SinyalOksigenReaktifyang Tergantung pada HipoksiadalamSirkulasiParu:

Berfokus pada Kanal Ion

Florian Veit, dkk

Abstrak

Signifikansi: Kekuranganoksigen yang terjadisecaraakut di paru-

parumenyebabkanvasokonstriksiparuyang bersifat hipoksik, yang mengoptimalkanproses
pertukaran gas. Pada kontekslain, hipoksiakronismemicuproses remodeling
pembuluhdarahpatologis yang menyebabkanhipertensiparu, dan
iskemiadapatmenyebabkankerusakanpembuluhdarah yang memuncak pada edema paru-paru.
Perkembanganterbaru: Regulasiekspresisaluran ion danpengaturankanal ion oleh
keadaanredoksseluleradalahmekanisme yang telahdikenalsecaraluas; Namun,
masihmenjadiproblematikaadalahapakahpeningkatanataupenurunanreactive oxygen
species(ROS) terjadidalamkondisihipoksia. Regulasiredokssaluran ion
telahdijelaskansecararinciuntukbeberapasaluran ion, sepertisaluranKvatau TRPC6. Namun,
secaraumum, informasitentangregulasiredokssaluran ion masihsangatsedikit. RumusanMasalah
dan TujuanPenelitian: Selainproblematikamengenaipeningkatan dan penurunanproduksi ROS
selamakeadaanhipoksia, penelitibertujuanmenjelaskan dan menguraikanmengapaoksidan yang
berbeda, dalamkondisi yang berbeda, dapatmenyebabkanaktivasi dan
penghambatanaktivitassaluran. Sementarajalurhulu yang mempengaruhisalurankanal ion
sudahdipaparkandenganbaik, pembacaperlupemahaman yang lebihbaiktentangmodifikasi protein
redoksuntukdapatmenentukankompleksitasregulasiredokspada saluran ion. Karena
latarbelakangtersebut, penelitimerangkumperkembanganterkinitentangpensinyalankanal ion ROS
yang dimediasihipoksiadalamsirkulasiparu.

Pendahuluan

Efekhipoksia alveolar pada sirkulasiparudapatdibagimenjaditigafase: (i) faseakut (30

detikhingga<20 menit), (ii) faseberkelanjutan (>30 menithinggaberjam-jam), yang oleh
vasokonstriksi pulmonal hipoksia (HPV) sesuaidenganperfusidarahuntukventilasi alveolar
dalamkondisihipoksia alveolar regional, dan (iii) fasekronis, yang ditandai oleh
vasokonstriksirefraktori dan proses remodeling vaskulardenganhipertensi pulmonal yang
diinduksi oleh keadaan yang menyebabkanhipertensi pulmonal (PH). Selepitel alveolar
biasanyaterpapar 100mmHg dan jarangmenghadapikeadaandimanakadar O2 kurangdari 40mm
Hg. Dalamkondisihipoksia alveolar secaramenyeluruh, faseakut dan berkelanjutan juga
berkontribusiterhadapperkembanganhipertensipulmoner. Terdapatbuktikuatbahwaketigafaseini,
sebagian, diatur oleh mekanisme yang berbeda. Meskipun endothelium
mengubahvasokonstriksiinimelaluipelepasanzatvasoaktif, responsinieksklusifuntukselotot polos
arteripulmonalis (PASMC) sepertijenisselefektor.
Perubahankadaroksigen (O2) diketahuidisertai oleh
perubahanproduksispesiesoksigenreaktif di PASMC. Produksi ROS
initelahdiketahuiuntukmenjadi mediator kuncidaripensinyalan yang bergantung pada hipoksia.
Sementaramekanismependeteksiankadar O2 masihbelumdiketahui,
beberapabuktimenunjukkanbahwamitokondria dan NADPoksidasesebagaisumber ROS
dominanada. Di antaraberbagaisistem yang mampumenghasilkan ROS dalamselmamalia,
rantaipernapasanmitokondria dan NADPoksidasetelahterbuktiterlibatdalamregulasi HPV di
bawahhipoksiaakut, sertadalamproliferasisel, dan hipertrofi media selamahipoksiakronis.
Meskipunpensinyalanredokstelahdipaparkansebagaiperistiwapentingdalam HPV dan remodeling,
adaproblematikasaatinimengenaiapakahpeningkatanataupenurunan ROS memicu proses ini. ROS
dapatbereaksidengan DNA, lipid, dan polipeptida. Namun, hanyaefeknya pada protein yang
spesifik. Konsentrasi ROS yang tinggidapatmenyebabkanberbagaimodifikasiasam amino
(oksidasigugustiol [SH], oksidasiresiduarginin dan lisin, atauoksidasimetionin),
pengikatansilangmolekul, dan penjebakan protein dalamkompleksmultimolekul.
Berbedadenganmodifikasiireversibel yang merusakfungsi protein, jumlahfisiologis ROS
dapatmengaturfungsi protein melaluiinteraksispesifikdenganasam amino.
Buktibahwaketerlibatansaluran ion
dalamperistiwahipoksikdaripembuluhdarahparumengungkapsalurankalsiumtipe-L (Ca2 +) dan
salurankalium (K +) sebagaipemainpenting. Beberapajenissalurankalium dan
kalsiumlainnyaditemukan, yang juga berkontribusiterhadap HPV dan hipertensipulmonerkronis
yang diinduksihipoksia. Saluran ion inisangatsensitifterhadapperubahanredoks. Dalamhalini, dua
model antitesissaatiniakandibahas. Model pertamamendukungpenutupansaluran K yang
dimediasi oleh penurunanrilis ROS mitokondria, yang mengaktifkanvasokonstriktif, pro-
proliferasi, dan kaskadepensinyalanantiapoptotik. Proposal inididasarkan pada pengamatan yang
berlawanandalamhalpeningkatanataupenurunanproduksi ROS
dalamsirkulasiparuselamahipoksia.
Ada juga problematikatentangsumberpotensialproduksi ROS (mis.,
MitokondriaatauNADPoksidase) dan target hilirnya. Model
keduamengusulkanbahwapeningkatan ROS
darimitokondriaatauNADPoksidasememicuperistiwatersebutmelaluisaluranmembran yang
berbeda, termasukKv-, potensireseptorsementara (TRP) -, dan saluran Ca2 + L-type dan /
ataupelepasan Ca2 + intraseluler (52). Perbedaanantarakedua model dapatdijelaskan oleh
penelitian yang mengungkapkanperbedaandalamkeadaanoksidasi basal
antarakompartemensubseluler. Selamakeadaanhipoksiaakut, ruangsitosol dan
intermembranmenunjukkanpeningkatangenerasi ROS, sedangkanproduksi ROS
dalammatriksmitokondriamenurun. Di bawahkondisinormoksik, kompleksmitokondria I dan III
menghasilkansejumlahkecilradikalsuperoksida (sebandingdengan PaO2 alveolar).
Superoksidadarikompleks I dan sisi Qi kompleks III memasukimatriks,
sedangkansuperoksida yang terbentuk di sisiQokompleks III pergikeruangantarmembran dan
kemudiandikonversimenjadihidrogenperoksida (H2O2), yang
mampumelewatimembranmitokondrialuar dan untukmemasukisitosol.
Selainrantaipernapasanmitokondria, ROS yang diproduksisecaralokal oleh
keluargaNoxNADPoksidaseselamanormoksiamendatangkansejumlahbesarresponsseluler yang
diperlukanuntukpensinyalanfaktorpertumbuhanfisiologis. Namun, dalamkondisihipoksia,
peningkatan dan penurunanproduksi ROS selamahipoksiaakut dan kronistelahdijelaskan.
Penentuan tonus pembuluhdarahparu oleh saluran ion
dalammenanggapihipoksiaditerimasecaraluas. Apakahkarenapeningkatanpenurunan ROS, entri
Ca2 + melaluisaluranLtype, dan pelepasankalsiumdariretikulumsarkoplasma (SR)
menyebabkanpeningkatan Ca2 + intraseluler, dan memulai dan mempertahankankontraksiselotot
polos vaskularparu (VSMC) dalammenanggapihipoksia. Terhadaplatarbelakangini, peneliti,
dalamulasanini, akanfokus pada peranregulasiredokssaluran ion selamahipoksiaakut dan kronis.
Penelitisadarbahwapenelititidakdapatmerujuksemuainvestigasi yang
telahdilakukandalamkonteksini. Selainitu, dalamberbagaikasus, penelitimengarah pada
investigasi non-parujikaliteraturspesifikparutidakada.

SaluranKalium

Salurankaliummelakukan ion K + melintasimembransel dan

sangatpentinguntukpolapotensialaksi (pembentukanimpulslistrik), fungsiepitel, pengaturan
volume sel, sekresihormon, dan menyesuaikanpotensimembran plasma.
Konduksimengikutigradienelektrokimiauntuk K +, dan saluraninisangatselektifuntuk K + (63).
Semuasaluran K + yang dikenalmemilikistruktur yang samadengandaerahpori yang
sangatselektifini. Saluran K + dapatdibagimenjadi lima subkategori dan
berbedaterutamadalamcarasaluran K + dibukasecaraterbuka: (i) penyearahkedalam (Kir),
termasukKirklasik, saluran g-protein-gated, saluran K + peka-ATP (KATP) , dan K + -transport
saluran; (ii) empatsegmen transmembran-2 pori (K2P), termasuk pH, suhu, asam lemak,
voltasekelistrikan, dan saluran yang diatur oleh reganganmembran; (iii) voltasekelistrikan-gated
(Kv); (iv) keluargaSlo (KCa), memilikikonduktansi yang sangatbesar dan termasuksaluran K +
(BK) ‘‘ besar ’(BK); dan (v) Keluarga SK yang diaktifkan Ca2 + (SKCa),
memilikikonduktansikecil (saluran SK).
Empattipeutamasaluran K + telahdiidentifikasidalampembuluhdarahparu dan otot polos
arteriparu: (i) saluranKv, (ii) saluranKCa, (iii) saluran KIR, dan (iv) saluran K2P. Dalam
PASMC, penghabisan K + setelahaktivasisaluran K + menyebabkanhiperpolarisasimembran dan,
selanjutnya, vasodilatasi. Sebaliknya, penghambatansaluran K + menyebabkandepolarisasi dan
vasokonstriksi. Penghambatansaluran K + dan masuknya K + (bukanpengurangankonduktansi K
+) ditunjukkanuntukmemulaidepolarisasimembran, aktivasisaluran Ca2 + (VOCC) yang
dioperasikandenganvoltasekelistrikan, dan vasokonstriksi. Dalam PASMC,
peraniniterutamatelahditugaskanuntuksaluranKv dan K2P, sementarasaluranKCamungkinpenting
pada hewanjaninataubayibarulahir dan saluranKCa dan ATP sensitifkalium (KATP)
dapatmemodulasihipoksikdepolarisasi di SMC arterikoroner.
 Saluran K + dengankanalion

Meskipunberbagaijenissaluran K + diekspresikandalampembuluhdarahparu,
banyakpenelitian yang berpusat pada peransaluranKv, mengenaipotensimembran,
perubahantonuspembuluhdarahparu, dan PASMC proliferasi.
SaluranKvmewakiligolongansaluran K + terbesardan paling beragam. Golonganiniterdiridari 40
gen: 36 gen darienamsaluran K + transmembran (KCNA [keluarga Kv1], KCNB [Kv2], KCNC
[Kv3], dan KCND [Kv4], KCNQ [Kv7], KCNH [Kv10, Kv11, dan Kv12]), dan
kelompoknonkonduktordariempat modulator kanal (KCNF [Kv5], KCNG [Kv6], KCNV [Kv8],
dan KCNS [Kv9]). Saluranfungsionaldibentuk oleh empat a-subunit (organisasitetramerik),
denganpori-poriterletak di sumbu. Setiap subunit memilikienam domain transmembran.
SaluranKvdisusunsebagaikompleks homo-tetramer
atauheterotetramerdenganbanyakkemungkinankombinasi. Di bawahhipoksiaakut, stimulus
hipoksiamemicupenghambatanaktivitassaluranKv di PASMC.
Efekinitelahdijelaskantidakhanyauntuk PASMC tetapi juga untukkontraksi yang
diinduksihipoksiadalamselotot polos vena paru. Sebaliknya,
hipoksiatidakmenghambataktivitassaluranKvataumengubahekspresisaluranKv di SMC sistemik.
Dengandemikian, saluranKvtampaknyamenjadiefektorhipoksikdalamsirkulasiparu-paru,
tetapitidak pada SMC sistemik, yang melakukanvasokonstriksi.
PenghambatansaluranKv juga telahdiketahuiuntukdimediasi oleh penurunan dan
peningkatanproduksi ROS darimitokondria dan/atauNADPoksidase. Secaraumum,
modifikasiredoksresidusisteinpentinguntukaktivitasKv. Sahoo
dkkmenunjukkanbahwatingkatfisiologis ROS memicumekanismeumpanbalikpositif, yang
mengurangiaktivitassaluranKv. Mittal dkkmenggambarkanmekanismedimanapeningkatan Nox4
yang diturunkandalamproduksi ROS menginduksipenghambatansaluranKv. Selanjutnya,
CogolludodkkmenunjukkanbahwaaktivasiNADPoksidase dan produksi H2O2
selanjutnyaterlibatdalampenghambatansaluranKv dan responskontraktil yang diinduksi oleh
aktivasireseptortromboksan pada arteriparutikus. Sebaliknya, rotenone inhibitor kompleks I
(NADH oksidoreduktase) dan inhibitor flavoprotein diphenyleneiodonium (DPI)
terbuktimenghambatarussaluran HPV dan Kv. Namun, efek rotenone pada
respirasimitokondriasangattergantung pada konsentrasi dan terbuktimemicu HPV,
sertamenghambatresponsvasokonstriktorparu. Vasokonstriksiparu yang diinduksi rotenone
(menggunakankonsentrasi rotenone> 350 nM), yang miripdenganderajat HPV,
telahdikaitkandenganefeknonselektifdaripadaperubahangenerasi ROS.
Inhibitor lain darirantaipernapasanmitokondriaproksimal dan distal juga
telahterbuktimenimbulkandampak yang berlawananterkait HPV.
SementarahipoksiaakutbertindakmelaluipenghambatanaktivitassaluranKv, selamahipoksiakronis
K + salurankepadatan dan ekspresi protein saluranKv (Kv1.5 dan Kv2.1) menurun,
meskipunarusKvmasihdapatdideteksi. Namun, baikinduksi dan represiekspresi subunit
saluranKv di bawahhipoksiakronistelahdijelaskan.
PenelitianlainnyamenunjukkanbahwapenghambatanhipoksikdariarusKv di PASMC
tidakberubahbahkansetelah 2 harihipoksiaambien, ketika HPV sudahhilang. Namun, setelah 3
mingguhipoksiakronis, potensimembran PASMC terdepolarisasi, protein saluran Kv1.5 dan
Kv2.1 berkurang, dan penghambatanhipoksiaakutdariseluruharussel K + selhilang. Penelitian
lain menunjukkanpeningkatansaluranKvkarenagangguankronissistem thioredoxin di
bawahtekananoksidatif (tingkat ROS patofisiologis). Lebihlanjut,
interaksidengannukleotidapiridin (76) dan S-nitrosilasi Cys445 telahdijelaskan. Saluran Ca + +
yang diaktifkan K + Ca2 + channel K + (KCa) yang
diaktifkandikategorikanmenurutkonduktansinya: besar (BK), menengah (IK), dan kecil (SK). Di
sini, penelitiakanfokus pada saluranBKCa.
BerbedadengansaluranBKCa, peransaluranSKCa dan IKCadalam VSMC
tidakdipahamidenganbaik. SaluranBKCadiekspresikan di mana-mana dalam VSMC dan
dapatdiaktifkandenganperubahanbaik pada potensialmembran dan konsentrasi Ca2 + intraseluler.
Saluraniniterbuktibertindaksebagaimekanismeumpanbaliknegatifsebagairesponsterhadapdepolari
sasi dan peningkatankonsentrasi Ca2 + sitosolikselamavasokonstriksi. Peningkatankonsentrasi
Ca2 + intraselulerterbuktimenurunkanarusBKCa dan meningkatkanarusKv. Dengandemikian,
level Ca2 + sitosoliktidakhanyamemainkanperanbesar yang mengatursaluraninitetapi juga
sensitifterhadapperubahanvoltasekelistrikan. SaluranBKCahadirdalam PASMC,
tetapiperannyadalamseluruhaliran K + seltergantung pada spesies dan
bervariasidalamwilayahpohonarteripulmonalis yang berbeda.
Segmenproksimalmengandungproporsi PASMC yang diperkayaKCa yang lebihbesar,
sedangkansegmen distal mengandunglebihbanyak PASMC yang diperkayaKv. Selainitu,
telahdiusulkanbahwaresponhipoksiaakibatsaluran K + berubahseiring PASMC
matangdarijaninke neonatal dan dewasa PASMC.
TelahdiketahuibahwaaktivitassaluranKCadominan pada hipoksia yang
diinduksivasodilatasijanin. Kontribusiterhadapresponhipoksik oleh BKCamasihbelumjelas.
Selamahipoksiaakut, aktivitassaluranBKCadilemahkandalam PASMC,
sementarapelepasan Ca2 + dari SR meningkatkanaktivitassaluranBKCa. Karena pelepasan Ca2 +
dalam SR terkaitdenganaktivasisaluranKCakonduktansibesar dan hiperpolarisasimembran,
tetaptidakmenjawabpertanyaanterkaitapakahrilis Ca2 + yang
dimediasihipoksiaakutmemicudepolarisasimembran pada PASMC. Tidakbanyak yang
diketahuitentangregulasiredokssaluranKCa di PASMC ataupembuluhdarahparu orang dewasa.
Setidaknyauntukparu-parutikus, diperlihatkanbahwasistem KO dari sub-unit alfa-subunit esensial
yang fungsionaltidakmengubah HPV akut dan berkelanjutanatauhipertensipulmonelkronis yang
diinduksihipoksia. SaluranKCaterbuktipentingdalammediasi HPV di paru-parujanin,
tetapihalinidisebabkan oleh stimulasi kinase yang bergantung pada nukleotidasiklik,
menghasilkanaktivasisaluranKCa, hiperpolarisasimembran, dan vasodilatasi.
Efek ROS pada aktivitasBKCa, darisudutpandangpeneliti, tidakkonklusif dan
terutamaberasaldariinvestigasinonpulmoner. SementaraselektifpenghambatsaluranBKCa
tetraethylammonium (TEA) terbuktimenghambatvasodilasi yang diinduksisuperoksida,
itutidakmemilikiefek yang signifikan pada kemungkinankeadaanterbukasaluranBKCa. H2O2
telahdilaporkanmenginduksiaktivasi dan penghambatanaktivitassaluranBKCa, tergantung pada
kondisieksperimental. Sementaraoksidasisisteinmenurunkanaruskonduktansibesar Ca2+- saluran
K+ teraktivasi, oksidasimetioninmeningkatkanarus. Selanjutnya, H2O2
menurunkanaktivitassaluranBKCadenganmenggesersensitivitasvoltasekelistrikankearah yang
lebihpositif. Dalam VSMC,
peroxynitriteterbuktimenghambataktivitassaluranBKCadenganmenekanarusKCaseluruhsel dan
pengurangankemungkinankeadaanterbukasaluranKCatunggal. Sebaliknya,
saluranBKCaendoteltidakbereaksiterhadapperoksinitrit. Para
penulismenyarankanbahwaperilakuinidisebabkan oleh
ketidakpekaansaluranBKCaendotelterhadapinteraksiantarasuperoksida dan nitratoksida (NO),
yang munculdari b-subunit saluranBKCa yang diekspresikandalam SMC dan selendotel.
 Saluran K + yang pekaterhadap ATP

KATP adalahsubkelassaluran K+ yang

menunjukkansedikitatautidakadaketergantunganterhadapvoltasekelistrikankelistrikan, dan
memilikiprobabilitasterbuka yang rendah di bawahkondisidasar. Saluran-
salurantersebutterdiridarisebuahkompleksoktamerikdariempat subunit
penyearahkedalamsaluranpenyusunpori K + (Kir 6.1 atau 6.2) dan empatreseptor sulfonylurea
(SUR). Ekspresibersamadari sub-unit inimenghasilkanduasaluran yang berbeda, saluran K +
nukleotidadifosfat (KNDP) dan KATP. Ko-ekspresiKir 6.1 dengan SUR2B telahterdeteksi pada
manusia PASMC, dan kontribusiterhadappotensialistirahatmembran di PASMC telahdiketahui.
Sebaliknya, inhibitor KATP tidakmeningkatkanresistensivaskularparunormoksik pada
mamaliadewasa, menunjukkanbahwatipesaluraninitidakmengontrol tonus arteriparu basal.
Sampaisaatini, tidakadaperan yang diusulkanuntuksaluran KATP dalam HPV dan
telahdiketahuiuntukditutup di arteriparu-paru dan tidakdiaktifkan oleh tingkathipoksia yang
menyebabkanpenyempitan.
AdapunsaluranKCa, peraturanredokssaluran KATP di PASMC
tidakdijelaskandenganbaik. Secaraumum, saluran KATP dilindungi oleh nukleotidaintraseluler,
yang menghubungkanmetabolismeenergidenganrangsanganmembran. Dalamjaringanselainparu-
paru, adapeningkatanbuktibahwaaktivitassaluran KATP kemungkinandiatur oleh keadaanredoks.
Sayangnya, hampirsemuamekanismepengaturantergantungredoksdijelaskan pada jaringan lain
selainparu-paru. Jadi, penelititidakakanmenjelaskanmekanismeini di sini.

Saluran K + dua-domain

Salurandua-domainatau K2P berisiempat domain transmembran dan dua domain pori.

Dimer dua subunit membentukporitunggal dan dengandemikiansaluranfungsional (total duapori).
N- dan C-Terminus terletak di sitosol. Saluran K2P selektifuntuk K+ dan
pentinguntukpengaturanpotensialmembranistirahat (penyokongsaluran K+),
sehinggamengaturrangsanganseluler dan permeabilitas K+. Pengaturansaluran K2P
cukupkompleks, karenasaluraninimeresponsbanyakrangsangan, termasuk pH, peregangan, suhu,
asam lemak, voltasekelistrikan O2, sumoylasi, fosforilasi, defosforilasi, dan osmolaritas. Karena
selektivitas K + dan kanalbebasvoltasekelistrikan [TREK-1 adalah gated voltasekelistrikanketika
S348 terfosforilasi (92), dan TASK-1 terbuktibergantung pada voltasekelistrikan pada kelinci
PASMC (62)], saluran K2P sangatcocokuntukmemediasilatarbelakangarus K +. K2P
terdiridarienamsubfamili: saluran TWIK, TREK, TASK, TASK-2, THIK, dan TRESK.
Dalamekspresipembuluhdarahparudari TASK-1, TASK-2, TREK-2, THIK-1, dan TWIK-2
telahditunjukkan. Namun, hanyauntuk TASK-1 dan TASK-2 (terutama TASK-1),
keterlibatandalampenjelasanterkait non-inaktivasi K + konduktansitelahditunjukkan,
dimanapenghambatan TASK-1 yang diinduksihipoksiaberkontribusiterhadapdepolarisasi
PASMC dan HPV.
Karena TASK-1 tidakdapatmendeteksi O2 itusendiri, NADPoksidase NOX4
telahdiketahuiuntukmenjadimitrapengindera O2 yang memodulasisensitivitas O2 dari TASK-1.
Dalamsel HEK293, aktivasi NOX4 yang diinduksihipoksiamenghambataktivitas TASK-1 (85).
Dalam proses ini, domain hememoiety dan FAD-binding
diusulkanuntukbertanggungjawabatasregulasi NOX4 dari TASK-1. Selanjutnya, dalamsel HeLa,
TASK-1, TASK-3, dan TUGAS-1/3 heteromerditunjukkandiaktifkan oleh H2O2.
Efekinitidaktergantung pada oksidasikelompok-SH, menunjukkanbahwa H2O2
bertindaklangsung pada protein saluran. Sebaliknya, TREK-1, TREK-2, TALK-1, TASK-2, dan
TRESK tidakmenanggapipengobatan H2O2. Superoksida yang berasaldaricampuran
xanthine/xanthine oksidasehanyamempengaruhiaktivitas TASK-2 dalamsel HeLa.
Perludicatatbahwa H2O2 tidakmemilikiefeksignifikan pada konsentrasihingga 16,3mM, yang
merupakankonsentrasi yang agaktidakfisiologis dan dapatmenyebabkanefek yang tidakspesifik.
Sebelumnya, Kim dkkmempublikasihasilkonflik yang menunjukkanbahwa H2O2
tidakmempengaruhiarus TASK-1, TASK-3, dan TRAAK ketikasalurandiekspresikandalamsel
CHO. Namun, TREK-2 diaktifkan oleh H2O2, mungkinsebagairesponterhadapaktivasimyosin
light chain kinase (MLCK) yang diinduksi H2O2. Temuanberbeda oleh Kim
dkkmungkindijelaskan oleh konsentrasi H2O2 yang jauhlebihrendah (5mM) dan jenissel yang
berbeda yang digunakandalampenelitiantersebut dan sebagiandidukung oleh penelitian yang
ditulisoleh Turner dan Buckler. Hasilnyamenunjukkanbahwahipoksia (dan karenanya ROS)
menghambataktivitassalurantunggal TASK-1 dan TASK-2 dalamsel tipe-1 yang
diisolasidaribadankarotid.
 SaluranKalsium

Konsentrasi Ca2 + intraselulermerupakanpusatpengaturan tonus pembuluhdarah. Selama

homeostasis, Ca2 + intraseluleradalah * 100 nMintraseluler dan 1,6mM ekstraseluler.
Gradienkonsentrasi yang besarantarakonsentrasi Ca2 + intraseluler dan
ekstraselulermenunjukkanpentingnyaCaost + homeostasis seluler yang dikontroldenganketat.
Saluran Ca2 + -permeable memungkinkan Ca2 +
untukmasukkedalamselmelaluimembrankarenagradienelektrokimia. Ca2 +
memompamengangkut Ca2 + terhadapgradienkonsentrasi, dan penukar Ca2 + yang
dapatmengangkut Ca2 + kelingkungan intra atauekstraseluler, tergantung pada mode aksi.
Saluranberikutmengoordinasikankonsentrasi Ca2 + sitosolikdalam PASMC: (i) entri Ca2 +
ekstraselulermelalui VOCCs, (ii) salurankation yang dioperasikanreseptor (ROC), dan (iii)
saluran yang dioperasikan olehsuatupenyimpanankalsium (SOCs) yang
diaktifkandenganmenipisnya SR). Perubahankonsentrasi Ca2 +
intraselulermemainkanperanpentingdalamkontraksiotot (kerangka, jantung, dan otot polos) dan
motilitassel, pelepasan neurotransmitter, rangsangan neuron, pembelajaran dan memori,
pembentukan dan pengembangan, proliferasisel, diferensiasi, apoptosis, dan gen transkripsi.
Masuknya Ca2 + sangatpentinguntukpenyempitanhipoksikdariarteripulmonalispra-kapiler.
Jalur Ca2 + yang masukke PASMC adalahmelalui VOCCs (diatur oleh
potensialmembranistirahat) dan saluran TRP (TRPC; salurankationnonselektifindependen-
voltasekelistrikan, SOCs dan ROCs). Peningkatankonsentrasi Ca2 + intraselulerdalam PASMC
telahditerimasecaraluassebagaiperistiwapentinguntuk HPV. Dalampembuluhdarahparu,
pelepasan Ca2 + hipoksikakutdalam PASMC tergantung pada tingkat yang lebihrendah pada
VOCCs (penghambatanpelepasan Ca2 + hipoksik yang dilemahkansebesar 30%) dan pada
tingkat yang lebihbesar pada salurantransmembranlainnyaseperti TRPC
(penghambatanmelemahkan Ca2 + hipoksikdilemahkanrilis 60%). Saluran-
saluraniniterutamabertanggungjawabataskontraksi PASMC yang berkelanjutanterkaitdengan
HPV dan modulasiresponshipoksikparu.

Saluran Ca2 + yang bergantung padavoltasekelistrikan

 Potensimembranseluler PASMC sebagianbesardiatur oleh saluran K +.
Penghambatanefluensi K + (mis., Selamahipoksia) menyebabkandepolarisasi sel. VOCC
diaktifkanketikadepolarisasimencapaiambangtertentu, suatumekanisme yang juga
dikenalsebagaipenggandaaneksitasi-kontraksi. Selainitu,
penemuanbahwapenghambatsalurantipe-L menekan HPV menyebabkanhipotesis lama bahwa
HPV terutamadisebabkan oleh penghambatan redox-mediated saluran K + tertunda-penyearah,
depolarisasi, dan entri Ca2 + yang bergantung pada voltasekelistrikan). VOCC diekspresikan di
mana-mana di VSMC. Subunit tersebuttermasuk a1, b1-b4, c1-c8, dan a2d1-a2d3, masing-
masingberisienam domain spanningtransmembran (S1-S6) tertutup oleh N- dan C-termini.
Banyak dari subunit inidapatberkumpulbersama, menyebabkanheterogenitas VOCC. Subunit a1
adalah subunit utama, yang mengandungporiselektif Ca2 + (loop antara S5 dan S6) dan sensor
voltasekelistrikan (S4), sangatpentinguntukfungsisaluran, dan berisi situs
untukpengaturansaluranmelaluiutusankeduaintraseluler, racun, dan obat-obatan . Kombinasidari
subunit a1 dengan subunit aksesori yang berbedamembentukenamsubfamili yang
berbedasecarafungsional: salurantipe L-, N-, P / Q-, R-, dan T. Subkelompokutamadarikeluarga
VOCC inidiekspresikandalambanyaktipesel dan bertanggungjawabuntukberbagaifungsiseluler,
termasukkontraksiotot, kontrolpotensialaksi, sekresi, dan ekspresi gen. Saluran-tipe T yang
dihidropiridinpeka, diaktifkanvoltasekelistrikantinggi, dan
tidakaktifperlahansertavoltasekelistrikanrendah yang diaktifkan, salurantipe-T yang
dinonaktifkandengancepat paling banyakdipelajari di VSMC.
Salurantipe-L telahdipelajarisecaraluasdalam PASMC dan
memainkanperanpentingdalammeningkatkankonsentrasi Ca2 + selulerselamahipoksia.
Salurantipe-L diaktifkandenganvoltasekelistrikantinggi dan mengatursambunganeksitasi-
kontraksi. Salurantipe L terbuktidiregulasidalamhipertensipulmonelkronis yang
diinduksihipoksia dan terkaitdenganresistensitergantung Ca2 +.
Dibandingkandenganarterisaluran, kepadatansalurankalsiumtipe-L dua kali lebihtinggi pada
PASMC dariarteriresistensi. Saluran Ca2 +
umumlainnyadalampembuluhdarahparuadalahsalurantipe-T yang
diaktifkanvoltasekelistrikanrendah. Saluran-saluraninitidakpekaterhadappenghambatsalurantipe-
L yang umum, dan relevansifisiologisnyakurangdikarakteristikkan. Dalampembuluhdarahparu,
ekspresi dan fungsisalurantipe-T tidakdijelaskandenganbaik dan
sifatelektrofisiologisnyaperludikarakterisasisecaramendalam. Penelitianterbaru juga
menunjukkanbahwasalurantipe-T pentingdalamproliferasi PASMC manusia. Arustipe Rt
telahterbuktidiaktifkan oleh endotelin-1 dan
menyebabkanpeningkatanpenyempitanarteriserebralselamaperdarahansubaraknoid.
Sementaramasuknya Ca2 + kedalam PASMC dariarteriresistensiditingkatkan oleh hipoksia,
masuknyake SMC dariarterisaluranterhambat (sepertiarterisistemik).
Sepertidisebutkansebelumnya, pelepasan Ca2 + hipoksikakutdalam SMC
dariarteriresistensiparubergantung pada derajat yang lebihrendah pada VOCC
(penghambatanpelepasan Ca2 + hipoksik yang dilemahkansebesar 30%) dan ketingkat yang
lebihbesar pada salurantransmembranlainnyaseperti TRPC (inhibisidilepaskanrilis Ca2 +
hipoksiksebesar 60%). Namundemikian, VOCC adalah salah satusaluran Ca2 + pertama yang
diidentifikasisebagairedokssensitif. Oksidanmempengaruhiaktivitas VOCC, ekspresi,
perdagangan, waktuterbuka, dan probabilitasterbuka. Residusisteindalam subunit a1-peforming
adalah target molekuleruntuk ROS, dan baikaktivasimaupunpenghambatanaktivitassaluran oleh
oksidasitelahdijelaskan. Meskipunhampirsemuapenelitiandilakukan pada
miositatausaluranjantungtipe L, telahdiketahuibahwa mode aksiregulasiredoksdarijaringan dan
sel lain mungkindapatditerjemahkankedalam VOCCs dari PASMC.
Namun, asumsiiniditantang oleh pengamatan yang menggambarkanefekhipoksia yang
berbeda pada masuknya Ca2 + kedalam PASMC arteriresistensi (ditingkatkan oleh hipoksia),
dan pada masuknya Ca2 + ke SMC dariarterisaluran (dihambat oleh hipoksia). Selainitu,
penghambatanhipoksikakutdari sub-unit-a1
pembentukporidiketahuimemediasivasodilatasiarterihipoksia, tetapihipoksia juga
terbuktisecaraselektifmeningkatkansaluran Ca2 + tipe-L dalamsel PC12 dan neuron
granulaserebelar. Dengandemikian, masihdipertanyakanapakahregulasiredoks VOCC
dapatditerjemahkandarisatujaringankejaringanlainnya.
Hudasekdkkmelaporkanbahwa subunit A1 tipejantungmanusia yang
diekspresikandalamsel HEK 293 menunjukkanpeningkatanarussetelahpenerapan 100 lM H2O2
dengancara yang bergantung pada voltasekelistrikan. Regulasikatalasemengurangiarusini.
Sebaliknya, inhibitor NADPoksidasedifenilen iodonium dan fenilarsinoksidatidakmemilikiefek
pada aliran Ca2 + basal atauresponsterhadaphipoksia. Para penulismenyimpulkanbahwaproduksi
H2O2 endogen mengatur subunit a1, tetapitidakadapenekanan level H2O2
maupunpenghambatanNADPoksidase yang terlibatdalamregulasi O2 yang bergantung pada
saluran Ca2 +. Peningkatan yang diinduksihipoksiadalamekspresisaluranfungsional tipe-Ca2 +
tipe L telahdiverifikasidalamsistemekspresirekombinan (garissel HEK-293
secarastabilmengekspresikantipe-L manusia-subunit 1-tipe L). Namun,
peningkatanekspresifungsionaldikaitkandenganperubahan yang
disebabkanhipoksiadariperdagangan a-subunit. Secaraumum, generasi ROS
diubahselamahipoksiaakut dan kronis, dan oksidasikelompok SH oleh ROS
menurunkanarusjantungtipe L Ca2 + jantung, sedangkanoksidasikelompok SH oleh oksidator
lain menyebabkanstimulasi Ca2 + - arusdalammiositventrikel. Dengandemikian,
efekagenpengoksidasi pada salurantipe-L tampaknyatergantung pada spesies dan mode aksi.

Saluran Ca2 + yang bergantung padareseptor

Masuknya Ca2 + melintasimembran plasma juga dapatdipicu oleh penipisan Ca2 +

dariretikulumendoplasma (ER) dan SR. Entri Ca2 + yang
dioperasikandenganpenyimpanankalsiuminidimediasi oleh SOC. Selainpenghambatansaluran K
+ karenaoksidasiresidusaluran, khususnya pada Kv1.5 (9, 102), depolarisasi PASMC
sebagairesponsterhadaphipoksiatelahterbuktidiprakarsai oleh sejumlahmekanisme lain
dimanahipoksiadapatmenyebabkanpenghambatan. ini dan saluranKvlainnya.
Mekanismeinitermasukpeningkatankonsentrasi Ca2 + sitosolikkarenapelepasan Ca2 +
daripenyimpanan, dan adabanyakbukti yang menunjukkanbahwadepolarisasi PASMC yang
dikurangihipoksinainsetidaknyasebagianakibataktivasi SOC.
Aktivasireseptormembrandenganpengikatanligan, diasilgliserol (DAG), dan protein kinase C
(PKC) dapatmenstimulasi ROC, menyebabkanmasuknya Ca2 + dan masuknya Na + efflux.
Aktivasimasuknya Na + melaluisalurankationnonselektifsebagaiakibatdaripenipisanpenyimpanan
Ca2 + oleh SOCs atauaktivasijalur messenger protein-detikreseptor-G oleh ROC
telahterbuktimenjadipenyebabutamapentingdaridepolarisasi dan selanjutnya Ca2
voltasekelistrikan-gated + entridalam PASMC. Dalampembuluhdarahsecaraumum, TRPC
mampumembentuk ROC fungsional dan SOC.
Miripdengan VOCC, TRPC
adalahbagiandarisuperfamilidarienamsalurankationpemancartransmembran,
tetapitidakmemilikisensitivitasvoltasekelistrikan (tidaktergantungvoltasekelistrikan). TRPC
adalahsalurankationnonselektif, tetapisecaradominanmembawa ion Ca2 +.
Dalampembuluhdarahparu-paru,
beberapasubtipetelahdiidentifikasisesuaidenganmekanismeaktivasi dan keberadaan domain
pengaturdalam N- dan C-termini. Subtipeinitermasuk TRP klasikataukanonik (TRPC1 –
TRPC7), TRP terkaitvaniloid-reseptor (TRPV1– TRPV4), dan saluran TRP terkait (TRPM1 –
TRPM8) yang terkaitdenganmelastatin. Di VSMC, lebihdari 10 isoform TRP telahterdeteksi.
Namun, ekspresi protein TRPC1, TRPC4, dan TRPC6 terbuktilebihtinggi di arteriparu distal
daripada di arteriparuproksimal, berkorelasidenganperubahankonsentrasi Ca2 + sitosolik yang
terjadiselama HPV (89), dan TRPC1 selanjutnyadiperlihatkanmemainkanperanpentingdalam
remodeling vaskularparu yang mendasariperkembanganhipertensipulmoner yang
diinduksihipoksia (93). TRPC6 sangatdiekspresikandalamjaringanparu-parusertadalamparu-paru
dan VSMC dan sel-selendotel (41). Pada tikus TRPC6- / -, faseakut HPV benar-benartidakada,
sedangkanfaseberkelanjutantidakterpengaruhsecarasignifikan (162) (Gbr. 5). TRPC6 dan TRPC3
adalahsaluran ion pertama yang ditunjukkandiaktifkan oleh DAG (Hofmann 1998). Di
bawahnormoxia, DAG terlokalisasi di sitoplasma. Dalamkondisihipoksia, DAG
mentranslokasikemembran plasma TRPC6 (162).
Kemungkinan, translokasi DAG dipicu oleh peningkatan ROS sebagaiinvestigasi pada
model binatang edema yang dipicuiskemiaparu (I/R) yang menunjukkanbahwa TRPC6
dalamselendoteldapatdiaktifkan oleh produksisuperoksida Nox2
turunanendotelialselamahipoksia. fase I/R denganaktivasiberikutnyafosfolipase Cc, dan
penghambatan DAG kinase. Menurutkonsepini, superoksidadikonversimenjadi H2O2, yang,
melalui loop ekstraseluler, memicurespons TRPC6. Sepertidisebutkansebelumnya, TRPC
adalahsalurankationnonselektif. Dengandemikian, penelitilebihlanjutberspekulasibahwaentri
natrium melalui TRPC6 dan peningkatankonsentrasi Na + sub-
sarkolemmalmenghambatsaluranKv dan mengaktifkansaluran Ca2 + tipe-L.
Telahdiketahuibahwapeningkatangenerasi ROS dapatmenyebabkanpelepasan Ca2 +
daripenyimpananintraselulersertamasuknya Ca2 + melintasimembran plasma. Khususnya pada
sel yang tidakdieksisiasi (mis., Selendotel),
meskipunselendotelmikrovaskularparumengekspresikansalurankalsiumtipe-T yang
terjagakeamanannya, jalurmasuk Ca2 + utamaadalahmelalui SOC dan ROC. TRPC7 (TRPM2)
dan TRPC3 / TRPC4 telahterbuktidiatur oleh ROS di endotelium. TRPC7
tidaklagidianggapsebagaianggotakeluarga TRPC (30). Saluran yang mengandung TRPC3/4
terbuktidiaktifkan dan berkontribusiterhadapdepolarisasiselendotel di hadapanoksidan dan diatur
oleh stresoksidatif oleh gangguanoksidasi yang diinduksi oleh rakit lipid kaya kolesterol.
Miripdengan TRPC6, aktivasi TRPC3 diatur oleh C-type fosfolipase (PLC) dan oleh hidrolisis
PIP membran-mediated-mediated. Namun, mekanisme yang mendasariaktivasi TRPC3 yang
dimediasistresoksidatiftidakmelibatkanhidrolisis PIP.
Telahberspekulasibahwaoksidasikolesterolmembran oleh ROS
mungkinmerupakanperistiwapensinyalan yang mengaktifkan TRPC3.
Poteserdkkmenyimpulkanbahwa TRPC3 dan TRPC4 berkontribusipada bagiansubunit
kesaluran yang pekaterhadapredoks. Karakteristikdua subunit lainnyatidakjelas. Peran PLC
dalamaktivasi TRPC1 belumditangani. SOC juga terbuktisecaratidaklangsungdiatur oleh status
redoksselulermelaluisalurankationnonselektif yang secarakovalendimodifikasi oleh glutathione
disulfide (GSSG), molekulantioksidan. Juga telahdiketahuibahwa SOCs sendiridapatmenjadi
target langsung GSSG (dengandemikiandarikeadaanredoksseluler) ataubeberapa ROS / spesies
nitrogen reaktiflainnya. Secaraumum, tidakbanyak yang
diketahuitentangregulasiredokssaluranmasuk SOC di paru-paru. Hipoksiaakut (mis.,
Lebihbanyak ROS) terbuktimeningkatkanmasuknya Ca2 + kapasitasimelaluiSOC di PASMC
distal dengandepolarisasiberikutnya dan aktivasi VOCC, menunjukkanperan SOC dalam HPV.
Lebihlanjut, antagonis SOC dan VOCC menghambatkontraksi PASMC
selamahipoksiasertaaktivasi VOCC yang bergantung pada SOC. Hipotesistentangregulasi
TRPC1 dan TRPC3/4 yang bergantung pada ROS. Perludicatatbahwa TRPM2, TRPM7, TRPC5,
dan TRPV1 diaktifkan oleh ROS. Dalamkasus TRPC5, TRPV1, dan TRPA1,
aktivasidipicumelaluioksidasigugussisteinsulfhidrilbebas. Masih
harusditentukanapakahtemuaninisejalandengan TRPC lain atau TRPC di paru-paru.

Kesimpulan
 Pengaturanredoksekspresisaluran ion dan kanal di bawahkondisihipoksia dan
terkaithipoksia, sertadalamkondisi lain dengandampak pada
keadaanredoksseluleradalahmekanisme yang diterimasecaraluas. Efek reversal langsung ROS
pada saluran ion meliputi, tetapitidakterbatas pada, oksidasigugustiol, oksidasiresiduarginin dan
lisin, dan oksidasimetionin. Efekreversibeltidaklangsungterdiridari, misalnya, perubahankadar
GSH, aktivasi PLC (DAG), aktivasi PKC, dan perubahankadar Ca2 + sitosolik.
Meskipunpemahamanpembacatentangpengaturanredokssaluran ion
cukupterperinciuntukbeberapasaluran ion (saluranKv, TRPC6), tetapsajahanyasedikit.
Selainproblematikapeningkatanataupenurunanproduksi ROS selamahipoksia,
pembacaperlumemahamimengapaoksidan yang berbedadalamkondisi yang
berbedadapatmenyebabkanaktivasi dan penghambatanaktivitassaluran. Menurutliteratur yang
tersedia, ROS darisumber yang identikdapatbekerja pada residuasam amino yang
berbedadarisaluran ion, sehinggamemediasipembukaanataupenutupansaluran.
Saatini, sebagianbesarmekanismepengaturanredoks yang dijelaskandarisaluran ion
didasarkan pada spekulasi dan ekstrapolasidaribeberapamekanismepengaturanredoks yang
diketahui. Sementarajalurhulu yang mempengaruhisalurankanalseringdijelaskandenganbaik, efek
ROS pada protein individujalursebagianbesartetaptidakdiketahui. Salah
satumasalahadalahuntukmendapatkanpemahaman yang lebihbaiktentangmodifikasi protein
redoksuntukdapatmenentukankompleksitasregulasiredokssaluran ion.
Pentinguntukmenguraikanbagaimana ROS diatur dan apaperandistribusispasial ROS
dalamhalini. Sudahjelasbahwapensinyalanredoksfisiologisterbatasbaiksecaraspasial dan temporal
dalamkompartemensubseluler dan mikrodomain. Status
redoksseltidakselalumerupakanketidakseimbangan global oksidan dan molekulpereduksi,
melainkan status bersihdari status redoksdalamkompartemenseluler yang berbeda.
Sebagaikompartemen yang paling aktifredoksdalamsel, mitokondriaadalah situs yang
dominanuntukproduksi ROS. Meskipunmitokondriamemilikikapasitasantioksidan yang
sangattinggi, pelepasan ROS yang berlebihandapatmenyebabkanberbagaigangguan. Sitoplasma
juga dapatmewakilikompartemensubseluler. Stimulasimembran plasma
dapatmemicuoksidasiprotein spesifikdalamsitosoltanpamempengaruhiorganellain.
Kompartemenaktifredokslainnyaadalahnukleus, lumen ER, peroksisom, endosom, dan lisosom.
Dalamkompartemenini, ROS dalampembuatanmikrodomain juga bisasangatberagam. Karena
atasdasarlatarbelakangini, NADPoksidase, sumber ROS seluler lain yangdominan,
telahterbuktidiekspresikandalammikrodomain ROS tersebut [misalnya, dalam caveolae dan
endosome. Bahkantelahdiketahuibahwa isoform Noxtunggal (Nox1)
dapatmemilikibeberapaefekpensinyalandenganmenempatimikrodomain yang berbeda di dalam
sel.