Resumen
El objetivo de este trabajo es la identificación del principal pigmento presente en la cáscara del
maracuyá púrpura (Passiflora edulis). La cáscara del maracuyá púrpura se trató con la mezcla
metanol/HCl 0.01%. El extracto se analizó mediante cromatografía y posteriormente se
determinaron los valores Rf por cromatografía sobre papel y de silicagel. El pigmento se
sometió a hidrólisis ácida con HCl 2M que permitió la separación del azúcar de la antocianidina.
La identificación de la antocianidina se realizó en forma indirecta mediante hidrólisis alcalina
con Ba(OH)2 al 20%. El azúcar se determinó comparando su valor Rf determinado sobre papel
Whatman Nº 1 y comparados con los señalados en la literatura. El pigmento se identificó
aplicando las expresiones que relacionan: máx. antociano - máx. antocianidina y la que
relaciona A/A = (A 440/Amáx. antocianidina) x 100. Se concluye que el pigmento presente en la
cáscara del maracuyá es el 3 monoglucósido de la malvidina.
Abstract
The objective of the present study was the identification of the main pigment present in the skin
of purple passion fruit (Passiflora edulis). Skins of purple passion fruit were extracted with
0.01%HCl in methanol. The extract was analyzed by chromatography, with subsequent
determination of the Rf value for the pigment using paper and silica gel chromatography The
pigment was submitted to acid hydrolysis in 2M HCl to separate the sugar from the
anthocyanidin. The identification of the anthocyanidin was carried out indirectly through alkaline
hydrolysis with 20% Ba(OH)2 . The sugar was determined by comparing its Rf value on
Whatman N° 1 paper with data from the literature. The pigment was identified by applying the
expressions which relate: Dlmax. anthocyano - lmax. anthocyanidin, and that which relates DA/A =
(A 440/Amax. anthocyanidin) x 100. It is concluded that the pigment present in the skin of the
purple passion fruit is malvidin 3-monoglucoside .
INTRODUCCIÓN
Passiflora edulis var. Flavicarpia Degener difiere del púrpura ya que tiene el fruto más grande,
con una corteza de color amarillo; una pulpa ácida más aromática y semillas café más grandes.
La parte comestible del fruto es de consistencia pulposa de gran cantidad de semillas, por lo
que se consume de preferencia en forma de jugo (Salazar y Torres, 1977). Su atractivo color
amarillo – anaranjado, su acidez y aroma característicos hacen de esta fruta una especie de
gran atractivo para las zonas con microclimas tropicales y sub-tropicales como existen en
algunas regiones de Chile (Osorio, 1981).
El fruto del maracuyá no puede ser almacenado más allá de 2 semanas bajo condiciones
normales de temperatura. El fruto puede ser mantenido 4 ó 5 semanas entre 4 a 10º C (7º C
óptimo). Sin embargo, gran parte de su sabor se pierde durante este período de
almacenamiento. Las temperaturas por debajo de 4º C llevan a la descomposición y ataques de
mohos.
Los azúcares constituyen la mayor parte de los carbohidratos. Así, el jugo de la variedad
púrpura fluctúa entre 14,4 y 21,9%, mientras en la variedad amarilla estos valores están entre
13 y 18%. En la variedad púrpura la proporción azúcar/ácido es de 5:1 mientras en la variedad
amarilla esta proporción es de 3:8, por lo tanto, el jugo de la variedad púrpura es considerado
de un sabor mucho más dulce.
Pruthi (1963), informó que el contenido de almidón en el jugo del fruto de la variedad púrpura
fluctúa entre 1,0 a 3,7%. Se ha encontrado que el contenido de almidón es más alto en la
variedad púrpura que en la variedad amarilla.
Las proyecciones y posibilidades de aprovechamiento del maracuyá como fruta exótica son
enormes, ya sea en forma de jugo o de jugo concentrado. No obstante, también se ha utilizado
el jugo de maracuyá en mezcla con otros jugos de frutas (Aguilera y Araneda, 1996).
Asimismo, Padilla (1995), explora las posibilidades de aprovechamiento del colorante natural
presente en la cáscara del maracuyá púrpura.
MATERIALES Y MÉTODOS
Hidrólisis ácida.
El procedimiento se llevó a cabo mediante una hidrólisis alcalina con (Ba (OH) 2 al 20%
generándose floroglucinol y un derivado fenólico del ácido benzoico. Ambos compuestos se
extrajeron con sucesivas extracciones con 2 mL de acetato de etilo (Swain, 1965).
Una forma de establecer la posición del grupo azúcar es a través del conocimiento de las
características espectrales del antociano y de la antocianidina y de las relaciones espectrales
que fueron establecidas por Díaz y Olave (1979a), y que dió origen a la Fig. 1.
Estas relaciones espectrofotométricas son: Diferencia algebraica entre máx. del antociano y de
la antocianidina expresado como máx. = máx. antociano - máx. antocianidina.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se utiliza una relación: peso de cáscara/ volumen de solución extractiva (1g/3mL) para cada
una de las etapas anteriormente descritas. Esta relación permitió obtener una alta
concentración de pigmento alcanzándose a un valor de absorbancia de 0,8.
La separación de los pigmentos obtenidos se realiza por cromatografía en capa fina de silicagel
lográndose la separación de 2 manchas muy nítidas, una amarilla muy débil y otra mancha roja
ancha e intensa. Se extrajo esta última y se purificó por cromatografía en capa fina de silicagel
60 G utilizando la mezcla solvente indicada materiales y métodos. Esta operación se efectúa
por dos veces para facilitar la identificación del pigmento. Experiencias exploratorias indicaron
que el pigmento obtenido debería corresponder a un pigmento antociánico.
Los valores de Rf obtenidos por cromatografía sobre papel se muestran en la Tabla 1, donde
se aprecia que existe concordancia entre los valores Rf del pigmento obtenido con los de la
malvidina 3 glucósido para los solventes A.W.H. (34,2 + 2,1) y HCl 1% (6,0 + 0,4).
Los valores Rf obtenidos por cromatografía en capa fina de silicagel se muestran en la Tabla 2.
Dado que no existen antecedentes bibliográficos al respecto, dichos valores Rf representan un
aporte a las características cromatográficas del antociano presente en la cáscara de maracuyá.
La máxima encontrado para el antociano fue de 533 nm, valor que puede corresponder a una
Malvidina 3 glucósido o una malvidina 3 – 5 diglucósido. La relación espectral del A440/A máx .
100 cuyo valor es 40, no concuerda con los observados para los dos pigmentos antes citados.
Sin embargo, se debe tener presente que el valor de la relación es relativo y depende del valor
de absorbancia con que se determina el antociano y la antocianidina (Díaz et. al., 1981).
Las características espectrales del antociano se muestran en la Tabla 3; los valores de l
máxima se comparan con los valores dados por distintos autores.
Valores Rf de la antocianidina.
En la Tabla 4 se muestran los valores Rf determinados sobre papel para diferentes mezclas
solventes. Si se comparan con los valores obtenidos por otros autores se observa que el Rf
promedio del pigmento en estudio es 41 + 2,8 son cercanos a los valores obtenidos para la
delfinidina. No obstante, hay que destacar que los valores Rf tienen un carácter orientativo y en
ningún caso sirven para dilucidar entre una antocianidina y otra.
En la Tabla 5 se presentan los valores Rf determinados sobre silicagel para tres diferentes
mezclas solventes. Estos valores no pueden ser comparados pues no existen datos
bibliográficos para las distintas antocianidinas lo que constituye un aporte para las propiedades
cromotográficas de la antocianidina en estudio.
Al comparar los máx para las distintas antocianidinas obtenidas por Harborne (1958), con los
resultados obtenidos en este estudio, es posible afirmar que la antocianidina puede ser
cianidina, petunidina o malvidina. Sin embargo, queda descartada la posibilidad de que la
antocianidina sea la cianidina o la petunidina, ya que ambas presentan desplazamiento
batocrómico cuando se hace reaccionar con el cloruro de aluminio al 5% en etanol, al contrario
de lo que sucede con el pigmento en estudio, que sólo tiene un desplazamiento de sólo 5
unidades lo que no es significativo (Tabla 6).
Por lo tanto, se estaría en presencia de una malvidina, ya que es aquella antocianidina que
presenta el valor más cercano a 540 nm (Tabla 6) además, no presentan desplazamiento
batocrómicos mayores de 10 nm.
Al comparar los valores de las mezclas patrones con los de la muestra, se puede observar que
para el derivado fenólico de la antocianidina en estudio, su máx fue de 270 nm (Tabla 7). Este
valor concuerda con el reportado para el ácido gálico + floroglucinol ( máx 270) y el ácido
siríngico + floroglucinol ( máx 269).
Del análisis de tal situación quedan descartadas las antocianidinas cuyos derivados de
floroglucinol con los distintos derivados fenólicos del ácido benzoico aparecen con más de un
máximo o con un valor distinto a 270 nm como es el caso de la pelargonidina (252 nm).
Por último, se puede observar que la mezcla de ácido gálico + floroglucinol mencionada
anteriormente, con un lmáx a los 270 nm, presenta desplazamiento batocrómico de 33 unidades
que no coinciden con la antocianidina en estudio que tiene sólo 5 unidades por lo que se
demuestra que la antocianidina es una malvidina.
Identificación del grupo azúcar.
Azúcar Rf x100
Arabinosa 30
Galactosa 18
Glucosa 22
Pigmento 21,9
Así los resultados obtenidos para máx es -7 y para la relación A/A es +0 (Tabla 9) definen la
posición del pigmento en estudio en 3 y 3 – 7 (ver Gráfico Nº 1).
Por otro lado, Díaz y Olave (1979a), definieron pautas para diferenciar la posición 3 de
la posición 3 – 7 de la Fig. 1. Estas pautas están basadas en los valores de Rf
determinados en tres mezclas de solventes diferentes de acuerdo a los siguientes
rangos:
Posición 3 – 7 Posición 3
10 < Rf B.A.W. 28 < Rf B.A.W.
< 22 < 45
35 < Rf A.W.H. 20 < Rf A.W.H.
< 50 < 35
15 < Rf HCl 1% 7 < Rf HCl 1%<
< 25 15
Por lo tanto, la posición del azúcar queda definida en función de los valores de Rf x 100 que se
muestran en la Tabla 1. Existe concordancia para los valores en los solventes A.W.H. y para el
solvente HCl 1%, y sólo en el caso del solvente B.A.W. el valor de Rf = 24 del pigmento (Tabla
1), se encuentra un poco por debajo del valor límite inferior para la posición 3 (Rf > 28).
Con ello se consigue aprovechar la cáscara del maracuyá púrpura para extraer dicho pigmento
y utilizarlo como colorante natural en productos alimenticios. Asimismo, se consigue el total
aprovechamiento del maracuyá en su proceso de industrialización.
AGRADECIMIENTOS
REFERENCIAS
Albach, R.F., Kepner, R.E. y Webb, A.D., “Peonidin 3 monoglucoside in vinifera grapes”, J.
Food Sci., 28, 55 – 58 (1963). [ Links ]
Bate – Smith, E.C., “Paper chromatography of anthocyanin and velated substances in petal
extracts”, Nature, 161, 835 (1948). [ Links ]
Calzada, B.J., “143 frutales nativas. El maracuyá”, Pág. 320 - 322. Universidad Nacional
Agraria, La Molina, Lima, Perú (1970) [ Links ]
Carreño – Díaz, R. y Luh, B.S., “Anthocyanin pigments on Trousseau grapes”, J. Food Sci., 34,
415 – 419 (1969). [ Links ]
Díaz L.S. y Olave, R., “Estudio de la posición del grupo azúcar en los pigmentos antociánicos
mediante relaciones espectrofotométricas”, Alimentos, 4(2), 12 – 17 (1979a). [ Links ]
Díaz, L.S., Olave, R y Muñoz, A., “Análisis de las relaciones espectrales de antocianos y
antocianidinas”, XIV Congreso Latinoamericano de Química. San José, Costa Rica
(1981). [ Links ]
Díaz, L.S. y Olave, R., “Nuevos métodos para la hidrólisis ácida y alcalina enla identificación
espectrofotométrica de antocianidinas”, Rev. Agroquim. Tecn. Alimentos, 21(3), 419 – 426
(1981). [ Links ]
Harborne, J.B., “Spectral methods of characterizing antrhocyanins”, Biochemical J., 70, 22 – 28
(1958). [ Links ]
Jagtiani, J., Chan, H.T. y Sakai, W., “Tropical fruti procesing”, Pag. 149, Academic Press, Inc.
New York, U.S.A (1988). [ Links ]
Pruthi, J.S., “Phisiology, chemistry and technology of passion fruit”, Advances Food Research,
12, 149 – 180 (1963). [ Links ]
Saenz, C. y Sepúlveda, E., “Determinación del contenido y característica del aceite de semilla
de maracuyá (Passiflora edulis, var. Flavicarpia) cultivado en Chile”, Investigación Agrícola,
7(3), 71 – 74 (1981). [ Links ]
Saenz, C. y Sepúlveda, E., “El maracuyá y su potencial agroindustrial”, Próxima década, 70, 29
– 32 (1988). [ Links ]
Schaller, D.R. y Von Elbe, J.H., “The minor pigment component of montmorency cherries”, J.
Food Sci., 33, 442 – 443 (1968). [ Links ]
Sepúlveda, C., “Identificación de los antocianos presentes en la cáscara del fruto de maracuyá
púrpura (Passiflora edulis)”, Tesis, Facultad de Ciencias, Departamento de Química,
Universidad de La Serena, La Serena, Chile (1995). [ Links ]
Smith, R.M. y Luh, B.S., “Anthocyanin pigments in the hybrid grape variety Rubired”, J. Food
Sci., 30, 995 – 1005 (1965). [ Links ]
Sotomayor, E. y De la Riva, F., “Introducción del maracuyá amarillo (Passiflora edulis var.
Flavicarpia Degener) en Arica", Idesia, 7, 69 – 72 (1983) [ Links ]
Swain, T., “Analytical methods for flavonoids”, En Chemistry and Biochemistry of plant
pigments, 543 – 544. Ed. Goodwin T.W. Academic Press – London (Inglaterra)
(1965) [ Links ]
Vega, F. y Cortés, C., “Caracterización química de las semillas y cáscaras del maracuyá
púrpura (Pasiflora edulis) cultivado en la IV Región”, Tesis, Facultad de Ingeniería,
Departamento de Ingeniería en Alimentos, Universidad de La Serena, La Serena, Chile
(1993). [ Links ]