Metode Resmi AOAC 2012.
24 Buang metanol menurut peraturan federal, negara
Flavanol dan Procyanidin
(Menurut Tingkat Polimerisasi 1–10)
Isi Cokelat, Minuman Keras Kakao, Bubuk,
dan Ekstrak Kakao Flavanol
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Normal–
Deteksi Fluoresensi
Aksi Pertama 2012
[Berlaku untuk penentuan flavanol dan
procyanidin (DP1-10) konten cokelat, minuman
keras kakao, bubuk kakao, dan
ekstrak kakao. Jumlah monomer (DP = 1) dan
oligomer fraksi (DP2-10) dilaporkan sebagai
flavanol total dan prosianidin kandungan.]
Perhatian: Pelarut adalah pelarut dan reagen yang
umum digunakan.
Asetonitril. - Iritan sangat mudah,terbakar,beracun.
Simpan di lemari penyimpanan cairan yang mudah
terbakar. Berbahaya jika terhirup, tertelan, atau
diserap melalui kulit. Menggunakan peralatan dan
teknik perlindungan pribadi yang sesuai kontrol
seperti mantel laboratorium, kacamata
keselamatan, karet sarung tangan, dan tudung
asap. Buang asetonitril dan solusi menurut
peraturan federal, negara bagian, dan lokal.
Asam asetat glasial.- Cairan korosif, mudah
terbakar. Simpan di lemari penyimpanan asam.
Menyebabkan luka bakar parah. Gunakan
peralatan perlindungan pribadi yang sesuai dan
kontrol teknik seperti mantel laboratorium,
kacamata keselamatan, pelindung wajah, sarung
tangan karet tebal, dan kap asap saat bekerja
dengan solusi terkonsentrasi. Buang asam dan
solusi menurut peraturan federal, negara bagian,
dan lokal.
n-Hexane. - Iritan mudah terbakar, beracun.
Simpan di lemari penyimpanan cairan yang mudah
terbakar. Berbahaya jika terhirup, ditelan, atau
diserap melalui kulit. Gunakan sesuai peralatan
pelindung pribadi dan kontrol Teknik seperti
mantel laboratorium, kacamata keselamatan,
sarung tangan karet, dan asap kap. Buang
n-heksana dan solusi menurut peraturan federal,
negara bagian, dan lokal.
Metanol.- Mudah menyala, beracun, iritasi cair.
Toko dalam lemari penyimpanan cairan yang
mudah terbakar. Berbahaya jika terhirup, tertelan,
atau diserap melalui kulit. Gunakan peralatan
perlindungan pribadi yang sesuai dan kontrol
teknik seperti mantel laboratorium, keselamatan
kacamata, sarung tangan karet, dan tudung asap.
bagian dan lokal.
Aseton.- Mudah terbakar, beracun, mengiritasi
cairan. Simpan di lemari penyimpanan cairan yang
mudah terbakar. Berbahaya jika terhirup,
ditelan, atau diserap melalui kulit. Gunakan sesuai
peralatan pelindung pribadi dan kontrol teknik
seperti jas laboratorium, kacamata keselamatan,
sarung tangan karet, dan lemari asam. Buang
aseton dan solusinya sesuai ke peraturan federal,
negara bagian, dan lokal
Lihat Tabel 2012.24A untuk hasil penelitian yang
mendukung penerimaan dari metode ini.
A. Prinsip
Cokelat, minuman keras kakao, ekstrak kakao, dan
bubuk diekstraksi dengan heksana untuk
menghilangkan komponen lipidnya sebelum
ekstraksi flavanol dan prosianidin. Flavanol dan
prosianidin (DP1-10) kemudian diekstraksi dari
bahan yang dihilangkan lemaknya dengan
diasamkan sistem pelarut aseton berair [asam
asetat-air-asetat] (AWAA)]. Akhirnya, ekstrak
dilewatkan melalui kartrid SPE, difilter, dan
ditransfer ke botol kromatografi untuk fase normal
Analisis HPLC.
B. Aparatur
(a) Sistem HPLC. — Agilent 1100/1200 dengan
fluoresensi deteksi (FLD) dan autosampler dengan
kontrol suhu (Agilent, Santa Clara, CA), atau yang
setara.
(B) perangkat lunak akuisisi data kromatografi. —
Agilent Chemstation Plus Family, Revisi A.08.03,
atau setara
(c) kolom HPLC. — Develosil Diol 100 Å 5 µm, 250 ×
4,6 mm (Fenomena, Torrance, CA; Cat. No.
DI11546250W), atau setara.
(d) Pemandian sonik. — Setidaknya Mampu
sonication dan pemanasan 50 ° C (VWR, West
Chester, PA; Model 150D), atau setara.
(e) Labu volumetrik. — 5, 10, 25, 50, atau 100 mL.
(f) Filter jarum suntik. — PTFE, 0,45 μm, 13 mm
(Nalgene,Rochester, NY; Kucing. No. 187-1345),
atau setara.
(g) Botol / kap HPLC — VWR (Cat. No. 608216-
1232), atau setara.
(h) Krups coffee mill.—Krups (Millville, NJ) Model
203, atau setara.
(i) Kartrid SPE. — StrataSCX, 55 µm, 70 Å, 500 mg /
3 mL (Fenomena; Cat. No. 8B-S010-HBJ).
(j) Vacuum manifold. — 24 posisi (Fenomena; Cat.
AH0-6024), atau setara.
Tabel 2012.24A. Hasil studi antar laboratorium (berdasarkan defatted) untuk flavanol dan prosianidin dalam cokelat, minuman keras coklat,
bubuk kakao, dan ekstrak kakao

No. of
Sample Avg., RSDr, No. of
Pair sr sR RSDR, % HorRat replicates
No. mg/g % labs used
used
1 9 10.07 0.97 9.61 1.29 12.86 3.22 11 22
2 12 60.40 2.91 4.83 4.67 7.73 2.53 12 24
3 10 8.07 0.37 4.64 0.86 10.68 2.59 12 24
4 13 339.02 17.52 5.14 34.85 10.23 4.60 12 24
5 8 484.74 30.91 6.38 47.46 9.79 4.39 12 24
6 11 16.19 0.67 4.17 0.82 5.03 1.35 11 20
7 14 2.21 0.21 9.60 0.39 17.68 3.52 12 24
© 2012 AOAC INTERNATIONAL