Nama: Mita Harma

Nim : 05061181722006

Efek Antioksidan, Antiproliferatif, dan Antiangiogenesis dari Rumput Laut

Kaya Polifenol ( Sargassummuticum)
Penelitian bertujuan untuk mengevaluasi efek rumput laut coklat Sargassummuticum
ekstrak metanol (SMME), melawan proliferasi sel kanker payudara MDC-7 dan MDA-MB-231.
Ekstrak ganggang ini juga dievaluasi untuk mengurangi aktivitas dan total konten polifenol.
Rumput laut adalah salah satu makanan fungsional yang paling banyak digunakan dan tanaman
obat dengan sejarah panjang di negara-negara Asia. Rumput laut dikenal sebagai
makanan fungsional karena kaya akan lemak, mineral dan vitamin tertentu, dan juga beberapa
zat bioaktif seperti polisakarida, protein, dan polifenol, dengan potensi penggunaan obat
melawan kanker, stres oksidatif, peradangan, alergi, diabetes, thrombosis, obesitas, lipidemia,
hipertensi, dan penyakit degeneratif lainnya. Angiogenesis berarti pembentukan jaringan
pembuluh darah dari pembuluh sebelumnya, yang terjadi dalam kondisi patologis yang berbeda
seperti pertumbuhan tumor dan metastasis, dan juga memiliki peran penting dalam beberapa
proses fisiologis seperti pertumbuhan organ, penyembuhan luka, dan reproduksi. laporan
pertama tentang sifat biofungsional dari Sargassummuticum dari perairan Teluk Persia.
Bahan-bahan dan metode-metode pada penelitian ini
1. Bahan baku yaitu Spesimen rumput laut dari wilayah pesisir perairan Teluk Persia dicuci dan
disimpan di - 20 ∘ C. Sampel rumput laut kering yang dibekukan diekstraksi dengan metanol
difilter, dan rotari-evaporasi pada suhu 40 ∘ C untuk memberikan massa kental (disimpan di -
20 ∘ C).
2. Bahan kimia yaitu The 3- (4,5-dimethylthiazolyl-2) -2,5-difen-yltetrazolium bromide (MTT)
dibeli dari Sigma-Aldrich Canada (Oakville, ON). RPMI 1640 medium pertumbuhan, L-
glutamin, natrium bikarbonat, asam amino nonesensial, natrium piruvat, (FBS), dan saline
fosfat-buffered (PBS) diperoleh dari Perusahaan Invitrogen (Burlington, ON), dan metanol
berasal dari Merck (Darmstadt, Jerman).
3. Evaluasi Kandungan Antioksidan dan Total Fenolik. Prosedur Ferri mengurangi antioksidan
(FRAP) yang dijelaskan oleh Benzie dan Strain diikuti. Fenolik total ditentukan secara
kalorimetri menggunakan reagen Folin-Ciocalteu seperti yang dijelaskan oleh Velioglu et al.
4. Garis Sel dan Kultur Sel. Sel Vero garis sel normal (ATCC CCl-81, garis ginjal) digunakan
untuk menguji efek sitotoksik SMME. Garis Sel dan Kultur Sel. 0,1% gentamicin, 20mM
HEPES, dan 2mM glutamin, dipanen dan disepuh di pelat datar 96-well dengan kepadatan
1,5 × 10 3 sel / mL dalam GM, dan diinkubasi pada 37 ∘ C dalam inkubator yang
dilembabkan mengandung 5% CO2 selama 24 jam. Setelah mengeluarkan media lama, sel-
sel diperlakukan dengan berbagai konsentrasi (0, 200 • g / mL) larutan sampel uji dalam
MEM yang mengandung 1% FBS (MM) dan diinkubasi pada suhu 37 ∘ C selama 3 hari. Sel
yang dilapisi dengan hanya MM digunakan sebagai kontrol. Perubahan morfologis sel dalam
bentuk dan tingkat adhesi diperiksa setiap hari di bawah mikroskop terbalik (Nikon CMM
214, Jepang).
5. Penilaian morfologis Apoptosis. Dalam percobaan ini, perubahan morfologis yang
disebabkan oleh SMME diperiksa menggunakan kontras fase, fluoresensi, dan mikroskop
elektron. Di setiap pelat T, sel yang dirawat dan yang tidak dirawat dicuci dengan PBS,
difiksasi, didehidrasi, kemudian dipasang ke stub menggunakan prosedur standar
sebelum dilapisi dengan emas dalam sputter coater selama 1,5 menit, dan segera
dilihat menggunakan SEM atau disimpan dalam desikator silika gel.
6. Caspase Assay. Aktivitas protease caspases-3, -8, dan -9 dalam sel MCF-7 dilakukan
menggunakan kit colorimetric assay (GenScript kit, kode: L00289, Piscataway, NJ 08854,
USA) yang didasarkan pada deteksi spektrofotometri enzim caspase setelah belahan dari
substrat berlabel. Sekitar 2 × 10 6 Sel MCF-7 diobati dengan SMME di IC 50. dan diinkubasi
selama 24, 48, dan 72 jam, sedangkan sel yang tidak diinkubasi selama 24, 48, dan 72 jam
bertindak sebagai kontrol. Kemudian, sel disentrifugasi selama 5 menit pada 2000 rpm untuk
menghilangkan media.
7. Pengujian CAM. Untuk efek Antiangiogenik, 40 sel telur yang dibuahi didistribusikan secara
acak ke dalam 4 kelompok termasuk kelompok kontrol, palsu yang terpapar (diperlakukan
dengan pelarut DMSO), dan kelompok eksperimen 1 dan 2 (diperlakukan dengan SMME 50
dan 100 • g / mL). Telur yang telah dibuahi ditempatkan pada inkubasi yang diputar
secara otomatis pada suhu 38 ∘ C dan kelembaban relatif 55-65%. Pada hari ke 8 inkubasi, •
L streptomisin penisilin,yang disiapkan baru pada kondisi steril, ditempatkan pada membran
korioallantoik anak ayam pada suhu 4 × 4mm Dalam sampel yang diobati dengan SMME, 10
mL ekstrak ditambahkan ke spons gelatin, dan kemudian tempat-tempat jendela ditutup
 kembali dan telur dikembalikan ke inkubator. Pada hari ke-12 inkubasi, semua sampel
(kontrol, pura-pura terbuka, diperlakukan secara eksperimental dengan konsentrasi 50 dan
100 • L / mL), gambar diambil dari wilayah lokasi spons gelatin melalui penelitian
photostereomicroscopy (Zeiss, Jerman).
8. Analisis statistik. Semua data dinyatakan sebagai sarana ± SEM. Analisis varian satu arah
(ANOVA; SPSS 16.0 untuk Windows; SPSS Inc., Chicago, IL, USA) digunakan untuk
menguji perbedaan antara konsentrasi perlakuan yang berbeda. Di mana perbedaan memang
ada, sumber perbedaan di a • <0,05 tingkat signifikansi diidentifikasi oleh uji rentang
berganda Student-Newman-Keuls.
Hasil dan Pembahasan
Hasil aktivitas antioksidan dari SMME dengan menggunakan uji ferric reduction
antioxidant power (FRAP) menunjukkan 75.32 ± 11.36mmol, Fe II per 100 g tanaman kering.
Total konten fenolik dari SMME adalah 78,95 ± 4.33 mg kesetaraan asam galat per 100 g
tanaman kering. Genus Sargassum adalah rumput laut coklat tropis dan subtropis yang terdiri
dari 150 spesies. Senyawa fenolik adalah salah satu antioksidan yang paling efektif dalam
ganggang coklat dan kandungannya 20-30% berat kering ganggang. Berdasarkan profil absorpsi,
waktu retensi dan uji spiking pada SMME, catechin, phlorotannins, dan quercetin adalah
beberapa senyawa fenolik dalam SMME. Phlorotannins adalah salah satu dari tiga puncak utama
yang diidentifikasi. Phlorotannins adalah senyawa fenolik utama yang dideteksi dalam warna
coklat yang dibagi menjadi tiga bagian, phlorotannin yang dapat larut dari matriks alga atau
cytoplasmic phlorotannin, phlorotannin yang terikat di dinding sel yang melekat pada membran,
atau dinding sel dan memancarkan phlorotannin yang keluar ke air laut di sekitarnya. Aktivitas
antioksidan dari ekstrak yang terikat membran lebih tinggi daripada ekstrak sitoplasma,
Phlorotannins 10-100 kali lebih kuat dan antioksidan yang lebih stabil daripada polifenol
lainnya; juga, paruh phlorotannins dalam tubuh hingga 12 jam, dibandingkan dengan 30-180
menit untuk polifenol terrestrial.
Hasil uji MTT menunjukkan bahwa ekstrak itu sitotoksik terhadap garis sel kanker
payudara dengan cara yang tergantung dosis, dengan IC 50 dari 22 • g / ml untuk MCF-7 dan 55
• g / ml untuk garis sel MDA-MB-231. Persentase sel yang diobati MCF-7 apoptosis meningkat
dari 13% menjadi 67% dengan meningkatkan konsentrasi SMME. Kemanjuran antiproliferatif
ekstrak alga ini berkorelasi positif dengan total kandungan polifenol, menunjukkan hubungan
sebab akibat yang terkait dengan kandungan ekstrak asam fenolat. Analisis siklus sel
menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam akumulasi sel yang diobati SMME pada fase
sub-G1, menunjukkan induksi apoptosis oleh SMME. Induksi apoptosis lebih lanjut dikonfirmasi
oleh Hoechst 33342 dan pewarnaan AO / PI. SMME juga ditanamkan secara in vivo ke dalam
telur ayam yang dibuahi menginduksi aktivitas antiangiogenik terkait dosis dalam membran
chorioallantoic (CAM). Hasil kami menyiratkan wawasan baru tentang fungsi novel
Sargassummuticum rumput laut yang kaya polifenol dalam penelitian kanker dengan induksi
efek apoptosis, antioksidan, dan antiangiogenesis. Sargassum muticum, mungkin menjadi
sumber berlimpah makanan pelengkap dan alternatif fungsional potensial untuk pencegahan dan
pengobatan kanker, dan itu adalah yang paling cocok untuk penelitian lebih lanjut untuk
berurusan dengan zat aktif antitumor selektif untuk kanker manusia terutama kanker payudara.