Anggota Kelompok

1. Putri Salsabila K100190131

2. Fathima Az Zahro K100190132
3. Siti Mareti Ita Mulia K100190133

Judul Jurnal : Validation of Analytical Methods In a Pharmaceutical Quality System:

An Overview Focused On HPLC Methods

Volume & Halaman : Vol. 43, No. 8

Tujuan Penelitian : Membahas validasi analitik secara kritis dengan mengevaluasi konsep dan

pencapaian yang berbeda dari setiap parameter kinerja analitis, serta

batasannya.

Landasan Teori

Metode analisis memegang peran penting dalam pemenuhan atribut kualitas produk yang
memadai. Namun kualitas yang tepat hanya bisa dicapai jika metode analisis mengalami proses
validasi yang sesuai. Validasi analitik terdiri dari alat formal, sistematis. Dan terdokumentasi yang
mengukur kemampuan metode analitik untuk memberikan hasil yang andal, akurat dan dapat
direproduksi. Karena kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) lebih menonjol di antara aplikasi
analitik farmasi. Ulasan ini memprioritaskan pembahasan berdasarkan teknik ini.

Hasil Penelitian

A. Parameter Analytical Validation

Pedoman regulasi yang terkait dengan validasi metode obat menyarankan penggunaan
(I) uji identifikasi, (II) uji batas untuk pengotor, (III) uji kuantitatif untuk pengotor, dan (IV)
uji kuantitatif untuk bahan aktif farmasi. Bergantung pada tujuan analitis, parameter validasi
yang berbeda mungkin diperlukan, seperti selektivitas, efek matriks, linieritas, presisi,
akurasi, jangkauan, deteksi dan kuantifikasi, dan ketahanan. Parameter kinerja yang lebih
analitis harus dievaluasi untuk validasi analitik agar sesuai untuk tujuan yang dimaksudkan.

B. Selektivitas, Kekhususan, dan Efek Matriks

Semua metode analitik harus dapat dengan tegas menentukan properti yang diminati,
yang merupakan dasar dari setiap prosedur analitis. Karena ini adalah parameter yang paling
mendasar, ini harus menjadi yang pertama dievaluasi dalam validasi analitik. Secara umum,
selektivitas dievaluasi dengan membandingkan sampel yang hanya mengandung analit dan
sampel yang mengandung kemungkinan interferen, yang dapat ditambahkan dalam jumlah
yang sesuai. Dalam kromatografi cair (LC), parameter ini biasanya diverifikasi dengan tidak
adanya interferen pada waktu retensi analit yang sama. selektivitas dibuktikan ketika hasil
positif hanya diperoleh untuk sampel yang berisi analit yang diminati, dan hasil negatif
 diperoleh untuk sampel dari potensi gangguan. Artinya, kriteria penerimaan untuk jenis
pengujian ini adalah hasil negatif untuk interferensi tersebut. Uji kemurnian puncak
menunjukkan bahwa tidak ada ko-elusi, dan ini dapat dinilai dengan menggunakan
photodiode array (PDA) atau detektor spektrometri massa MS.Untuk metode kuantifikasi,
demonstrasi selektivitas harus memastikan keakuratan dan ketepatan uji atau potensi analit
yang diinginkan. harus dipastikan bahwa eksipien dan kemungkinan interferen lainnya tidak
mempengaruhi respons analitik analit yang diinginkan.
Evaluasi efek matriks melibatkan membandingkan kurva kalibrasi yang diperoleh
dengan matriks yang diperkuat dengan kurva kalibrasi yang diperoleh dengan pelarut. kedua
kurva harus ditetapkan dalam rangkap tiga dan dalam tingkat linieritas yang sama. Dengan
membandingkan koefisien kemiringan, seseorang dapat mengevaluasi kesejajaran garis.
Adanya paralelisme merupakan indikasi tidak adanya efek matriks, dan demonstrasi harus
dilakukan melalui evaluasi statistik yang memadai, misalnya dengan uji-t, mengadopsi
tingkat signifikansi 5% dalam uji hipotesis.

C. Kurva dan Jangkauan Kalibrasi

Kurva kalibrasi linier dapat diperoleh dengan sistem tunggal atau multipoint, di mana
hanya satu atau beberapa set konsentrasi yang dapat digunakan untuk menghitung respons
instrument. Beberapa aspek sangat penting dalam perencanaan eksperimen untuk studi
kalibrasi, misalnya, (I) kisaran konsentrasi yang tercakup; (II) pengaruh matriks; (III) jumlah
urutan kalibrasi yang akan dilakukan; (IV) jumlah tingkat kalibrasi dan distribusinya; (V)
jumlah ulangan untuk setiap tingkat kalibrasi; (VI) jenis mode kalibrasi (internal / eksternal);
dan (VII) menyesuaikan data kalibrasi.
Beberapa aspek praktis harus dipertimbangkan mengenai desain percobaan kalibrasi.
Idealnya, setidaknya tiga urutan kalibrasi independen harus dilakukan untuk membantu
mengatasi beberapa kemungkinan keterbatasan praktis, seperti evaluasi hanya satu sumber
variasi, misalnya, keakuratan alami instrument. Bagaimana level didistribusikan dalam
rentang kerja sangat penting. Konsentrasi yang terdistribusi secara merata dianggap sebagai
pilihan terbaik, dan biasanya mudah diperoleh pada kisaran konsentrasi yang kecil. Namun
demikian, untuk rentang kalibrasi yang luas, hal ini tidak selalu merupakan situasi yang
sederhana atau memungkinkan untuk dicapai.
Beberapa pendekatan terhadap kurva kalibrasi harus dihindari karena memiliki
keterbatasan dalam penerapan regresi linier kuadrat-terkecil. Prosedur yang mungkin menjadi
sumber kesalahan adalah pencantuman titik nol sebagai data dalam kurva kalibrasi. Jika
digunakan titik nol standar yang sebenarnya dan respons yang diamati adalah nol atau
mendekati nol, maka sinyal latar belakang dapat diartikan sebagai nol. Kurva dapat dipaksa
melalui titik asal hanya jika terlihat bahwa intersep tidak berbeda secara signifikan dari nol.
Jika tidak, parameter regresi yang akan digunakan untuk memperkirakan konsentrasi sampel
yang tidak diketahui diperoleh dengan menggunakan persamaan yang berbeda untuk garis
terbaik melalui pusat massa.
D. Batas Deteksi dan Kuantifikasi
LoD didefinisikan sebagai konsentrasi terendah yang berbeda dengan kebisingan.
LoD dapat diestimasi dengan tiga kriteria berbeda: evaluasi visual, rasio signal-to-noise
(S/N), dan berdasarkan parameter kurva analitik. LoD dikaitkan dengan konsentrasi terendah
di mana derau dan sinyal analitik dapat dibedakan. Pendekatan lain yang digunakan untuk
mengestimasi LoD adalah melalui perhitungan rasio signal-to-noise, dimana dilakukan
perbandingan pengukuran sinyal analit dalam matriks dengan sampel kosong (matriks tanpa
analit). Kriteria evaluasi ketiga dari LoD didasarkan pada parameter kurva analitik.
Pendekatan ini dapat menyebabkan kesalahan jika kisaran konsentrasi tidak dibatasi secara
memadai, meskipun dianggap sebagai kriteria evaluasi yang paling kuat.
Limit of Quantitation (LoQ) didefinisikan sebagai jumlah analit terendah dalam
sampel yang dapat diukur secara kuantitatif dengan akurasi dan presisi yang sesuai dalam
kondisi eksperimental yang ditetapkan untuk metode analisis. LoQ juga disebut sebagai batas
kuantifikasi, batas kuantisasi, dan batas penentuan. Penentuan LoQ sebagai parameter
validasi analitik direkomendasikan untuk uji kuantifikasi pengotor dan saat pengukuran
dilakukan pada sampel dengan kadar analit rendah. Selain itu, jika kurva analitik tingkat
pertama lebih tinggi dari LoQ, maka tidak perlu mengestimasi LoQ karena telah terbukti
bahwa tingkat pertama kurva tersebut memenuhi persyaratan

E. Presisi
Parameter validasi analitik ini harus direalisasikan untuk pengujian dan pengujian
untuk penentuan kuantitatif, dan biasanya dinyatakan sebagai koefisien variasi (CV) atau
deviasi standar relatif (RSD), yang merupakan rasio antara deviasi standar dan deviasi
standar. Presisi dapat dipertimbangkan pada tiga tingkat: pengulangan, presisi menengah, dan
reproduktifitas. Namun, beberapa penulis mengkategorikan penyebaran hasil dalam presisi
melalui empat kategori: systemprecision, pengulangan, presisi menengah, dan reproduktifitas.
Variabilitas dalam laboratorium dari suatu metode analitik harus ditentukan dengan
pengulangan dan uji presisi menengah. Pengulangan mengevaluasi kontribusi preparasi
sampel terhadap variabilitas metode dan dapat dipengaruhi oleh pengenceran, penimbangan,
homogenisasi, dan ekstraksi.

F. Kekokohan
Kekokohan metode analitik menggambarkan kemampuannya untuk menahan variasi
kecil dan disengaja dalam parameter analitik, sambil mempertahankan presisi dan akurasi
yang dapat diterima. Parameter ini idealnya harus diakses selama pengembangan metode
sebelum validasi, sedangkan evaluasi pengaruhnya dapat dengan mudah dilakukan saat
memanipulasi metode untuk mencapai kondisi metode yang optimal. 9,50 Perubahan kondisi
kromatografi yang diterapkan selama pengembangan metode sering kali keras; namun, ini
membantu untuk menunjukkan parameter apa yang harus dipersempit selama validasi. Tidak
ada standar yang menjelaskan parameter mana yang harus dievaluasi dalam analisis
ketahanan. Mereka harus ditentukan oleh analis dan akan berbeda dengan peralatan dan
teknik terapan yang berbeda. Hasil ketangguhan merupakan indikasi dari kekritisan metode
dan faktor apa yang harus diikuti dengan hati-hati untuk memastikan reproduktifitas hasil.
G. Studi Stabilitas Solusi Analitis
Pra-menetapkan kondisi penanganan dan penyimpanan merupakan dasar untuk
pengembangan analitik yang tepat, serta untuk validasi analitik nanti. Penentuan profil
stabilitas solusi analitik pada tahap awal pengembangan metode memungkinkan pengurangan
pengeluaran untuk penggunaan solusi yang baru disiapkan untuk setiap pengujian, menjaga
keandalan. Selama rutinitas laboratorium, penyimpanan larutan stok memungkinkan
penggunaan bahan kimia referensi dengan lebih baik. Larutan stok dapat disimpan dalam
beberapa kondisi selama siklus hidupnya (penyimpanan di bawah bench-top pada suhu
kamar, didinginkan, dan dibekukan). Meskipun penerapan untuk ruang lingkup yang berbeda,
beberapa sikap yang diadopsi oleh panduan bioanalitik dapat membantu untuk mengevaluasi
metode analitis dengan lebih baik. Solusi analitis yang diperoleh dari larutan stok atau dari
sampel juga harus dievaluasi di bawah kondisi bench top dan penanganan. Jika kondisi ini
berbeda atau tidak tercakup oleh kondisi penyimpanan pengambilan sampel otomatis, periode
singkat hingga 24 jam sudah cukup untuk penilaian ini. Sebaliknya, ketika kondisi auto-
sampler yang berbeda dari kondisi bench-top digunakan, waktu tinggal yang diharapkan
untuk proses analitis harus dinilai. Penting untuk dicatat bahwa jika selama penerapan rutin
metode analitik, kondisi penyimpanan dan penanganan berbeda atau terjadi di luar kondisi
yang divalidasi, stabilitas analitik harus dievaluasi ulang di bawah kondisi baru ini.

H. Kesesuaian Sistem
Dengan uji eksperimental dan bukti ilmiah, validasi metode memastikan bahwa
prosedur analitik sesuai untuk tujuan penggunaannya dalam kondisi yang ditentukan.
Meskipun evaluasi menyeluruh dari keseluruhan proses direkomendasikan, SST sering
diterjemahkan dalam verifikasi peralatan analitik. Aspek yang terkait dengan persiapan
sampel, validasi analitik, dan kualifikasi peralatan juga dapat diverifikasi. Misalnya,
penggunaan timbangan yang dikalibrasi untuk memverifikasi keakuratan timbangan, menguji
volume yang ditarik dalam mikropipet dengan menimbang volume air yang berbeda, dan
bahkan menggunakan larutan buffer dengan pH yang diketahui untuk mengevaluasi pengukur
pH adalah cara untuk mengevaluasi komponen yang relevan dengan persiapan sampel, yang
merupakan bagian fundamental dari evaluasi kesesuaian system.
Pada saat metode dikembangkan, terdapat cukup informasi untuk menghasilkan SST
untuk metode yang diusulkan dengan parameter yang disediakan dari hasil (misalnya, pelat
teoritis, resolusi puncak, faktor tailing, faktor kapasitas, kromatogram dari kondisi
kromatografi optimal). Penting untuk menggunakan parameter dari metode yang
dioptimalkan untuk verifikasi sistem karena nilai beberapa parameter dapat dipengaruhi oleh
kondisi kromatografi yang disediakan.Dengan cara ini, kegagalan pengujian kesesuaian
sistem dapat menunjukkan bahwa kinerja prosedur analitik akan berada di luar cakupan
validasi atau akan ada kehilangan kapasitas operasional peralatan.