Flavonoid adalah kelompok besar metabolit tumbuhan sekunder.

Mereka adalah
kelompok polifenol yang paling tersebar luas dan beragam dan terjadi sebagai aglikon atau
konjugat dengan gugus glikosida dan asil, di mana sejauh ini sekitar 8000 jenis yang berbeda
telah diidentifikasi (Gonzales et al., 2014a). Mereka menggunakan berbagai aktivitas biologis,
termasuk antioksidan (Fiol et al., 2012; Pietta, 2000), anti-hipertensi (Al Shukor et al., 2013;
Balasuriya & Rupasinghe, 2012), anti-obesitas (Hsu & Yen, 2008), aktivitas anti-virus,
hepatoprotektif dan pengaturan kekebalan (Middleton et al., 2000).

Secara umum, faktor-faktor seperti interaksi matriks makanan, pemrosesan makanan,

faktor-faktor yang terkait dengan inang (manusia) (misalnya usia, terjadinya penyakit dan gaya
hidup tertentu) dan struktur kimia flavonoid menyebabkan ketersediaan hayati oral yang buruk
(D'Archivio et al., 2010)

Struktur flavonoid

Flavonoid terdiri dari kerangka 15 karbon yang terdiri dari dua cincin benzen yang
dipasang melalui cincin piran heterosiklik, diberi label sebagai cincin A, B, dan C, dalam
susunan C6-C3-C6, seperti yang digambarkan pada Gambar 1. Mereka dibagi menjadi beberapa
kelompok tergantung pada derajat hidroksilasi, metoksilasi, prenilasi, glikosilasi atau bahkan
pelekatan cincin B (dalam kasus isoflavon). Flavonoid terjadi baik sebagai glikosida, turunan
termetilasi atau aglikon (struktur dasar). Posisi cincin B mungkin berada pada posisi C2 pada
kebanyakan flavonoid atau pada posisi C3 pada kasus isoflavon. Titik hidroksilasi umum berada
pada posisi 5, 7 (cincin A), 30, 40, 50 (cincin B), 3 dan 2 (cincin C). Perbedaan juga bergantung
pada keberadaan ikatan rangkap C2¼C3 dan bagian C4-keton.

Gambar

Analisis SAR

Analisis SAR adalah teknik untuk membedakan fitur struktural atau kimia yang
mengarah pada aktivitas atau properti yang diinginkan (Gandhi & Morris, 2009). Premis dasar
SAR adalah bahwa sifat kimia dan fisik molekul, ketika bersentuhan dengan sistem biologis,
menentukan perilaku biologis / toksikologis / fisiknya (McKinney et al., 2000).

Tujuan dari pemodelan QSAR adalah untuk membangun hubungan matematis antara
deskriptor struktural molekuler dan aktivitas atau properti (Gandhi & Morris, 2009). ). Ini
biasanya melibatkan empat langkah: mengekstraksi deskriptor dari struktur molekul, memilih
deskriptor yang sesuai yang relevan dengan properti yang dimaksud, menggunakan nilai
deskriptor sebagai variabel independen untuk menjelaskan properti yang diamati melalui
penggunaan teknik komputasi dan validasi model (Dudek et al., 2006).

QSAR adalah regresi linier berganda (MLR) dan regresi kuadrat terkecil parsial (PLSR).
MLR dan PLSR keduanya merupakan metode pemodelan yang memprediksi aktivitas atau
properti sebagai fungsi linier deskriptor molekuler (Dudek et al., 2006). MLR memodelkan
aktivitas yang akan diprediksi sebagai fungsi linier dari semua deskriptor Masalah dengan teknik
ini muncul dalam kasus rasio deskriptor-senyawa yang besar, di mana terjadi multikolinieritas.
Ini membuat model agak tidak stabil, terutama ketika memprediksi dataset eksternal atau ketika
senyawa yang tidak termasuk dalam dataset digunakan untuk mengembangkan model sebagai set
pelatihan (Dudek et al., 2006).

PLSR digunakan untuk menghasilkan model yang mengaitkan interaksi ini dengan aktivitas / properti
yang diamati, untuk memverifikasi kemampuan prediksi dari model yang dihasilkan dan menggunakan
model untuk memprediksi aktivitas senyawa baru yang tidak ada dalam model. Keindahan dari teknik ini
terletak pada kemampuannya untuk memplot interaksi ke wilayah yang sesuai dalam struktur molekul,
yang juga sesuai dengan bagian molekul tertentu (McKinney et al., 2000). Entah bagaimana dianggap
sebagai pengembangan COMFA, Comparative Molecular Similarity Index Analysis (COMSIA) meluas ke
lebih banyak deskriptor spasial, seperti hidrofobisitas, akseptor ikatan hidrogen, dan donor. Ini juga
tidak melibatkan nilai cut-off, yang memungkinkan kalkulasi di luar permukaan molekul, sehingga
membuat COMSIA menjadi teknik yang lebih andal (Nilewar & Kathiravan, 2014). Ulasan ini tidak
bertujuan untuk memberikan penjelasan yang lengkap tentang teknik dan prosedur pemodelan yang
dilakukan dalam berbagai eksperimen. Sebaliknya, kami fokus pada hasil model QSAR ini dan
implikasinya terhadap ketersediaan hayati flavonoid dan sampai batas tertentu, bioaktivitas. Ini adalah
pertama kalinya interaksi flavonoid ke berbagai faktor di berbagai tingkat pencernaan,

Saluran cerna bagian atas

Sesuai dengan model SAR (Q), studi in vivo mengkonfirmasi bahwa interaksi flavonoid-karbohidrat
mempengaruhi bioavailabilitas flavonoid. Studi pemberian makan pada manusia telah menunjukkan
bahwa pemberian bersama flavonoid dengan makanan kaya karbohidrat meningkatkan penyerapan
flavonoid, yang dijelaskan oleh efek perlindungannya terhadap kerusakan mikroba di usus, pelepasan
flavonoid yang terikat melalui fermentasi dan aktivitas karbohidrat-flavonol transporter (GLUT) (Neilson
et al., 2009; Schramm et al., 2003; Zhang et al., 2014). Yang terakhir, bagaimanapun, tetap
dipertanyakan karena sebelumnya telah diperdebatkan bahwa flavonoid tidak diangkut oleh transporter
glukosa (Kottra & Daniel, 2007). Oleh karena itu, masalah ini membutuhkan penyelidikan lebih lanjut.

Interaksi flavonoid terhadap lipase dan pengaruh konsumsi lemak terhadap ketersediaan hayati
Beberapa makalah melaporkan potensi anti-obesitas polifenol melalui beberapa mekanisme, termasuk
penghambatan lipase pankreas. Faktanya, beberapa ekstrak tumbuhan kaya polifenol telah terbukti
menghambat aktivitas lipase pankreas (Birari & Bhutani, 2007; Yun, 2010). Namun, penghambatan
lipase dari berbagai flavonoid terisolasi atau standar flavonoid belum ditemukan dalam literatur (kecuali
untuk turunan katekin). Oleh karena itu, sulit untuk menghasilkan SAR yang kualitatif, bahkan lebih
kuantitatif.

flavan-3-ol tampaknya memiliki aktivitas penghambatan lipase yang lebih kuat dibandingkan dengan
flavonol, isoflavon, flavon dan flavanon. Ini mungkin menyiratkan bahwa planaritas, yang meningkatkan
hidrofobisitas senyawa, mengurangi aktivitas penghambatan lipase. Namun, katekin asli dan epikatekin
kurang aktif dibandingkan dengan bentuk galloylated mereka, dan aktivitas penghambatan lipase yang
lebih tinggi diamati dengan peningkatan jumlah hubungan ester. Menurut studi tentang penghambatan
lipase senyawa fenolik dari teh oolong, telah diamati bahwa memang gugus galloyl dalam struktur
diperlukan untuk meningkatkan penghambatan lipase (Nakai et al., 2005).

tampak bahwa peningkatan gugus hidroksil dalam posisi C3 flavonoid berkontribusi pada potensi
penghambatan lipase mereka. Selain efek galloylation dalam flavan-3-ols pada posisi C3, ada juga
peningkatan dramatis dalam aktivitas penghambatan lipase ketika ada bagian hidroksil dalam posisi C3
seperti dalam kasus quercetin dan luteolin, dimana quercetin mengandung bagian hidroksil pada posisi
C3, sedangkan luteolin tidak. Selanjutnya, mengganti bagian hidroksil C3 dengan cincin benzen dalam
kasus genistein, sebuah isoflavon, juga secara dramatis menurunkan potensi penghambatannya. Dalam
studi quercetin yang diesterifikasi dengan berbagai rantai asil dengan panjang berbeda pada posisi C3,

Daftar koefisien partisi oktanol-air yang dihitung untuk flavonoid yang berbeda telah dilaporkan, yang
dapat digunakan untuk menjelaskan kemampuan flavonoid untuk menstabilkan emulsi dan partisi ke
wilayah lemak. Oleh karena itu, dapat dikatakan bahwa flavonoid berinteraksi dengan lemak melalui
interaksi hidrofobik yang agak lemah. Menggunakan model kultur.

Menemukan bahwa pemberian bersama flavonoid dengan minyak makanan yang biasa digunakan
mengubah perilaku penyerapan flavonoid tergantung pada hidrofobisitasnya. Misalnya, Penambahan
minyak secara signifikan meningkatkan produksi konjugat kuersetin dan kaempferol (terutama sulfat) di
kompartemen basolateral masing-masing hingga tiga dan empat kali lipat.

Secara paralel, uji in vivo menggunakan model babi mengungkapkan bahwa kadar yang lebih tinggi dari
kandungan lemak makanan meningkatkan penyerapan flavonoid, yang dikaitkan dengan peningkatan
sekresi garam empedu yang membentuk struktur misel selama pemberian diet tinggi lemak (Lesser et
al., 2004) . Studi in vivo ini menegaskan pentingnya penggabungan misel dari flavonoid untuk absorpsi
usus. Peningkatan penyerapan flavonoid setelah konsumsi lemak juga menunjukkan bahwa interaksi
flavonoid dengan lipase pankreas memang minimal.
Interaksi flavonoid dengan protein makanan dan enzim proteolitik
Mungkin interaksi yang paling populer dalam studi bioavailabilitas flavonoid adalah interaksi flavonoid
dengan protein makanan. Efek ini tidak hanya mengurangi ketersediaan hayati dari flavonoid tetapi juga
dari protein makanan itu sendiri

mengungkapkan bahwa kadar yang lebih tinggi dari kandungan lemak makanan meningkatkan
penyerapan flavonoid, yang dikaitkan dengan peningkatan sekresi garam empedu yang membentuk
struktur misel selama pemberian diet tinggi lemak (Lesser et al., 2004) . Studi in vivo ini menegaskan
pentingnya penggabungan misel dari flavonoid untuk absorpsi usus. Peningkatan penyerapan flavonoid
setelah konsumsi lemak juga menunjukkan bahwa interaksi flavonoid dengan lipase pankreas memang
minimal. Interaksi flavonoid dengan protein makanan dan enzim proteolitik Mungkin interaksi yang
paling populer dalam studi bioavailabilitas flavonoid adalah interaksi flavonoid dengan protein
makanan. Efek ini tidak hanya mengurangi ketersediaan hayati dari flavonoid tetapi juga dari protein
makanan itu sendiri. Sayangnya, studi tentang hubungan struktur-afinitas dari flavonoid dengan protein
makanan telah dibatasi terutama pada protein susu. Dalam penelitian tentang protein susu sapi (BMP)
(Xiao et al., 2011; Xu & Chen, 2011), afinitas flavonoid terhadap protein tersebut sangat dipengaruhi
oleh sifat dan struktur molekulnya, yang dapat diringkas sebagai berikut Hidroksilasi cincin A dan B
secara signifikan meningkatkan ikatan pada BMP. Metilasi dan metoksilasi cincin semacam itu karena itu
mengurangi afinitasnya. Glikosilasi flavonoid sangat mengurangi afinitas flavonoid terhadap BMP
sebesar 1-2 kali lipat. Hidrogenasi ikatan rangkap C2¼C3 pada cincin C sangat mengurangi afinitas
pengikatan hingga 75 kali lipat. Oleh karena itu, planaritas merupakan persyaratan struktural utama
untuk afinitas. Galloylation katekin secara signifikan meningkatkan afinitas pengikatan setidaknya 100
kali lipat. Dalam perspektif kuantitatif, Xu & Chen (2011) mengemukakan bahwa afinitas pengikatan
flavonoid terhadap BMP meningkat dengan meningkatnya koefisien partisi (XlogP3) dan memiliki
korelasi negatif dengan jumlah akseptor dan donor ikatan hidrogen. Hal ini menunjukkan bahwa
hidrofobisitas flavonoid memainkan peran penting dalam pengikatan flavonoid dengan protein
makanan. Kesimpulan yang sama dibuat saat menganalisis potensi protein makanan sebagai pembawa
flavonoid (Bohin et al., 2012). Lebih lanjut, disarankan bahwa luas permukaan kutub topologi (TPSA)
flavonoid menurun dengan meningkatnya afinitas pengikatan, yang menjelaskan afinitas rendah
glikosida flavonoid ke BMP dibandingkan dengan rekan aglikonnya (Xu & Chen, 2011). Namun, Data
yang disajikan dalam artikel ini tidak memberikan hubungan kuantitatif yang dapat diandalkan karena
nilai korelasi yang rendah (R2 ¼0.42 untuk XlogP3 versus afinitas pengikatan; R2 ¼0.27 untuk TPSA
versus afinitas pengikatan). Namun, korelasi yang lebih tinggi antara elektronegativitas Mulliken dan
afinitas pengikatan ditemukan (R2 ¼0.65). Meskipun korelasinya lebih tinggi, sifat molekul ini mungkin
tidak memenuhi persyaratan untuk model QSAR prediktif. Meskipun demikian, informasi struktural ini
memberikan pandangan kualitatif tentang fitur molekuler penting yang mempengaruhi pengikatan
flavonoid dengan protein makanan. Meskipun korelasinya lebih tinggi, sifat molekul ini mungkin tidak
memenuhi persyaratan untuk model QSAR prediktif. Meskipun demikian, informasi struktural ini
memberikan pandangan kualitatif tentang fitur molekuler penting yang mempengaruhi pengikatan
flavonoid dengan protein makanan. Meskipun korelasinya lebih tinggi, sifat molekul ini mungkin tidak
memenuhi persyaratan untuk model QSAR prediktif. Meskipun demikian, informasi struktural ini
memberikan pandangan kualitatif tentang fitur molekuler penting yang mempengaruhi pengikatan
flavonoid dengan protein makanan.
Menurut Xiao et al. (2011), flavonoid kehilangan sifat antioksidannya saat terikat pada protein makanan.
Lebih lanjut, jelas bahwa fitur molekuler yang penting untuk pengikatan protein makanan adalah fitur
yang sama yang meningkatkan aktivitas penghambatan a-amilase dan a-glukosidase. Ini tidak
mengherankan karena enzim adalah protein itu sendiri. Namun demikian, seseorang harus berhati-hati
dalam penggunaan flavonoid sebagai agen anti-obesitas dan / atau anti-diabetes karena pemberian
makanan berprotein tinggi secara bersamaan dapat mengurangi fungsinya. Lebih lanjut, jika intervensi
diet ditujukan untuk meningkatkan ketersediaan hayati flavonoid oral, diet protein tinggi mungkin tidak
diberikan bersama karena ini mengurangi ketersediaan hayati flavonoid yang dimaksud. Enzim
proteolitik juga telah diteliti untuk interaksinya dengan flavonoid. Namun, penelitian ini berfokus pada
aktivitas penghambatan flavonoid dengan relevansi dengan protease intraseluler dan bukan pada
lambung dan usus. Penghalang usus Lapisan lendir usus: mata rantai yang hilang dalam studi tentang
ketersediaan hayati flavonoid Sejumlah penelitian telah mencoba untuk memahami mekanisme
absorpsi dan meningkatkan absorpsi flavonoid di usus. Model seluler, seperti sel Caco-2, telah banyak
digunakan untuk mensimulasikan permeabilitas flavonoid usus (Barrington et al., 2009; Tammela et al.,
2004; Tian et al., 2009). Percobaan in vitro ini mengungkapkan bahwa flavonoid hidrofobik lebih baik
diserap (Barrington et al., 2009; Liu & Hu, 2002; Tammela et al., 2004; Tian et al., 2009), yang dapat
dijelaskan dengan peningkatan permeasi melalui lapisan ganda fosfolipid dari membran sel. Secara
paralel, glikosida flavonoid diserap dengan buruk melalui model sel usus karena adanya gugus gula, yang
meningkatkan hidrofilisitas, sehingga mengurangi permeabilitas membran (Dai et al., 2008). Namun,
berbeda dengan temuan in vitro ini, penelitian pada hewan dan manusia menunjukkan bahwa glukosida
flavonoid tertentu diserap lebih efisien daripada bentuk aglikonnya. Misalnya, kuersetin glukosida yang
tertelan diserap dua kali lebih banyak dari aglikon yang sesuai pada manusia (Hollman et al., 1995).
Pengamatan yang sama diperoleh dari studi pemberian makan menggunakan babi (Cermak et al., 2003),
tikus (Morand et al., 2000) dan anjing (Reinboth et al., 2010). Meskipun beberapa hipotesis telah
dirumuskan, seperti deglikosilasi efektif oleh bakteri atau enzim sel epitel (Cermak et al., 2003), literatur
saat ini gagal memberikan penjelasan konkret untuk perilaku ini. Secara umum, strategi yang berhasil
untuk meningkatkan ketersediaan hayati flavonoid bergantung pada peningkatan sifat hidrofiliknya.
Tinjauan tentang teknik ini dapat ditemukan di Thilakarathna & Rupasinghe (2013). Secara singkat,
penggabungan flavonoid ke campuran eutektik borneol / metanol, mikro-emulsi, dispersi
polivinilpirolidon, kompleksasi lesitin dan kompleksasi siklodekstrin telah efektif (Thilakarathna &
Rupasinghe, 2013), serta penggabungan aglikon flavonoid ke dalam nanokristal (Li et al. , 2013). Lebih
lanjut, seperti yang dinyatakan sebelumnya, kandungan lemak dalam makanan babi meningkatkan
ketersediaanhayati oral dari quercetin, mungkin karena pembentukan misel campuran flavonoid (Lesser
et al., 2004). Dari studi ini, kita dapat menyimpulkan bahwa dua kekuatan pendorong yang memicu
absorpsi flavonoid di usus, yaitu di satu sisi, deglikosilasi dari glikosida flavonoid merupakan langkah
penting sebelum absorpsi usus (Day et al., 1998; Ne'meth et al. , 2003), tetapi di sisi lain, bentuk encer
dari flavonoid atau glukosida flavonoid membuat jumlah metabolit flavonoid yang lebih tinggi dalam
darah. Hal ini dapat dijelaskan dengan adanya penghalang berair antara usus dan sel epitel yang hanya
memungkinkan penetrasi flavonoid hidrofilik dan / atau glikosida flavonoid dan bahwa deglikosilasi
hanya terjadi setelah senyawa menembus melalui penghalang tersebut. Cermak dkk. (2003) juga
berhipotesis bahwa hidrofilik quercetin monoglucoside terkonsentrasi di perbatasan sikat di mana
mereka terdeglikosilasi oleh epitel, Saluran pencernaan dilindungi oleh lapisan lendir (kadar air 90–
98%), yang memungkinkan penyerapan nutrisi sementara tidak termasuk bakteri dan senyawa beracun
lainnya. Studi tentang penetrasi bakteri dan model partikel makanan telah dilakukan, tetapi penelitian
ekstensif tentang fungsi penghalang dan kesehatan masih langka (Macierzanka et al., 2011; Mackie et
al., 2012). Agar flavonoid dapat diserap, oleh karena itu flavonoid harus dapat melakukan perjalanan
melalui lapisan lendir usus yang melekat (Georgiades et al., 2014). Sejauh yang kami tahu, efek
penghalang lendir ini pada penyerapan flavonoid usus dan glikosida saat ini tidak diketahui. Kami
berhipotesis bahwa sifat hidrofobik dari aglikon flavonoid membatasi penetrasi, sehingga membuatnya
tidak dapat diakses oleh sel. Glikosida flavonoid, bagaimanapun, mungkin dapat menembus lapisan
lendir. Mereka kemudian terdeglikosilasi di permukaan sel, sehingga mengarah ke penyerapan. Seperti
yang juga disebutkan sebelumnya, aglikon berinteraksi lebih banyak dengan enzim pencernaan dan
komponen matriks makanan daripada rekan aglikonnya. Hal ini mungkin menjelaskan mengapa
tampaknya ada penyerapan glukosida flavonoid in vivo yang lebih tinggi daripada in vitro, mengingat
model berbasis sel saat ini (biasanya sel Caco-2) tidak menghasilkan lapisan lendir. Saat ini, model
seluler yang melibatkan kultur bersama enterosit dengan sel penghasil mukus semakin banyak
digunakan untuk mengatasi keterbatasan ini, meskipun datanya langka (Be'duneau et al., 2014). Hal ini
mungkin menjelaskan mengapa tampaknya ada penyerapan glukosida flavonoid in vivo yang lebih tinggi
daripada in vitro, mengingat model berbasis sel saat ini (biasanya sel Caco-2) tidak menghasilkan lapisan
lendir. Saat ini, model seluler yang melibatkan kultur bersama enterosit dengan sel penghasil mukus
semakin banyak digunakan untuk mengatasi keterbatasan ini, meskipun datanya langka (Be'duneau et
al., 2014). Ini mungkin menjelaskan mengapa tampaknya ada penyerapan glukosida flavonoid in vivo
yang lebih tinggi daripada in vitro, mengingat model berbasis sel saat ini (biasanya sel Caco-2) tidak
menghasilkan lapisan lendir. Saat ini, model seluler yang melibatkan kultur bersama enterosit dengan
sel penghasil mukus semakin banyak digunakan untuk mengatasi keterbatasan ini, meskipun datanya
langka (Be'duneau et al., 2014).

Permeabilitas usus secara keseluruhan

Flavonoid, setelah mencapai usus kecil, mengalami hidrolisis gugus glikosidiknya dan metabolisme fase 1
dan 2 yang parah, yang meliputi glukuronidasi, sulfasi dan metilasi (Crozier et al., 2010; Hollman, 2004;
Manach et al., 2005; Scalbert & Williamson, 2000). Oleh karena itu, ketersediaan hayati dari struktur
flavonoid induk tetap menjadi penentu besar untuk bioaktivitasnya (Thilakarathna & Rupasinghe, 2013).
Struktur flavonoid telah lama dianggap sebagai kriteria penentu penting untuk ketersediaan hayati
(Hollman, 2004; Scalbert & Williamson, 2000).

Gambar 2 memberikan pandangan kualitatif tentang daya serap flavonoid di usus. Namun, karena
keragaman dan keragaman struktur yang sangat luas dalam setiap kelompok, sulit untuk
menggeneralisasi daya serap flavonoid hanya berdasarkan kelompoknya. Misalnya, metilasi gugus
hidroksil dari flavonol telah ditemukan secara signifikan meningkatkan perjalanannya melalui model sel
usus (Walle, 2007; Wen & Walle, 2006). Selanjutnya, tingkat glikosilasi dan jenis gula telah terbukti
mempengaruhi ketersediaan hayati flavonoid dibandingkan dengan rekan aglikonnya (Crozier et al.,
2010; Karakaya, 2004; Morand et al., 2000). Karena studi tentang flavonoid yang lebih luas dalam uji
coba pada manusia menghadirkan kendala finansial, teknis, dan etika, para peneliti telah berfokus pada
penggunaan model sel usus untuk mempelajari lebih lanjut penyerapan flavonoid oleh usus. Puncak
yang tertunda dalam konsentrasi plasma ini dikaitkan dengan deglikosilasi mikroba rutin di duodenum
dan kurangnya rhamnosidase di epitel (Cermak et al., 2003; Morand et al., 2000).

Model prediksi juga menjadi semakin penting dalam desain dan penemuan obat selama dekade terakhir
(van de Waterbeemd & Gifford, 2003; Wessel et al., 1998).Dalam aturan-5 ini, senyawa yang
kemungkinan dapat diserap melalui usus mengandung paling banyak 5 donor ikatan-H, 10 akseptor
ikatan-H, memiliki berat molekul 4500Da dan Log P (indeks lipofilisitas) 45. Dengan menerapkan aturan
ini pada flavonoid, dapat dikatakan bahwa struktur yang mengandung banyak gugus hidroksil, glikosidik
dan galoil cenderung tidak diserap melalui usus. Sebaliknya,Pendekatan lain yang digunakan untuk
prediksi absorpsi obat-obatan potensial di usus diajukan oleh Egan et al. (2000) yang menganalisis
kemiripan obat dari ribuan obat yang diketahui secara oral, yang telah diuji untuk permeabilitas sel
Caco-2. Dengan menggunakan pengenalan pola, ditemukan bahwa dua deskripsi molekuler, luas
permukaan kutub (PSA) dan AlogP98 (indeks lipofilisitas), memainkan peran penting dalam menentukan
absorpsi usus. Menggunakan prinsip ini, Gonzales et al. (2014b) menunjukkan potensi 36 flavonoid dari
kelas yang berbeda (Tian et al., 2009; Wang et al., 2011) untuk diserap melalui usus, menggunakan
software prediksi ADMET yang tersedia secara komersial (Accelrys, San Diego, CA).

Semua senyawa lain, seperti yang memiliki 56 gugus hidroksil, isoflavon dan flavonoid termetilasi,
diproyeksikan memiliki daya serap lebih dari 90%. Peningkatan PSA tampaknya memiliki efek negatif
pada daya serap, sedangkan hidrofobisitas flavonoid mendukung absorpsi usus. Prinsip ini, pada
kenyataannya, telah menjadi dasar dari banyak model permeabilitas usus lainnya (Egan et al., 2000).

QSAR yang dikhususkan untuk flavonoid tetap langka dalam literatur. Hal ini disebabkan oleh
terbatasnya jumlah penelitian in vitro yang terdiri dari berbagai macam flavonoid, dan jumlah
maksimum flavonoid yang dianalisis dalam satu penelitian sejauh ini adalah 36, walaupun dari kelas
kimia yang berbeda (Tian et al., 2009).bahwa koefisien partisi oktanol / air berkorelasi baik dengan
permeabilitas nyata dari isoflavon, flavon dan dehidroflavon. Namun, ada korelasi yang buruk dengan
flavonol, yang mereka anggap sebagai akibat dari akumulasi sel yang tinggi, dengan beberapa
pengecualian karena mekanisme pembuangan dan ketidakstabilan senyawa.

Dalam penelitian kami sebelumnya (Gonzales et al., 2014b), kami telah mengembangkan model 2D dan
3D QSAR untuk menjelaskan dan memprediksi penyerapan flavonoid di usus menggunakan
permeabilitasnya yang terlihat dalam sel Caco-2. Untuk model 2D, model SMLR dan PLSR dihasilkan.
Model 2D menghasilkan prediktabilitas internal dan eksternal yang tinggi (SMLR: Latihan R2 ¼0.93,
R2test ¼0.82, Q2 ¼0.77; PLSR: Latihan R2 ¼0.93, R2test ¼0.90, Q2 ¼0.67).
Untuk meningkatkan interpretabilitas model permeasi, kami menggunakan COMSIA berbasis
farmakofor, yang menghasilkan model yang sangat prediktif (R2training ¼0.96, R2test ¼0.95) dan robust
(Q2 ¼0.63). Model ini hanya memasukkan akseptor ikatan hidrogen dan donor sebagai deskriptor
molekuler karena penambahan hidrofobisitas ke model tidak meningkatkan kinerja prediktifnya,
sedangkan parameter sterik dan elektrostatis tidak berkontribusi pada permeabilitas

sedangkan parameter sterik dan elektrostatis tidak berkontribusi pada permeabilitas flavonoid usus.
Menurut model, jumlah dan lokasi donor dan akseptor ikatan hidrogen berkontribusi pada serapan
flavonoid usus. Mengingat bahwa akseptor ikatan hidrogen dan kelompok donor mempengaruhi
permeabilitas flavonoid, oleh karena itu terbukti bahwa glikosida flavonoid diangkut dengan buruk
melalui sel Caco-2, terutama ketika gugus glukosa melekat pada posisi C3. Model ini juga setuju dengan
'' rule-of-5 '' yang telah dibahas sebelumnya, namun lebih kuantitatif dan prediktif. Karena
prediktabilitasnya yang tinggi, model ini karenanya dapat digunakan sebagai metode untuk menyaring
database flavonoid dan senyawa mirip flavonoid dalam pencarian senyawa yang sangat tersedia secara
hayati.
Karena prediktabilitasnya yang tinggi, model ini karenanya dapat digunakan sebagai metode untuk
menyaring database flavonoid dan senyawa mirip flavonoid dalam pencarian senyawa yang sangat
tersedia secara hayati. Model ini juga setuju dengan '' rule-of-5 '' yang telah dibahas sebelumnya, namun
lebih kuantitatif dan prediktif. Karena prediktabilitasnya yang tinggi, model ini karenanya dapat
digunakan sebagai metode untuk menyaring database flavonoid dan senyawa mirip flavonoid dalam
pencarian senyawa yang sangat tersedia secara hayati.

Ketersediaan hayati flavonoid yang buruk telah dikaitkan dengan metabolisme fase 2 yang ekstensif,
yang terutama disebabkan oleh enzim konjugasi di usus. Glucuronidation senyawa endogen dan
eksogen dimediasi oleh beberapa isoform UDP-glukuronosiltransferase (UGT) yang ditemukan baik di
usus maupun hati. Dilaporkan bahwa 80% jalur metabolisme flavonoid disebabkan oleh enzim ini (Wu et
al., 2011b, c).

Secara umum SAR flavonoid terhadap aktivitas glukuronidasi in vitro dari isoform UGT dapat diringkas
sebagai berikut:

1.Flavonol adalah flavonoid glukuronidasi yang paling sedikit.

2.Ketika gugus C3-OH dihilangkan (dalam kasus flavon), aktivitas glukuronidasi meningkat.

3.Glucuronidation bahkan lebih diintensifkan ketika ikatan C2¼C3 dilepaskan (dalam kasus flavanon),
yang berkaitan dengan pentingnya planaritas struktural (Lewinsky et al., 2005).

4.Peningkatan jumlah gugus hidroksil pada cincin A dan B (kecuali untuk gugus 40-OH) meningkatkan
aktivitas glukuronidasi flavon, sementara penambahan gugus hidroksil 3-OH tampaknya tidak
berpengaruh (Lewinsky et al., 2005; Wong et al., 2009).

Wu et al. (2011c) juga berpendapat bahwa perlu untuk memodelkan glukuronidasi regiospesifik secara
individual untuk mendapatkan laju glukuronidasi global, mengingat banyaknya situs glukuronidasi
potensial dalam struktur flavonoid. Namun, keberadaan model '' prediksi akurat '' untuk glukuronidasi,
yang tidak memodelkan glukuronidasi regiospesifik (Wu et al., 2012),

Jalur metabolisme fase 2 lainnya dimediasi oleh sulfotransferase (SULTs), yang terutama bertanggung
jawab untuk mengkatalisasi sulfasi flavonoid dan senyawa sejenis obat lainnya. Jalur ini penting untuk
memahami ketersediaan hayati flavonoid karena flavonoid tersulfat telah dilaporkan dikeluarkan
kembali ke dalam lumen usus dan karenanya tidak diserap dengan baik (Barrington et al., 2009).

Dalam studi 16 flavonoid berbeda dari kelas flavonoid berbeda, jelas ditunjukkan bahwa sulfasi terjadi
sebagian besar pada posisi C7-OH, dan menghilangkan gugus hidroksil ini mengurangi atau menghambat
sulfasi. Selanjutnya, setiap keterikatan pada posisi C3 (apakah gugus hidroksil atau cincin B) mengurangi
aktivitas sulfasi (Meng et al., 2012).

Interaksi flavonoid dengan kaset pengikat ATP

Menambah daftar panjang penjaga gerbang yang menjaga tubuh kita dari bahan kimia yang tidak
diinginkan memasuki sirkulasi sistemik adalah pompa membran tertentu atau pengangkut limbah yang
disebut pengangkut kaset pengikat ATP (ABC). Transporter yang terikat membran ini akhir-akhir ini
mendapat banyak perhatian tidak hanya karena efeknya terhadap ketersediaan hayati flavonoid tetapi
juga pada ketersediaan hayati senyawa aktif farmakologis lainnya, yaitu obat anti kanker (Morris &
Zhang, 2006).

13 & 14

13. P-glikoprotein

P-glikoprotein adalah protein transmembran 170-kDa, yang dikenal untuk secara aktif mengangkut obat
keluar dari sel dengan cara yang bergantung pada ATP (Boumendjel et al., 2002; Kothandan et al., 2011).
Analisis struktural urutan protein menunjukkan 1276 asam amino pada tikus, terdiri dari dua bagian
homolog yang mengandung domain transmembran (TMD) yang terdiri dari enam heliks yang mencakup
membran yang terlibat dalam pengikatan obat dan pembuangan, dan domain pengikatan nukleotida
sitosol dengan karakteristik Motif pejalan A dan B

Diketahui bahwa flavonoid menggunakan penghambatan P-glikoprotein, berdasarkan sifat fisik yang
dijelaskan sebelumnya. Secara umum, pengamatan berikut mengenai interaksi flavonoid-P-glikoprotein
telah dilaporkan dalam literatur (Boumendjel et al., 2002; Conseil et al., 1998, 2000; Morris & Zhang,
2006):

1. Flavonol, kalkon, dan flavon umumnya aktif, sedangkan flavanon dan isoflavon memiliki aktivitas
penghambatan P-glikoprotein yang lebih rendah.

2. Gugus hidroksil pada posisi 5 dan 3 diperlukan untuk aktivitas penghambatan terhadap P-glikoprotein.

3. Senyawa yang sangat hidrofilik, seperti rutin dan glikosida flavonoid lainnya, tidak berinteraksi
dengannya

P-glikoprotein.

4. Peningkatan jumlah gugus hidroksil pada cincin A dan C meningkatkan afinitas flavonoid menjadi

P-glikoprotein.

5. Cincin B yang dipasang pada posisi C2 memerlukan afinitas yang lebih tinggi daripada saat dipasang
pada posisi C3, dalam kasus isoflavon.

6. Adanya ikatan rangkap C2¼C3 meningkatkan afinitas flavonoid terhadap P-glikoprotein.

7. Hidroksilasi pada posisi C40 dan C30 mengurangi afinitas flavonoid-P-glikoprotein, sedangkan
metoksilasi pada posisi C40 meningkatkannya.

Wang et al. (2005) membangun model QSAR dari 57 flavonoid yang beragam secara struktural
menggunakan 248 deskriptor molekuler yang terdiri dari ClogP, deskriptor keadaan elektrotopologi,
indeks konektivitas molekuler yang dihitung dengan Molconn-Z (paket perangkat lunak SYBYL, St Louis,
MO). Awalnya, deskriptor molekuler menjadi sasaran analisis komponen utama (PCA) untuk mengurangi
jumlah deskriptor molekuler menjadi empat komponen utama, yang mewakili 85% varian total. Tiga
teknik penambangan data kemudian digunakan, jaringan saraf tiruan balik, PLSR dan jaringan saraf yang
diatur Bayesian, di mana yang terakhir menghasilkan model yang paling prediktif dan kuat. Meskipun
prediktif, interpretasi langsung yang mana deskriptor molekuler bertanggung jawab atas penghambatan
P-glikoprotein agak tidak jelas karena PCA menjadi teknik pengurangan. Pendekatan lain dilakukan oleh
Sheu et al. (2010), dimana SMLR digunakan untuk membuat model QSAR dari analisis in vitro 22
flavonoid menggunakan sel karsinoma kolorektal manusia (HCT15). Model dengan R2 yang disesuaikan
tertinggi dilaporkan sebagai (Sheu et al., 2010):

mencatat aktivitas di 50ð mM flavonoidÞ

¼ 81:34 7ð OHÞ50: 37 ð30OHÞ65: 93 4ð 0OHÞ þ58: 81 5ð 0OHÞþ40: 83 ðflavanolÞ101: 9 ðisoflavonesÞ

þ12: 13 ðClogPÞþ115: 81

R2 disesuaikan ¼ 0: 7126, F ¼ 4:53, hal50: 02

Sebaliknya, hidroksilasi pada C7, C50 dan ClogP secara positif mempengaruhi aktivitas flavonoid
terhadap P-glikoprotein. Meskipun nilai Adjusted R2 relatif tinggi, namun langkah validasi tidak
dilakukan dalam penelitian ini, yang sangat penting dalam pembuatan model QSAR.

Oleh karena itu, ketahanan dan prediktabilitas aktual dari model ini tidak dapat dijamin. Meskipun
demikian, hasil model tersebut dilengkapi dengan baik dengan tren struktural yang diamati secara
umum, seperti disebutkan di atas.Untuk kedua analisis COMFA dan COMSIA, baik penyelarasan berbasis
ligan (penyelarasan atomatom) dan penyelarasan yang dipandu reseptor (berdasarkan pose docking)
digunakan. Teknik tersebut menghasilkan model prediktif dan model robust, seperti yang ditunjukkan
oleh prediktabilitas internal dan eksternalnya (nilai R2internal dan R2external), nilai R2 yang divalidasi
silang (Q2) dan parameter prediksi internal dengan pengacakan progresif (Q * 2). Seperti yang
tercantum dalam Tabel 2, penyelarasan flavonoid yang dipandu reseptor sebelum COMFA dan COMSIA
menghasilkan kinerja prediksi yang lebih baik. Ini menyiratkan bahwa interaksi flavonoid dengan residu
asam amino di tempat pengikatan protein sangat penting untuk menentukan kemanjuran. Berdasarkan
hasil docking mereka, tampaknya situs potensial untuk konjugasi antara lain Asn1043, Asp1049, Pro1051
dan Asn1248.

Tabel 2. COMFA dan COMSIA flavonoid terhadap aktivitas P-glikoprotein (Kothandan et al., 2011).

Model

Parameter / dtk

Q2

R2int

R2 teks

T*2

COMFA berbasis ligand

Sterik

0.75

0.95

0.80
0.64

COMFAdipandu reseptor

Sterik

0.71

0.98

0.84

0,50

BERBASIS LIGA

Sterik

0.81

0.94

0.79

0.68

Dipandu reseptor COMSIA

Hidrofobik

0.81

0,99

0.94

0,59

di sekitar cincin A meningkatkan afinitas flavonoid terhadap tempat pengikatan P-glikoprotein.

Protein resistensi multidrug

MRP adalah jenis transporter ABC lain yang terdiri dari sembilan anggota, yang bervariasi dalam hal
spesifisitas substrat, distribusi jaringan, dan lokasi intraseluler. Yang paling sering dipelajari adalah MRP1
dan MRP2. Meskipun kedua transporter memiliki banyak substrat dan kemiripan urutan sekitar 49%
(van Zanden et al., 2005), MRP1 biasanya ditemukan pada membran basal, sedangkan MRP2 ditemukan
pada membran apikal sel usus (ditunjukkan pada Gambar 3) (Alvarez et al., 2010). MRP1 juga kurang
spesifik untuk substrat dibandingkan MRP2. Ekspresi berlebih dari MRP1 dan MRP2 telah ditemukan
untuk memberikan resistensi multidrug terhadap berbagai obat anti kanker (van Zanden et al.,
2005).Menggunakan regresi linier bertahap, dengan penghambatan MRP1 sebagai variabel dependen
dan lima deskriptor struktural (jumlah gugus OCH3, jumlah gugus OH, log sudut dihedral ikatan C3 – C2 –
C10 – C20, lipofilisitas dan jumlah gugus pirogallol dan katekol) , van Zanden dkk. (2005) melaporkan
bahwa penghambatan MRP1 oleh flavonoid dapat dijelaskan dengan persamaan berikut:

% penghambatan¼45: 46þ18: 94ð # OCH3Þþ12: 47ð # OHÞ

48: 25ðlog sudut dihedralÞR2 ¼0: 77, hal50: 001

Selanjutnya, peningkatan jumlah gugus metoksil dan peningkatan jumlah gugus hidroksil keduanya
meningkatkan penghambatan MRP1 yang diinduksi flavonoid ke tingkat yang relatif sama. Hasil ini,
bagaimanapun, agak aneh karena peningkatan jumlah gugus OCH3 dalam struktur flavonoid akan
menyebabkan penurunan jumlah gugus hidroksil dalam struktur. S Dalam kasus MRP2, jumlah flavonoid
yang diuji agak terbatas. Namun demikian, berdasarkan laporan Pedersen et al. (2008) tentang
penghambatan MRP dari 191 senyawa yang berbeda, beberapa di antaranya adalah flavonoid, fitur
molekuler yang diperlukan untuk penghambatan MRP2 meliputi bobot molekul yang lebih tinggi,
peningkatan lipofilisitas, dan aromatik.

Penambahan baru-baru ini ke keluarga transporter ABC adalah BCRP, yang merupakan protein asam
amino 655 dengan berat molekul 72.1kDa. Tidak seperti transporter ABC lainnya yang berisi 12 TMD dan
dua situs pengikatan ATP, BCRP hanya terdiri dari enam TMD dan satu domain pengikat ATP; oleh
karena itu, ini disebut transporter setengah ABC dan mungkin memerlukan pembentukan homodimer
agar berfungsi (Morris & Zhang, 2006; Zhang et al., 2005).

Pendekatan dengan menggunakan deskriptor energi solvasi linier 3D yang diperoleh dari
VolSurf dan bidang interaksi molekuler. Menggunakan regresi PLS, model (R2training ¼0.77,
R2test ¼0.67, Q2 ¼0.70) dikembangkan untuk memprediksi aktivitas penghambatan BCRP
senyawa flavonoid dan flavonoid-like (n¼34) (Nicolle et al., 2009). Dalam model oleh Nicolle et
al. (2009), ditemukan bahwa penghambatan BCRP terutama didorong oleh volume hidrofobik
yang besar dan dapat terpolarisasi dengan kapasitas donor Hbond minimal. Berbeda dengan
model yang disajikan oleh Zhang et al. (2005), seperti dibahas di atas, Nicolle et al. (2009)
berpendapat bahwa pendekatan mereka mempertimbangkan lebih banyak sifat molekuler 3D,
yang menyiratkan bahwa model tersebut menggambarkan keseluruhan interaksi antarmolekul
flavonoid. Dalam kasus Zhang et al. (2005), di mana algoritma genetika digunakan untuk
memilih variabel independen, banyak informasi molekuler tidak dijelaskan dalam model.
Namun, harus dipertimbangkan bahwa meskipun Nicolle et al. (2009) berpendapat bahwa model
mereka mewakili lebih banyak interaksi molekuler, model yang diusulkan oleh Zhang et al.
(2005) tampaknya berkinerja lebih baik dalam hal prediktabilitas. Selain itu, karena MLR
digunakan, interpretasi model menjadi lebih sederhana.
Flavonoid dalam sirkulasi sistemik dan distribusinya ke jaringan target. Setelah senyawa atau
metabolit terkonjugasi berhasil melewati penghalang usus, mereka kemudian harus diangkut
melalui sistem peredaran darah ke jaringan target mereka. Namun, bioaktivitas senyawa ini dapat
dipengaruhi oleh afinitasnya terhadap protein yang terdapat dalam darah. Seperti protein
makanan yang dibahas sebelumnya, flavonoid juga telah terbukti berinteraksi dengan beberapa
protein darah (Bolli et al., 2010; Boulton et al., 1998; Xiao & Kai, 2011; Zsila et al., 2003).
Albumin serum manusia (HSA) adalah protein yang paling melimpah dalam plasma dan
berfungsi sebagai depot dan pembawa berbagai jenis senyawa dalam darah, yang kemudian
mempengaruhi farmakokinetik dan nasib metaboliknya (Bolli et al., 2010). Faktanya, ditemukan
bahwa distribusi dan metabolisme banyak senyawa bioaktif berkorelasi dengan afinitasnya
terhadap HSA (Zsila et al., 2003). Seperti yang ditunjukkan oleh hipotesis `` obat bebas '', hanya
senyawa yang tidak terikat pada protein plasma yang melakukan aktivitas biologis, yang oleh
karena itu menunjukkan bahwa flavonoid dengan afinitas pengikatan tinggi terhadap HSA dapat
kehilangan aktivitas biologisnya setelah mencapai darah (Xiao & Kai, 2011) . Seperti dirangkum
oleh Xiao & Kai (2011) dalam ulasannya, hubungan struktur-afinitas flavonoid dengan protein
plasma adalah sebagai berikut:

1. Peningkatan gugus hidroksil pada cincin A dan B meningkatkan afinitas flavonoid

terhadap protein plasma, sedangkan penambahan gugus hidroksil pada cincin C akan
melemahkannya.
2. Metilasi gugus hidroksil ini lebih jauh meningkatkan ikatannya dengan protein plasma.
3. Adanya ikatan tak jenuh pada C2¼C3, khas flavonol, memperkuat ikatan protein.
4. Glikosilasi sangat mengurangi afinitas pengikatan protein plasma.
5. Galloylation meningkatkan pengikatan katekin ke protein plasma.

Dengan karakteristik ini, dapat disiratkan bahwa hidrofobisitas memainkan peran penting
dalam pengikatan protein; metilasi, ikatan C2¼C3 membuat flavonoid lebih lipofilik, sedangkan
glikosilasi membuatnya menjadi hidrofilik. Memang, sebelumnya telah dilaporkan bahwa
senyawa dengan lipofilisitas yang berkurang juga menunjukkan pengikatan protein yang
berkurang (Smith et al., 2010). Menarik untuk dicatat bahwa karakteristik flavonoid dengan
permeabilitas usus keseluruhan yang lebih tinggi mirip dengan persyaratan struktural untuk
pengikatan protein.