METODE TERAPI GEN
Sel hasil isolasi ditumbuhkan pada media
Pada kebanyakan studi terapi gen, sebuah gen
normal ditambalkan ke dalam genome untuk
menggantikan gen yang abnormal yang
merupakan gen penyebab penyakit, Sebuah
molekul pembawa yang disebut vektor harus
dapat digunakan urtuk mengadarkan gen
tempeutik kedalarn sel target pasien. Saat ini,
vektor yang umum digunakan adalah virus yang
secara genetik telah dihilangkan sifat patoget
dan kemampuaanya untuk memperbanyak diri.
Virus tersebut kemudian mengantarkan gennya
ke sel manusia. Para ahli mencoba untuk
mencari keuntungan dari kemampuan ini dan
memanipulasi genom virus untuk memindahkan
gen penyebab penyakit dan menggantinya
dengan gen terapeutik. Vektor kemudian akan
mencurahkan material genetiknya yang
mengandung gen terapeutik manusia ke daiam
sel target. Produk protein fungsional yang
dihasilkan dari gen terapeutik akan
memperbaiki sel target menjadi be nuk normal.
Penghantaran Ex vivo
Dalam sistem ini, sel-sel penerima yang
sebelumnya diambil dari jaringan target atau
sumsum tulang dikultur secara in vitro dan
kemudian dimasukkan kembali kedalam tubuh
pasien setelah transfer gen terapeutik. Untuk
meningkatkan keberhasilan terapi, sel yang
telah ditransfeksi secara positif diseleksi dari
total sel untuk implantasi, yang merupakan
kelebihan dari pemberian secara ex vivo.
Namun, kekurangan dari sistem penghantara ex
vivo adalah prosesnya kompleks dan
kelangsungan hidup sel yang dimasukkan
kembali rendah. Metode terapi gen secara ex
vivo terdiri dari beberapa langkah :
1. Isolasi sel yang memiliki gen abnormal dari
pasien penderita penyakit tertentu.
2.
kultur tertentu yang sesuai dengan karakteristik
sel
3. Sel target yang telah dikultur kemudian
diinfeksi dengan retrovirus yang mengandung
rekombinan gen dalam bentuk gen normal
untuk menggantikan gen abnormal pada sel
4. Produksi rDNA dari RNA rekombinan (jika
vektor virus merupakan virus dengan materi
genetik berupa RNA) dengan transkripsi balik
(reverse transcription)
5. Translasi gen normal pada sitoplasma sel
menghasilkan protein yang bertanggung jawab
pada gen yang mengalami kerusakan (terjadi
integrasi antara gen target untuk terapi dengan
gen pada sel yang dikultur
6. Seleksi, perbanyakan, dan pengujian sel yang
telah ditransfeksi untuk mendapatkan sel
normal yang gen abnormalnya telah berhasil
digantikan oleh gen baru
7. Injeksi kembali sel yang telah berhasil
direkayasa dengan terapi gen ke dalam jaringan
atau organ pasien.
Penghantaran In vivo
Dalam sistem ini, vektor gen yang membawa
gen terapeutik secara langsung dimasukkan ke
jaringan target atau organ, melalui injeksi
sistemik, injeksi in situ, obat oral atau
semprot,dimana teknik injeksi in situ lokal pada
jaringan tumor paling sering dilakukan. Terapi
gen secara in vivo melibatkan proses transduksi
secara langsung di dalam tubuh, lebih mudah
dilaksanakan dan dikembangkan dalam skala
tertentu, dan tidak membutuhkan fasilitas
khusus karena injeksi atau transfer gen bisa
dilakukan dengan metode umum maupun
menggunakan biolistic gene. terapi gen secara
in vivo memiliki spesifitas dan efisiensi yang
lebih rendah dibandingkan terapi gen secara ex
vivo.
VEKTOR DALAM TERAPI GEN
Sistem vektor ini dapat dibagi menjadi dua
kategori: sistem vektor nonviral dan viral.
Metode Viral biasanya menawarkan efisiensi
transduksi yang lebih tinggi dan ekspresi gen
jangka panjang, tetapi mungkin dapat terkait
dengan toksisitas, imunogenisitas,
mutagenisitas, ketidakmampuan untuk
mentransfer gen ukuran besar dan biaya tinggi.
Metode non-viral memberikan keuntungan
relatif aman, kemampuan untuk mentransfer
gen ukuran besar, toksisitas kurang dan
persiapan mudah; mereka juga dapat
dimodifikasi dengan ligan untuk jaringan atau
target spesifik sel. Namun, metode non-viral
menunjukkan keterbatasan efisiensi transfeksi
rendah dan ekspresi transgen yang rendah.
Non-viral vector systems
Vektor non-viral terdiri dari vektor kimia, vektor
biologi dan metode fisik transfer Gen untuk
memperkenalkan DNA telanjang (DNA plasmid),
molekul RNA, atau oligonukleotida ke sel
penerima. Vektor virus yang paling umum
dalam terapi gen pada penyakit kanker adalah
adenovirus (Adv), retrovirus (RV), virus
adenoassociated (AAV), lentivirus, herpes
simplex virus (HSV), virus influenza, virus
penyakit Newcastle, virus cacar, dan virus
EpsteinBarr (EBV).
oleh sistem tubuh penderita sehingga tidak
akan menimbulkan reaksi alergi ataupun
inflamasi. Penyisipan gen target via vektor
tersebut harus aman bagi penderita dan
lingkungan. Vektor penyisipan gen juga harus
mampu untuk memfasilitasi ekspresi gen target
sepanjang terapi tersebut dibutuhkan, bahkan
sepanjang umur penderita. Penyisipan gen pada
terapi gen umumnya menggunakan vektor
berupa virus (viral vector) maupun senyawa
atau molekul selain virus (non viral vector).
Transfer gen pada terapi gen dengan
menggunakan vektor berupa virus disebut
sebagai transduksi sedangkan transfer dengan
vektor selain virus disebut sebagai transfeksi.
Vektor yang ideal sebaiknya mampu
mengantarkan gen ke tipe sel spesifik,
mengakomodasi gen asing untuk menyesuaikan
ukurannya, mencapai level dan durasi ekspresi
transgenik yang mampu memperbaiki
kerusakan atau ketidaknormalan gen, serta
bersifat aman dan nonimunogenik

Transfer Gen

Vektor yang akan digunakan untuk penyisipan

gen pada terapi gen harus memenuhi beberapa
karakteristik, yaitu memiliki spesifitas yang
tinggi, mampu secara efisien menyisipkan satu
atau lebih gen dengan ukuran tertentu, tidak
dikenali oleh sistem imun tubuh penderita, dan
dapat dipurifikasi dalam jumlah yang besar.
Vektor pembawa gen target harus tidak dikenali