net/publication/43023181
Efek antioksidan ekstrak biji anggur pada model tikus diabetes mellitus
Artikel di Penelitian Diabetes & Penyakit Vaskular · Juli 2009
DOI: 10.1177 / 1479164109336692 · Sumber: PubMed
KUTIPAN BACA
86 272
7 penulis, termasuk:
Farmasi ieganu
Chemoprotectia prin produsi naturali di cancerele epiteliale fotoinduse - CHEMPROTECT Lihat proyek
Semua konten setelah halaman ini diunggah oleh Irina Chis pada 28 Mei 2014.
Efek antioksidan ekstrak biji anggur pada model tikus diabetes mellitus
Irina C. Chis, Marius I. Ungureanu, Adriana Marton, Ramona Simedrea, Adriana Muresan, Ion-Dan Postescu dan
Nicoleta Decea
Penelitian Diabetes dan Penyakit Vaskular 2009 6: 200
DOI: 10.1177 / 1479164109336692
Diterbitkan oleh:
http://www.sagepublications.com
Atas nama:
Masyarakat Internasional Penyakit Diabetes Vaskular
Layanan dan informasi tambahan untuk Penelitian Diabetes dan Penyakit Vaskular dapat ditemukan di:
Langganan: http://dvr.sagepub.com/subscriptions
Izin: http://www.sagepub.com/journalsPermissions.nav
Kutipan: http://dvr.sagepub.com/content/6/3/200.refs.html
Abstrak
Dalam penelitian ini kami menyelidiki efek anti-hiperglikemik dan antioksidan dari ekstrak biji anggur, flavonoid
polifenol, pada tikus Wistar diabetes normal dan yang diinduksi streptozotocin. Tikus wistar jantan dewasa dibagi
menjadi tiga kelompok: kelompok I: kontrol non diabetes; Kelompok II: pengendalian diabetes; Kelompok III: tikus
diabetes yang diberi ekstrak biji anggur, diberikan melalui selang intragastrik (0,6 ml / tikus), dengan dosis 100 mg / kg
selama 20 hari berturut-turut setelah diabetes melitus diinduksi. Diabetes diinduksi dengan injeksi ip dengan
streptozotocin untuk kelompok II dan III. TBARS, protein karbonilasi, diukur dalam plasma dan supernatan
homogenisasi hati, dan superoksida dismutase dan katalase diukur dalam hemolisat sel darah merah dan supernatan
homogenisasi hati. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian ekstrak biji anggur (100 mg / kg / hari) secara oral
menurunkan kadar peroksida lipid dan protein karbonilasi serta meningkatkan aktivitas antioksidan dalam plasma dan
jaringan hati pada tikus yang diberi ekstrak alami biji anggur dibandingkan dengan penderita diabetes. tikus kontrol.
Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak biji anggur meningkatkan pertahanan antioksidan terhadap spesies oksigen reaktif
yang diproduksi dalam kondisi hiperglikemik, sehingga melindungi sel-sel hati.
Kata kunci
diabetes mellitus, Spesies Oksigen Reaktif, peroksida lipid, protein karbonilasi, CAT, SOD, polifenol,
streptozotocin Buah dan sayuran mengandung beragam komponen
antioksidan, terutama polifenol dan flavonoid.8, 9
Flavonoid memiliki beberapa sifat fisiologis: aktivitas
antioksidan, antibakteri, antivirus, antiinflamasi,
pengantar antimutagenik dan antitumoral, serta aktivasi atau
inaktivasi enzim tertentu.10 Pada tumbuhan, flavonoid
Pada diabetes mellitus, hiperglikemia kronis menghasilkan umumnya ada sebagai turunan glikosilasi dan sulfat.11
sekuele biokimia ganda, dan stres oksidatif akibat diabetes Glikosida flavonoid jauh lebih cepat diserap oleh manusia
dapat berperan dalam gejala dan perkembangan penyakit.1 daripada aglikon.12
Stres oksidatif dapat menyebabkan produksi berlebih Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi
prekursor radikal bebas oksigen dan / atau penurunan peran ekstrak biji anggur terhadap peroksidasi lipid,
efisiensi sistem antioksidan.2 Generasi oksigen radikal oksidasi protein dan status antioksidan dalam plasma
bebas dikaitkan dengan auto-oksidasi glukosa, gangguan dan hati hewan yang diinduksi diabetes melitus.
metabolisme glutathione, perubahan dalam enzim
antioksidan dan pembentukan peroksida lipid.3–5 Ada
berbagai mekanisme pertahanan endogen melawan radikal Bahan dan metode Persiapan
bebas, seperti enzim GSH, SOD, GPx dan CAT, yang ekstrak biji anggur
aktivitasnya menghilangkan superoksida, hidrogen
peroksida, dan radikal hidroksil.6 Biji anggur merah (Vitis vinifera variety Burgund mare)
Stres oksidatif meningkat dalam model eksperimental diperoleh dari kebun anggur Recas, Rumania. BM 1: 1
diabetes mellitus yang diinduksi streptozotocin
Kedokteran dan Farmasi, Str. Emil Isac nr. 13, RO 400023 Cluj- (0,6 ml / tikus) setiap hari selama 20 hari. Tikus kontrol
Napoca, Rumania. non-diabetes dan kontrol diabetes menerima CMC saja.
E-mail: irinnaus@yahoo.com
Setelah perlakuan terakhir (hari ke-20), tikus
diperoleh seperti yang dijelaskan sebelumnya.13
dipuasakan semalaman dan dikorbankan dengan cara
Kandungan polifenol ditentukan dengan metode Folin-
pemenggalan leher rahim. Untuk masing-masing
Ciocalteu dan sampel distandarisasi dengan 3 mEq GA /
kelompok ditentukan kadar glukosa plasma di awal
ml.13
percobaan, 96 jam setelah pemberian STZ (hanya untuk
Hewan kelompok II dan III) dan di akhir percobaan.
Tikus Wistar berumur 90 hari, dengan berat 225 ± 25 g, Pengambilan sampel dan persiapan bahan
diberi pakan standar normokalorik (Hindustan Lever, biologis
Kolkata, India) dan air ad libitum, sambil dipelihara
dalam lingkungan yang terkendali (siklus terang dan Jaringan Jaringan hati, disimpan dalam wadah es dingin,
gelap 12 jam, 21– 23 ° C). Hewan-hewan tersebut dihomogenisasi menggunakan penghomogen Potter-
diaklimatisasi dengan kondisi laboratorium selama satu Elvejham dengan serum fisiologis, disentrifugasi pada
minggu sebelum dimulainya percobaan. Semua 3.000 rpm dan kemudian supernatan dikumpulkan.
percobaan dilakukan sesuai dengan resep NIH14 dan Parameter biokimia diukur dalam homogenat pada hari
protokolnya telah disetujui oleh Komite Kelembagaan pengorbanan.
Etika Percobaan Hewan.
Analisis biokimia Kadar stres oksidatif di hati dan
Obat-obatan dan bahan kimia plasmatik diperkirakan, dengan menilai konsentrasi
Semua obat dan biokimia dibeli dari Sigma Chemical peroksida lipid dan protein karbonilasi.
Company Inc., St Louis, MO, USA. Bahan kimia
tersebut adalah kelas analitik. Peroksida lipid diukur dengan metode TBARS. 17
Hasilnya diekspresikan dalam nmol MDA per mL plasma
Induksi diabetes eksperimental dan nmol MDA per g jaringan.
Streptozotocin baru dilarutkan dalam buffer sitrat (0,01 Protein karbonilasi sebagai produk dari reaksi antara
M, pH 4,5) dan disimpan di atas es sebelum digunakan. spesies oksigen reaktif (ROS) dan protein ditentukan
Diabetes diinduksi dengan injeksi ip tunggal STZ (50 dalam plasma dan homogenat jaringan hati, menggunakan
mg / kg) ke tikus puasa semalam.15 Tikus kontrol metode guanidin hidroklorik.18 Hasilnya dinyatakan
disuntik dengan buffer sitrat. Status diabetes dalam nmol per mg protein.
dikonfirmasi pada tikus yang diobati dengan STZ Aktivitas SOD telah diuji seperti yang dijelaskan oleh
dengan mengukur glukosa plasma puasa setelah 72 jam. Kakkar et al.19 Unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai
Darah (0,2 ml) dikumpulkan ke dalam tabung reaksi enzim yang memberikan penghambatan 50% dari
heparanisasi dengan menusuk pleksus retro-orbital. pengurangan NBT dalam 1 menit dalam kondisi pengujian
Plasma disentrifugasi pada 2000 G, selama 10 menit. dan dinyatakan sebagai aktivitas spesifik dalam unit / mg
Setelah melepaskan lapisan penyangga, sel darah merah Hb , masing-masing unit / mg protein.
yang dikemas dicuci dua kali dengan larutan garam Aktivitas CAT diuji menurut Sinha20 dan diekspresikan
fisiologis isotonik dingin. Kemudian volume sel darah dalam μmol HO yang dikonsumsi / min / mg Hb, respec-
2 2
merah yang diketahui dilisiskan dalam buffer fosfat
dingin (pada pH = 7,4). Hemolisat dipisahkan dengan unit efektif / mg protein.
sentrifugasi pada 3000 G, selama 10 menit, pada 2˚C.
Baik plasma dan hemolysate digunakan untuk analisis Analisis statistik Semua analisis dinyatakan sebagai nilai
biokimia. Kadar glukosa diperkirakan menggunakan kit rata-rata ± SEM dan dianalisis dengan uji t Student.
glukosa komersial (Qualigens Diagnostics - AccuChek- Perbedaan dianggap signifikan pada p <0,05.
ROCHE). Tikus dengan kadar glukosa plasma di atas
13,89 mmol / L dianggap diabetes16 dan digunakan Hasil
dalam percobaan. Perawatan dengan ekstrak BM
dimulai pada hari ke-3 setelah injeksi STZ.
Pengaruh ekstrak BM pada kadar glukosa
Desain eksperimental plasma puasa
Tabel 1. Pengaruh ekstrak biji anggur terhadap kadar glukosa plasma puasa, kadar peroksida lipid dan protein karbonilasi dan
aktivitas enzim antioksidan dalam plasma dan jaringan hati pada tikus normal dan diabetes
Tikus diabetes diobati
dengan
Tikus kontrol normal Tikus pengontrol diabetes ekstrak biji anggur
Glukosa plasma (mg / dL) 4.72 ± 0.16 15,23 ± 0,69 *** 5.28 ± 0.26 * +
+
p <0,001 p <0,005
TBARS plasma (nmol / mL) 2,01 ± 0,51 2,83 ± 0,25 * 2.06 ± 0.48 * +
+
CP plasma (nmol / mg protein) 0,61 ± 0,06 2,52 ± 0,52 *** 0,96 ± 0,20 * +
+
RBC SOD (U / mg Hb) 3,17 ± 0,14 1,62 ± 0,16 * 3,005 ± 0,09 * +
+
RBC CAT (digunakan µmol H2O2 / min / mg 2.81 ± 0.09 1,73 ± 0,13 * 2,63 ± 0,07 * +
Hb) +
TBARS hati (nmol / g jaringan) 0,85 ± 0,03 1,77 ± 0,08 * 0,96 ± 0,07 * +
+
CP hati (nmol / mg prot) 1,005 ± 0,73 3,50 ± 0,69 *** 2,20 ± 1,09 * +
+
SOD hati (Unit / mg prot) 10.72 ± 0.82 5,72 + 0,44 * 9,90 ± 0,75 * +
+
CAT Hati (Unit / mg prot) 75,2 ± 1,46 44,9 ± 1,38 * 65,9 ± 3,10 * +
+
TBARS = zat reaktif asam thiobarbituric, CP = protein karbonilasi, RBC = lisat sel darah merah, SOD = superoksida dismutase, CAT = katalase
*, **, dan *** = signifikan pada P <0,05, P = 0,005, dan P <0,001, masing-masing, dibandingkan dengan tikus kontrol normal
+
, ++, dan +++ = signifikan pada P <0,05, P = 0,005, dan P <0,001, masing-masing, dibandingkan dengan tikus kontrol diabetes
Kadar glukosa plasma puasa meningkat pada tikus kontrol pengobatan dengan ekstrak biji anggur dapat memperbaiki
diabetes. Jika diberikan ekstrak biji anggur tikus diabetes stres oksidatif yang disebabkan oleh hiperglikemia.
ditampilkan secara signifikan (p <0,005) penurunan kadar Peroksidasi lipid merupakan karakteristik diabetes
glukosa plasma, mendekati tingkat normal (Tabel 1). mellitus. Peroksidasi lipid adalah proses yang diinduksi
oleh radikal bebas yang menyebabkan kerusakan oksidatif
Pengaruh ekstrak BM pada TBARS dan CP PUFA. Dalam kondisi fisiologis, konsentrasi peroksida
Konsentrasi TBARS dan CP dalam plasma dan hati tikus lipid di jaringan rendah. Karpen et al. 24 melaporkan
normal dan diabetes dijelaskan pada Tabel 1. Pada tikus peningkatan kadar peroksida lipid dalam plasma tikus
diabetes, TBARS dan CP meningkat secara signifikan di diabetes. Kerusakan jaringan yang dimediasi lipid
plasma dan jaringan hati (p <0,05). Perlakuan tikus peroksida mengakibatkan perkembangan diabetes tipe I
diabetes dengan ekstrak biji anggur secara signifikan dan II.
menurunkan konsentrasi TBARS dan CP dalam plasma Kadar peroksida lipid yang rendah merangsang sekresi
dan jaringan hati (p <0,005). insulin, tetapi ketika konsentrasi peroksida endogen
Pengaruh ekstrak BM pada antioksidan meningkat, hal itu dapat memulai peroksidasi lipid yang
enzimatik tidak terkontrol, sehingga menyebabkan infiltrasi seluler
dan kerusakan sel pulau pada diabetes tipe I. Indikator
Pada tikus diabetes, aktivitas SOD dan CAT secara peroksidasi lipid yang paling umum digunakan adalah
signifikan menurun di plasma dan hati (Tabel 1) (p produk TBARS.26 Peningkatan peroksidasi lipid dalam
<0,034). Tikus diabetes yang diobati dengan ekstrak BM jaringan hewan diabetes mungkin disebabkan oleh
menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam aktivitas peningkatan konsentrasi TBARS di hati dan ginjal tikus
SOD dan CAT dalam plasma dan hati (p <0,005). diabetes.27 Hasil kami menunjukkan bahwa pada Pada
hewan diabetes kadar TBARS tinggi di plasma dan
Diskusi jaringan hati, dan dikembalikan ke nilai normal setelah
Tikus diabetes STZ mengalami sebagian besar komplikasi pengobatan dengan ekstrak BM.
diabetes yang khas.21 Berbagai protein, termasuk Karbonilasi protein adalah ciri kerusakan oksidatif
hemoglobin, albumin, kolagen, LDL atau protein kristal ireversibel, seringkali menyebabkan hilangnya fungsi
menjalani glikasi non-enzimatik22. Glikasi itu sendiri protein, yang dianggap sebagai indikator luas kerusakan
dapat menginduksi pembentukan radikal bebas yang oksidatif parah dan disfungsi protein yang diturunkan
diturunkan dari oksigen pada kondisi diabetes.23 Dalam dari penyakit. Apakah protein berkarbonasi sedang
penelitian ini, pemberian ekstrak BM menurunkan kadar didegradasi oleh sistem proteasom, protein berkarbonasi
glukosa plasma pada tikus diabetes dan mencegah stres berat cenderung membentuk agregat dengan berat
oksidatif yang diinduksi STZ. Hal ini menunjukkan bahwa molekul tinggi yang tahan terhadap degradasi dan
terakumulasi sebagai protein yang rusak atau tidak
terlipat. Kerusakan oksidatif yang diinduksi STZ pada