Nama asisten : Novia Oktaviani

Tanggal Praktikum : 11 September 2019

Tanggal Pengumpulan : 18 September 2019

PEMBUATAN MEDIA DAN STERILISASI

FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN
UNIVERSITAS PADJADJARAN

Aditya Nugraha (240210180100)

Departemen Teknologi Industri Pangan Universitas Padjadjaran, Jatinangor

Jalan Raya Bandung-Sumedang Km. 21, Jatinangor, Sumedang 40600 Telp. (022)
7798844, 779570 Fax. (022) 7795780 Email: aditya18018@mail.unpad.ac.id

ABSTRAK

Medium adalah bahan yang mengandung campuran nutrisi yang bermanfaat

untuk menumbuhkan mikroba. Medium ada yang alami dan ada yang merupakan buatan
manusia, contoh medium buatan manusia adalah medium cair, medium kental dan
medium setengah padat. Medium cair digunakan untuk bakteri dan fragmentasi.
Medium padat digunakan untuk menmbuhkan mikrobia pada permukaan[CITATION Dwi \l
1033 ]. Media berfungsi untuk menumbuhkan mikroba, isolasi, memperbanyak jumlah,
menguji sifat-sifat fisiologis dan perhitungan jumlah mikroba, dimana dalam proses
pembuatannya harus disterilisasi dan menerapkan metode aseptis untuk mnghindari
kontaminasi pada media[ CITATION Had931 \l 1033 ] . Sterilisasi merupakan proses untuk
mematikan semua mikroorganisme yang hidup. Tujuan dari praktikum ini dalah agar
mahasiswa dapat membuat berbagai macam media dan dapat melakukan proses
sterilisasi alat dan media. Hasil dari praktikum kali ini adalah medium NA dan larutan
pengencer NaCl Fis.
Kata Kunci : Medium, Mikroorganisme, Sterilisasi

PENDAHULUAN mikroorganisme merugikan.

Mikroorganisme juga banyak
Mikrobiologi merupakan suatu dipergunakan dalam pembuatan bahan
kajian yang mempelajari mengenai pangan, seperti roti, dan keju.[ CITATION
mikroorganisme. Mikroorganisme Gar92 \l 1057 ]
merupakan organisme yang berukuran
Mikroorganisme bisa hidup
sangat kecil dan hanya memiliki sel
disegala tempat, namun untuk bisa
tunggal sehingga jika tidak dapat dilihat
mendapatkan mikroorganisme yang kita
dengan mata tenjang. Secara individual
inginkan, kita harus menumbuhkannya
hanya dapat dilihat dengan batuan
sendiri. Dalam menumbuhkan dan
mikroskop. Mikroorganisme juga
memelihara mikoorganisme diperlukan
banyak tersebar pada panga. Sering kali
media atau biasa disebut medium,
terjadi mikroorganisme dalam jumlah
Medium adalah bahan yang
banyak menjadi penyebab turunnya
mengandung campuran nutrisi yang
mutu pangan. Namun, tidak semua
bermanfaat untuk menumbuhkan
mikroba. Medium ada yang alami dan
ada yang merupakan buatan manusia,
contoh medium buatan manusia adalah
medium cair, medium kental dan
medium setengah padat. Medium cair
digunakan untuk bakteri dan
fragmentasi. Medium padat digunakan
untuk menmbuhkan mikrobia pada
permukaan.[CITATION Dwi \l 1033 ]
Pembuatan dan penggunaan
medium didasarkan pada fungsi
komposisi media dan konsistensinya
sehingga dapat tumbuh dan sesuai
dengan yang diharapkan. Media
berfungsi untuk menumbuhkan
mikroba, isolasi, memperbanyak
jumlah, menguji sifat-sifat fisiologis
dan perhitungan jumlah mikroba,
dimana dalam proses pembuatannya
harus disterilisasi dan menerapkan
metode aseptis untuk mnghindari
kontaminasi pada media.[ CITATION
Had931 \l 1033 ]
Praktikum kali ini dilakukan
dengan tujuan mahasiswa dapat
membuat berbagai macam media dan
sterilisasi alat.
METODOLOGI
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada
praktikum kali ini adalah Autoclave,
Beaker Glass, Botol Scootc, Cawan
Petri,Erlenmeyer, Gelas Ukur, Neraca,
Pipet Tetes, Pipet Ukur, Sumbat,
Sparula, dan Tabung reaksi.
Bahan-bahan yang digunakan pada
praktikum kali ini adalah Aquades,
Butir Gelas, Deterjen, KH2PO4, NA,
Pasir Quarts, PCA, dan PDA
Prosedur
Pembuatan Media dan Larutan
Pengencer
Prosedur yang dilakukan untuk
membuat media NA, NB, PDA dan
PCA adalah pertama timbang media
yang dibutuhkan kemudian larutkan
dalam aquades setelah itu masukkan ke
dalam labu Erlenmeyer/botol scoots,
kemudian panaskan media hingga
homogen atau sampai media terlihat
jernih. Setelah itu tutup
Erlenmeyer/botol scoots dan sterilisasi
dengan Autoclave. Setelah selesai
disterilisasi kemudian beri nama pada
media yang dibuat, tunggu sampai
dingin kemudian simpan di kulkas.
Pembuatan Larutan Pengencer NaCl
fis
NaCl di timbang sesuai yang
dibutuhkan lalu NaCl fis dilarutkan
dengan 100ml aquades dalam gelas
kimia terlebih dahulu dengan bantuan
spatula, lalu dimasukkan ke dalam
erlenmeyer dan di sumbat.
Sterilisasi Basah Dengan Cara
Perebusan
Cuci alat-alat seperti botol,
cawan petri, tabung reaksi, gelas ukur
dan Erlenmeyer dan bilas hingga bersih.
Masukan kedalam panci yang bagian
bawahnya sudah dilapisi oleh lap lalu
maskan air sampai alat teremdam.
Didihkan selama 5-10 menit.

Sterilisasi basah dengan
menggunakan Autoclave
Autoclave diisi dengan aquades
sampai batas lalu simpasn empat
penyimpanan alat/media diatas
penyangga. Masukan alat/media lalu
tutup autoclave dengan rapat dan
kencangkan kunci tutup. Nyalakan
tombol ‘ON’ dan atur suhu pemanasan.
Klep pengaman tetap dibuka. Setelah air
menetes tutup klep tersebut dan atur
besar kecilnya pemanasan lalu listrik
api dimatikan. Stelah jarum penunjuk
kembali ke 0 buka klep dan geser tutup.
Keluarkan isi autoclave kemudian
tekan tombol ‘OFF’.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pembuatan Media dan Larutan
Pengencer
Media pertumbuhan mikroba
memiliki jenis yang beragam tergantung
dari mikroba apa yang akan
ditumbuhkan. Media NA (Nutrient
Agar) Merupakan media yang
digunakan untuk menumbuhkan segala
jenis bakteri. Media NB (Nutrient
Broth) merupakan media cair umum
pertumbuhan mikroorganisme. Media
PDA (Potato Dextrose Agar) media ini
digunakan untuk media pertumbuhan
kapang dan khamir, selain itu digunakan
juga untuk enumeriasi yeast dan kapang
dalam suatu sampel atau produ
makanan. Media PCA (Plate Count
Agar) merupakan media yang berfungsi
sebagai media untuk menghitung
jumlah bakteri total (semua jenis
bakteri) yang terdapat pada makanan,
produk susu, atau air limbah. Larutan
pengencer NaCl fis 0,85% berfungsi
sebagai pengencer untuk mempermudah
dalam perhitungan koloni mikroba.
Selain itu, NaCl fis dianggap sebagai
cairan yang konsentrasinya sesuai
dengan tubuh manusia sehingga
dianggap menyimpan banyak nutrisi
yang juga baik untuk mikroorganisme.
Untuk membuat media NA
sebanyak 200 mL diperlukan 4g
padatan NA. Komposisi larutan NA
yang tertulis pada kemasan adalah 20g
padatan NA untuk 1L aquades, karena
praktikum kali ini hanya membutuhkan
100mL medium, maka dapat dihitung
sebagai berikut :
20 g NA
× 200 mL=4 g NA
1000 mL
Setelah diketahui berat NA yang
diperlukan, selanjutnya ditimbang 4g
medium NA menggunakan neraca
teknis dengan wadah gelas kimia.
Setelah itu, campurkan dengan 200mL
akuades dengan cara pertama
campurkan dengan 100mL akuades
terlebih dahulu dan masukan ke labu
Erlenmeyer. Selanjutnya, bilas gelas
kimia dengan 100mL sisa aquades,
kemudian dimasukakan kembali ke
dalam Erlenmeyer, dan tutup dengan
sumbat. Karena mengandung
polisakarida, larutan NA harus
dipanaskan untuk mempercepat proses
pelarutan dan agar terjadi gelatinisasi.
NA sendiri memiliki warna coklat muda
pada saat bubuk. Sedangkan ketika
dilarutkan dan disterilisasi warna coklat
muda tadi menjadi keruh.
Pembuatan 200mL
medium NB digunakan 1,6 gram
padatan NB. Komposisi larutan yang
tertera di kemasan adalah 8 gram untuk
setiap 1 Liter akuades. Praktikum ini
hanya memerlukan 200mL larutan NB,
maka dapat dihitung sebagai berikut :
8 g NB
× 200 mL=1,6 g NB
1000 mL
Cara pembuatan medium NB sama
dengan cara membuat NA, bedanya saat
dipanaskan media NB tidak boleh
sampai mendidih, sekitar 5 menit.
Bubuk NB berwarna kuning pucat.
Setelah dilarutkan NB menjadi
berwarna kuning jernih begitu juga
setelah disterilisasi.
Pembuatan 200mL medium
PDA dilakukan dengan dengan cara
melarutkan 7, gram padatan PDA pada
200mL akuades. Komposisi yang
tertulis pada kemasan adalah 39 gram
untuk 1 Liter akuades. Karena pada
praktikum ini hanya diperlukan 200mL
medium, maka dapat dihitung sebagai
berikut :
39 g PDA
× 200 mL=7,8 g PDA
1000 mL
Membuat medium PDA dapat
dilakukan dengan menimbang 7,8 gram
PDA dan melarutkannya dengan 200mL
akuades didalam labu erlenmeyer.
Setelah itu dipanaskan selama sekitar 5
menit agar homogen. Larutan PDA
yang sudah homogen kemudian
disumbat menggunakan sumbat dan
disterilisasi di autoclave.
Pembuatan medium PCA
sebanyak 200mL dapat dilakukan
dengan cara melarutkan 4,5 gram
padatan PCA pada 200mL akuades.
Pada kemasan, tertulis untuk
menggunakan 22,5 gram untuk setiap 1
L akuades. Praktikum kali ini hanya
memerlukan 200mL, dapat dihitung
dengan perhitungan :
22,5 g PCA
×200 mL=4,5 g PCA
1000 mL
Cara pembuatan media PCA juga sama
dengan NA dan NB. Serbuk PCA
ditimbang terlebih dahulu dengan
neraca analitik sebanyak 24,5 gram.
Serbuk yang sudah ditimbang
dilarutkan dengan 200 ml akuades
sedikit demi sedikit. Larutan diaduk
menggunakan spatula di dalam gelas
kimia. Larutan dipindahkan dari gelas
kimia ke labu erlenmeyer dibantu
dengan corong sambil dilarutkan
dengan akuades. PCA kemudian
dipanaskan selama 5 menit agar larutan
menjadi homogen. Larutan yang sudah
homogen disumbat dengan sumbat dan
disterilisasi di autoclave.
NaCl Fisiologis 0,85% dibuat
dengan melarutkan 1,7 gram NaCl fis
dengan 200ml akuades. Berat NaCl
yang dilarutkan didapatkan dari hasil
kali konsentrasi larutan yang dinginkan
dengan volume larutan:
0,85
NaCl fis= x 200=1,7 gram
100
NaCl fis dilarutkan dengan
200ml aquades dalam gelas kimia
terlebih dahulu dengan bantuan spatula,
lalu dimasukkan ke dalam erlenmeyer
dan di sumbat. Sebelum di larutkan,
NaCl Fis berbentuk serbuk berwarna
putih seperti kristal. Setelah dilarutkan
dengan air NaCl Fis menjadi cairan
yang tidak berwarna (jernih) dan larut
dalam aquades. Setelah disterilisasi
NaCl Fisiologis tidak mengalami
perubahan.
Sterilisasi
Sterilisasi adalah cara untuk
mendapatkan suatu kondisi bebas
mikroba atau setiap proses yang
dilakukan baik secara fisika, kimia, dan
mekanik untuk membunuh semua
bentuk kehidupan terutama
mikroorganisme. Sterilisasi yang sering
dilakukan pada praktikum biologi
terbagi menjadi sterilisasi kering dan
sterilisasi basah.
Pada sterilisasi kering proses
pembunuhan mikroba berdasarkan
oksidasi oksigen di udara.  Suhu yang
digunakan lebih tinggi kira-kira 150°.  sterilisasi basah adalah autoklaf, yaitu
Satu gram udara pada suhu 100°, jika
didinginkan menjadi 99° hanya
membebaskan 0,237 kalori.  Sterilisasi
kering ini sering digunakan untuk
sterilisasi alat-alat dari gelas (gelas
kimia, gelas ukur, pipet ukur, dll) serta
bahan obat yang tahan pemasan tinggi
(minyak lemak, vaselin).  Alat yang
sering digunakan adalah oven .  Oven
adalah lemari pengering dengan dinding
ganda yang dilengkapi dengan
termometer dan lubang tempat keluar
masuknya udara, dipanaskan dari bawah
dengan gas atau listrik.
            Selain dengan menggunakan
oven, sterilisasi kering juga dapat
dilakukan dengan memakai api gas
dengan nyala api tidak berwarna atau
api dari lampu spiritus.  Cara ini sangat
sederhana, cepat dan menjamin
sterilisasi bahan / alat yang disterilkan. 
Akan tetapi sterilisasi ini hanya dapat
dilakukan untuk beberapa alat / bahan
saja.  Yang dapat disterilkan dengan
cara ini adalah benda-benda logam
(pinset, penjepit krus), gelas / porselin
(sudip, batang pengaduk, kaca
arloji,dll).  Seluruh permukaan alat
harus berhubungan langsung dengan api
selama tidak kurang dari 20 detik.
            Pada Sterilisasi basah proses
pembunuhan mikroba berdasarkan
koagulasi atau penggumpalan zat putih
telur dari mikroba tersebut.  Sterilisasi
dengan cara ini menggunakan suatu
siklus autoklaf yang ditetapkan dalam
farmakope untuk media atau pereaksi
adalah selama 15 menit pada suhu
121°.  Alat yang digunakan pada
suatu panci logam yang kuat dengan
tutup yang berat. Autoclave ini
mempunyai lubang tempat
mengeluarkan uap air beserta krannya,
termometer, pengatur tekanan udara,
dan klep pengaman.  Cara sterilisasi ini
lebih efektif dibandingkan dengan
pemanasan yang lain karena suhunya
lebih tinggi. Yang dapat disterilkan
menggunakan sterilisasi basah ini antara
lain adalah alat pembalut, kertas saring,
alat gelas (buret, labu ukur, dll) dan
media pertumbuhan.
KESIMPULAN
Kesimpulan yang dapat diambil
dari praktikum kali ini adalah media
merupakan tempat tumbuh dan mikroorganisme memiliki fungsi yang
berkembangbiak mikroorganisme berbeda-beda karena kandungan nutrisi
dengan menyediakan nutrisi bagi yang berbeda. Medium harus
mikroorganisme tersebut. Pembuatan disterilisasi dahulu sebelum digunakan
media secara umum sama, yang berbeda untuk mencegah kontaminasi.
hanyalah dosis dan perlakuan ketika
homogenasi. Media pertumbuhan DAFTAR PUSTAKA
Debby M. Sumanti, E. S.-I. (2019). Diktat Penuntun Praktikum Mikrobiologi Pangan. Program
Studi Teknologi Pangan, Jurusan Teknologi Industri Pangan, Fakultas Teknologi Industri
Pertanian, Universitas Padjadjaran.

Dwidjoseputro. (1994). Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.

Gardjito, M., Naruki, S., & Murdiat, A. (1992). Ilmu Pangan Pengantar Ilmu Pangan, Nutrisi dan
Mikroorganisme. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.

Hadietomo. (1993). MIkrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama.
LAMPIRAN
No Nama Media Fungsi Gambar
1 NA (Nutrient Agar) Untuk menumbuhkan segala
jenis bakteri

2 PCA (Plate Count Untuk menghitung jumlah

Agar) bakteri total (semua jenis
bakteri) yang terdapat pada
makanan, produk susu, atau
air limbah.
3 Larutan Pengencer Sebagai pengencer untuk
NaCl Fis 0,85% mempermudah dalam
perhitungan koloni mikroba.