Anda di halaman 1dari 5

BAB III

METODE PRAKTIKUM

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum Bakteriologi yang berjudul “Uji Kontaminasi Mikroba” telah

dilaksanakan pada hari Senin, tanggal 22 Maret pukul 14.40-17.50 WITA

yang bertempat di laboratorium mikrobiologi Universitas Bina Mandiri

Gorontalo

3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat

a. Cawan petri

b. Erlenmeyer

c. Gelas ukur

d. Spatula

e. Batang pengaduk

f. Pipet tetes

g. Colony counter

h. Autoklaf

i. Neraca analitik

j. Inkubator

k. Hotplate

l. Magnetik stirrer
m. Kaca arloji

n. Aluminium foil

3.2.2 Bahan

a. Natrium agar

b. Potato dextrose agar

c. Eosin methyle blue agar

d. Larutan NaCl

e. Aquadest

3.3 Prosedur Kerja

3.3.1 Pembuatan Media

a. Pembuatan Na (Natrium Agar)

- Ambil sampel, letakkan di kaca arloji

- Timbang sebanyak 1,2 gram Na di neraca analitik

- Larutkan dengan 60ml aquadest pada gelas Erlenmeyer

- Kemudian masukkan magnetik stirrer, tutup gelas Erlenmeyer

dengan menggunakan aluminium foil lalu panaskan diatas hotplate.

- Sterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121oc selama 15

menit

- Tuangkan media kedalam cawan petri

- Padatkan media tersebut di Bio Safety cabinet.

b. Pembuatan PDA (Potato Dextrose Agar)

- Ambil sampel, letakkan di kaca arloji


- Timbang sebanyak 1,75 gram PDA di neraca analitik

- Larutkan dengan 45ml aquadest pada gelas Erlenmeyer

- Kemudian masukkan magnetik stirrer, tutup gelas Erlenmeyer

dengan menggunakan aluminium foil lalu panaskan diatas hotplate.

- Sterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121oc selama 15

menit

- Tuangkan media kedalam cawan petri

- Padatkan media tersebut di Bio Safety cabinet.

c. Pembuatan EMBA (Eosin Methyle Blue Agar)

- Ambil sampel, letakkan di kaca arloji

- Timbang sebanyak 1,125 gram Emba di neraca analitik

- Larutkan dengan 30ml aquadest pada gelas Erlenmeyer

- Kemudian masukkan magnetik stirrer, tutup gelas Erlenmeyer

dengan menggunakan aluminium foil lalu panaskan diatas hotplate.

- Sterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121oc selama 15

menit

- Tuangkan media kedalam cawan petri

- Padatkan media tersebut di Bio Safety cabinet.

3.3.2 Uji kontaminasi udara

a. Letakkan cawan petri yang berisi media nutrien agar dalam satu

ruangan dalam kondisi cawan petri terbuka

b. Biarkan dalan keadaan terbuka selama 30 menit


c. Cawan ditutup dan inkubasi pada suhu ruang (37oc) dengan posisi

cawan terbalik selama 1-2 x 24 jam

d. Amati pertumbuhan mikroba pada media dan hitung jumlah koloni

yg tumbuh pada cawan petri tersebut.

3.3.3 Uji kebersihan tangan

a. Siapkan metode emba 2 cawan

b. Sentuhkanlah tangan pada media Emba. Cawan 1 tangan yang belum

dicuci, cawan 2 tangan yang sudah dicuci dengan sabun.

c. Semua cawan di inkubasi secara terbalik pada suhu ruang (37 oc)

selama 1-2 x 24 jam

d. Amati pertumbuhan mikroba pada media setelah di inkubasi.

3.3.4 Uji mikroba dalam mulut

a. Letakkan cawan petri yang berisi media Na tepat berhadapan dengan

mulu dalam kondisi cawan petri terbuka

b. Hembusan nafas serta berbicara dihadapan media tersebut.

c. Cawan ditutup dan di inkubasi pada suhu ruang (37 oc) selama 1-2 x

24 jam. Inkubasi dilakukan dengan posisi cawan terbalik

d. hitung jumlah koloni yg tumbuh pada cawan petri tersebut.

3.3.5 Uji kebersihan alat

a. Siapkan swab yang telah direndam dalam larutan buffer fosfat/NaCl

0,85 %
b. Swab diperas dengan cara menekankan pada dinding tabung

kemudian dipakai untuk menyeka permukaan alt-alat gelas seluas 10

cm

c. Selanjutnya diusapkan secara merata pada seluruh permukaan media

cawan petri berisi media Na dan di inkubasi pada suhu ruang 37 oc

selama 24 jam

d. Dihitung jumlah koloni yang tumbuh pada permukaan cawan.