MAKALAH

DASAR BIOPROSES - B

( JUDUL )

Disusun Oleh:

HANIF ASSHIDDDIQ ROHMAT 17/410319/TK/45676

WAHYU DIPA PRATAMA 17/410346/TK/45703
NIKODEMUS BAMBANG WIJAYANTO 17/413749/TK/46189
ROY NA DAP DAP 17/413758/TK/46198

DEPARTEMEN TEKNIK KIMIA

FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS GADJAH MADA
2019
LATAR BELAKANG

Saccharomyces cerevisiae adalah mikroorganisme industri yang paling

populer karena menggunakan bahan murah untuk pertumbuhan dan produksi. Ragi
tipe liar dianggap sebagai objek yang sangat baik untuk penelitian dan
pengembangan, karena mereka kuat dan cukup stabil dalam budidaya selama periode
waktu yang lama. Ini adalah ragi yang paling diselidiki secara menyeluruh sebagai
model eksperimental karena fitur yang berbeda dari metabolisme glukosa dan penting
dalam industri. Organisme ini telah diterima sebagai produsen aman non-patogenik,
yaitu, yang dapat dengan mudah dimanipulasi secara genetik dan tumbuh pada media
yang sederhana dan murah dibandingkan dengan budidaya sel hewan. Selain itu, ia
mampu melakukan modifikasi post-translation protein yang diproduksi (misalkan
Glikosilasi, fosforilasi, dan asetilasi). Jadi, terlepas dari aplikasi klasik dalam produksi
anggur, bir, ragi roti, dan etanol, S. cerevisiae juga merupakan sistem ekspresi
potensial protein rekombinan.
Salah satu produk dari metabolisme ragi roti adalah enzim, protein alkohol
dehydrogenase terstruktur kompleks (ADH). ADH milik oksidoreduktase. Enzim
yang diisolasi memiliki berat molekul sekitar 150.000, struktur kuaterner distabilkan
oleh ion Zn. Karena itu, ia termasuk dalam kelompok methaloenzyme. Ini tergantung
pada koenzim nicotinamide adenine dinucleotide, yang terlibat, dalam oksidasi atau
reduksi dua elektron. YADH mengkatalisasi reaksi reversibel oksidasi alkohol dan
aktif terutama pada alkohol alifatik primer tak bercabang (C2-C12) dan sekunder (C3-
C14), sehingga bermanfaat dalam proses biotransformasi. Keuntungan YADH adalah
steroselektivitasnya, yang memungkinkan pengurangan enantioselektif 2-keton ke
isomer S dari alkohol sekunder yang sesuai. Enzim YADH juga digunakan untuk
persiapan aldehida oleh oksidasi alkohol primer. Hal ini dikarenakan
kemungkinannya untuk mengoksidasi etanol, aplikasi paling penting dari enzim
YADH adalah untuk penentuan etanol dalam bahan makanan seperti minuman
beralkohol, jus buah, cuka, coklat, selai, madu dll. Sebagai enzim analitik, itu juga
digunakan untuk penentuan etanol dalam darah. Baru-baru ini, skala semi industri
untuk produksi kontinyu heksanol dari heksanal dalam fase gas secara keseluruhan sel
ragi ADH telah didirikan. Enzim yang sama dimasukkan dalam proses itu, sebagai
NAD (H) regenerasi enzim dengan etanol ditambahkan sebagai cosubstrate. Dalam
proses baru untuk produksi protein heterologus dalam hasil tinggi (hirudin,
miniproinsulin, lepton), sistem promotor ragi ADH juga diterapkan .
Produksi alkohol dehidrogenase (ADH) terhubung langsung dengan
konsentrasi oksigen terlarut, sumber karbon dan etanol, yang merupakan produk dari
jalur metabolisme reduktif. ADH adalah enzim yang diproduksi dalam sel untuk
mensintesis dan mengoksidasi etanol. Produksi etanol terjadi hanya jika oksidasi
piruvat melalui siklus asam trikarboksilat dihentikan karena kekurangan oksigen,
yang merupakan kekuatan pendorong utama untuk operasi siklus ini atau alternatif
piruvat yang dihasilkan dari glukosa untuk itu harus ditangani dalam mitokondria.
Sedangkan produksi piruvat dihubungkan dengan pembentukan pengurangan ekivalen
(NADH), yang harus dioksidasi ulang, sel perlu menemukan beberapa mekanisme
selain fosforilasi oksidatif untuk mereoksidasi itu. Jadi, konversi piruvat menjadi
etanol adalah solusi yang baik karena merupakan proses reduktif yang terkait dalam
langkah-langkah akhir dengan reoksidasi NADH. Dengan mempertimbangkan fakta
sebelumnya, dapat diasumsikan bahwa produksi ADH tertinggi akan dicapai selama
budidaya ragi tukang roti oksidatif-reduktif. Jalur oksidatif diperlukan untuk
pembentukan biomassa karena ADH adalah produk intraseluler dan reduktif untuk
sintesis etanol.

RUMUSAN MASALAH
1. Bagaimana karakteristik bakteri yang digunakan dalam proses?
2. Bagaimana proses upstream dari produksi alkohol dehydrogenase?
3. Bagaimana proses downstream dari produksi alkohol dehydrogenase?
PEMBAHASAN

Karakteristik bakteri yang digunakan dalam proses.

Klasifikasi Ilmiah
Kingdom : Fungi
Phylum : Ascomycota
Class : Saccharomycetales
Family : Saccharomycetaceae
Genus : Saccharomyces
Bakteri ini digolongkan sebagai kelompok bakteri Eukariotik
Hidup pada temperatur optimal 30-35°C dan memiliki temperatur maksimal 45°C.
pH optimum dari bakteri ini adalah 4-6

Proses upstream dari produksi alkohol dehydrogenase.

Modelling
Studi kinetik merupakan bagian penting dari keseluruhan penyelidikan pembentukan
produk dalam fermentasi. Model matematika memungkinkan analisis data yang
mudah dan memberikan strategi untuk mengoptimalkan produksi. Model untuk
menggambarkan produksi enzim biasanya didasarkan pada studi Luedeking & Piret
untuk pembentukan produk dengan beberapa modifikasi yang dikarakterisasi untuk
enzim spesifik. Tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk mengumpulkan semua
informasi yang tersedia tentang perilaku ragi roti dalam model matematika untuk
mengoptimalkan pertumbuhan ragi roti dan produksi alkohol dehidrogenase enzim.
Asumsi Model
Model yang kami usulkan didasarkan pada asumsi berikut:
-reaktor mengandung dua fase (sistem gas-cair), mikroorganisme tidak dianggap
sebagai fase terpisah karena ukurannya yang kecil dan kerapatan mirip air;
- Isi reaktor dianggap homogen dalam arah aksial dan radial;
Keseimbangan energi tidak dipertimbangkan karena kontrol suhu yang efektif
dilakukan;
-pindahan massa antara fase gas dan cair dijelaskan oleh model film yang juga
dimasukkan ke dalam model proses.
Untuk menggambarkan perubahan aktivitas enzim dari alkohol dehidrogenase enzim,
dua asumsi berikut diperkenalkan:
-produksi enzim mengikuti pertumbuhan biomassa, yaitu produksi enzim terkait
pertumbuhan;
Deaktivasi enzim yang disebabkan oleh kondisi yang tidak tepat dalam bioreaktor
(suhu, pH) dapat dijelaskan oleh kinetika orde pertama.

Proses downstream dari produksi alkohol dehydrogenase.

4. Metode dan Material

Biakan murni sel S. cerevisiae (diperoleh dari koleksi mikroorganisme
Fakultas Teknik Kimia dan Teknologi, Zagreb dalam dokumen. PhD Brisˇki
laboratorium) disimpan di piring yang mengandung agar malt di +4 8C. Kultur
diaktifkan kembali dengan menginokulasi S. sel cerevisiae dari substrat padat menjadi
Erlenmeyer labu dengan 100 mL media, yang diinkubasi pada 30 8Con rotary shaker
selama 24 jam.
Media fermentasi dan kocok labu untuk percobaan berisi: FeSO4 7H2O
0,012 g dm3, (NH4)2- SO4 7,5 g dm3, CaCl2 0,03 g dm3, CuSO4 5H2O 0,001 g dm 3,
KH2PO4 1,5 g dm 3, ZnSO4 7H2O 0,006 g dm 3 dan MgSO4 7H2O 0,691 g dm 3
dalam air suling. Sebagai karbon sumber, konsentrasi awal glukosa yang berbeda
digunakan
(cGO = 5, 10, 30 dan 50 g dm 3). Pertumbuhan flake-flask medium mengandung 10 g
dm3 glukosa. Pertumbuhan batch ragi roti dilakukan di 5 dm3 reactor
(Drasler,Slovenia) mengandung medium 3,5 dm3. Bioreaktor dilengkapi dengan unit
kontrol standar untuk pH, suhu, aerasi, dan kecepatan pengaduk. Komputer akuisisi
untuk mengumpulkan dan memantau data DO (oksigen terlarut) setiap 10 detik
didirikan. Semua fermentasi dilakukan pada suhu 30 8C. Konsentrasi oksigen terlarut
disimpan sekitar 10% (kondisi mikro-aerob) dan sekitar 40% (kondisi aerobik)
konsentrasi saturasi oleh variasi pengadukan (200-700 RPM) dan laju aliran udara (3–
10 dm3 min 1). Media fermentasi dan bioreaktorndisterilkan selama 20 menit pada
120 oC, kecuali glukosa, yang disterilkan selama 30 menit pada 110 oC. Perubahan
berat basah biomassa dipantau pada spektrofotometer pada panjang gelombang 660
nm dengan kurva kalibrasi. Perubahan konsentrasi etanol dan Sampel uji untuk
aktivitas ADH disiapkan oleh permeabilisasi sel-sel ragi dengan
cetyltrimethylammonium bromida. Konsentrasi glukosa diukur dengan metode
colorenzymatic standar (PAP). Konsentrasi oksigen dihitung berdasarkan korelasinya:

Di mana cO, S mewakili konsentrasi oksigen saturasi (cO, S = 0,00712 g dm 3,

dihitung sesuai dengan Henry hukum) yang dianggap konstan selama percobaan.
Parameter model diestimasi dengan non-linear analisis regresi menggunakan metode
Nelder-Mead. Nilai numerik dari parameter dievaluasi oleh pas model ke data
eksperimen dengan Perangkat lunak. Persamaan model itu diselesaikan secara
numerik dengan urutan keempat Runge-Kutta algoritma, yang juga ditawarkan dalam
perangkat lunak yang sama. Seperangkat parameter optimal digunakan untuk
simulasi. Data yang dihitung dibandingkan dengan eksperimen data, dihitung ulang
dalam rutin optimasi dan diumpankan lagi ke langkah integrasi sampai kesalahan
minimal antara nilai-nilai eksperimental dan terintegrasi tercapai (built-in). Jumlah
residu kuadrat didefinisikan sebagai jumlah kuadrat perbedaan antara eksperimental
(yi) dan data yang dihitung (yi, calc).

Untuk setiap data, tentukan korelasi product-moment Pearson Koefisien ditentukan

(built-in Scientist). Ini korelasi antara dua variabel X dan Y didefinisikan oleh:

di mana x dan y adalah sarana X dan Y, n adalah jumlah titik. Algoritma ‘‘ Episode
’untuk sistem diferensial yang kaku persamaan, diimplementasikan dalam paket
perangkat lunak ‘‘ Scientist ’, digunakan untuk simulasi. Ini menggunakan koefisien
variabel Adams-Moulton dan Formula Diferensiasi Mundur metode dalam bentuk
Nordsieck, memperlakukan matriks Jacobian penuh atau berpita.