2038 - Nata Validasi Metode - En.id

Panduan Akreditasi Umum -
Validasi dan verifikasi metode uji kuantitatif dan kualitatif
Januari 2018
© Hak Cipta National Association of Testing Authorities, Australia 2004
Publikasi ini dilindungi oleh hak cipta di bawah Commonwealth of Australia Copyright Act 1968.
Fasilitas atau fasilitas terakreditasi NATA yang mencari akreditasi dapat menggunakan atau menyalin publikasi ini atau mencetak atau
mengirimkan publikasi ini melalui email secara internal untuk tujuan akreditasi.
Individu dapat menyimpan salinan publikasi ini untuk penggunaan pribadi non-komersial atau menyalin sebagian yang wajar
dari publikasi ini sesuai dengan ketentuan pemanfaatan wajar di Bagian III Divisi 3 Undang-Undang Hak Cipta 1968.
Anda harus menyertakan pemberitahuan hak cipta ini dalam bentuk lengkapnya jika Anda membuat salinan dari publikasi ini.
Terlepas dari penggunaan yang diizinkan ini, Anda tidak boleh memodifikasi, menyalin, mereproduksi, menerbitkan ulang, membingkai, mengunggah
ke pihak ketiga, menyimpan dalam sistem pengambilan, memposting, mengirimkan atau mendistribusikan konten ini dengan cara apa pun atau bentuk
apa pun atau dengan cara apa pun tanpa tersurat. otoritas tertulis dari NATA.
Panduan Akreditasi Umum - Validasi dan verifikasi metode tes kuantitatif dan kualitatif
Daftar Isi
1. Perkenalan ............................................... .................................................. ............................................ 4

2. Verifikasi metode yang telah divalidasi sebelumnya ........................................... ............................................... 4
3. Validasi metode dan parameter validasi ........................................... .............................................. 5
3.1 Rentang di mana persamaan kalibrasi berlaku (linieritas kalibrasi) ...................................... 8
3.1.1 Interval pengukuran ................................................ .................................................. ................... 9
3.1.2 Efek matriks ................................................ .................................................. ........................... 9
3.2 Selektivitas ................................................. .................................................. .................................. 10
3.3 Kepekaan................................................. .................................................. .................................. 11
3.4 Akurasi ................................................. .................................................. ................................... 13
3.4.1 Presisi ................................................. .................................................. ............................... 14
3.4.1.1 Pengulangan ................................................. .................................................. ................. 14
3.4.1.2 Reproduksibilitas ................................................. .................................................. .............. 15
3.4.2 Kebenaran ................................................. .................................................. ............................... 15
3.5 Batas deteksi dan batas kuantitasi ........................................... ........................................ 17
3.5.1 Batas deteksi (LOD) ........................................ .................................................. ............... 17
3.5.1.1 LOD berdasarkan evaluasi visual .......................................... ................................................. 17
3.5.1.2 LOD berdasarkan deviasi standar dari blank ...................................... ......................... 18
3.5.1.3 LOD berdasarkan kisaran di mana persamaan kalibrasi berlaku .................................... .. 18
3.5.1.4 LOD berdasarkan signal-to-noise ....................................... .................................................. ...... 18
3.5.2 Batas kuantitasi (LOQ) ........................................ .................................................. ........... 18
3.5.2.1 Batas pelaporan (LOR) ........................................ .................................................. ......... 18
3.6 Kekasaran................................................. .................................................. .............................. 18
3.7 Ketidakpastian Pengukuran ................................................ .................................................. .......... 19
3.8 Ringkasan................................................. .................................................. ................................... 20
4. Validasi metode non-rutin .......................................... .................................................. ............ 21
5. Validasi dan verifikasi metode subjektif .......................................... ....................................... 21
Parameter Validasi ................................................ .................................................. ............................ 22
5.1 Repeatability / reproducibility (yaitu keandalan) ........................................... ...................................... 22
5.2 Probabilitas deteksi dan / atau tingkat kesalahan potensial ......................................... .............................. 22
Tindakan Pengendalian ................................................ .................................................. ................................... 23
5.3 Analisis kritis (atau risiko) ............................................ .................................................. ................. 23
5.4 Latihan kolaboratif ................................................ .................................................. .............. 23
5.5 Kontrol kualitas ................................................ .................................................. ............................ 23
5.6 Kompetensi staf ............................................... .................................................. .................... 23
5.7 Tingkat penerimaan metode tes ........................................... ............................................ 23
6. Daftar istilah ............................................. .................................................. ................................... 24
7. Referensi ............................................... .................................................. ........................................... 28
8. Bacaan tambahan .............................................. .................................................. ................................. 29
Lampiran 1. Validasi metode dan pohon keputusan verifikasi ......................................... ............................. 30
Amandemen ................................................. .................................................. ............................................. 31
Januari 2018 Halaman 3 dari 31

1. pengantar
Suatu metode harus terbukti sesuai dengan tujuannya sehingga pelanggan fasilitas dapat yakin dengan hasil yang dihasilkan oleh penerapannya.
Validasi dan verifikasi metode memberikan bukti obyektif bahwa suatu metode sesuai dengan tujuannya, yang berarti bahwa persyaratan tertentu
untuk tujuan penggunaan tertentu terpenuhi.
Catatan: istilah 'metode' mencakup kit, reagen individu, instrumen, platform, dan perangkat lunak.
Untuk alasan ini, validasi metode dan verifikasi merupakan persyaratan penting akreditasi ISO / IEC 17025 dan ISO 15189. Oleh karena itu, fasilitas
yang diakreditasi untuk Standar ini harus menunjukkan validitas semua metode yang digunakan dengan memvalidasi semua metode standar internal
dan yang dimodifikasi serta memverifikasi standar. metode. Validasi selalu menyeimbangkan antara biaya, risiko, dan kemungkinan teknis. Tingkat
validasi yang diperlukan akan bergantung pada status metode yang sedang dipertimbangkan dan kebutuhan yang berkaitan dengan aplikasi yang
dimaksudkan.
Jika fasilitas ingin menerapkan metode standar yang telah divalidasi secara ekstensif melalui studi kolaboratif,
misalnya ASTM dan metode standar (Gold) (seperti metode Standar Australia dan metode Standar ISO) pertimbangan harus diberikan sejauh verifikasi
metode yang diperlukan. Studi verifikasi metode biasanya kurang ekstensif daripada yang diperlukan untuk validasi metode. Namun demikian, fasilitas
tersebut diharapkan dapat menunjukkan kemampuan untuk mencapai karakteristik kinerja yang dipublikasikan dari metode standar di bawah kondisi
pengujian mereka sendiri.
Catatan Teknis ini menjelaskan aspek-aspek metode yang harus dipertimbangkan saat melakukan validasi metode atau verifikasi metode, dan
memberikan panduan tentang bagaimana mereka dapat diselidiki dan dievaluasi. Ini dimaksudkan agar dapat diterapkan pada sebagian besar jenis
aktivitas pengujian. Pedoman ini tidak mencakup pengambilan sampel sehubungan dengan kinerja suatu metode. Untuk beberapa fasilitas pengujian,
tidak semua pendekatan validasi dan verifikasi yang dijelaskan dalam dokumen ini relevan. Khususnya untuk fasilitas yang terlibat dalam pengujian
subjektif (misalnya fasilitas pengujian forensik, pengujian non-destruktif, dan pengujian mekanis), bagian yang lebih dapat diterapkan dalam dokumen ini
adalah Bagian 5.
Laporan Teknis IUPAC (Thompson et al., 2002), dan publikasi lainnya oleh Komite Tetap ENFSI (QCC-VAL-001, 2006), Laboratory of the Government
Chemist, Inggris, (LGC, 2003) dan B. Hibbert ( Hibbert, 2004) diakui sebagai sumber utama informasi dan panduan yang diberikan dalam Catatan
Teknis ini. Pengguna Catatan Teknis ini harus memperhatikan bahwa meskipun ada banyak publikasi dan metode untuk memvalidasi dan
memverifikasi metode yang berbeda, tidak ada satu metode yang disetujui secara universal dan pendekatan selain yang ditetapkan dalam pedoman
ini dapat diterapkan dan diterima. Panduan tersebut tidak dapat dianggap sebagai prosedur untuk validasi atau verifikasi metode sehubungan dengan
kepatuhan fasilitas terhadap persyaratan ISO / IEC 17025 dan ISO 15189. Merupakan tanggung jawab fasilitas untuk memilih prosedur validasi atau
verifikasi dan protokol yang paling sesuai untuk hasil yang diinginkan. Namun, penting untuk diingat bahwa tujuan utama validasi atau verifikasi
metode pengujian apa pun adalah untuk menunjukkan bahwa metode tersebut sesuai dengan tujuan yang dimaksudkan. Referensi dan bahan bacaan
tambahan yang tercantum di akhir dokumen ini dapat memberikan panduan yang berguna dan lebih lanjut tentang verifikasi dan validasi metode.
Sejumlah contoh dari berbagai jenis pengujian aktivitas telah disediakan di seluruh dokumen ini dan dimaksudkan hanya untuk tujuan panduan.
Mereka sama sekali tidak lengkap dan pendekatan lain mungkin lebih sesuai berdasarkan keadaan individu.
Untuk pengujian dimana hasil kualitatif dilaporkan berdasarkan nilai numerik diharapkan validasi atau verifikasi metode sejalan dengan prosedur
kuantitatif.
2. Verifikasi metode yang sebelumnya divalidasi

Metode yang diterbitkan oleh organisasi seperti Standards Australia, ASTM, USEPA, ISO dan IP telah divalidasi oleh studi kolaboratif dan terbukti
sesuai untuk tujuan sebagaimana ditentukan dalam ruang lingkup metode. Oleh karena itu, ketelitian pengujian yang diperlukan untuk
memperkenalkan metode seperti itu ke dalam fasilitas kurang dari yang diperlukan untuk memvalidasi metode internal. Hal yang sama berlaku untuk
metode yang diterima oleh rekan yang diterbitkan dalam literatur ilmiah bersama dengan data kinerja. Jika fasilitas menggunakan kit uji komersial
yang metodologi dan reagennya tidak berubah dari petunjuk pabrik, kit tersebut tidak perlu divalidasi ulang secara independen di fasilitas pengujian.
Pada dasarnya fasilitas hanya perlu memverifikasi bahwa mereka

operator yang menggunakan peralatan mereka di lingkungan laboratorium mereka dapat menerapkan metode yang memperoleh hasil yang sama seperti yang
ditentukan dalam data validasi yang disediakan dalam metode standar. Verifikasi metode oleh fasilitas harus mencakup korelasi statistik dengan metode
tervalidasi yang ada sebelum digunakan.
Namun harus dicatat, bahwa dokumentasi untuk metode analisis standar yang diterbitkan oleh badan standardisasi dan organisasi teknis yang diakui
(misalnya AOAC), dll. Bervariasi. Dalam beberapa kasus, tidak ada laporan validasi sebagai dasar untuk metode analisis, atau karakteristik kinerja
tidak - atau hanya sebagian - divalidasi. Jika demikian, verifikasi kemampuan fasilitas untuk menggunakan metode analisis tidak memungkinkan
secara langsung dan validasi diperlukan.
Verifikasi dalam kondisi penggunaan ditunjukkan dengan memenuhi spesifikasi kesesuaian sistem yang ditetapkan untuk metode tersebut, serta
demonstrasi akurasi dan presisi atau parameter metode lain untuk jenis metode tersebut. Kinerja metode dapat ditunjukkan oleh:
• media kosong, atau tidak diinokulasi (misalnya dalam mikrobiologi), untuk menilai kontaminasi;
• sampel kontrol laboratorium (misalnya sampel berduri untuk kimia atau kontrol kultur positif untuk mikrobiologi) untuk menilai
akurasi;
• duplikat untuk menilai presisi;
• standar pemeriksaan kalibrasi dianalisis secara berkala dalam batch analitik untuk analisis kuantitatif; memantau sampel kendali mutu,
• biasanya melalui penggunaan diagram kendali; dan
• partisipasi dalam program pengujian kinerja asalkan bahan yang diuji mewakili metode dalam hal matriks, parameter analitik, tingkat
konsentrasi, dll.
Modifikasi kecil pada metode in-house yang telah divalidasi sebelumnya (misalnya menggunakan jenis kolom kromatografi yang sama dari pabrik yang
berbeda, penggunaan media pertumbuhan non-selektif yang berbeda, perbedaan dalam rincian pengenceran sampel sebagai konsekuensi dari
penghitungan yang diharapkan atau sedikit perubahan dalam suhu inkubasi yang tidak kritis) juga harus diverifikasi untuk menunjukkan bahwa tidak ada
perubahan pada hasil yang diharapkan.
Parameter utama yang perlu dipertimbangkan dalam proses verifikasi akan bergantung pada sifat metode dan kisaran jenis sampel yang mungkin
ditemui. Sampel dalam jumlah yang signifikan secara statistik harus digunakan dalam proses evaluasi dan ini harus mencakup hasil yang lengkap
untuk tujuan penggunaan. Pengukuran bias dan pengukuran presisi adalah persyaratan minimum untuk metode yang menghasilkan hasil kuantitatif.
Untuk analisis jejak, fasilitas juga harus memastikan bahwa batas deteksi yang dapat dicapai (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) sudah sesuai untuk
tujuan. Untuk metode kualitatif, studi korelasi dengan metode tervalidasi yang ada atau perbandingan dengan hasil yang diketahui diperlukan. Untuk
metode diagnostik, sensitivitas dan selektivitas klinis (spesifisitas) juga harus dievaluasi pada populasi pasien lokal yang spesifik (mis rumah sakit,
pasien komunitas) jika memungkinkan. Idealnya fasilitas akan mampu mendemonstrasikan kinerja yang sejalan dengan spesifikasi metode. Jika tidak,
penilaian harus dilakukan untuk menentukan apakah metode tersebut dapat diterapkan untuk menghasilkan hasil tes yang benar-benar sesuai dengan
tujuannya.
Validasi penuh diperlukan jika fasilitas memiliki alasan untuk mengubah metode standar secara signifikan. Tidak mungkin untuk menentukan apa yang
merupakan modifikasi utama, selain mengatakan modifikasi yang akan mempengaruhi hasil tes. Beberapa contoh mungkin: penggunaan pelarut
ekstraksi yang berbeda; penggunaan HPLC sebagai pengganti GLC; perbedaan dalam formulasi media selektif / diferensial (misalnya penambahan
antibiotik alternatif); konsentrasi antibiotik yang berbeda dengan media dasar yang ditentukan; perubahan suhu atau waktu inkubasi kritis (misalnya 3
hari daripada 5 hari inkubasi); atau prosedur konfirmasi yang berbeda (misalnya penggunaan rangkaian alternatif pengujian biokimia selain yang
ditentukan).
Validasi tambahan juga harus dipertimbangkan jika pelanggan memerlukan spesifikasi yang lebih ketat daripada yang metode standarnya telah
divalidasi.
Pohon keputusan yang diilustrasikan dalam Lampiran 1 dimaksudkan untuk memberikan klarifikasi lebih lanjut tentang kapan harus melakukan validasi atau verifikasi
metode.
3. Validasi metode dan parameter validasi

Metode non-standar dan yang dikembangkan sendiri memerlukan validasi metode. Untuk fasilitas yang terlibat dalam pengujian medis, elemen metode
yang didukung 'hanya penggunaan penelitian' atau 'tidak untuk penggunaan diagnostik' juga harus divalidasi oleh fasilitas sebelum digunakan untuk tujuan
diagnostik seperti yang diuraikan dalam publikasi NPAAC Persyaratan untuk Validasi In-House In-Vitro Diagnostic Devices (IVDs). Fasilitas yang memiliki
komponen kit yang dimodifikasi atau prosedur pabrikan harus menunjukkan kesetaraan atau keunggulan prosedur yang dimodifikasi dengan menerapkan
proses ke dalam penggunaan rutin. Prosedur tersebut harus diperlakukan sebagai pengujian internal untuk tujuan validasi

per publikasi NPAAC Standar Akreditasi Laboratorium dan Panduan Deteksi dan Analisis Asam Nukleat dan Persyaratan untuk Validasi In-House
In-Vitro Diagnostic Devices (IVDs).
Karakteristik kinerja metode didasarkan pada tujuan penggunaan metode. Misalnya, jika metode akan digunakan untuk analisis kualitatif, tidak perlu
menguji dan memvalidasi linieritas metode pada rentang dinamis penuh peralatan.
Ruang lingkup metode dan kriteria validasinya harus ditentukan dan didokumentasikan di awal proses. Ini termasuk tetapi tidak terbatas pada
pertanyaan-pertanyaan berikut:
Sebuah) Tujuan pengukuran (apa yang harus diidentifikasi dan mengapa)? Apa matriks
b) sampel yang mungkin?
c) Apakah ada gangguan yang diharapkan, dan, jika demikian, haruskah ditentukan? Apa cakupannya
d) (berapa tingkat atau rentang konsentrasi yang diharapkan)? Apakah ada persyaratan legislatif atau
e) peraturan tertentu?
f) Adakah akomodasi peralatan khusus dan kondisi lingkungan yang perlu dipertimbangkan?
g) Jenis peralatan apa yang akan digunakan? Apakah metode untuk satu instrumen tertentu, atau haruskah digunakan oleh semua instrumen
dengan jenis yang sama?
h) Metode yang digunakan untuk persiapan, sub-pengambilan sampel, prosedur dan termasuk peralatan yang akan digunakan?
Alat berikut dapat digunakan untuk mendemonstrasikan kemampuan untuk memenuhi spesifikasi metode kinerja:
1. Kosong: Penggunaan berbagai jenis blank memungkinkan penilaian berapa banyak sinyal analitik yang dapat diatribusikan ke analit dan
berapa banyak yang dapat diatribusikan ke penyebab lain, misalnya interferensi. Kosong juga dapat digunakan dalam pengukuran Batas
Deteksi.
2. Bahan referensi dan bahan referensi bersertifikat: Penggunaan bahan dengan sifat atau nilai kuantitas yang diketahui dapat digunakan
untuk menilai keakuratan metode, serta memperoleh informasi tentang interferensi. Jika digunakan sebagai bagian dari prosedur
pengukuran, standar tersebut dikenal sebagai standar pengukuran. Ketika ditempatkan secara berkala dalam batch analitik, pemeriksaan
dapat dilakukan bahwa respons dari proses analitik terhadap analit adalah stabil. Catatan: standar pengukuran yang sama tidak dapat
digunakan untuk kalibrasi dan pengukuran bias.
3. Bahan dan larutan yang diperkuat (berduri): Pemulihan dapat dihitung dari hasil analisis sampel yang diperkuat dengan bahan
referensi.
4. Bahan yang ditimbulkan: Ini adalah bahan di mana analit yang diinginkan pada dasarnya mungkin asing, tetapi telah dimasukkan ke sebagian
besar di beberapa titik sebelum bahan yang dijadikan sampel. Bahan yang timbul dapat digunakan sebagai pengganti bahan yang diperkuat.
5. Replikasi: Analisis berulang memungkinkan penilaian ketepatan pengukuran.

6. Analisis data statistik: Teknik statistik digunakan untuk mengevaluasi akurasi, presisi, rentang linier, batas deteksi dan kuantifikasi, dan
ketidakpastian pengukuran.
Studi validasi dapat dibagi menjadi validasi komparatif dan primer.
Validasi komparatif
Validasi komparatif (yaitu korelasi atau silang) biasanya diterapkan pada metode bioanalitik dan bertujuan untuk menunjukkan kinerja yang setara
antara dua (atau lebih) metode yang digunakan untuk menghasilkan data dalam studi yang sama atau di seluruh studi yang berbeda dengan
membandingkan parameter validasi. Contoh validasi komparatif adalah situasi di mana metode bioanalitik asli yang divalidasi berfungsi sebagai
referensi dan metode bioanalitik yang direvisi adalah pembanding.
Tidak ada tes tunggal untuk menetapkan kesetaraan metode atau kriteria penerimaan numerik untuk itu. Umumnya, metode dengan sensitivitas
terbesar atau pemulihan tertinggi untuk analit target adalah yang terbaik. Untuk menentukan apakah rata-rata metode alternatif secara statistik tidak
berbeda dari rata-rata metode referensi, dilakukan analisis varian satu arah atau uji-t berpasangan berdasarkan jenis sampel dan konsentrasi analit.
Studi validasi komparatif metode kualitatif melibatkan identifikasi karakteristik operasi metode (misalnya sensitivitas, selektivitas, dugaan positif palsu
dan negatif palsu dugaan).
Studi validasi dapat didukung oleh studi teknis tambahan yang bersumber secara eksternal dari fasilitas. Penggunaan data uji profisiensi yang dapat
diverifikasi dapat dipertimbangkan.
Ketika analisis sampel dalam satu studi dilakukan di lebih dari satu situs atau lebih dari satu fasilitas, validasi silang dengan standar
matriks berpaku dan sampel subjek harus dilakukan
di setiap lokasi atau fasilitas untuk menetapkan keandalan antar-laboratorium. Validasi komparatif juga harus

dipertimbangkan ketika data yang dihasilkan menggunakan teknik analisis yang berbeda (misalnya LC-MS-MS vs. ELISA) dalam studi yang
berbeda dimasukkan.
AS / NZS 4659 Panduan Penentuan Kesetaraan Metode Uji Mikrobiologi Pangan adalah contoh protokol yang dapat digunakan untuk validasi
komparatif. Standar ini memberikan panduan tentang validasi uji kualitatif, kuantitatif, konfirmasi dan antibiotik.
Validasi primer
Untuk situasi di mana validasi komparatif tidak berlaku (misalnya metode yang dikembangkan sendiri, metode standar yang telah dimodifikasi
sedemikian rupa sehingga hasil akhir dapat dipengaruhi, metode standar yang digunakan di luar ruang lingkup yang dimaksudkan, penggunaan
isolasi atau deteksi alternatif prinsip, serta metode cepat), validasi primer harus dilakukan sebelum memperkenalkan metode tersebut. Dalam kasus
seperti itu, validasi menjadi proses eksplorasi dengan tujuan menetapkan batasan operasional dan karakteristik kinerja alternatif, metode baru atau
metode yang tidak dikarakterisasi secara memadai. Ini harus menghasilkan spesifikasi numerik dan / atau deskriptif untuk kinerja metode.
Langkah pertama dalam validasi metode adalah menentukan apa yang ingin Anda identifikasi atau ukur; keduanya secara kualitatif menggambarkan entitas
yang akan diukur dan kuantitas (jika berlaku). Sebuah metode kemudian divalidasi terhadap spesifikasi ini dan persyaratan pelanggan lainnya.
Langkah kedua dalam validasi adalah menentukan parameter kinerja tertentu yang dipilih. Ini dijelaskan di bawah. Catatan: parameter untuk validasi
metode telah ditentukan di berbagai kelompok kerja komite nasional dan internasional. Sayangnya, beberapa definisi berbeda antara organisasi yang
berbeda. Dokumen ini menggunakan definisi berdasarkan International Vocabulary of Metrology (VIM) (JCGM200, 2008) dalam banyak kasus karena
sekarang ini menggantikan yang lainnya. Namun, beberapa interpretasi mungkin diperlukan di berbagai jenis aktivitas, misalnya untuk pengujian
veteriner, mungkin lebih dapat diterapkan untuk merujuk ke OIE Terrestrial Manual (2009) untuk sebagian besar terminologi relevan yang digunakan di
sini.
Ukuran sampel untuk menentukan parameter kinerja dapat bervariasi di berbagai jenis aktivitas pengujian, namun harus sedemikian rupa sehingga
cukup besar untuk menghasilkan hasil yang valid secara statistik dengan metode seperti uji-t Student untuk menilai akurasi. Minimal 7 analisis
ulangan dilakukan pada setiap konsentrasi untuk setiap penentuan dan setiap jenis matriks direkomendasikan. Pada kenyataannya angka ini
seringkali terlampaui. Secara umum, semakin banyak sampel yang diuji, semakin besar angka derajat kebebasannya, semakin baik basis statistik
untuk hasil pengukuran yang dimaksud.
Variasi matriks, di banyak sektor, merupakan salah satu sumber kesalahan yang paling penting tetapi paling tidak diakui dalam pengukuran analitik
(IUPAC, 2002). Oleh karena itu, mungkin penting untuk mempertimbangkan variabilitas matriks karena sifat fisiologis sampel. Dalam kasus prosedur
tertentu, misalnya prosedur berbasis LC-MS-MS, langkah-langkah yang tepat harus diambil untuk memastikan kurangnya efek matriks selama
penerapan metode, terutama jika sifat matriks berubah dari matriks yang digunakan selama metode validasi (FDA, 2001).
Setiap langkah dalam metode harus diselidiki untuk menentukan sejauh mana variabel lingkungan, matriks, material, atau prosedural dapat
mempengaruhi estimasi analit dalam matriks dari saat pengumpulan bahan hingga dan termasuk waktu analisis. Selain parameter kinerja yang
tercantum di bawah ini, mungkin juga perlu untuk menilai stabilitas analit saat melakukan studi validasi. Misalnya, banyak zat terlarut yang mudah
terurai sebelum penyelidikan kromatografi (misalnya selama pembuatan larutan sampel, ekstraksi, pembersihan, pemindahan fase atau penyimpanan
botol yang disiapkan dalam lemari es atau dalam sampler otomatis). Poin-poin yang mungkin perlu dipertimbangkan termasuk stabilitas analit selama
pengumpulan dan penanganan sampel, setelah penyimpanan jangka panjang dan jangka pendek, dan setelah melalui siklus pembekuan dan
pencairan serta proses analitis. Kondisi yang digunakan dalam eksperimen stabilitas perlu mencerminkan situasi yang mungkin ditemui selama
penanganan dan analisis sampel aktual. Prosedur juga harus mencakup evaluasi stabilitas analit dalam larutan stok.
Contoh uji stabilitas yang dilakukan sebagai bagian dari rencana validasi metode untuk timah (Sn) dalam buah kaleng disajikan di bawah ini:
Contoh:
Analyte (Sn) dalam larutan standar:
Standar kerja yang baru disiapkan dibandingkan dengan standar yang telah dibuat dan disimpan. Pengukuran dilakukan pada interval waktu tertentu
untuk menentukan stabilitas Sn dalam larutan.
Analit (Sn) dalam matriks:

Sampel buah kaleng dijalankan pada interval waktu yang ditentukan selama sampel biasanya disimpan untuk melihat apakah tingkat Sn menurun atau
terkonsentrasi. Standar yang digunakan untuk kurva kalibrasi ICP-OES dipantau untuk memastikan bahwa standar tersebut tidak menurun atau
kedaluwarsa.
Analyte (Sn) dalam contoh intisari:

Sampel buah kaleng dengan konsentrasi timah yang diketahui dicerna dan diukur setiap hari selama seminggu.
Parameter Kinerja:
3.1 Rentang di mana persamaan kalibrasi berlaku (linearitas kalibrasi)

Linearitas kalibrasi prosedur analitik adalah kemampuannya untuk menginduksi sinyal (respons) yang berbanding lurus dengan konsentrasi
parameter analitik yang diberikan.
Penentuan linieritas diterapkan pada persamaan kalibrasi sehingga hanya mencakup pengukuran instrumen. Linearitas juga dapat
diselidiki untuk metode secara keseluruhan dan dengan demikian menjadi penyelidikan kebenaran sebagai fungsi dari konsentrasi
analit.
Untuk analisis instrumental, protokol berikut (Thompson et al., 2002; LGC, 2003) direkomendasikan untuk menetapkan validitas model kalibrasi
sebagai bagian dari validasi metode:
• harus ada enam atau lebih standar kalibrasi (termasuk standar kosong atau kalibrasi dengan konsentrasi mendekati nol);
• standar kalibrasi harus ditempatkan secara merata di atas kisaran konsentrasi yang diinginkan. Idealnya, konsentrasi yang berbeda
harus disiapkan secara independen, dan bukan dari alikuot dari larutan induk yang sama;
• kisaran tersebut harus mencakup 0–150% atau 50–150% dari konsentrasi yang mungkin ditemui, bergantung pada mana yang lebih
cocok; dan
• standar kalibrasi harus dijalankan setidaknya dalam rangkap dua, dan sebaiknya rangkap tiga atau lebih, dalam urutan acak.
Plot data yang sederhana akan memberikan indikasi cepat tentang sifat hubungan antara respons dan konsentrasi. Regresi kuadrat terkecil klasik,
biasanya diimplementasikan dalam program spreadsheet, digunakan untuk menetapkan persamaan hubungan antara respons instrumental ( y) dan
konsentrasi ( x) yang mana untuk model linier y = a + bx, dimana a = perpotongan y untuk pemasangan garis terbaik, dan b = kemiringan garis
terbaik
cocok. Kesalahan standar dari regresi (s y / x) adalah ukuran kebaikan kecocokan. Penggunaan koefisien korelasi yang berasal dari analisis regresi
sebagai uji linieritas dapat menyesatkan (Mulholland dan Hibbert,
1997), dan telah menjadi subyek banyak perdebatan (Hibbert, 2005; Huber, 2004; Ellison, 2006; Van Loco et al,
2002). Residu juga harus diperiksa untuk bukti perilaku non-linier (Miller dan Miller, 2000). Grafik dari data dan residu yang dipasang harus selalu
diplot dan diperiksa untuk mengkonfirmasi linieritas dan memeriksa pencilan. Catatan: jika varians ulangan sebanding dengan konsentrasi, kalkulasi
regresi berbobot harus digunakan daripada regresi 'klasik' (yaitu tidak berbobot).
Statistik juga terkenal untuk metodenya, di mana kalibrasi dapat memberikan kecocokan melengkung (misalnya kecocokan kuadrat untuk analisis
ICP-AES dan ICP-MS). Contoh diberikan dalam Hibbert (2006) tentang bagaimana parameter dan ketidakpastian pengukuran dari persamaan yang
linier dalam parameter, seperti kalibrasi kuadrat, dapat diturunkan.
Jika hubungan tidak mengikuti model linier yang diharapkan selama rentang penyelidikan, maka perlu untuk menghilangkan penyebab non-linieritas,
atau membatasi rentang konsentrasi yang dicakup oleh metode untuk memastikan linieritas. Dalam beberapa kasus, mungkin tepat untuk
menggunakan fungsi non-linier, tetapi kehati-hatian harus dilakukan untuk memvalidasi model yang dipilih dengan benar. Secara umum kisaran
kalibrasi harus mencakup hanya kisaran konsentrasi sampel uji yang diharapkan. Tidak ada manfaat kalibrasi pada rentang konsentrasi yang lebih
luas daripada yang diperlukan, karena ketidakpastian pengukuran dari kalibrasi meningkat dengan rentang tersebut.
Data kalibrasi dapat digunakan untuk menilai presisi (memang s y / x dapat digunakan sebagai pengulangan y, atau s y / x / b untuk itu x). Untuk
menghitung presisi kurva harus disiapkan minimal tiga kali. Catatan: dari data ini
batas kuantitasi dapat dihitung.

Untuk analisis non-instrumen, linearitas dapat ditentukan dengan memilih konsentrasi standar yang berbeda (level rendah, sedang dan tinggi). Tingkat
terendah harus jatuh pada kira-kira batas deteksi, tingkat menengah dan tinggi masing-masing satu dan dua tingkat lebih tinggi (tingkat perantara
tambahan dapat ditambahkan untuk meningkatkan presisi). Hasilnya kemudian dapat diplot dalam bentuk 'kurva-respons'. Contoh diberikan di bawah
ini. Untuk analisis mikrobiologi, hasil dari penghitungan yang diperoleh harus dikonversi ke nilai log dan diplot.
Contoh:
Kisaran nilai yang merupakan rentang operasi linier dari uji diagnostik dapat ditentukan dengan seri pengenceran di mana serum positif tinggi
diencerkan secara serial dalam serum negatif. Setiap pengenceran kemudian dijalankan pada pengenceran kerja yang optimal dalam buffer dan
hasilnya diplot. Standar serum dan reagen lain dapat digunakan untuk menyelaraskan pengujian dengan hasil yang diharapkan diperoleh dari reagen
referensi aktivitas yang diketahui. Kontrol serum internal (digunakan untuk normalisasi data) dan standar serum sekunder tambahan, seperti serum
positif rendah, positif tinggi, dan negatif (digunakan untuk perkiraan pengulangan dalam pemeriksaan rutin berikutnya), dapat dipasang ke kurva
respons untuk mencapai nilai yang diharapkan untuk serum tersebut.
3.1.1 Interval pengukuran

Interval pengukuran biasanya diturunkan dari studi linearitas. Interval pengukuran suatu metode didefinisikan sebagai interval antara konsentrasi
(jumlah) atas dan bawah analit dalam sampel yang telah dibuktikan bahwa metode tersebut memiliki tingkat presisi, akurasi, dan linieritas yang sesuai
(yaitu hasil akan dapat diterima. tingkat ketidakpastian). Dalam praktiknya, ketidakpastian yang dapat diterima dapat dicapai pada konsentrasi yang
lebih besar dari batas atas (di luar jangkauan rentang linier yang ditentukan). Namun, lebih bijaksana untuk mempertimbangkan kisaran yang
divalidasi, yaitu kisaran antara LOQ dan konsentrasi tertinggi yang dipelajari selama validasi. Catatan: Dalam beberapa jenis aktivitas, istilah interval
pengukuran juga disebut sebagai "interval kerja", "rentang kerja", "rentang pengukuran", atau "rentang pengukuran".
3.1.2 Efek matriks

Setelah kisaran di mana persamaan kalibrasi diterapkan telah ditentukan, efek matriks pada perolehan kembali analit harus ditentukan. Sebagai
aturan, sampel tidak hanya mengandung zat yang akan dianalisis (analit), tetapi juga konstituen lebih lanjut (zat asing, zat yang menyertai).
Konstituen matriks mungkin memiliki potensi untuk mengubah hasil atau membuat yang ditingkatkan atau ditekan respons dari detektor instrumen.
Efek matriks terkenal bervariasi dalam kejadian dan intensitasnya tetapi beberapa teknik sangat rentan terhadapnya (interferensi mereka dapat, dalam
keadaan tertentu, begitu besar sehingga pemulihan analit menyimpang dari 100% ke tingkat yang signifikan). Misalnya, dalam peningkatan matriks
pengujian kimia adalah fenomena yang kadang-kadang diketahui dengan baik dalam analisis residu pestisida menggunakan kromatografi gas-cair.
Dalam kasus sampel dengan matriks yang kompleks dan / atau diketahui tidak persis - misalnya, makanan - sangat sulit untuk memperkirakan
pengaruh potensial zat asing pada analisis (efek matriks). Untuk patologi, pertimbangan perlu diberikan pada sampel hemolisis, lipaemik, dan ikterik.
Jika tidak ada efek matriks yang terlihat, lebih disukai untuk menyiapkan standar kalibrasi sebagai solusi sederhana dari analit. Jika efek matriks
dicurigai, mereka dapat diselidiki dengan membuat penambahan standar analit ke larutan ekstrak sampel tipikal. Jumlah yang disarankan untuk
menentukan efek matriks setidaknya satu kali atau dalam rangkap dua pada masing-masing dari 3 konsentrasi di setiap jenis matriks sampel.
Untuk menentukan efek matriks pada respons instrumen, kisaran konsentrasi dengan penambahan standar harus sama dengan kisaran konsentrasi
dengan kalibrasi bebas matriks sehingga kemiringan kedua plot kalibrasi dapat dibandingkan untuk mendapatkan perbedaan yang signifikan. Jika
kemiringan tidak berbeda secara signifikan (<10%), tidak perlu mengkompensasi efek matriks. Namun, harus dicatat bahwa penambahan standar
tidak mengimbangi efek matriks aditif.
Untuk metode non-instrumen pengujian pemulihan yang dijelaskan dalam Bagian 3.4.2 dokumen ini dapat dilakukan untuk menentukan apakah ada
efek matriks.
Jika hasil yang diperoleh untuk standar yang diperkuat matriks lebih rendah (atau lebih tinggi) daripada hasil yang diperoleh untuk standar murni yang
diambil melalui analisis lengkap, hasil tersebut mungkin disebabkan oleh pemulihan analit yang rendah dari bahan matriks (atau adanya gangguan
saat pemulihan tinggi diperoleh) atau mungkin karena penekanan matriks atau efek peningkatan yang mengubah respons detektor. Untuk memeriksa
kemungkinan ini, fasilitas dapat membandingkan hasil yang diperoleh dari standar murni, standar murni yang diambil melalui analisis lengkap, standar
yang dibubuhi ekstrak matriks kosong, dan standar yang ditambahkan ke matriks sebelum ekstraksi. Penentuan berikut kemudian dapat dibuat:

• Standar murni versus standar yang diambil melalui analisis menunjukkan setiap kehilangan analit yang terkait dengan
metode, sementara hasil yang ditingkatkan mungkin menunjukkan kontaminasi reagen.
• Standar murni yang diambil melalui analisis dibandingkan dengan standar murni yang ditambahkan ke ekstrak yang diekstraksi atau
dicerna memberikan indikasi peningkatan matriks atau efek penekanan pada sistem deteksi.
• Standar murni yang ditambahkan ke matriks kosong setelah ekstraksi atau destruksi, dibandingkan dengan standar murni yang diperkuat
dalam matriks sebelum ekstraksi atau destruksi, memberikan indikasi hilangnya analit selama pemrosesan (AOAC flworkshop).
3.2 Selektivitas
Selama validasi metode, penting untuk menetapkan bahwa metode pengujian hanya mengukur apa yang dimaksudkan untuk diukur. Dengan kata lain,
metode harus bebas dari interferensi yang dapat mengakibatkan hasil yang tidak tepat. Selektivitas metode adalah keakuratan pengukurannya dengan
adanya gangguan seperti mikroorganisme non-target yang bersaing, pengotor, pengurai, dan komponen matriks. Istilah selektivitas dan spesifisitas
sering digunakan secara bergantian. Istilah 'spesifik' umumnya mengacu pada metode yang menghasilkan respons untuk analit tunggal saja,
sedangkan istilah 'selektif' mengacu pada metode yang memberikan respons untuk sejumlah entitas yang mungkin atau mungkin tidak dibedakan satu
sama lain. Jika tanggapan dibedakan dari semua tanggapan lainnya, maka metode tersebut dikatakan selektif.
Metode yang menggunakan prosedur determinatif yang sangat spesifik, seperti kromatografi / spektrometri massa, memiliki kemampuan untuk
menjadi sangat selektif. Namun, metode yang didasarkan pada pengukuran kolorimetrik dapat dipengaruhi oleh adanya sampel sampel berwarna atau
senyawa dengan sifat kimia yang mirip dengan analit. Meskipun tidak praktis untuk mempertimbangkan setiap potensi gangguan, analis harus
menggunakan pengetahuan dan pengalaman mereka untuk mempertimbangkan skenario yang paling relevan.
Jika diperlukan, efek dari potensi gangguan dapat diperiksa dengan menganalisis sampel yang telah ditambahkan konsentrasi yang diketahui dari
gangguan yang dicurigai (satu dari setiap yang dianalisis sekali sudah cukup). Ini harus dilakukan pada sampel yang mengandung analit dengan
kisaran konsentrasi yang diharapkan dalam praktiknya (uji titik tunggal dapat diterima tetapi berbagai titik dengan jumlah inhibitor yang bervariasi
akan menambah lebih banyak data tentang interferensi dari jumlah zat yang berbeda). Jika metode dimaksudkan untuk menghitung lebih dari satu
analit, setiap analit harus diuji untuk memastikan tidak ada interferensi. Pemeriksaan efek interferensi perlu dilakukan - apakah keberadaan
interferensi meningkatkan atau menghambat deteksi kuantifikasi besaran ukur? Pada prinsipnya, metode harus dikembangkan untuk memberikan
tingkat selektivitas tanpa gangguan yang berarti. Jika deteksi atau kuantifikasi dihambat secara signifikan oleh interferensi, pengembangan metode
lebih lanjut akan diperlukan, tetapi efek kecil dapat ditoleransi dan dimasukkan dalam estimasi bias.
Untuk metode yang memerlukan langkah konfirmasi, misalnya untuk sampel dengan konsentrasi senyawa organik rendah (termasuk residu pestisida
dan kontaminan organik lainnya dalam sampel makanan dan lingkungan, serta obat-obatan dan metabolitnya di jaringan dan cairan tubuh),
identifikasi positif jumlah jejak organik senyawa diperlukan. 'Konfirmasi' berlaku untuk identitas dan konsentrasi residu. Konfirmasi identitas dan
konsentrasi analit untuk sampel positif dapat dicapai dengan menggunakan sistem atau kolom deteksi yang berbeda atau menggunakan sistem
deteksi khusus seperti spektrometri massa atau menggunakan teknik analisis alternatif (misalnya sekuensing DNA; elektroforesis gel). Dalam kasus
seperti itu, validasi teknik konfirmasi juga harus dilakukan.
Beberapa contoh untuk menentukan selektivitas metode dan beberapa faktor yang perlu dipertimbangkan diberikan di bawah ini. Beberapa
contoh tambahan untuk menentukan selektivitas dan sensitivitas muncul di bagian 3.3.
Contoh:
Selektivitas analitik dari uji diagnostik (yang didefinisikan sebagai proporsi sampel dari spesimen referensi tidak terinfeksi yang diketahui yang dites
negatif dalam suatu pengujian) dapat dinilai dengan menggunakan panel sampel yang berasal dari spesimen yang telah terpapar organisme terkait
secara genetik yang mungkin merangsang antibodi reaktif silang, atau serum dari spesimen dengan gambaran klinis serupa. 'Analisis tetangga dekat'
ini berguna dalam menentukan probabilitas reaksi positif palsu dalam pengujian. Juga tepat untuk mendokumentasikan kriteria kekhususan
kelompok yang mencakup deteksi analit minat dalam serum dari subjek yang telah mengalami infeksi / pajanan ke seluruh kelompok atau serotipe
organisme.

bunga. Penting juga untuk mengevaluasi selektivitas analitik dari pengujian menggunakan sampel dari hewan atau manusia (mana saja yang dapat
diterapkan) yang telah divaksinasi. Mungkin diperlukan suatu uji untuk membedakan antara virus hidup, strain yang divaksinasi dan fragmen virus
tergantung pada tujuan penggunaan uji tersebut. Jika pengujian menargetkan antibodi yang ditimbulkan oleh virus, vaksinasi terhadap virus tersebut
dapat menghasilkan antibodi yang mengganggu kesimpulan pengujian tentang infeksi. Selain itu, jika antigen virus yang digunakan dalam pengujian ini
berasal dari preparat kultur virus sel utuh, yang mengandung reagen antigenik (protein pembawa, dll.) Selain virus, hewan atau manusia yang
divaksinasi dapat melakukan uji positif palsu karena deteksi virus. antibodi non-virus.
Contoh:
Untuk analisis mikrobiologi, selektivitas adalah fraksi dari jumlah total kultur negatif atau koloni yang ditetapkan dengan benar dalam pemeriksaan
dugaan (ISO 13843: 2000). Ini adalah probabilitas bahwa hasil pengujian akan diklasifikasikan sebagai negatif dengan metode pengujian yang
diberikan bahwa sampel negatif untuk organisme tertentu (SANAS TG28-02, 2008). Untuk metode mikrobiologi kualitatif alternatif, perhatian pada
kemampuannya untuk mendeteksi berbagai mikroorganisme yang mungkin ada dalam artikel pengujian ditangani secara memadai oleh promosi
pertumbuhan di media untuk metode kualitatif yang mengandalkan pertumbuhan untuk menunjukkan ada atau tidaknya mikroorganisme. Namun,
untuk metode yang tidak membutuhkan pertumbuhan sebagai indikator keberadaan mikroba,
Untuk metode mikrobiologi yang melibatkan langkah konfirmasi, hasil positif dugaan diambil melalui prosedur budaya dan dikonfirmasi menjadi positif
atau ditentukan menjadi negatif. Dengan kata lain, langkah konfirmasi memungkinkan sampel untuk diklasifikasikan ulang sebagai positif yang
diketahui atau negatif yang diketahui. Dengan demikian, tingkat selektivitas hasil setelah konfirmasi selalu 100%.
3.3 Kepekaan
Sensitivitas (atau inklusivitas) suatu metode adalah laju perubahan respons yang diukur dengan perubahan konsentrasi (atau jumlah) analit (atau
mikroorganisme). Sensitivitas yang lebih besar biasanya berarti rentang dinamis yang lebih rendah tetapi juga ketidakpastian pengukuran yang lebih
rendah. Untuk sistem instrumen, sensitivitas diwakili oleh kemiringan ( b) dari kurva kalibrasi ( y = a + bx) dan dapat ditentukan dengan prosedur
kuadrat terkecil klasik (untuk kesesuaian linier), atau secara eksperimental, menggunakan sampel yang mengandung berbagai konsentrasi analit.
Sensitivitas dapat ditentukan dengan analisis sampel berduri atau terkontaminasi artifisial atau standar yang disiapkan dalam larutan ekstrak sampel
(pemeriksaan awal sudah cukup). Kemiringan rata-rata dengan nilai linier positif tinggi (misalnya> 1) atau negatif rendah (misalnya <-1) menunjukkan
bahwa rata-rata metode tersebut sangat sensitif. Semakin besar sensitivitas (kemiringan / gradien grafik kalibrasi), semakin baik suatu metode untuk
membedakan perubahan kecil dalam konsentrasi analit (atau mikroorganisme). Namun, sensitivitas tinggi biasanya berarti rentang dinamis kecil. Jika
sensitivitas berubah dengan kondisi operasi sehari-hari, pertimbangan sensitivitas selama validasi metode mungkin dibatasi untuk memastikan
kepuasan, respons linier secara teratur dapat dicapai dalam kisaran konsentrasi yang diperlukan. Sensitivitas harus diperiksa sebagai bagian dari
prosedur jaminan kualitas dan kendali mutu fasilitas yang berkelanjutan.
Beberapa contoh untuk menentukan sensitivitas suatu metode telah disediakan di bawah ini. Contoh mikrobiologi yang diberikan juga termasuk
contoh untuk menentukan selektivitas.
Contoh:
Sensitivitas analitik dari uji diagnostik dapat dinilai dengan mengukur jumlah paling sedikit dari analit yang dapat dideteksi dalam sampel pada variasi
koefisien yang dapat diterima. Hal ini dapat dilakukan dengan membatasi pengenceran standar konsentrasi analit yang diketahui. Namun, ukuran
absolut yang obyektif seperti itu sering kali tidak mungkin dicapai karena kurangnya sampel atau standar konsentrasi atau aktivitas yang diketahui.
Pendekatan lain adalah menggunakan analisis pengenceran titik akhir sampel dari spesimen positif yang diketahui, untuk menentukan pengenceran
sampel kedua dari belakang di mana analit tidak lagi dapat dideteksi, atau setidaknya, tidak dapat dibedakan dari aktivitas serum negatif. Jika hasil
untuk pengujian yang sedang dikembangkan dibandingkan dengan pengujian lain yang dijalankan pada sampel yang sama, ukuran relatif sensitivitas
analitik dapat diperkirakan.
Contoh:
Dalam istilah mikrobiologi, sensitivitas adalah probabilitas bahwa metode tertentu akan memperoleh hasil positif yang dikonfirmasi karena sampel uji
diketahui positif. Positif yang diketahui mengacu pada konfirmasi analit yang diinokulasi. Untuk mendemonstrasikan selektivitas dan sensitivitas,
sampel uji harus diinokulasi dengan strain mikroorganisme spesifik yang diuji serta strain yang dianggap berpotensi kompetitif. Evaluasi selektivitas dan
sensitivitas tidak berlaku untuk jumlah total yang layak, jumlah ragi dan jamur atau metode pencacahan total serupa yang tidak diarahkan pada
mikroorganisme tertentu. Direkomendasikan bahwa selektivitas dan sensitivitas ditetapkan dengan analisis setidaknya 30 galur murni dari
mikroorganisme spesifik yang sedang dipelajari dan setidaknya 20 galur murni galur yang berpotensi bersaing [AOAC OMA Program Manual, 2002).
Jumlah ini mungkin perlu ditingkatkan (mis. Untuk Salmonella metode, jumlah strain analit target ini

ditingkatkan menjadi setidaknya 100 galur yang dipilih untuk mewakili mayoritas serovar yang diketahui
Salmonella).
Untuk pengujian klasifikasi biner, sensitivitas diartikan sebagai kemampuan suatu pengujian untuk mengidentifikasi nilai positif benar dengan benar, sedangkan
spesifisitas pengujian didefinisikan sebagai kemampuan pengujian untuk mengidentifikasi nilai negatif sebenarnya dengan benar. Misalnya, ketika diterapkan
pada tes klasifikasi biner diagnostik medis, jika 100 pasien diketahui memiliki suatu penyakit dites, dan 46 dites positif, maka tes tersebut memiliki sensitivitas
46%. Jika 100 pasien tanpa penyakit diuji dan 94 memberikan hasil negatif, maka tes tersebut memiliki spesifisitas 94%.
Selain sensitivitas dan spesifisitas, kinerja uji klasifikasi biner dapat diukur dengan nilai prediksi positif (PPV) dan nilai prediksi negatif (NPV). Nilai
prediksi positif menjawab pertanyaan "Jika hasil tes positif, seberapa baik prediksi tersebut untuk keberadaan yang sebenarnya, misalnya, suatu
penyakit?". Ini dihitung sebagai (positif benar) / (positif benar + positif palsu); yaitu, ini adalah proporsi positif benar dari semua hasil positif. (Nilai
prediksi negatif sama, tetapi untuk negatif.)
Penting untuk diperhatikan satu perbedaan penting antara kedua konsep tersebut. Artinya, sensitivitas dan spesifisitas tidak bergantung pada populasi
dalam arti tidak berubah bergantung pada proporsi positif dan negatif yang diuji. Memang, Anda dapat menentukan sensitivitas tes dengan hanya
menguji kasus positif. Namun, nilai prediksi bergantung pada populasi.
Kondisi
Positif Negatif
Positif Benar Positif False Positive → Nilai prediksi positif

Uji
hasil
Negatif Negatif Palsu True Negative → Nilai prediksi negatif
↓ ↓
Kepekaan Kekhususan
Contoh yang berhasil untuk menentukan spesifisitas dan sensitivitas tes klasifikasi biner veteriner (tes skrining darah okultisme feses (FOB) yang
digunakan pada 206 anjing untuk mencari kanker usus) disediakan di bawah ini:
Contoh:
Anjing dengan kanker usus
Positif Negatif
→ Nilai prediksi positif

= PB / (PB + PB) = 4 /
Positif TP = 4 FP = 18 (4 + 18)
= 4/22
FOB = 18%
hasil → Nilai prediksi negatif
= TN / (FN + TN) = 182
Negatif FN = 2 TN = 182 / (2 + 182) = 182/184
≈ 98,9%
↓ ↓
Kepekaan Kekhususan
= TP / (TP + FN) = TN / (FP +
= 4 / (4 + 2) TN)
= 4/6 = 182 / (18 +
≈ 66,67% 182)
= 182/200
= 91%
Perhitungan:
Rasio positif palsu (%) = FP / (FP + TN) = 18 / (18 + 182) = 9% = 1 - spesifisitas Rasio negatif palsu (%) = FN
/ (TP + FN) = 2 / (4 + 2 ) = 33% = 1 - sensitivitas Daya = sensitivitas = 1 - tingkat negatif palsu

Rasio kemungkinan positif = sensitivitas / (1 - spesifisitas) = 66,67% / (1 - 91%) = 7,4 Rasio kemungkinan negatif
= (1 - sensitivitas) / spesifisitas = (1 - 66,67%) / 91% = 0,37
Oleh karena itu dengan sejumlah besar positif palsu dan sedikit negatif palsu, tes layar FOB positif dengan sendirinya buruk dalam memastikan kanker
(PPV = 18%) dan penyelidikan lebih lanjut harus dilakukan, namun, itu akan
66,7% dari semua kanker (sensitivitas). Namun sebagai tes skrining, hasil negatif sangat bagus untuk meyakinkan bahwa anjing tidak menderita
kanker (NPV = 98,9%) dan pada skrining awal ini dengan tepat mengidentifikasi 91% dari mereka yang tidak menderita kanker (spesifisitas).
3.4 Ketepatan
Akurasi adalah properti dari hasil pengukuran tunggal dan dipengaruhi oleh kesalahan acak dan sistematis, oleh karena itu tidak disertakan dalam
validasi metode itu sendiri. Keakuratan hasil pengukuran menggambarkan seberapa dekat hasil tersebut dengan nilai sebenarnya dan oleh
karena itu mencakup efek presisi dan kebenaran (dinyatakan dalam bentuk bias).
Presisi berkaitan dengan kondisi pengulangan dan / atau reproduktifitas pengukuran “mendapatkan pengukuran yang sama setiap waktu”. Dengan
kata lain kedekatan hasil beberapa analisis satu sama lain. Oleh karena itu, presisi adalah ukuran penyebaran hasil pengukuran berulang dan hanya
bergantung pada distribusi kesalahan acak - ini tidak memberikan indikasi seberapa dekat hasil tersebut dengan nilai sebenarnya.
Suatu sistem pengukuran bisa akurat tetapi tidak tepat, tepat tetapi tidak akurat, tidak keduanya, atau keduanya. Misalnya, jika percobaan berisi
kesalahan sistematis, memperbesar ukuran sampel biasanya meningkatkan presisi tetapi tidak meningkatkan keakuratan. Menghilangkan kesalahan
sistematis meningkatkan akurasi tetapi tidak mengubah presisi. Namun, validitas sistem pengukuran bergantung pada 'kesesuaian untuk tujuan' dan
karenanya akurasi dan presisi perlu dinilai terhadap kriteria validasi. Tidak ada skala absolut.
Kita tidak pernah bisa membuat pengukuran yang sempurna. Hal terbaik yang bisa kami lakukan adalah sedekat mungkin dengan keterbatasan alat
ukur.
Ilustrasi di bawah ini digunakan sebagai upaya untuk mendemonstrasikan perbedaan antara kedua istilah tersebut, akurasi dan presisi.
Misalkan Anda membidik sebuah target, mencoba mengenai sasaran (pusat target) dengan anak panah. Berikut beberapa pola anak panah yang
mewakili target:
SEBUAH B C
SEBUAH Akurat dan tepat. Anak panah itu berkerumun rapat dan posisi rata-rata mereka adalah pusat dari sasaran.
B Tepat, tapi tidak akurat. Anak panah dikelompokkan bersama tetapi tidak mencapai sasaran yang diinginkan. Akurasi dan presisi
C buruk. Anak panah tidak berkumpul bersama dan tidak berada di dekat sasaran.
Akurasi juga digunakan sebagai ukuran statistik tentang seberapa baik pengujian klasifikasi biner mengidentifikasi atau mengecualikan suatu kondisi
dengan benar. Artinya, keakuratan adalah proporsi hasil sebenarnya (baik positif benar maupun negatif benar) dalam populasi.
Kondisi
Benar Salah
Uji → Positif
Positif Benar-benar positif Positif palsu
hasil nilai prediksi

→ Negatif
Negatif Negatif palsu Negatif benar
nilai prediksi
↓ ↓
Ketepatan
Kepekaan Kekhususan
3.4.1 Presisi
ISO 3534-1 (2006) menjelaskan presisi sebagai ukuran kedekatan (derajat sebaran) antara hasil uji independen yang diperoleh dalam kondisi yang
ditentukan (kondisi yang ditetapkan dapat berupa, misalnya, pengulangan, presisi menengah, atau reproduktifitas). Ketepatan yang dibutuhkan
ditentukan oleh peran hasil tes dalam membuat keputusan. Catatan: “Hasil uji independen” berarti hasil yang diperoleh dengan cara yang tidak
dipengaruhi oleh hasil sebelumnya pada benda uji yang sama atau serupa tetapi juga bahan uji telah disiapkan secara mandiri sehingga dianggap
sampel acak dari populasi yang diukur.
Presisi biasanya dinyatakan secara numerik dengan ukuran ketidaktepatan, seperti deviasi standar (presisi yang kurang tercermin dengan deviasi
standar yang lebih besar) atau deviasi standar relatif (koefisien varian) dari hasil ulangan. Namun, tindakan lain yang sesuai dapat diterapkan. Agar
presisi yang dinyatakan benar-benar mencerminkan kinerja metode dalam kondisi operasi normal, harus ditentukan dalam kondisi seperti itu. Bahan uji
harus khas dari sampel yang biasanya dianalisis. Persiapan sampel harus konsisten dengan praktik normal dan variasi dalam reagen, peralatan uji,
analis, dan instrumentasi harus mewakili yang biasanya ditemui. Sampel harus homogen, bagaimanapun,
Presisi dapat bervariasi dengan konsentrasi analit. Ini harus diselidiki jika konsentrasi analit diharapkan bervariasi lebih dari 50% dari nilai rata-rata.
Untuk beberapa pengujian, mungkin tepat untuk menentukan presisi hanya pada satu atau dua konsentrasi yang memiliki signifikansi tertentu bagi
pengguna data pengujian, misalnya spesifikasi kendali mutu produksi (QC) atau batas peraturan.
Untuk validasi satu laboratorium, ukuran presisi terbaik diperoleh dengan mereplikasi analisis dari bagian uji sampel laboratorium yang disiapkan
secara independen, bahan referensi bersertifikat (CRM) atau bahan referensi (RM), dalam kondisi operasi jangka panjang normal. Biasanya ini akan
melibatkan penentuan reproduktifitas intra-laboratorium seperti yang dijelaskan di bawah ini.
Jika data tersedia dari eksperimen presisi yang dilakukan pada sampel yang berbeda, mungkin pada waktu yang berbeda dan tidak ada perbedaan
yang signifikan antara varian dari setiap kumpulan data, data dapat digabungkan untuk menghitung simpangan baku yang dikumpulkan.
Untuk presisi uji klasifikasi biner didefinisikan sebagai proporsi positif benar terhadap semua hasil positif (baik positif benar dan positif palsu).
Akurasi 100% berarti nilai yang diukur sama persis dengan nilai yang diberikan.
jumlah truepositif
Presisi •
jumlah truepositif • kepalsuan
Untuk membandingkan presisi dari dua metode, uji-F direkomendasikan. Jika statistik uji yang dihitung (F = var1 / var2) melebihi nilai kritis
yang diperoleh dari tabel statistik, terdapat perbedaan yang signifikan antara varian metode dan hipotesis nol ditolak.
Untuk presisi, dua kondisi pengukuran, pengulangan dan reproduktifitas, biasanya dikutip. AS 2850 (1986) memberikan panduan tentang aspek
validasi metode ini. Karena pengulangan dan reproduktifitas akan bervariasi secara tipikal dalam rentang pengukuran suatu metode analisis, ini
harus ditentukan pada beberapa tingkat konsentrasi, dengan salah satu dari tingkat ini mendekati nilai yang lebih rendah dari rentang pengukuran.
Dengan variasi dalam matriks yang dipertanyakan, penentuan pada beberapa level akan diperlukan.
3.4.1.1 Pengulangan
Pengulangan adalah perkiraan presisi yang diperoleh saat hasil pengukuran diproduksi di satu fasilitas dan pengujian dilakukan pada item pengujian
yang identik selama interval waktu yang singkat oleh satu operator yang menggunakan peralatan yang sama dalam kondisi yang sekonstan mungkin
(misalnya waktu dan suhu inkubasi) . Ini dapat dinyatakan sebagai deviasi standar ( s), varians ( s 2), fungsi distribusi probabilitas, dll untuk sejumlah
pengukuran yang sesuai yang dibuat dalam kondisi pengulangan. Jika metode analisis melibatkan

teknik instrumen pengulangan instrumen perlu ditentukan selain pengulangan metode (contoh diberikan di bawah). Pengulangan memberikan
indikasi variasi jangka pendek dalam hasil pengukuran dan biasanya digunakan untuk memperkirakan kemungkinan perbedaan antara hasil
pengukuran ulangan yang diperoleh dalam satu batch analisis. Namun, ini meremehkan penyebaran hasil yang dapat diharapkan dalam kondisi
operasi normal dalam jangka panjang
Deviasi standar pengulangan, varians, fungsi distribusi probabilitas, dll harus ditentukan dengan setidaknya 6 derajat kebebasan. Hal tersebut dapat
dicapai misalnya dengan menganalisis 7 kali seri dengan satu soal tes (df = 6), 4 kali seri dengan 2 soal tes (df = 6), 3 kali seri dengan 3 soal tes
(df). = 6), dll (Zar, 1974).
Pengulangan instrumental dapat ditentukan dengan injeksi larutan standar yang digunakan untuk menyiapkan kurva kalibrasi kerja serta sampel
yang dikeluarkan atau diperkuat pada masing-masing tingkat lonjakan sebanyak 7 kali. Suntikan ini harus dilakukan secara acak untuk
meminimalkan bias. Hitung rata-rata, simpangan baku dan persen simpangan baku relatif.
Pengulangan metode dapat ditentukan dengan menyiapkan kumpulan bahan sampel dengan tingkat analit
pada atau di dekat konsentrasi yang digunakan untuk studi pemulihan metode. Ini dapat dilakukan dengan menggunakan bahan yang timbul atau
dengan memperkuat bahan (kosong atau terjadi) dengan jumlah analit yang diperlukan. Ekstrak ulangan disiapkan dari masing-masing sampel ini dan
dianalisis oleh satu analis pada hari yang sama. Hitung rata-rata, simpangan baku, dan persen simpangan baku relatif.
Untuk analisis mikrobiologi, pengulangan juga dapat dinilai dalam kasus-kasus di mana sampel dibuat dalam duplikat.
3.4.1.2 Reproduksibilitas
Reprodusibilitas adalah perkiraan presisi yang diperoleh ketika serangkaian pengukuran dilakukan dalam kondisi yang lebih bervariasi, yaitu metode
yang sama pada item uji identik yang digunakan oleh operator berbeda dengan peralatan berbeda di fasilitas berbeda pada waktu berbeda. Ini dapat
dinyatakan sebagai deviasi standar, varian, faktor distribusi probabilitas, dll. Dari jumlah yang sesuai dari penentuan pada spesimen identik yang
dianalisis selama beberapa hari dengan setidaknya dua standar kalibrasi berbeda. 'Reproduksibilitas intra-laboratorium', 'reproduktifitas dalam
laboratorium' atau 'presisi menengah' adalah istilah yang digunakan untuk menjelaskan ketepatan yang berkaitan dengan kondisi reproduktifitas yang
dibatasi pada satu fasilitas. Ini melibatkan membuat pengukuran ulangan pada hari yang berbeda, dalam kondisi yang mencerminkan, sejauh
mungkin,
Deviasi standar reproduktifitas dapat ditentukan dengan beberapa sampel yang dijalankan dalam seri atau sebagai deviasi standar gabungan
dari sejumlah penentuan ganda berganda yang dijalankan pada beberapa seri. Besarnya derajat kebebasan yang dicapai dengan berbagai
kombinasi jumlah seri dan jumlah spesimen pada setiap seri diatur pada tabel di bawah ini:
Derajat kebebasan Derajat kebebasan untuk

Jumlah sampel
Jumlah seri untuk pengulangan reproduktifitas fasilitas
per seri
deviasi standar deviasi standar
7 1 6 Tidak ditentukan
4 2 6 7
3 3 6 8
2 6 6 11
n m ( n- 1) * m n * m- 1
Jika metode pengujian akan digunakan untuk analisis rentang jenis sampel (mis. Konsentrasi analit atau matriks sampel yang berbeda) maka
ketepatan perlu dievaluasi untuk rentang sampel yang representatif. Misalnya, ketepatan metode uji biasanya menurun karena konsentrasi analit
menurun.
3.4.2 Kebenaran
Kebenaran pengukuran menggambarkan kedekatan kesepakatan antara rata-rata jumlah tak terbatas dari nilai kuantitas terukur ulangan dan nilai
kuantitas referensi. Kurangnya kebenaran menunjukkan kesalahan sistematis. Bias adalah ekspresi kuantitatif dari kebenaran. Ketepatan hasil
meningkat seiring dengan penurunan bias.
Bias hasil pengukuran dapat dilihat sebagai kombinasi dari bias dari metode itu sendiri, bias laboratorium dan bias yang disebabkan oleh proses
analitik tertentu (pemulihan analitik). GE O'Donnell

dan DB Hibbert (2005) menjelaskan bagaimana bias yang berbeda diacak karena tingkat percobaan komunal yang lebih tinggi digunakan untuk memberikan
deviasi standar.
Tes pemulihan digunakan untuk menilai bias. Bias diukur dengan mendeteksi sejumlah parameter analitik yang ditambahkan ke spesimen dan
dimasukkan ke seluruh metode analisis. Setelah mengurangi konten yang terdeteksi dari parameter analitik yang dipermasalahkan dalam spesimen
asli tanpa penambahan, persentase pemulihan dapat dihitung sebagai persentase dari jumlah yang ditambahkan. Penyimpangan substansial dari
nilai referensi yang diterima diwujudkan dalam tingkat bias yang tinggi.
Untuk memperhitungkan setiap variasi di antara proses, bias harus ditentukan selama beberapa hari dan sebaiknya di seluruh rentang pengukuran
dan, jika dapat diterapkan, melalui penggunaan kombinasi yang sesuai dari spesimen yang berbeda. Karena metode analisis tidak dapat diharapkan
memiliki bias yang sama di seluruh rentang pengukuran (misalnya dengan kurva kalibrasi non-linier), beberapa tingkat konsentrasi harus
digabungkan dalam penentuan bias (setidaknya satu penentuan pada tingkat tinggi dan rendah tingkat). Jika tidak, fasilitas harus dapat membuktikan
bahwa metode analisis yang digunakan memiliki kebenaran yang sama di seluruh rentang pengukuran.
Ketika bahan referensi bersertifikat (CRM) tersedia untuk menyesuaikan dengan matriks dan nilai sampel laboratorium, mereka menyajikan pilihan
terbaik untuk memperkirakan bias. Idealnya, beberapa CRM dengan matriks dan konsentrasi analit yang sesuai harus diukur.
Namun, untuk sebagian besar metode pengujian, CRM yang sesuai tidak tersedia, dan alternatif diperlukan untuk memperkirakan bias. Jika CRM
yang sesuai tidak tersedia, pemulihan dapat diperkirakan dengan menganalisis bahan referensi (RM) (asalkan matriks tersebut cocok dengan sampel
yang akan diuji dan dikarakterisasi secara memadai sehubungan dengan analit yang diminati). Bahan yang ditandai dengan pengujian kolaboratif
terbatas mungkin cocok untuk tujuan tersebut.
Jika CRM atau RM yang sesuai tidak tersedia, bias dapat diselidiki dengan analisis matriks kosong atau sampel yang tidak diperkuat dan diperkuat
(yaitu terkontaminasi secara artifisial) dengan analit yang diminati pada berbagai konsentrasi. Dalam hal ini pemulihan ( R) dihitung dari perbedaan
antara hasil yang diperoleh sebelum dan sesudah spiking sebagai sebagian kecil dari jumlah yang ditambahkan.
c1• c2
R•
c3
Dimana: c 1 = konsentrasi terukur dalam sampel yang diperkaya

c 2 = konsentrasi terukur dalam sampel yang tidak diperkuat
c 3 = konsentrasi benteng
Catatan: Pemulihan dinyatakan sebagai persentase dengan mengalikan hasilnya dengan 100.
Untuk beberapa pengujian, misalnya analisis residu pestisida, fasilitas mungkin dapat meningkatkan sampel yang telah ditentukan agar tidak
mengandung residu analit yang dapat dideteksi. Namun, untuk banyak pengujian, sampel spike yang mengandung konsentrasi alami analit
diperlukan.
Dalam kasus seperti itu, bias diperkirakan dari perbedaan antara hasil yang diperoleh untuk analisis sampel dalam keadaan berduri dan aslinya.
Perhatian disarankan saat mengevaluasi bias dari analisis sampel berduri karena pemulihan mungkin lebih baik untuk analit berduri dibandingkan
dengan analit 'asli', atau residu / kontaminan yang timbul. Misalnya, meskipun menyiram air minum dengan fluorida akan memungkinkan perkiraan
pemulihan yang dapat diandalkan, hal yang sama mungkin tidak berlaku untuk membubuhi pestisida organoklorin pada tanah. Hal ini sebagian besar
disebabkan oleh efisiensi ekstraksi yang berbeda untuk analit 'tambahan' dan 'asli'. Jika memungkinkan, data pemulihan berduri harus didukung dengan
beberapa cara; misalnya, partisipasi dalam uji profisiensi yang melibatkan sampel alami atau sampel dengan residu / kontaminasi yang timbul.
Dalam beberapa kasus, fasilitas harus bergantung hanya pada data pemulihan berduri atau terkontaminasi buatan untuk memperkirakan bias. Dalam
kasus seperti itu, perlu dicatat bahwa sementara pemulihan 100% tidak selalu menunjukkan kebenaran, pemulihan yang buruk pasti menunjukkan bias,
meskipun kemungkinan meremehkan total bias.
Untuk analisis mikrobiologi, organisme yang diinokulasi harus mewakili genera, spesies dan / atau mikroorganisme penghasil toksin yang berbeda
yang dimaksudkan untuk dimasukkan dalam pernyataan penerapan metode. Pilihan kultur harus cukup luas untuk mewakili variasi yang melekat
pada mikroorganisme yang diinginkan.

Metode referensi (biasanya metode standar internasional atau nasional yang diakui) dengan bias yang diketahui juga dapat digunakan untuk
menyelidiki bias metode lain. Sampel khas yang mencakup kisaran matriks dan konsentrasi analit yang relevan dengan program pengujian yang
diusulkan dianalisis dengan kedua metode tersebut. Signifikansi bias metode pengujian dapat diperkirakan dengan analisis statistik (uji-t) dari hasil
yang diperoleh.
3.5 Batas deteksi dan batas kuantitasi

Penentuan batas deteksi (LOD) atau batas kuantitasi (LOQ) biasanya hanya diperlukan untuk metode yang dimaksudkan untuk mengukur analit
pada konsentrasi mendekati nol. Tidak perlu memperkirakan LOD atau LOQ untuk metode yang akan selalu diterapkan untuk mengukur konsentrasi
analit yang jauh lebih besar daripada LOQ. Namun, perkiraan sering kali sangat penting untuk metode penelusuran dan ultra-trace di mana
konsentrasi masalah sering kali mendekati LOD dan LOQ dan hasil yang dilaporkan sebagai 'tidak terdeteksi' dapat berdampak signifikan pada
penilaian risiko atau keputusan peraturan.
Penentuan batas deteksi dan batas kuantitasi yang terpisah mungkin diperlukan untuk matriks yang berbeda.
3.5.1 Batas deteksi (LOD)

Untuk sebagian besar metode analisis modern, LOD dapat dibagi menjadi dua komponen, yaitu method detection limit (MDL) dan instrumental
detection limit (IDL)
MDL adalah istilah yang harus diterapkan pada ekstraksi dan metode analisis yang dikembangkan untuk analisis analit tertentu dalam matriks. MDL
dapat didefinisikan sebagai jumlah atau konsentrasi terkecil dari suatu analit yang dapat dideteksi atau dibedakan secara andal dari latar belakang
untuk matriks tertentu (dengan metode tertentu). Dengan kata lain, LOD adalah nilai terendah yang diukur dengan metode yang lebih besar dari
ketidakpastian yang terkait dengannya (Taylor, 1989). Semua gangguan matriks harus diperhitungkan saat menentukan MDL. Diterapkan pada uji
mikrobiologi, MDL adalah jumlah mikroorganisme terendah yang dapat dideteksi.
Metode LOD tidak sama dengan respons instrumental terendah. Penggunaan rasio sinyal terhadap derau untuk standar analitik yang diperkenalkan
pada instrumen merupakan indikator yang berguna dari kinerja instrumen tetapi cara yang tidak tepat untuk memperkirakan LOD suatu metode.
Sebagian besar analisis saat ini dilakukan pada instrumen analitik. Masing-masing instrumen ini memiliki batasan jumlah analit yang dapat dideteksi.
Batasan ini dapat dinyatakan sebagai batas deteksi instrumen (IDL), yang dapat didefinisikan sebagai jumlah terkecil dari suatu analit yang dapat
dideteksi atau dibedakan secara andal dari latar belakang pada suatu instrumen (yaitu suara instrumen). Ketika sensitivitas meningkat, IDL menurun,
dan sebagai kebisingan instrumen menurun, begitu pula IDL.
Beberapa pendekatan untuk menentukan batas deteksi dimungkinkan. Pendekatan selain yang tercantum di bawah ini mungkin dapat diterima.
3.5.1.1 LOD berdasarkan evaluasi visual
Evaluasi visual dapat digunakan untuk metode non-instrumental tetapi juga dapat digunakan dengan metode instrumental. Ini juga berguna
untuk menetapkan LOD untuk pengukuran kualitatif.
Batas deteksi ditentukan dengan analisis sampel kosong sampel dengan konsentrasi analit yang diketahui dan dengan menetapkan tingkat
minimum di mana analit dapat dideteksi dengan andal.
Sampel kosong dibubuhi analit pada berbagai tingkat konsentrasi. Pada setiap tingkat konsentrasi, perlu untuk mengukur sekitar 7 ulangan independen
(seperti disebutkan sebelumnya, pada kenyataannya jumlah ini sering terlampaui). Pengukuran ulangan di berbagai tingkatan harus diacak. Kurva
respons persentase hasil positif (atau negatif) versus konsentrasi harus dibuat dari data, yang darinya data dapat ditentukan, dengan inspeksi,
konsentrasi ambang batas di mana pengujian menjadi tidak dapat diandalkan.
Batasan deteksi yang diterapkan pada uji mikrobiologi adalah ada tidaknya 1cfu dalam jumlah sampel yang tetap. Walaupun dapat diteliti dan
dibuktikan secara teori, dalam prakteknya hal ini sangat sulit dibuktikan karena adanya mikroorganisme pesaing serta pengaruh sampel pada
organisme tersebut. Oleh karena itu, sampel uji yang terkontaminasi 5-10 cfu dapat digunakan untuk menentukan batas deteksi (SANAS TG 28-02,
2008).
Contoh:
Salah satu metode untuk menunjukkan batas deteksi untuk uji kuantitatif mikrobiologi adalah dengan mengevaluasi dua metode (alternatif dan
kompendial) dengan inokulasi dengan jumlah mikroorganisme tantangan yang rendah (bukan

lebih dari 5 cfu per unit) diikuti dengan pengukuran pemulihan. Tingkat inokulasi harus disesuaikan sampai setidaknya 50% sampel menunjukkan
pertumbuhan dalam uji kompendial. Penentuan ini perlu diulang beberapa kali, karena batas deteksi suatu assay ditentukan dari sejumlah ulangan.
Kemampuan kedua metode untuk mendeteksi keberadaan mikroorganisme dalam jumlah sedikit dapat ditunjukkan dengan uji Chi square.
3.5.1.2 LOD berdasarkan deviasi standar dari blanko
Batas deteksi dapat ditentukan dengan analisis sejumlah besar blank (n • 20 direkomendasikan). Dimana blanko sampel independen masing-masing
diukur satu kali (n • 10 direkomendasikan) dan blanko sampel independen yang diperkuat pada konsentrasi terendah yang dapat diterima
masing-masing diukur sekali (n • 10 direkomendasikan). LOD dinyatakan sebagai nilai rata-rata sampel kosong ditambah tiga standar deviasi (+ 3 s).
3.5.1.3 LOD berdasarkan kisaran di mana persamaan kalibrasi berlaku
Jika data pada sampel dekat atau di LOD tidak tersedia, parameter persamaan kalibrasi dapat digunakan untuk memperkirakan LOD instrumen.
Dengan menggunakan perkiraan LOD sebagai blank ditambah tiga standar deviasi dari blank, respon instrumen terhadap blank diambil sebagai
intersep kalibrasi ( Sebuah), dan standarnya
penyimpangan respons instrumen diambil sebagai kesalahan standar kalibrasi ( s y / x). Oleh karena itu dari
persamaan kalibrasi jika y LOD = a + 3 s y / x = a + bx LOD, kemudian x LOD = 3 s y / x / b. Persamaan ini banyak digunakan dalam kimia analitik. Namun
karena ini adalah ekstrapolasi, hasilnya tidak bisa seandal itu
dari percobaan yang dilakukan di dekat LOD yang diharapkan, dan disarankan agar sampel dengan konsentrasi mendekati LOD yang diperkirakan dianalisis
untuk memastikan bahwa sampel tersebut dapat dideteksi dengan probabilitas yang sesuai.
3.5.1.4 LOD berdasarkan signal-to-noise
Dalam kasus prosedur analitik instrumental yang menunjukkan kebisingan latar belakang, pendekatan yang umum adalah membandingkan sinyal
yang diukur dari sampel dengan konsentrasi analit rendah yang diketahui dengan sampel kosong dan menetapkan konsentrasi minimum di mana
analit dapat dideteksi dengan andal. Rasio signal-to-noise yang biasanya diterima adalah 2: 1 atau 3: 1.
3.5.2 Batas kuantitasi (LOQ)

Batas kuantisasi juga disebut sebagai batas determinasi, namun istilah batas kuantitasi lebih disukai untuk membedakannya dari LOD. Sama halnya
dengan LOD, LOQ dapat dibagi menjadi dua komponen, yaitu method quantitation limit (MQL) dan instrumental quantitation limit (IQL).
MQL dapat didefinisikan sebagai jumlah terkecil dari analit yang dapat diidentifikasi dan diukur secara andal dengan tingkat keandalan tertentu dalam
matriks tertentu (dengan metode tertentu).
IQL dapat didefinisikan sebagai jumlah terkecil dari analit yang dapat diidentifikasi dan diukur dengan andal oleh instrumen.
Batas kuantitasi dinyatakan sebagai konsentrasi analit (misalnya persentase, bagian per miliar) dalam sampel. Berbagai konvensi telah diterapkan
untuk memperkirakan LOQ. Bergantung pada tingkat kepastian yang diperlukan (misalnya apakah analisis tersebut untuk tujuan hukum,
ketidakpastian pengukuran target, dan kriteria penerimaan), rekomendasi paling umum adalah mengutip LOQ sebagai nilai kosong ditambah 10 kali
deviasi standar pengulangan, atau 3 kali LOD (yang sebagian besar memberikan angka yang sama) atau 50% di atas tingkat fortifikasi terendah
yang digunakan untuk memvalidasi metode. Untuk kepastian yang lebih besar, LOQ dapat dikutip sepuluh kali LOD. Faktor lain dapat digunakan
dalam jenis aktivitas pengujian tertentu dan fasilitas harus dalam hal ini mengacu pada faktor yang ada di dalam jenis aktivitas pengujian yang
dimaksud.
Batas kuantitasi untuk matriks dan metode yang ditentukan dapat bervariasi antara fasilitas atau dalam satu fasilitas dari waktu ke waktu karena
peralatan, teknik, dan reagen yang berbeda.
3.5.2.1 Batas pelaporan (LOR)
LOR adalah batas praktis kuantitasi pada atau di atas LOQ.
3.6 Kekasaran
Kekasaran (ukuran ketahanan) suatu metode adalah sejauh mana hasil tidak terpengaruh oleh perubahan kecil dari kondisi eksperimental yang
dijelaskan dalam metode, misalnya, perubahan kecil pada suhu, pH, konsentrasi reagen, laju alir, waktu ekstraksi, komposisi fase gerak. Pengujian
kekasaran memberikan indikasi keandalan metode selama penggunaan normal. Tujuan dari pengujian kekasaran adalah untuk mengidentifikasi dan,
jika perlu, kondisi metode pengendalian yang lebih baik yang dapat menyebabkan variasi dalam hasil pengukuran, ketika pengukuran dilakukan pada
waktu yang berbeda atau pada waktu yang berbeda.

fasilitas. Ini juga dapat digunakan untuk mengidentifikasi faktor-faktor yang perlu ditangani untuk meningkatkan presisi dan bias. Kekasaran diselidiki
dengan mengukur efek perubahan kecil yang direncanakan pada kondisi metode pada rata-rata hasil. Uji coba perlu dilakukan dengan bantuan
spesimen kosong, bahan referensi (bersertifikat), spesimen dengan komposisi yang diketahui, dll. Untuk mengevaluasi tingkat kekasaran, pengujian
signifikansi dapat dilakukan. Dalam beberapa kasus, informasi mungkin tersedia dari studi yang dilakukan selama pengembangan metode in-house.
Investigasi reproduktifitas intra-laboratorium, menurut sifatnya, memperhitungkan beberapa aspek kekasaran suatu metode.
Pengujian kekasaran dapat dilakukan dengan mempertimbangkan setiap efek secara terpisah, dengan mengulangi pengukuran setelah
memvariasikan parameter tertentu dengan jumlah kecil dan mengontrol kondisi lain secara tepat (pengujian variabel tunggal). Namun, ini bisa menjadi
padat karya karena sejumlah besar efek mungkin perlu dipertimbangkan. Desain eksperimental tersedia, yang memungkinkan beberapa faktor
independen diperiksa secara bersamaan. Hibbert (2007) menjelaskan desain eksperimental Plackett-Burman yang memberikan pendekatan yang
ekonomis dan efisien dimana (4 n - 1) variabel dievaluasi dengan melakukan hanya 4 n analisis. Kedua pendekatan mengasumsikan independensi efek.
Dalam praktiknya, seorang analis berpengalaman akan dapat mengidentifikasi parameter metode tersebut dengan potensi untuk mempengaruhi hasil dan
memperkenalkan kontrol, misalnya batas yang ditentukan untuk suhu, waktu atau rentang pH, untuk menjaga dari efek tersebut.
3.7 Ketidakpastian Pengukuran

Measurement Uncertainty (MU) adalah sifat hasil pengukuran, bukan metode. Namun, jika suatu metode berada di bawah kendali statistik yang
memadai, perkiraan indikatif UM dari hasil pengukuran tipikal dapat dikutip.
MU didefinisikan sebagai parameter, terkait dengan hasil pengukuran, yang mencirikan penyebaran nilai yang secara wajar dapat dikaitkan dengan
besaran ukur (JCGM200, 2008). Pengetahuan tentang UM diperlukan untuk perbandingan pengukuran yang efektif dan untuk perbandingan
pengukuran dengan batasan spesifikasi. ISO / IEC 17025 dan ISO 15189 mensyaratkan perkiraan fasilitas tersebut dan, jika memungkinkan,
melaporkan MU yang terkait dengan hasil. Oleh karena itu, estimasi UM dapat dianggap sebagai persyaratan penting dalam validasi metode.
Terdapat banyak referensi yang menyajikan pendekatan berbeda untuk estimasi UP, dan karenanya UM tidak dibahas panjang lebar dalam dokumen
ini. ISO telah menerbitkan pedoman tentang estimasi MU (ISO / IEC Guide 98-3, 2008) dan dokumen interpretatif oleh Eurachem / CITAC
menjelaskan bagaimana mereka dapat diterapkan pada pengukuran analitis (Eurochem / CITAC, 2000). Dokumen-dokumen ini sekarang telah
dilengkapi dengan pedoman dan contoh dari sejumlah sumber lain (UKAS, 2000; ILAC, 2002; APLAC, 2003; Magnusson et al., 2003; ISO / TS, 2004;
Nordtest, 2005; Eurolab, 2007) bertujuan untuk menyediakan fasilitas dengan contoh yang lebih praktis dan pendekatan yang lebih sederhana yang
dapat digunakan untuk menghitung estimasi UP yang wajar. Contoh yang sangat baik juga tersedia dari situs web www.measurementuncertainty.org.
Informasi yang diperoleh dari aspek lain dari validasi metode, seperti dijelaskan di atas, dapat memberikan kontribusi yang besar untuk anggaran
ketidakpastian pengukuran (tetapi komponen lain juga harus dinilai). Data ini dapat dilengkapi dengan data dari pemeriksaan QC reguler setelah
metode tersebut beroperasi dan data yang dihasilkan dari partisipasi dalam uji coba uji profisiensi yang relevan. Estimasi juga dapat didasarkan pada,
atau sebagian berdasarkan, data yang dipublikasikan dan penilaian profesional. Seperti semua aspek validasi metode, estimasi UP harus sesuai untuk
tujuan. Ketelitian yang diperlukan untuk perkiraan akan bervariasi sesuai dengan alasan pengujian; prinsipnya adalah bahwa perkiraan harus masuk
akal untuk tujuan yang dimaksudkan. Perkiraan UM yang wajar dapat diperoleh dari pertimbangan presisi jangka panjang (reproduktifitas
intra-laboratorium) dan bias.

3.8 Ringkasan
Tabel di bawah ini merangkum karakteristik kinerja yang harus dipertimbangkan ketika merencanakan validasi metode dan investigasi verifikasi
metode untuk metode kuantitatif dan kualitatif dan juga menyertakan catatan singkat tentang bagaimana setiap karakteristik kinerja dapat
ditentukan.
Validasi Verifikasi
Karakteristik yang akan dievaluasi Kuantitatif Kualitatif Kuantitatif Kualitatif
metode metode metode metode
Batas deteksi * dan
penghitungan • - • -
Kepekaan
• • • •
Selektivitas
• • • •
Rentang di mana persamaan kalibrasi
berlaku (linearitas kalibrasi) • - • -
Interval pengukuran
• - • -
Efek matriks
• • • •
Kebenaran; bias • • • •
Presisi (pengulangan dan
reproduktifitas) / Akurasi • • • •
Kekasaran
• • - -
Pengukuran Ketidakpastian (MU)
• - (1) -
* Diperlukan untuk metode yang dimaksudkan untuk mengukur analit pada konsentrasi mendekati nol Menandakan
• bahwa karakteristik ini biasanya dievaluasi
- Menandakan bahwa karakteristik ini biasanya tidak dievaluasi
(1) Jika metode pengujian yang dikenal baik menetapkan batasan nilai sumber utama UP dan bentuk penyajian hasil yang dihitung, fasilitas
dianggap telah memenuhi persyaratan ISO / IEC 17025 atau ISO 15189.
Karakteristik yang akan dievaluasi Prosedur yang dapat diikuti
Batas deteksi dan Replikasi analisis pada berbagai konsentrasi termasuk konsentrasi yang mendekati nol (metode grafis),
penghitungan atau replikasi analisis pada konsentrasi yang diperkirakan sama dengan dua kali LOQ (metode
statistik). Gunakan blanko dan berbagai standar atau sampel yang mengandung analit konsentrasi
rendah (alami atau terkontaminasi buatan). Penentuan terpisah mungkin diperlukan untuk matriks yang
berbeda.
Kepekaan Analisis sampel atau standar berduri atau terkontaminasi artifisial yang disiapkan dalam larutan ekstrak
sampel. Pemeriksaan awal untuk gradien yang memuaskan untuk plot respon vs konsentrasi. (Lebih tepat
masalah QC setelah pemeriksaan awal).
Selektivitas Analisis reagen dan matriks kosong, standar dan sampel matriks yang dibubuhi standar (dalam kisaran
kerja) yang telah ditambahkan konsentrasi yang diduga dari gangguan yang dicurigai.
Rentang di mana persamaan kalibrasi Pengukuran duplikat dari standar yang ditempatkan secara merata di atas kisaran konsentrasi sampel
berlaku (linearitas kalibrasi) yang diharapkan.
Interval pengukuran Evaluasi bias dan kemungkinan penentuan LOQ
Efek matriks Analisis matriks kosong atau matriks yang dibubuhi standar (setidaknya satu kali atau dalam rangkap dua pada
masing-masing 3 konsentrasi di setiap jenis matriks sampel).
Kebenaran; bias Analisis ulangan. Sampel referensi harus matriks dan konsentrasi dicocokkan dengan sampel.

Karakteristik yang akan dievaluasi Prosedur yang dapat diikuti
Presisi (pengulangan dan Analisis ulangan untuk setiap jenis matriks sampel (jika mungkin dipilih untuk memuat analit pada konsentrasi yang
reproduktifitas) / Akurasi paling relevan bagi pengguna hasil pengujian) dalam kondisi yang ditetapkan. Untuk membandingkan presisi dari
dua metode, uji-F direkomendasikan. Untuk akurasi, bandingkan nilai sebenarnya dari setiap campuran vs. hasil
yang diukur.
Kekasaran Memperkenalkan batasan yang tepat untuk parameter metode yang mungkin berdampak pada hasil jika tidak dikontrol
dengan hati-hati. Selidiki jika perlu:
saya) uji variabel tunggal (uji dan uji ulang dengan perubahan kecil ke satu parameter
metode);
ii) tes multi variabel (eksperimen yang dirancang oleh Plackett-Burman).
Pengukuran Ketidakpastian (MU) Hitung perkiraan UM yang masuk akal dan sesuai untuk tujuan. Pastikan perkiraan selaras dengan
konsentrasi yang paling relevan dengan pengguna hasil.
Tidak semua parameter perlu dinilai untuk semua metode. Ketelitian validasi harus cukup untuk memastikan bahwa hasil tes yang dihasilkan oleh suatu
metode secara teknis bagus dan akan memenuhi kebutuhan klien. Studi validasi metode yang direncanakan dengan baik akan didasarkan pada
pemahaman yang jelas tentang persyaratan khusus untuk metode yang digunakan. Dalam kerangka kerja ini, eksperimen yang dirancang dengan cermat
akan memberikan informasi untuk memenuhi lebih dari satu parameter.
Fasilitas perlu menyimpan catatan lengkap tentang validasi metode, termasuk prosedur yang digunakan untuk validasi, hasil yang diperoleh,
dan pernyataan apakah metode tersebut sesuai untuk tujuan.
Fasilitas juga harus terus menerus memeriksa bahwa metode analisis memenuhi nilai karakteristik kinerja yang didokumentasikan sehubungan
dengan validasi. Hal ini dapat dicapai dengan misalnya melacak perilaku sampel kendali mutu internal dari waktu ke waktu. Jika metode tidak lagi
memberikan hasil yang konsisten dengan data validasi asli, metode tersebut dapat dianggap tidak sesuai untuk tujuan yang dimaksudkan.
4. Validasi metode non-rutin

Seringkali, metode tertentu digunakan hanya untuk beberapa analisis sampel. Pertanyaan harus diajukan, apakah metode ini juga perlu divalidasi
dengan menggunakan kriteria yang sama seperti yang direkomendasikan untuk analisis rutin. Dalam hal ini, validasi mungkin memerlukan lebih
banyak waktu daripada analisis sampel dan dapat dianggap tidak efisien, karena biaya per sampel akan meningkat secara signifikan. Jawabannya
cukup sederhana: Analisis apa pun hanya bermanfaat jika datanya cukup akurat; jika tidak, analisis sampel tidak ada gunanya. Kesesuaian metode
analisis dengan tujuan penggunaannya merupakan prasyarat untuk memperoleh data yang akurat; oleh karena itu, hanya metode yang divalidasi
yang harus digunakan untuk memperoleh data yang berarti. Namun, bergantung pada situasinya, upaya validasi dapat dikurangi untuk metode
non-rutin. Eurachem / CITAC Panduan kualitas dalam kimia analitik: Bantuan untuk akreditasi ( 2002) mencakup bab tentang bagaimana
memperlakukan metode non-rutin. Rekomendasinya adalah untuk mengurangi biaya validasi dengan menggunakan metode generik, misalnya
metode yang dapat diterapkan secara luas. Suatu metode umum dapat, misalnya, didasarkan pada kromatografi gas kapiler atau pada HPLC
gradien fase terbalik. Dengan sedikit atau tanpa modifikasi, metode ini dapat diterapkan pada sejumlah besar sampel. Parameter kinerja harus telah
divalidasi pada sampel tipikal yang dikarakterisasi oleh matriks sampel, jenis senyawa dan kisaran konsentrasi.
Jika, misalnya, senyawa baru dengan struktur serupa dalam matriks yang sama akan dianalisis, validasi hanya memerlukan beberapa eksperimen
utama. Dokumentasi metode umum tersebut harus dirancang agar dapat dengan mudah mengakomodasi perubahan kecil yang berkaitan dengan
langkah-langkah individu, seperti persiapan sampel, analisis sampel, atau evaluasi data.
Prosedur operasi metode harus menentukan pemeriksaan yang perlu dilakukan untuk analit baru untuk menetapkan bahwa analisis tersebut valid.
Dokumentasi terperinci dari semua parameter eksperimental penting untuk memastikan bahwa pekerjaan dapat diulangi dengan cara yang persis
sama di kemudian hari.
5. Validasi dan verifikasi metode subjektif

Menurut ISO / IEC 17025 semua prosedur teknis yang digunakan oleh fasilitas harus sepenuhnya divalidasi atau diverifikasi sebelum digunakan.
Persyaratan ini tidak hanya berlaku untuk metode analisis tetapi juga untuk metode yang hasilnya didasarkan pada keputusan interpretatif atau tingkat
subjektivitas (misalnya, tulisan tangan, senjata api dan analisis audio di laboratorium forensik, identifikasi mikroskopis, metode pengujian
non-destruktif, pengujian mekanis metode, dll.). Pedoman ini dimaksudkan untuk memberikan tingkat konsistensi, keandalan, dan harmonisasi

validasi dan verifikasi tidak hanya metode analitik seperti yang tercakup dalam bagian 2 dan 3 dokumen ini, tetapi juga untuk metode
pengujian berdasarkan keputusan interpretatif (yaitu metode pengujian subjektif).
Metode uji subjektif adalah metode di mana pengalaman dan keahlian analis atau penguji merupakan penentu signifikan apakah sampel atau item
uji dikatakan memenuhi kriteria tertentu atau tidak. Penilaian didasarkan pada data kualitatif dan keahlian individu dalam menafsirkan informasi
tersebut. Validasi metode tersebut lebih menantang dan tidak terlalu proscriptive dibandingkan dengan pengukuran analitik.
Parameter validasi seperti linieritas atau batas deteksi tidak relevan dalam pengujian subjektif. Presisi dan akurasi mungkin relevan dan mungkin perlu
dipertimbangkan.
Parameter yang harus diperhatikan adalah:
• Pengulangan / reproduktifitas; dan

• Probabilitas deteksi dan / atau potensi tingkat kesalahan. * lihat catatan 1 di bawah
Langkah-langkah mitigasi atau pengendalian berikut mungkin juga relevan:
• Analisis kritis (atau risiko);

• Latihan kolaboratif seperti pengujian perbandingan antar dan intra-laboratorium; * lihat catatan 2 di bawah
• Kontrol kualitas;
• Tingkat kompetensi staf yang terlibat; dan Tingkat
• penerimaan metode tes.
Pertanyaan berikut juga harus dipertimbangkan:
Apakah teknik telah diuji dalam kondisi jenis aktivitas aktual (dan tidak hanya di fasilitas), jika berlaku? Dapatkah probabilitas deteksi dan tingkat
kesalahan diperkirakan dengan andal?
* Catatan 1: Fasilitas mungkin tidak memiliki sarana andal memperkirakan probabilitas deteksi atau tingkat kesalahan potensial untuk metode
interpretatif / komparatif. Ini karena pengaruh pemeriksa individu pada parameter ini.
* Catatan 2: Perbandingan antar laboratorium dapat meningkatkan ketidakpastian.
Parameter Validasi
5.1 Pengulangan / reproduktifitas (yaitu keandalan)

Metode tes subyektif dapat dikatakan valid jika analis atau penguji berulang kali memperoleh hasil yang benar untuk tes yang diketahui positif dan
negatif. Bukti pengulangan dapat mencakup memberikan bukti:
- Tingkat kesepakatan antara dua analis atau penguji yang berbeda yang telah menilai bukti kinerja yang sama untuk metode tertentu (yaitu keandalan
antar-analis atau penguji); atau
- Tingkat persetujuan dari analis atau pemeriksa yang sama yang telah menilai bukti kinerja yang sama tetapi pada waktu yang berbeda
(yaitu keandalan intra-analis atau pemeriksa).
Bentuk lain dari reliabilitas yang harus dipertimbangkan termasuk konsistensi internal dari suatu tes (yaitu reliabilitas internal) serta kesetaraan
dari tes penilaian alternatif (yaitu bentuk paralel).
5.2 Kemungkinan deteksi dan / atau tingkat kesalahan potensial

Ketika memvalidasi atau memverifikasi metode uji kualitatif subjektif, probabilitas deteksi (POD) dan potensi tingkat kesalahan perlu dipertimbangkan.
Selain POD dan potensi tingkat kesalahan, sensitivitas dan selektivitas juga diidentifikasi sebagai karakteristik kinerja kritis dalam validasi metode
identitas kualitatif. POD dan tingkat kesalahan potensial dinyatakan sebagai persentase. POD adalah kemungkinan bahwa metodologi pengujian akan
mengidentifikasi besaran ukur dengan benar. Penentuan POD secara empiris untuk situasi baru tidak selalu praktis karena kurangnya waktu,
spesimen uji, dan sumber daya terbatas lainnya. Model fisik dapat memberikan alternatif yang berguna untuk penentuan empiris untuk mengukur POD
dalam situasi ketika data terbatas tetapi mungkin tidak memperhitungkan semua faktor dan sumber variabilitas. Metode statistik dapat digunakan untuk
mengukur dan menyesuaikan bias sistematis dan sumber variabilitas yang tidak diperhitungkan dalam model fisik. Oleh karena itu, menggabungkan
model fisik dengan penyesuaian empiris berpotensi memberikan metodologi yang bisa diterapkan.

Tingkat kesalahan potensial, yang sering ditentukan melalui partisipasi dalam studi pengujian profisiensi, juga dikenal sebagai "tingkat kepercayaan"
dari uji hipotesis dan sebagai tingkat signifikansi statistik dari hasil tes. Ini tidak memiliki definisi yang seragam. Ini bisa berarti rasio positif palsu, yang
merupakan persentase positif palsu dibagi dengan kombinasi negatif benar dan positif palsu; persentase positif palsu, yaitu persentase positif palsu
dibagi kombinasi positif benar dan positif palsu; atau sejumlah kemungkinan berbeda yang mungkin sangat bervariasi bahkan dalam satu sampel.
Tindakan Kontrol
5.3 Analisis kritis (atau risiko)

Analisis kritis (atau analisis risiko) perlu dilakukan. Ini termasuk identifikasi kemungkinan sumber kesalahan dan variasi proses. Setelah sumber
diidentifikasi, dampaknya terhadap proses perlu dievaluasi. Probabilitas deteksi (POD), kemungkinan terjadinya masalah (O), dan gravitasi
konsekuensi yang dihasilkan (G) dievaluasi. Parameter kritis (C) kemudian dapat dihitung (C = POD * O * G), dan mewakili ukuran kuantitatif dari
kekritisan dari setiap kemungkinan sumber ketidaksesuaian. Solusi yang tepat dapat diusulkan untuk setiap sumber yang mungkin diidentifikasi
untuk mengurangi kritis (C) ke tingkat yang dapat diterima, baik dengan meningkatkan pendeteksian masalah (dan mengurangi faktor POD) dan /
atau mengurangi kemungkinan terjadinya masalah (dan mengurangi faktor HAI).
5.4 Latihan kolaboratif

Partisipasi dalam latihan kolaboratif seperti pengujian perbandingan intra dan antar laboratorium penting untuk menentukan batasan metode. Ini juga
merupakan sumber penting penentuan tingkat kesalahan.
5.5 Kontrol kualitas

Setiap pengujian subjektif harus memiliki prosedur pengendalian kualitas yang tertanam. Metode pengujian harus mencakup prosedur untuk
memasukkan kontrol negatif dan positif jika memungkinkan. Misalnya, hasil tes subjektif dapat diperiksa oleh analis kompeten lainnya jika
memungkinkan. Pemeriksaan harus dilakukan tanpa akses ke pendapat analis pertama. Hasil pemeriksaan tersebut dapat disusun untuk menunjukkan
keandalan metode tersebut. Namun kehati-hatian harus diberikan karena keandalan dapat dipengaruhi oleh keahlian analis.
5.6 Kompetensi staf

Tujuan sebenarnya dari validasi metode subyektif adalah untuk memverifikasi kemungkinan memperoleh hasil yang benar menggunakan tes yang
dimaksud. Tes subyektif pada dasarnya adalah evaluasi kualitatif. Keahlian analis merupakan komponen penting. Oleh karena itu validasi harus
sangat bergantung pada pengujian keahlian pemeriksa. Diperlukan verifikasi kompetensi yang berkelanjutan.
5.7 Tingkat penerimaan metode tes

Metode pengujian yang mapan dan diterima mungkin tidak selalu memerlukan tingkat validasi atau verifikasi metode yang sama. Pertimbangan yang
relevan mungkin termasuk apakah teknik tersebut telah ditinjau oleh sejawat atau tidak dan diterbitkan dalam jurnal yang diakui. Ada atau tidak
standar untuk pengendalian operasi teknik dan jika teknik tersebut telah diterima secara umum dalam komunitas ilmiah yang relevan.

6. Daftar Istilah
Akurasi, Akurasi Pengukuran, Akurasi Pengukuran - Kedekatan kesepakatan antara nilai kuantitas terukur dan nilai kuantitas sebenarnya
dari suatu besaran ukur (JCGM200: 2008).
Analit - Komponen sampel atau item pengujian yang mencakup kuantitas atau kualitas yang pada akhirnya ditentukan secara langsung atau tidak
langsung. Istilah 'analit' dalam dokumen ini berlaku untuk zat atau bahan apa pun yang akan dianalisis (misalnya, komponen darah, unsur kimia,
mikroorganisme, dll).
Bias, Bias Pengukuran - Perkiraan kesalahan pengukuran sistematis (JCGM200: 2008).
Tes Klasifikasi Biner - Adalah tugas untuk mengklasifikasikan anggota dari sekumpulan objek ke dalam dua kelompok berdasarkan apakah mereka
memiliki beberapa properti atau tidak (misalnya diterapkan pada pengujian medis, tes klasifikasi biner digunakan untuk menentukan apakah seorang
pasien memiliki penyakit tertentu atau tidak - properti klasifikasi adalah penyakit). Bisa juga disebut sebagai tes ada / tidak, atau tes positif / negatif.
Kosong - Nilai kosong diperoleh sebagai hasil analisis spesimen yang sedapat mungkin tidak mengandung analit yang dimaksud. Penggunaan
berbagai jenis blank (yang tidak ditambahkan analit) memungkinkan penilaian tentang seberapa banyak respons instrumen terukur yang dapat
diatribusikan ke analit dan seberapa besar penyebab lainnya. Berbagai jenis blank tersedia untuk pengguna: Reagen kosong: Reagen yang
digunakan selama proses analisis (termasuk pelarut yang digunakan untuk ekstraksi atau pelarutan) dianalisis secara terpisah untuk melihat apakah
mereka berkontribusi pada sinyal pengukuran. Hasil pengukuran yang timbul dari analit kemudian dapat dikoreksi. Sampel kosong. Ini pada dasarnya
adalah matriks tanpa analit. Mereka mungkin sulit diperoleh tetapi bahan-bahan tersebut memberikan perkiraan terbaik dari efek interferensi yang
akan ditemui dalam analisis sampel uji (Eurachem, 1998).
Kalibrasi - Operasi yang, dalam kondisi yang ditentukan pada langkah pertama, menetapkan hubungan antara nilai kuantitas dengan ketidakpastian
pengukuran yang disediakan oleh standar pengukuran dan indikasi yang sesuai dengan ketidakpastian pengukuran terkait dan, pada langkah kedua,
menggunakan informasi ini untuk menetapkan hubungan untuk memperoleh pengukuran hasil dari suatu indikasi. Kalibrasi dapat diekspresikan
dengan pernyataan, fungsi kalibrasi, diagram kalibrasi, kurva kalibrasi, atau tabel kalibrasi. Dalam beberapa kasus, ini mungkin terdiri dari koreksi aditif
atau perkalian dari indikasi dengan ketidakpastian pengukuran terkait. Kalibrasi tidak boleh disamakan dengan penyesuaian sistem pengukuran, yang
sering keliru disebut "kalibrasi sendiri", atau pun dengan verifikasi kalibrasi (JCGM200: 2008).
Bahan Referensi Bersertifikat - Materi referensi, disertai dengan dokumentasi yang dikeluarkan oleh badan otoritatif dan memberikan satu atau
lebih nilai properti tertentu dengan ketidakpastian dan ketertelusuran terkait, menggunakan prosedur yang valid (JCGM200: 2008).
Derajat kebebasan - Jumlah penentuan independen (perkiraan) dari besaran statistik tertentu (misalnya mean atau deviasi standar) yang
dapat dilakukan berdasarkan kumpulan data tertentu.
Fasilitas - Diketahui bahwa tidak semua kegiatan pengujian atau kalibrasi dilakukan di 'laboratorium'. Karenanya, istilah 'fasilitas' dan
'laboratorium' digunakan secara bergantian di seluruh dokumen ini.
Negatif Palsu - Hasil negatif dari uji klasifikasi biner ketika hasil sebenarnya positif.
Positif Palsu - Hasil positif dari uji klasifikasi biner ketika hasil sebenarnya negatif.
Kebugaran untuk Tujuan - Sejauh mana data yang dihasilkan oleh proses pengukuran memungkinkan pengguna untuk membuat keputusan yang benar secara
teknis dan administratif untuk tujuan yang dinyatakan (IUPAC, 2000).
Sampel yang Dibentengi - Sampel yang terkontaminasi secara artifisial yang telah ditambahkan dengan konsentrasi analit yang diketahui (juga dikenal
sebagai a berduri Sampel). Digunakan untuk menguji akurasi (terutama efisiensi pemulihan) dari metode analitis.
Standar emas - Istilah yang sering digunakan dalam jenis pengujian kegiatan medis dan kedokteran hewan. Mengacu pada metode uji diagnostik atau
tolok ukur yang dianggap pasti. (Lihat Metode Standar definisi).
Batas Deteksi - Nilai kuantitas terukur, diperoleh dengan prosedur pengukuran tertentu, di mana probabilitas klaim palsu tidak adanya komponen
dalam suatu bahan adalah •• diberi kemungkinan • mengklaim keberadaannya secara tidak benar (JCGM200: 2008). Catatan: IUPAC
merekomendasikan nilai default untuk • dan • sama dengan 0,05.

Batas Kuantitas, Batas Penentuan - Mengacu pada konsentrasi atau massa analit terkecil, yang dapat dianalisis secara kuantitatif dengan
keandalan yang wajar dengan prosedur tertentu.
Presisi Menengah, Presisi Pengukuran Menengah - Presisi pengukuran di bawah serangkaian kondisi presisi menengah (JCGM200: 2008).
Kondisi Pengukuran Presisi Menengah, Kondisi Presisi Menengah - Kondisi pengukuran, dari sekumpulan kondisi yang mencakup prosedur
pengukuran yang sama, lokasi yang sama, dan pengukuran ulangan pada objek yang sama atau serupa dalam jangka waktu yang lama, tetapi dapat
mencakup kondisi lain yang melibatkan perubahan (JCGM200: 2008).
Matriks - Bahan, komponen, atau substrat utama yang berisi analit bunga.
Efek Matriks - Perubahan atau gangguan langsung atau tidak langsung sebagai respons karena adanya analit yang tidak diinginkan
(untuk analisis) atau zat pengganggu lainnya dalam sampel.
Verifikasi Matriks - Jika fasilitas perlu menerapkan metode standar atau metode peer review untuk matriks yang secara umum berbeda dari ruang
lingkup tujuan awal metode tersebut, perlu untuk memverifikasi bahwa metode ini sesuai untuk matriks baru. Pertimbangan harus diberikan pada
properti matriks baru sebelum protokol validasi dilakukan. Misalnya, sifat dari sifat fisik dari matriks atau keberadaan agen biostatik, yang dapat
mempengaruhi pemulihan determinan, harus dipertimbangkan dan tindakan yang tepat harus diambil.
Measurand - kuantitas yang akan diukur (JCGM200: 2008).
Ketidakpastian Pengukuran - Parameter non-negatif yang mencirikan penyebaran nilai kuantitas yang dikaitkan dengan besaran ukur,
berdasarkan informasi yang digunakan (JCGM200: 2008).
Interval pengukuran, interval kerja - Kumpulan nilai kuantitas dari jenis yang sama yang dapat diukur dengan alat ukur atau sistem pengukuran
tertentu dengan ketidakpastian instrumen tertentu, dalam kondisi yang ditentukan (JCGM200: 2008). Catatan: Batas bawah interval pengukuran
jangan sampai tertukar dengan batas deteksi.
Validasi Metode - Proses penetapan karakteristik kinerja dan batasan suatu metode dan identifikasi pengaruh yang dapat mengubah karakteristik ini
dan sejauh mana. Analit mana yang dapat ditentukan di matriks mana dengan adanya gangguan apa? Dalam kondisi ini, tingkat presisi dan akurasi
apa yang dapat dicapai? Proses untuk memverifikasi bahwa suatu metode cocok untuk tujuan; yaitu untuk penggunaan pemecahan masalah analitis
tertentu (Eurachem, 1998).
Verifikasi Metode - Ketika akreditasi pertama kali dicari untuk metode standar, data verifikasi harus dibuat. (Jika versi baru dari metode standar
diperkenalkan, modul pelatihan diperlukan. Lihat Lampiran 1). Verifikasi adalah proses mendemonstrasikan kriteria kinerja yang termasuk dalam
metode yang dapat dipenuhi oleh fasilitas sebelum memperkenalkannya untuk penggunaan rutin.
Pengujian Mikrobiologi - Istilah 'pengujian mikrobiologi' yang dimaksud dalam dokumen ini mencakup pengujian sampel untuk mikroorganisme dan
dapat diterapkan pada berbagai tingkatan untuk jenis kegiatan pengujian berikut (misalnya Agribisnis, Kesehatan Hewan, Lingkungan, Makanan dan
Minuman, Patologi Manusia dan Legal).
Peron - Istilah 'platform' biasanya mengacu pada sistem operasi komputer. Istilah ini sering digunakan ketika mengacu pada jenis sistem komputer apa
yang akan menjalankan program perangkat lunak tertentu.
Nilai Prediktif Positif dan Negatif - Istilah 'nilai prediksi positif dan negatif' sering digunakan untuk tes klasifikasi biner diagnostik dan mengacu pada
tingkat presisi. Misalnya, file nilai prediksi positif ( rasio positif benar untuk gabungan positif benar dan salah) adalah proporsi pasien dengan hasil
tes positif yang didiagnosis dengan benar. Ini adalah ukuran paling penting dari metode diagnostik karena mencerminkan probabilitas bahwa tes
positif mencerminkan kondisi yang mendasari yang sedang diuji. Itu
nilai prediksi negatif adalah proporsi pasien dengan hasil tes negatif yang didiagnosis dengan benar (rasio negatif benar dengan
gabungan negatif benar dan salah).
Presisi, Presisi Pengukuran - Kedekatan kesepakatan antara indikasi atau nilai kuantitas terukur yang diperoleh dengan mereplikasi pengukuran
pada benda yang sama atau serupa dalam kondisi tertentu.

Presisi pengukuran digunakan untuk menentukan pengulangan pengukuran, presisi pengukuran menengah, dan reproduktifitas pengukuran
(JCGM200: 2008).
Strain Murni - Strain murni mengacu pada keturunan isolasi tunggal dalam budaya murni dan biasanya terdiri dari rangkaian budaya yang pada
akhirnya diturunkan dari satu koloni. SEBUAH budaya murni adalah kultur sel atau organisme multisel yang tumbuh tanpa adanya spesies atau
jenis lain. Kultur murni dapat berasal dari satu sel atau organisme tunggal, dalam hal ini sel-sel tersebut merupakan klon genetik satu sama lain.
Hasil tes kualitatif - Hasil tes tidak diperoleh secara numerik (misalnya pemeriksaan visual atau tes klasifikasi biner seperti ketiadaan /
kehadiran, positif / negatif, reaktif / non-reaktif, dll). Hasil tes kualitatif berdasarkan pada hasil numerik, misalnya berdasarkan ambang, sering
digambarkan sebagai semikuantitatif atau semi-kualitatif dan diharapkan validasi atau verifikasi metode sejalan dengan prosedur kuantitatif.
Hasil tes kuantitatif - Hasil tes yang diturunkan secara numerik.
Pemulihan - Efisiensi ekstraksi dari proses analitik, dilaporkan sebagai (persentase dari) jumlah analit yang diketahui yang dilakukan melalui
ekstraksi sampel dan langkah-langkah pemrosesan metode.
Materi referensi - Material, cukup homogen dan stabil dengan mengacu pada properti yang ditentukan, yang telah ditetapkan agar sesuai
dengan tujuan penggunaannya dalam pengukuran properti nominal (JCGM200: 2008).
Deviasi Standar Relatif - ( RSD atau% RSD) adalah nilai absolut dari koefisien variasi ( s / x). Ini sering dinyatakan sebagai persentase. Istilah
serupa yang terkadang digunakan adalah varians relatif yang merupakan kuadrat dari koefisien variasi. Deviasi standar relatif banyak digunakan untuk
menyatakan presisi dan pengulangan.
Pengulangan, Pengulangan Pengukuran - Ketepatan pengukuran di bawah serangkaian kondisi pengulangan pengukuran (JCGM200: 2008).
Kondisi Pengukuran Pengulangan, Kondisi Pengulangan - Kondisi pengukuran, dari sekumpulan kondisi yang meliputi prosedur pengukuran yang
sama, operator yang sama, sistem pengukuran yang sama, kondisi operasi yang sama dan lokasi yang sama, serta mereplikasi pengukuran pada
objek yang sama atau serupa dalam waktu yang singkat. Ketepatan pengukuran di bawah serangkaian kondisi pengulangan pengukuran (JCGM200:
2008).
Reprodusibilitas, Reprodusibilitas Pengukuran - Ketepatan pengukuran dalam kondisi reproduktifitas pengukuran (JCGM200: 2008).
Kondisi Pengukuran Reproduksi, Kondisi Reproduksibilitas - Kondisi pengukuran, dari sekumpulan kondisi yang meliputi operator yang berbeda,
sistem pengukuran, lokasi, dan pengukuran ulangan pada objek yang sama atau serupa (JCGM200: 2008).
Kekasaran / Kekokohan - Tingkat kemandirian metode analisis dari penyimpangan kecil dalam kondisi eksperimental metode analisis.
Selektivitas, Selektivitas Sistem Pengukuran - Properti sistem pengukuran, digunakan dengan prosedur pengukuran tertentu, di mana ia
memberikan nilai kuantitas terukur untuk satu atau lebih besaran ukur sedemikian rupa sehingga nilai setiap besaran ukur tidak tergantung dari
besaran ukur lain atau besaran lain dalam fenomena, benda, atau zat yang diselidiki ( JCGM200: 2008).
Sensitivitas, Sensitivitas Sistem Pengukuran - Hasil bagi dari perubahan indikasi sistem pengukuran dan perubahan yang sesuai dalam nilai
kuantitas yang diukur (JCGM200: 2008).
Stabilitas - Stabilitas (kimia) analit dalam matriks tertentu dalam kondisi tertentu untuk interval waktu tertentu.
Deviasi Standar - Ukuran bagaimana nilai tersebar tentang mean dalam distribusi nilai. Deviasi standar • untuk seluruh populasi n nilai
diberikan oleh:

• ( xsaya
•)•2
• • saya • 1
Dalam praktiknya kami biasanya menganalisis sampel statistik dan bukan keseluruhan populasi. Deviasi standar s untuk sampel yang dipilih secara acak
diberikan oleh:
• ( xsaya
• x) 2
s•
saya • 1
n•1
Metode Standar - Menurut British Standards Institution, standar adalah terbitan: "spesifikasi yang membentuk bahasa yang sama, dan berisi
spesifikasi teknis atau kriteria tepat lainnya dan dirancang untuk digunakan secara konsisten, sebagai aturan, pedoman, atau definisi". (Lihat Standar
emas definisi).
Ketidakpastian Pengukuran Target - Ketidakpastian pengukuran ditetapkan sebagai batas atas dan diputuskan berdasarkan tujuan penggunaan
hasil pengukuran (JCGM200: 2008). Mewakili ketidakpastian terbesar yang diizinkan untuk penggunaan tertentu dari hasil tersebut.
Metode Tes - Sebuah tubuh prosedur dan teknik untuk melakukan suatu aktivitas. Istilah 'metode tes' dan 'prosedur' digunakan secara bergantian di
seluruh dokumen ini dan berlaku untuk semua metode pengujian termasuk prosedur pemeriksaan, seperti pemeriksaan sidik jari, dan review.
Modul Pelatihan - Istilah modul pelatihan mengacu pada tindakan yang harus diambil ketika versi baru dari metode yang saat ini diakreditasi oleh
fasilitas diperkenalkan. Modul pelatihan mengharuskan staf diberi tahu tentang perubahan dalam metode versi baru dan untuk ini dicatat dalam
catatan pelatihan staf. Modul pelatihan mempertimbangkan kompetensi staf fasilitas untuk melakukan teknik dan keakraban dengan, misalnya,
organisme sasaran.
Trueness, Measurement Trueness, Trueness of Measurement - Kedekatan kesepakatan antara rata-rata jumlah tak terbatas dari nilai kuantitas
terukur ulangan dan nilai referensi (JCGM200: 2008).
Benar Negatif - Hasil negatif dari uji klasifikasi biner ketika hasil sebenarnya negatif.
Benar Positif - Hasil positif dari uji klasifikasi biner jika hasil sebenarnya positif.
Validasi - Konfirmasi dengan pemeriksaan dan penyediaan bukti obyektif bahwa persyaratan tertentu untuk tujuan penggunaan tertentu telah
dipenuhi (ISO 9000: 2005). (Lihat Validasi Metode definisi).
Validasi komparatif bertujuan untuk menunjukkan kinerja yang setara antara dua (atau lebih) metode. Tidak ada tes tunggal untuk menetapkan
kesetaraan metode atau kriteria penerimaan numerik untuk itu. Umumnya, metode dengan sensitivitas terbesar atau pemulihan tertinggi untuk
mikroorganisme / analit target adalah yang terbaik. Untuk situasi di mana validasi komparatif tidak dapat diterapkan (misalnya penggunaan matriks
yang sangat berbeda dengan yang ditentukan dalam ruang lingkup metode atau penggunaan isolasi alternatif atau prinsip deteksi), validasi utama harus
dilakukan sebelum memperkenalkan metode ini. Dalam kasus seperti itu, validasi menjadi proses eksplorasi dengan tujuan menetapkan batasan
operasional dan karakteristik kinerja alternatif, metode baru atau metode yang tidak dikarakterisasi secara memadai. Ini harus menghasilkan
spesifikasi numerik dan deskriptif untuk kinerja metode.
Verifikasi - Konfirmasi dengan pemeriksaan dan pemberian bukti obyektif bahwa persyaratan tertentu telah dipenuhi (ISO 9000: 2005).

7. Referensi
Toko bahan AOAC, Pedoman untuk validasi laboratorium tunggal (SLV) metode kimia untuk logam dalam makanan,
www.flworkshop.com/metals/AOAC%20SLV%20Metals%20protocol.doc
AOAC International (2002), Pedoman komite metode AOAC Internasional untuk validasi kualitatif
dan metode dan analisis resmi mikrobiologi pangan kuantitatif, Manual Program OMA, www.aoac.org
AOAC International (2007), Cara memenuhi persyaratan ISO / IEC 17025 untuk verifikasi metode, ALACC
Panduan, www.aoac.org/alacc_guide_2008.pdf.
AS 2850 (1986), Program uji analisis-antar laboratorium kimia untuk menentukan ketepatan analisis
metode (s) -Panduan perencanaan dan perilaku.
AS / NZS 4659 (Bagian 1-4), Panduan untuk menentukan kesetaraan metode uji mikrobiologi pangan.
Ellison, SLR (2006), Untuk mempertahankan koefisien korelasi. Terakreditasi. Kual. Assurance, Issue No 11, hal
146 - 152.
Komite Tetap ENFSI untuk Kualitas dan Kompetensi (QC) (2006), Validasi dan Implementasi Metode (Baru), QCC-VAL-001, Edisi No. 001,
www.enfsi.eu
Ethier, J. (2005), Prosedur untuk validasi bahan aktif farmasi biologis (API)
proses manufaktur, Jurnal Resmi ISPE, Vol. 25 No. 2
Eurachem / CITAC (2002), Panduan kualitas dalam kimia analitik: Bantuan untuk akreditasi,
www.eurachem.org/guides/pdf/CITAC%20EURACHEM%20GUIDE.pdf
Eurachem Guide (1998), Kesesuaian untuk tujuan Metode analitis. Panduan laboratorium untuk metode
validasi dan topik terkait, Edisi 1.0, http://eurachem.ul.pt/guides/mval.html
Administrasi Makanan dan Obat (FDA) (2001), Panduan untuk industri - Validasi metode bioanalitik
Hibbert, DB (2005), Komentar lebih lanjut tentang penggunaan (salah) r untuk menguji linearitas kalibrasi,
Akreditasi dan Jaminan Kualitas, Edisi 10, hlm 300-301
Hibbert, DB (2006), Ketidakpastian hasil dari kalibrasi linier, Analyst, 131, hlm 1273-1278
Hibbert, DB (2004), Validasi metode, dalam Encyclopedia of Analytical Science, Edisi ke-2, Quality
Jaminan, Elsevier Ltd.
Huber, W. (2004), Tentang penggunaan koefisien korelasi r untuk menguji linieritas fungsi kalibrasi,
Akreditasi dan Jaminan Kualitas, Edisi No 9, hlm 726
ISO 3534-1 (2006), Statistik-kosakata dan simbol, Bagian 1: Istilah dan istilah statistik umum yang digunakan dalam
kemungkinan
ISO 9000 (2005), Sistem manajemen kualitas - Dasar-dasar dan kosakata
ISO 13843 (2005), Kualitas air - Panduan validasi metode mikrobiologi.
Panduan ISO / IEC 98-3 (2008), Ketidakpastian pengukuran - Bagian 3: Panduan untuk ekspresi ketidakpastian dalam
pengukuran (GUM 1995)
IUPAC (2002), Pedoman harmonis untuk validasi laboratorium tunggal metode analisis, Apel Murni.
Chem. 74 (5), hlm 835-855, http://www.iupac.org/publications/pac/2002/7405/x0835.html
JCGM: 200 (2008), Kosakata Internasional Metrologi (VIM) - Konsep dasar dan umum dan
istilah terkait, 3 rd edisi, BIPM, Sèvres, www.bipm.org/vim2008
Miller, JC dan Miller, JN (2000), Statistik dan kemometri untuk kimia analitik, Edisi ke-4, Prentice
Hall, ISBN 0-13-022888-5, dan / atau VAMSTAT II Pelatihan Statistik untuk Pengukuran Analitik yang Valid
CD-ROM, www.vam.org.uk
LGC (2003), Validasi metode internal - Panduan untuk laboratorium kimia, Laboratorium Pemerintah
Chemist (LGC), Inggris.
Mulholland, MI dan Hibbert, DB (1997), Linearitas dan batasan kalibrasi kotak terkecil, Jurnal dari
Kromatografi A, 76273-8
Dewan Penasihat Akreditasi Patologi Nasional (NPAAC) (2006), Standar Akreditasi Laboratorium dan
Pedoman Deteksi dan Analisis Asam Nukleat
Dewan Penasihat Akreditasi Patologi Nasional (NPAAC) (2007), Persyaratan untuk pengembangan dan
penggunaan Perangkat Diagnostik In Vitro (IVD) internal
Dewan Penasihat Akreditasi Patologi Nasional (NPAAC) (2007), Persyaratan untuk estimasi
ketidakpastian pengukuran
O'Donnell, GE dan Hibbert, DB (2005), Perlakuan bias dalam memperkirakan ketidakpastian pengukuran, Itu
Analis, Masalah No.130, hlm 721-729

OIE Terrestrial Manual (Mei 2009), Prinsip dan metode validasi tes diagnostik untuk infeksius
penyakit, Bab 1.1.4 / 5, www.oie.int / fileadmin / Home / eng / Health_standards / tahm / 1.1.04_VALID.pdf ”
Dewan Akreditasi SANAS (2008), Pedoman validasi dan jaminan kualitas dalam mikrobiologis
pengujian, TG28-02.
Taylor, JK (1989), Jaminan kualitas pengukuran kimia, edisi keenam, Lewis Publishers, ISBN 0-
87371-097-5, halaman 79.
Thompson M., Ellison SLR dan Wood R., UPAC Interdivisional Working Party (2002), Diselaraskan
pedoman untuk validasi laboratorium tunggal metode analisis ( Laporan Teknis IUPAC), Aplikasi Murni. Chem., 74 (5), hlm 835-855
Van Loco, J., Elskens, M., Croux, C., Beernaert, H. (2002), Linearitas kurva kalibrasi: penggunaan dan penyalahgunaan
koefisien korelasi, Terakreditasi. Kual. Assur., Masalah No. 7, hal 281-285.
Youden, WJ dan Steiner, EH (1975), Manual statistik dari Asosiasi Ahli Kimia Analitik Resmi,
AOAC, ISBN 0-935584-15-3
Zar, JH (1996), Analisis biostatistik, edisi ketiga, Prentice-Hall Inc.
8. Bacaan tambahan
APLAC (2003), Interpretasi dan pedoman tentang estimasi ketidakpastian pengukuran dalam pengujian,
APLAC TC 005, APLAC, www.aplac.org.
Praktik Terbaik untuk Metodologi Mikrobiologi (BPMM). Laporan Akhir di

http://www.fda.gov/ucm/groups/fdagov-public/@fdagov-foodsgen/documents/document/ucm088708.pdf
dengan suplemen di
http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm124900.htm
Panduan EURACHEM (1996), Kesesuaian untuk tujuan metode analitik. Panduan laboratorium untuk metode
validasi dan topik terkait, LGC, Teddington. Juga tersedia dari Sekretariat dan situs web EURACHEM.
Eurachem / CITAC (2000), Mengukur ketidakpastian dalam pengukuran analitik, Eurachem / CITAC Guide CG4,
Edisi ke-2, ISBN 0-948926-15-5, www.eurachem.ul.pt.
Eurachem / CITAC (2003), Ketertelusuran dalam pengukuran kimia, www.eurachem.ul.pt
Eurolab (2007), Ketidakpastian pengukuran ditinjau kembali: Pendekatan alternatif untuk evaluasi ketidakpastian,
Laporan Teknis No 1/2007, www.eurolab.org
Jenis Garaktivitas, FM, Klestan, E. dan Hirsch, J. (2000), Prinsip jaminan kualitas untuk analitis
laboratorium, Edisi ke-3, AOAC International, ISBN-0-935584-70-6.
Hibbert, DB (2007), Jaminan kualitas untuk laboratorium kimia analitik, Oxford University Press, Baru
York
ILAC (2002), Memperkenalkan konsep ketidakpastian pengukuran dalam pengujian dalam kaitannya dengan
penerapan Standar ISO / IEC 17025, ILAC G17, www.ilac.org.
ISO 16140 (2003), Mikrobiologi makanan dan pakan ternak - Protokol untuk validasi alternatif
metode
ISO / TS 21748: 2004, Panduan untuk penggunaan perkiraan keterulangan, reproduktifitas, dan kebenaran dalam
estimasi ketidakpastian pengukuran
Magnusson, B., Naykki, T., Hovind, H. dan Krysell, M. (2003), Buku Pegangan untuk perhitungan pengukuran
ketidakpastian di laboratorium lingkungan, Laporan NORDTEST TR537
Laporan Konsultasi Ahli Bersama FAO / IAEA (1997), Validasi metode analisis untuk pengendalian makanan,
FAO Food and Nutrition Paper No. 68, FAO
Thompson. M. dan Wood, R. (1995), Panduan harmonis untuk pengendalian kualitas internal dalam kimia analitik
laboratorium, Apel Murni. Chem., 67 (4), hlm 49-56
Thompson, M., Ellison, S., Fajgelj, A., Willetts, P. dan Wood, R. (1999), Pedoman harmonisasi untuk penggunaan
informasi pemulihan dalam pengukuran analitis, Apel Murni. Chem., 71 (2), hlm 337-348
Sekretariat NMKL, Finlandia (1996), Validasi metode analisis kimia, Prosedur NMKL No.4
Nordtest (2005), Buku Pegangan untuk perhitungan ketidakpastian pengukuran di laboratorium lingkungan, Melaporkan
TR 537, www.nordtest.org
Sub-komite untuk Kesehatan Hewan dan Standar Laboratorium (SCAHLS), http://www.scahls.org.au UKAS (2000), Ekspresi
ketidakpastian dalam pengujian, UKAS LAB12, Edisi Pertama, www.ukas.com.

Lampiran 1. Validasi metode dan pohon keputusan verifikasi
Apakah metode kandidat metode standar

atau sudah memilikinya Apakah Anda telah mereferensikan Apakah ini a
Iya Iya
telah divalidasi oleh Apakah metodenya justifikasi teknis untuk Iya baru Iya
MULAILAH
validasi metode yang diterima diubah? variasi, misalnya jurnal analit *** untuk
tubuh (misalnya AOAC) dan apakah publikasi? fasilitas?
data kinerja tersedia?
Tidak
Tidak
Konfirmasi dari No
kinerja yang dipublikasikan Training
karakteristik module**
Yes Yes
Yes
(verifikasi) tapi penuh Method published in Is the matrix within Is this a new Yes analyte***
Is theY reesa peer Method
validasi atau scientific literature with scope of the to
review method? verification
validasi komparatif performance data? method? the facility?
mungkin diperlukan jika ada
perubahan atau
matrices differ No No
No
No No
Method
Is the matrix
Yes verification
Full validation generically different Training
. required
from the scope of the module**
method?
Full validation
required
No
No Is the matrix within Yes
Full validation Comparative
scope of the
required validation
method?
Matrix verification
* It has been found in some cases (e.g. veterinary microbiological testing) that a specific test kit performs differently under local environmental conditions, to that of the original environmental conditions it was subjected to during primary validation. In such cases, the facility should conduct the validation to prove the kit performs under
local environmental conditions.
* * This covers the introduction of a new version of a standard method. This may for example have differences in agar, temperatures, reactions, etc which need to be explained.
* *enumeration
* In some cases where the
of coliforms. analyte is in
Experience not
1a new analyte
method to the
does not facility
mean that but
the afacility
different technique is
is necessarily employedtofor
competent the analysis of the analyte, performing a training module may not be adequate and method verification may be required. For example in biological testing, AS5013 has 2 methods (AS5013.3 and AS5013.4) for the
the
perform the other.
For ad-hoc or special analyses, the extent of validation will be limited by circumstance.
January 2018 Page 30 of 31

General Accreditation Guidance - Validation and verification of quantitative and qualitative test methods
Amendments
The table below provides a summary of changes made to the document with this issue.
Section Amendment
Entire document This document replaces the former Technical Note 17.
The document has been reviewed and updated to reflect the new accreditation criteria documentation
structure and replace field with activity type.
January 2018 Page 31 of 31

2038 - Nata Validasi Metode - En.id

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

2038 - Nata Validasi Metode - En.id

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Panduan Akreditasi Umum -

Validasi dan verifikasi metode uji kuantitatif dan kualitatif

Validasi dan verifikasi metode uji kuantitatif dan kualitatif

1. Perkenalan ............................................... .................................................. ............................................ 4

Januari 2018 Halaman 3 dari 31

Validasi dan verifikasi metode uji kuantitatif dan kualitatif

2. Verifikasi metode yang sebelumnya divalidasi

Januari 2018 Halaman 4 dari 31

3. Validasi metode dan parameter validasi

Januari 2018 Halaman 5 dari 31

5. Replikasi: Analisis berulang memungkinkan penilaian ketepatan pengukuran.

Studi validasi dapat dibagi menjadi validasi komparatif dan primer.

Januari 2018 Halaman 6 dari 31

Analit (Sn) dalam matriks:

Januari 2018 Halaman 7 dari 31

Analyte (Sn) dalam contoh intisari:

3.1 Rentang di mana persamaan kalibrasi berlaku (linearitas kalibrasi)

Januari 2018 Halaman 8 dari 31

3.1.1 Interval pengukuran

3.1.2 Efek matriks

Januari 2018 Halaman 9 dari 31

Januari 2018 Halaman 10 dari 31

Januari 2018 Halaman 11 dari 31

Positif Benar Positif False Positive → Nilai prediksi positif

Anjing dengan kanker usus

→ Nilai prediksi positif

Januari 2018 Halaman 12 dari 31

Januari 2018 Halaman 13 dari 31

Januari 2018 Halaman 14 dari 31

Derajat kebebasan Derajat kebebasan untuk

Januari 2018 Halaman 15 dari 31

Dimana: c 1 = konsentrasi terukur dalam sampel yang diperkaya

Januari 2018 Halaman 16 dari 31

3.5 Batas deteksi dan batas kuantitasi

3.5.1 Batas deteksi (LOD)

3.5.1.1 LOD berdasarkan evaluasi visual

Januari 2018 Halaman 17 dari 31

3.5.1.2 LOD berdasarkan deviasi standar dari blanko

3.5.1.3 LOD berdasarkan kisaran di mana persamaan kalibrasi berlaku

3.5.1.4 LOD berdasarkan signal-to-noise

3.5.2 Batas kuantitasi (LOQ)

3.5.2.1 Batas pelaporan (LOR)

LOR adalah batas praktis kuantitasi pada atau di atas LOQ.

Januari 2018 Halaman 18 dari 31

3.7 Ketidakpastian Pengukuran

Januari 2018 Halaman 19 dari 31

Karakteristik yang akan dievaluasi Prosedur yang dapat diikuti

Interval pengukuran Evaluasi bias dan kemungkinan penentuan LOQ

Januari 2018 Halaman 20 dari 31

Karakteristik yang akan dievaluasi Prosedur yang dapat diikuti

4. Validasi metode non-rutin

5. Validasi dan verifikasi metode subjektif

Januari 2018 Halaman 21 dari 31

Parameter yang harus diperhatikan adalah:

• Pengulangan / reproduktifitas; dan

Langkah-langkah mitigasi atau pengendalian berikut mungkin juga relevan:

• Analisis kritis (atau risiko);

Pertanyaan berikut juga harus dipertimbangkan:

* Catatan 2: Perbandingan antar laboratorium dapat meningkatkan ketidakpastian.

5.1 Pengulangan / reproduktifitas (yaitu keandalan)

5.2 Kemungkinan deteksi dan / atau tingkat kesalahan potensial

Januari 2018 Halaman 22 dari 31

5.3 Analisis kritis (atau risiko)