Diterbitkan oleh The Company of Biologists Ltd | The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
ARTIKEL PENELITIAN
ABSTRAK gizi optimum yang ditentukan oleh umur, keadaan fisiologis dan
Hewan dengan hati-hati mengatur jumlah protein yang mereka konsumsi. kapasitas reproduksi (Simpson dan Raubenheimer, 2012). Hewan
Jumlah asam amino esensial individu (EAAs) yang diperoleh dari protein mengatur asupan proteinnya dengan mengubah jumlah makanan yang
makanan bergantung pada sumber protein, tetapi bagaimana proporsi EAA dimakan (Simpson et al., 2004) atau dengan mengonsumsi campuran
dalam makanan mempengaruhi keseimbangan nutrisi jarang diteliti. makanan dengan keseimbangan protein dan makronutrien lain yang
Penelitian terbaru menggunakan Kerangka Geometris untuk Nutrisi telah benar (Raubenheimer dan Simpson, 1993; Simpson dan Raubenheimer,
mengungkapkan bahwa lebah madu penjelajah yang menerima sebagian 1993, 2012; Simpson et al., 2004). Bagaimana pengaturan asupan protein
besar diet EAA mereka dari nektar bunga dan bukan dari protein padat dilakukan oleh tubuh ' Kemampuan untuk mendeteksi kebutuhan asam
memiliki persyaratan yang relatif rendah untuk diet EAA. Di sini, kami amino esensial (EAAs) sebagian besar tidak diketahui (Morrison et al.,
793
ARTIKEL PENELITIAN The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
Kerangka Geometrik memperkirakan bahwa lebah madu pekerja pencari Kami menghitung target asupan dengan mengukur jumlah total
makan membutuhkan EAA diet 250 kali lebih sedikit daripada larva lebah makanan yang dikonsumsi oleh lebah pekerja dewasa selama percobaan 7 hari.
(Paoli et al., 2014a, b); lebah madu tanpa induk ' perawat ', sebaliknya, Proporsi protein terhadap karbohidrat (P: C) atau EAA: C dalam larutan diet
membutuhkan EAA diet lima kali lebih banyak daripada penjelajah (Paoli et memiliki pengaruh kuat pada jumlah makanan yang dimakan (Gbr. 1). Lebah yang
al., 2014a). Namun, beberapa spesies serangga sosial lainnya telah dipelajari diberi makan sukrosa yang dipasangkan dengan larutan sukrosekaseinat (Gbr. 1A)
dengan menggunakan Kerangka Geometrik. Lebah berekor buff makan lebih banyak kaseinat secara signifikan ketika mereka diberi diet 1:25 dan
Bombus terrestris adalah penyerbuk generalis yang hidup di koloni eusosial 1:10 (w / w) daripada lebah yang diberi makan dengan diet lain (Tabel 1, Š idák ' s post
beberapa ratus individu. Ini adalah penyerbuk liar yang penting tetapi hoc, P < 0,05). Makanan ini memiliki konsentrasi protein yang jauh lebih tinggi
baru-baru ini telah didomestikasi dan sekarang digunakan secara luas dalam daripada lebah ' target asupan. Sebaliknya, lebah yang diberi makan dengan
sistem penyerbukan komersial. Dibandingkan dengan lebah madu, pasangan diet di mana mereka tidak mungkin makan cukup untuk mencapai
biologinya lebih mirip dengan spesies lebah liar lainnya karena tidak banyak target asupan protein (diet 1: 500 dan 1: 250) makan lebih sedikit rata-rata (Gbr.
menyimpan makanan; sebaliknya serbuk sari yang dibawa kembali ke koloni 1A) tetapi juga makan lebih sedikit (Gbr. 1A) tetapi juga makan lebih sedikit.
dikonsumsi dengan cepat oleh penghuni koloni dan diumpankan ke induk, karbohidrat secara signifikan lebih sedikit daripada lebah pada diet kaseinat
dan hanya nektar yang disimpan. Dibandingkan dengan penyerbuk liar lainnya (Tabel 1, Š idák ' s post hoc, P < 0,05). Seperti lebah yang diberi pakan diet
lainnya, koloni yang dipelihara secara komersial memudahkan penelitian yang mengandung proporsi tinggi kaseinat, lebah yang diberi makan diet yang
spesies ini dalam kondisi laboratorium. Saat ini, kita hanya tahu sedikit terbuat dari EAA gratis makan secara signifikan lebih banyak EAA ketika memberi
tentang persyaratan makanan spesies lebah selain lebah madu, dan apakah makan diet dengan proporsi EAA: C tinggi (1:10 dan 1:25 mol / mol) (Gbr. 1B , Tabel
persyaratan rendah untuk protein makanan umum terjadi pada spesies 1, Š idák ' s post hoc, P < 0,05). Data ini menunjukkan bahwa lebah memiliki
pekerja serangga eusosial lainnya. Selanjutnya, Karena para pekerja kebutuhan rata-rata yang ditetapkan untuk karbohidrat harian (bahan tambahan
terutama membutuhkan protein untuk pemeliharaan somatik, lebah dapat Gambar S1; ∼ 45 mg hari - 1) dan memprioritaskan asupan karbohidrat daripada
menjadi model yang ideal untuk menguji bagaimana asupan makanan EAA protein. Tidak seperti lebah yang diberi pakan kaseinat encer, bagaimanapun,
diatur tanpa adanya reproduksi seksual. Lebah pekerja yang mencari makan lebah yang diberi makan diet EAA: C paling encer (1: 100) makan lebih banyak
tidak biasa karena mereka memperoleh sebagian dari diet EAA mereka dari karbohidrat secara signifikan daripada mereka yang diberi makan dengan diet lain
AAs gratis yang ditemukan dalam nektar bunga (Gardener dan Gillman, (Tabel 1,
2002; Petanidou et al., 2006; Nicolson dan Thornburg, 2007) dan dengan Š idák ' s post hoc, P < 0,05).
mudah mengkonsumsi larutan yang mengandung AAs. Dalam analisis kami, kami mengontrol koloni asal lebah
Di sini, kami menggunakan Kerangka Geometrik untuk dan menemukan bahwa itu mempengaruhi jumlah karbohidrat yang dikonsumsi
mengidentifikasi nutrisi optimal untuk diet EAA dan di kedua set percobaan (Tabel 1). Koloni juga mempengaruhi jumlah kaseinat
karbohidrat lebah pekerja dewasa ( B. terrestris). Studi tetapi tidak mempengaruhi jumlah EAA yang dimakan (Tabel 1). Selain itu, kami
sebelumnya tentang nutrisinya telah menunjukkan bahwa mengontrol ukuran lebah dan menemukan bahwa hal itu mempengaruhi jumlah
mikrokoloni mengkompensasi kadar protein dalam serbuk sari: karbohidrat yang dikonsumsi ketika lebah diberi makan makanan kaseinat (Tabel
lebah memakan lebih banyak serbuk sari ketika kandungan 1). Untuk kedua perawatan diet, lebah yang lebih besar makan lebih banyak
proteinnya rendah (diukur sebagai% N) (Tasei dan Aupinel, karbohidrat (Pearson ' koefisien korelasi: kaseinat, r = 0,496,
2008). Namun, saat ini sangat sedikit yang diketahui tentang P < 0,001; EAA, r = 0.221, P = 0,043).
persyaratan makronutrien spesies lebah ini, meskipun faktanya Sumber EAA dalam makanan juga mempengaruhi volume harian
ia banyak digunakan dalam penyerbukan komersial dan dari setiap larutan diet yang dikonsumsi oleh lebah (Gbr. 1C, D). Lebah yang diberi
merupakan model penting dalam studi laboratorium. Dalam makan diet kaseinat mengubah asupannya untuk mengonsumsi lebih banyak
percobaan ini, IT untuk karbohidrat dan sumber makanan dari larutan sukrosa ketika dipasangkan dengan larutan protein tinggi (misalnya diet
EAA (baik 10 EAA atau protein, kaseinat), ditentukan dengan 1:50) tetapi makan lebih sedikit larutan hanya sukrosa saat dipasangkan dengan
menggunakan desain eksperimental dimana lebah diizinkan sumber protein encer ( misalnya 1: 250) (Gbr. 1C, ANOVA dua arah,
untuk memilih antara makanan yang mengandung sukrosa pengobatan × solusi, F 6.234 = 7,99, P < 0,001). Lebah diberi pakan kaseinat
dan sumber EAAs dan sukrosa. sendirian. Dengan di ujung paling ekstrim dari kisaran yang kami uji (1: 500, 1:25, 1:10)
menggunakan desain ini, kami juga dapat menguji apakah tidak memberi kompensasi dengan cara ini. Selain itu, lebah yang lebih besar memakan
sumber makanan EAA memengaruhi TI. rata-rata volume yang lebih besar dari larutan diet [ANOVA dua arah, berat
(cov), F 1.249 = 5,85, P = 0,016]. Jumlah makanan yang dimakan juga
bervariasi sebagai fungsi koloni [ANOVA dua arah, koloni (cov),
HASIL F 1.249 = 9.07, P = 0,003]. Sebaliknya, lebah diberi pakan dengan pakan yang mengandung 10 EAA
Keseimbangan nutrisi tergantung pada sumber EAA dalam 0,5 mol l - 1 larutan sukrosa selalu memakan lebih banyak
Target asupan lebah pekerja tergantung pada sumber makanan larutan sukrosa (Gbr. 1D), dan jumlah larutan diet EAA yang
mereka konsumsi bergantung pada proporsi EAA: C (dua arah
Jurnal Biologi Eksperimental
EAA (Gbr. 1A, B). Tiga dari solusi diet di setiap perlakuan (protein
atau EAA) memungkinkan lebah mencapai target asupannya. ANOVA, solusi trt ×, F 5,223 = 7.07, P < 0,001). Tidak ada pengaruh
Lebah yang diberi makan kaseinat mencapai target asupan 1: 149 ukuran lebah pada hubungan ini (ANOVA dua arah, kovariat berat,
(w / w) saat diberi pilihan untuk makan dari tabung yang berisi F 1.224 = 1,05, P = 0,306). Volume yang dimakan bervariasi sebagai fungsi
0,5 mol l - 1 sukrosa dipasangkan dengan diet 1: 100, 1:75 dan 1:50 (w / w) koloni [ANOVA dua arah, berat (cov), F 1.249 = 6.49, P = 0,012].
kaseinat dan sukrosa (Gbr. 1A). Lebah diberi makan dengan 0,5 mol l - 1
sukrosa dan sukrosa yang mengandung EAA gratis mencapai target asupan ∼ Konsentrasi EAA yang tinggi dalam makanan meningkatkan risiko
1: 255 (mol / mol) saat diberi makan dengan diet 1:90, 1:75 dan 1:50 (mol / kematian
mol) (Gbr. 1B), yang diterjemahkan menjadi target asupan 1: 560 b / w. Makanan lebah yang diberi makan yang terdiri dari kaseinat memiliki tingkat kematian yang
Lebah yang diberi pakan kaseinat mengonsumsi karbohidrat kira-kira dua sangat rendah dan kelangsungan hidup mereka sebagian besar tidak dipengaruhi oleh konsentrasi kaseinat di
kali lebih banyak daripada yang diberi makan dengan larutan EAA gratis saat diet (Coxreg, χ 2 1 = 2.79, P = 0,095) (Gambar 1E). Namun, lebah diberi makan
mereka memakan makanan dalam kisaran di mana mereka dapat mencapai konsentrasi kaseinat tertinggi (1:10) memiliki risiko kematian 3,9 kali lebih besar
target asupannya (1:50, 1:75, 1: 100 w / w). daripada mereka yang diberi diet paling encer (1: 500). Lebah diberi makan diet
794
ARTIKEL PENELITIAN The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
Konsumsi protein (mg) Konsumsi asam amino (mg) dengan diet sukrosa saja bergantung pada
pasangan diet. (D) Lebah memberi makan sukrosa
Kasein + sukrosa Asam amino + sukrosa mengandung EAA gratis. (E) Lebah yang diberi pakan
Sukrosa saja Sukrosa saja
0.3 0.3 tinggi kaseinat memiliki risiko kematian yang lebih
rendah daripada lebah yang diberi pakan tinggi EAA
bebas (F). Data untuk individu yang sama di semua
0.2 0.2 panel. Bilah kesalahan menunjukkan
sem N = 20 lebah per pasangan makanan per panel.
0.1 0.1
0 0
1: 500 1: 2501: 100 1:75 1:50 1:25 1:10 1: 100 1:90 1:75 1:50 1:25 1:10
Pengobatan
E F
1.0 1.0
0.8 0.8
Bertahan hidup (%)
0.6 0.6
1: 500
0.4 1: 250
1: 100
0.4 1: 100
1:75 1:90
1:50 1:75
0.2 1:25 0.2 1:50
1:25
1:10
1:10
0 0
1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7
Hari
inEAA yang tinggi, bagaimanapun, lebih mungkin terjadi selama proses EAA: C dalam pakan mempengaruhi jumlah dan proporsi gula dan
percobaan daripada yang diberi makan dengan kaseinat (Gbr. 1F, Coxreg, χ 2 1= 5.78, asam amino dalam hemolimf lebah (Gbr. 2). Gula utama yang kami
P = 0,016). Risiko kematian meningkat sebagai fungsi dari jumlah EAA dalam temukan pada hemolimfa lebah adalah trehalosa, glukosa dan
makanan; lebah yang diberi pakan dengan rasio EAA: C kurang dari 1:90 (mol / fruktosa (Gambar 2A); sucroseduga hadir, tetapi pada konsentrasi ≥ 2
mol) memiliki 3 - Resiko kematian 7 kali lebih besar dibandingkan mereka yang lipat lebih rendah dari gula lainnya (0,380 mmol l - 1;
diberi makan diet tinggi karbohidrat (misal> 1:90). data tidak ditampilkan). Jumlah dan proporsi gula dalam haemolymph lebah
tergantung pada makanan (GEE, pengobatan × gula,
Sumber makanan EAAs mempengaruhi jumlah dan proporsi gula dan χ212= 58.1, P < 0,001). Dari semua gula yang kami ukur, trehalosa
AAs dalam hemolimf. hadir di hemolimf dengan konsentrasi tertinggi, kecuali di
Jurnal Biologi Eksperimental
Kami membatasi lebah pada diet tertentu dan mengukur bagaimana lebah diet memberi makan diet EAA rendah (1: 600 mol / mol). Pada lebah ini, glukosa
mempengaruhi komposisi nutrisi hemolimf. Rasio P: C atau berada pada konsentrasi yang lebih tinggi dari trehalosa ( Š idák ' s post hoc,
Tabel 1. MANOVA jumlah total masing-masing makronutrien yang dimakan selama 7 hari
Efek Tergantung Statistik uji (df) P- nilai Amino Gratis (DF) P- nilai
795
ARTIKEL PENELITIAN The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
70 SEBUAH Trehalose
profil asam amino hemolimf. Untuk melakukan ini, kami menguji apakah
Glukosa proporsi EAA spesifik dan non-EAA di hemolimf lebah lebah dapat
Fruktosa
60 memprediksi makanan yang diberi makan lebah menggunakan analisis
diskriminan kanonik (CDA). CDA untuk EAA mengungkapkan bahwa diet
Konsentrasi (mmol l 1)
50 mempengaruhi profil spesifik AAs dalam hemolimf lebah (Tabel 3). Fungsi
diskriminan kanonik pertama (fungsi 1) memisahkan lebah yang diberi
40 pakan tinggi protein (diet kaseinat tinggi, 1:20 b / b) dan lebah yang diberi
pakan tinggi EAA (AAdiet tinggi, 1: 30mol / mol) dari semua kelompok lain
30
(koefisien fungsi diskriminan kanonik, Tabel 3). Haemolimf AAs utama yang
digunakan untuk memisahkan lebah yang diberi pakan kaseinat tinggi dari
20
kelompok lain adalah leusin, treonin dan valin (korelasi kelompok gabungan,
Tabel 3). Nyatanya, lebah ini punya ∼ 10x lebih banyak leusin dalam darah
10
mereka daripada lebah yang diberi makan diet sukrosa saja atau kaseinat
0 rendah. Namun, lebah yang diberi diet AA tinggi memiliki konsentrasi leusin
terendah dari semua makanan. Fungsi diskriminan kedua membedakan
lebah yang diberi makan sukrosa saja dan yang diberi diet AA rendah dari
14 B Non EAA yang diberi makan dengan diet kaseinat rendah; lebah yang diberi pakan
EAA
kaseinat rendah memiliki kadar triptofan yang relatif tinggi dan kadar
12
fenilalanin yang rendah (Tabel 2 dan 3). Fungsi diskriminan ketiga dan
keempat tidak membedakan kelompok secara signifikan.
10
Konsentrasi (µmol l 1)
796
ARTIKEL PENELITIAN The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
Tabel 2. Konsentrasi rata-rata asam amino di hemolimf lebah lebah 3 hari setelah makan
Sukrosa saja AA rendah AA tinggi Kasein rendah Kasein tinggi
biaya produksi enzim untuk mencerna kasein juga dapat menyebabkan membatasi perilaku makan (Purpera et al., 2012; Jordi et al., 2013). Leusin,
permintaan yang lebih besar untuk EAA. Lebah yang diberi makan dengan diet misalnya, dan rantai cabang EAA lainnya, isoleusin dan valin, yang mengaktifkan
encer dalam kaseinat juga menunjukkan kesulitan dalam mengatur asupan TOR target seluler (target rapamycin), menekan pemberian makan ketika mereka
mereka untuk mengimbangi jumlah protein yang rendah, menunjukkan bahwa hadir dalam kelimpahan dalam makanan yang diumpankan ke vertebrata (Peters
mereka mungkin tidak mampu mendeteksi protein dalam makanan setelah dan Harper, 1985) atau
menelan ketika ada pada konsentrasi kurang dari 1: 250 w / w. disuntikkan langsung ke pusat otak yang terlibat dalam pemberian makan, seperti
Perbedaan utama antara diet kaseinat-sukrosa dan diet EAA-sukrosa hipotalamus (Blouet dan Schwartz, 2010; Karnani et al., 2011; Laeger et
gratis adalah proporsi EAAs (Tabel 4). Fakta bahwa lebah harus makan ∼ 4x al., 2014). Dalam percobaan kami, hanya valin yang cocok dengan
lebih kaseinat menyiratkan bahwa beberapa EAA yang kurang prediksi bahwa EAA rantai cabang penting untuk regulasi protein
berlimpah yang diproduksi oleh pencernaan kaseinat penting untuk karena konsentrasi empat kali lebih sedikit dalam diet kaseinat-sukrosa
pengaturan asupan protein. Dengan pengecualian isoleusin dan dibandingkan dengan diet EAA-sukrosa gratis; leusin adalah ∼ 30% lebih
fenilalanin, diet EAA gratis memiliki proporsi yang lebih besar dari sedikit pekat dibandingkan dengan diet EAA gratis dan isoleusin enam
semua EAA lain daripada kaseinat. Dua di antaranya, treonin dan valin ∼ 4 kali lebih pekat (Tabel 4). Data ini menyiratkan bahwa valin lebih
× kurang terkonsentrasi dalam diet kaseinat (Tabel 4); kecocokan penting dalam regulasi protein pada serangga atau lebih dari satu EAA
terdekat antara konsentrasi relatif mereka dengan faktor di mana lebah diperlukan tubuh untuk menentukan kecukupan protein. Saat ini, hanya
memakan lebih banyak kaseinat dapat menyiratkan bahwa keduanya ada sedikit data yang mendukung gagasan bahwa kelimpahan asam
sangat penting untuk pengaturan asupan EAA. Hanya lisin yang kurang amino tunggal (misalnya valin atau treonin) digunakan sebagai sinyal
terkonsentrasi dibandingkan treonin dan valin; dulu ∼ 13x lebih sedikit kecukupan protein (Laeger et al., 2014). Penjelasan yang lebih mungkin
terkonsentrasi dalam diet kaseinat. Lebih lanjut, fenilalanin dan adalah bahwa lebih dari satu EAA diperlukan untuk pengaturan asupan
isoleusin lebih terkonsentrasi daripada EAA lainnya, mungkin protein / EAA. Studi sebelumnya pada belalang dan tikus telah
menunjukkan bahwa mereka kurang penting dalam regulasi protein. menunjukkan bahwa konsumsi beberapa asam amino secara
Jurnal Biologi Eksperimental
Data intisari kaseinat kami juga menunjukkan bahwa hidrolisis kaseinat bersamaan seringkali memiliki efek yang lebih kuat pada pemberian
menghasilkan nonEAA, yang tidak terdapat dalam diet EAA ekuimolar makan daripada asam amino individu (Simpson et al., 1990; Karnani et
dan gratis kami. Fakta bahwa lebah harus menelan lebih banyak al., 2011). - atau kombinasi dari EAA lainnya - adalah apa yang
kaseinat untuk memenuhi kebutuhan mereka akan diet EAA - Meskipun mempengaruhi tubuh ' sinyal untuk kecukupan protein. Studi masa
diet kaseinat juga menyediakan non-EAA - menunjukkan bahwa depan yang menguji seberapa besar kontribusi masing-masing AAs
non-EAAs hanya memainkan peran kecil dalam regulasi asupan rantai cabang
makanan. asupan protein saat mereka ada dalam campuran lainnya
Mekanisme yang menimbulkan regulasi asupan protein sebagian besar EAA akan diperlukan untuk mengidentifikasi apakah semua EAA harus
tidak diketahui (lihat Morrison et al., 2012 untuk review). Protein makanan ada dalam proporsi tertentu untuk sinyal kecukupan protein.
dapat mempengaruhi pensinyalan oleh peptida seperti insulin (Buch et al.,
2008), dan ini secara tidak langsung dapat memberikan cara untuk Sumber makanan dari EAA mempengaruhi AAs di hemolimf
menentukan bahwa protein telah dimakan. Beberapa penelitian telah Penelitian kami adalah yang pertama untuk menetapkan bahwa sumber makanan EAAs
mengidentifikasi bahwa file ' kelimpahan berlebihan ' asam amino spesifik bisa memiliki pengaruh langsung pada tingkat hemolimf AAs, terutama EAAs, di
797
ARTIKEL PENELITIAN The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
Fungsi Eigenvalue % Var Statistik uji P- nilai Fungsi Eigenvalue % Var Statistik uji P- nilai
2= 131 2= 107
1 11.8 77.6 χ40 <0,001 1 3.95 52.6 χ44 <0,001
2= 27 2= 62.6
2 2.41 15.7 χ27 <0,001 2 1.75 23.3 χ30 <0,001
2= 16 2= 34.2
3 0,57 3.70 χ24 0,090 3 1.38 18.4 χ18 0,012
4 0.45 3.00 χ72= 7 0.153 4 0.42 5.70 χ82= 9,99 0,265
Korelasi dalam kelompok yang dikumpulkan Korelasi dalam kelompok yang dikumpulkan
Fungsi Fungsi
AA 1 2 3 4 AA 1 2 3 4
Leu 0,518 0.149 0,025 - 0,349 Tyr 0.175 0.607 0.358 0,089
Thr 0.454 0.175 - 0,092 - 0.172 Cys 0,311 - 0.448 0.222 0,323
Val 0,372 0.102 - 0.309 0.175 Gln - 0.248 0.285 0,019 - 0.152
Phe 0,081 - 0,586 0.420 0.242 Gly 0.211 0,245 0,019 - 0.177
Trp - 0,097 0.437 - 0.401 - 0.176 Ala 0.117 0,056 - 0,541 - 0.133
Arg - 0,001 0.498 0,634 0.115 GABA - 0,078 - 0.155 0.475 - 0.132
Nya 0,084 0,001 - 0,575 0,165 Asp 0.148 - 0,079 - 0.159 0,047
Lys 0.103 0,046 - 0,399 - 0.119 Ser - 0.220 0,078 - 0.125 0.673
Bertemu 0,390 0.171 - 0,021 - 0,591 Glu 0,021 - 0,026 - 0.306 0.468
Ile 0.289 0,058 - 0.128 - 0,514 Asn - 0,073 0.147 - 0,065 0.343
Pro 0,026 0.138 0,165 0.230
Fungsi koefisien fungsi diskriminan kanonik Fungsi koefisien fungsi diskriminan kanonik
Diet 1 2 3 4 Diet 1 2 3 4
Sukrosa - 1.103 - 2.122 0.402 - 0.446 Sukrosa - 2.76 - 0.741 0,026 - 0.439
AA rendah 0.766 - 1.215 - 0.281 1.697 AA rendah - 0,908 - 0,311 - 1.242 1.571
AA tinggi - 2.039 0,677 - 0.98 - 0,234 AA tinggi 0.127 1.612 1.063 0.111
Kasein rendah - 1.873 1.746 0,933 0.159 Kasein rendah 2.236 - 1.618 0.719 0,002
Kasein tinggi 7.039 0,536 - 0,027 - 0.285 Kasein tinggi 1.552 0.789 - 1.941 - 0,577
Korelasi dalam kelompok yang digabung dengan huruf tebal menunjukkan korelasi tertinggi dari setiap asam amino dengan setiap fungsi diskriminan. Koefisien fungsi diskriminan kanonik
menunjukkan bagaimana CDA membagi setiap perlakuan dalam kelompok yang berbeda; Perlakuan dengan magnitudo tertinggi (dicetak tebal) untuk fungsi yang signifikan menunjukkan bagaimana
klasifikasi memisahkan kelompok berdasarkan pembobotan masing-masing asam amino untuk masing-masing fungsi diskriminan.
seekor serangga. Dalam percobaan ini, kami membatasi lebah pada diet yang kami larutan. Beberapa penelitian telah meneliti kemampuan lebah untuk
perkirakan mendekati target asupan atau sangat tidak seimbang terhadap protein / EAA, merasakan asam amino (Inouye dan Waller, 1984; Roubik et al., 1995; Carter
dengan harapan kami dapat mengidentifikasi perbedaan dalam diet tidak seimbang yang et al., 2006; Simcock et al., 2014; Hendriksma et al., 2014) dan tidak ada yang
memprediksi sinyal kecukupan protein. Seperti yang diharapkan, data kami menunjukkan memilikinya melaporkan apakah B. terrestris atau lebah lain memiliki neuron
bahwa konsumsi kaseinat yang berlebihan (yang timbul dari kebutuhan lebah yang reseptor gustatori yang sesuai untuk mendeteksinya. Yang kedua adalah
bahwa mekanisme pasca-menelan untuk pengaturan asupan protein / EAA
dibatasi pada diet ini untuk menelan karbohidrat yang cukup) mengakibatkan ∼ 3 - Konsentrasi
7x lebih besar dari 7 dari 10 EAA di hemolimf. Khususnya, dua dari rantai cabang EAA dapat disetel ke kisaran konsentrasi tertentu dari asam amino ini, dan jika
(leusin dan valin) meningkat dalam hemolimf meskipun fakta bahwa mereka bukan AAs konsentrasi protein / EAA terlalu tinggi, lebah tidak dapat menyesuaikan
yang paling melimpah yang ada dalam digesti kaseinat. Sebuah studi baru-baru ini juga dengan mengurangi asupannya. .
menunjukkan bahwa tikus yang diberi makan makanan tinggi protein secara kronis
memiliki peningkatan level rantai cabang AAs (leusin, isoleusin dan valin) dalam darah Lebah memprioritaskan karbohidrat daripada asupan protein
mereka (Solon-Biet et al., 2014). Lebih lanjut, dalam penelitian yang sama, semua AAs Kami juga mengamati bahwa regulasi karbohidrat bergantung pada
plasma lainnya berkorelasi negatif dengan asupan protein atau tidak berkorelasi sama sumber makanan EAA dan jumlah protein yang dimakan. Lebah yang
sekali. Peninggian selektif rantai cabang EAA di hemolimf ketika diet tinggi protein dapat diberi makan sukrosa hanya dapat mengatur dengan jelas asupannya
Jurnal Biologi Eksperimental
menunjukkan bahwa semua AA lain dari protein: (1) tidak melewati dinding usus dengan di sekitar jumlah karbohidrat harian tertentu ( ∼ 45 ± 4 mg sukrosa hari - 1,
mudah; (2) digunakan lebih cepat oleh sel korporeal; bahan tambahan Gambar. S1). Lebah yang diberi makan diet
EAAsucrose gratis juga mengatur asupan karbohidratnya
∼ 47 ± 2 mg sukrosa hari - 1; ketika kaseinat sangat encer dalam makanan,
seperti dalam diet 1: 250 dan 1: 500 kaseinat-sukrosa, lebah
mengatur asupan mereka ke jumlah yang sama (36 ± 3 mg sukrosa
Aspek menarik dari penelitian kami adalah bahwa lebah tidak secara akurat hari - 1). Namun, ketika kaseinat hadir pada konsentrasi yang lebih besar
mengatur asupan EAA mereka ketika diet tinggi protein atau EAA, karena mereka dari diet 1: 250, lebah tidak hanya mengonsumsi kaseinat secara
makan berlebihan EAA dalam diet ini, terlepas dari fakta bahwa mereka juga diberi proporsional ( ∼ 5 ± 0,1 mg hari - 1), mereka juga meningkatkan total
akses ke sukrosa. -hanya diet. Ini menunjukkan beberapa kemungkinan asupan karbohidrat menjadi dua kali lipat asupan lebah pada semua
penjelasan. Yang pertama adalah lebah tidak dapat dengan mudah merasakan diet lainnya (75 ± 2 mg sukrosa hari). - 1). Data kami dapat menunjukkan
perbedaan konsentrasi protein atau EAA dalam makanan, sehingga mereka secara bahwa otak mengintegrasikan informasi tentang status nutrisi
pasif menelan protein / EAA dalam gula secara berlebihan. menggunakan karbohidrat dan EAA secara bersamaan
798
ARTIKEL PENELITIAN The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
Tabel 4. Proporsi asam amino yang ditemukan dalam natrium kaseinat dan dalam diet EAA ekuimolar
Natrium kaseinat dicerna menggunakan hidrolisis asam untuk menghasilkan EAA dan non-EAAs. AA dengan konsentrasi terbesar disorot dengan warna abu-abu. Perhatikan bahwa triptofan sering
dihancurkan oleh hidrolisis asam dan data ini mungkin tidak mencerminkan nilai sebenarnya yang diberikan oleh pencernaan lebah. N = 6 sampel.
(Simpson dan Raubenheimer, 2012), dan bahwa perhitungan ini dilakukan Dengan pola makan nektar, lebah yang mencari makan dapat secara selektif
secara independen dari evaluasi kecukupan EAA individu dalam makanan. mengonsumsi karbohidrat tanpa diharuskan makan protein / EAA dengan
Seperti protein lain, kaseinat tidak memberikan proporsi yang sama dari konsentrasi tinggi pada saat yang bersamaan. Dengan cara ini, mereka dapat
semua EAA (Tabel 4); untuk mendapatkan EAA spesifik yang cukup, lebah memperoleh kebutuhan karbohidrat mereka terlebih dahulu, dan kedua
mungkin harus mengonsumsi lebih banyak kaseinat (w / w) daripada larutan mengkonsumsi substrat lain (misalnya serbuk sari atau sekresi kelenjar dari teman
EAA gratis (w / w). Namun, mereka melakukan ini sambil juga sarang lainnya) untuk memenuhi kebutuhan mereka akan diet EAA.
mempertahankan target asupan mereka untuk proporsi P: C tertentu dan ini Lebah madu mengatur asupan karbohidratnya untuk dipertahankan
memaksa mereka untuk makan, secara total, lebih banyak karbohidrat titer hemolimf trehalosa (Blatt dan Roces, 2002a, b). Terlepas dari perubahan
daripada lebah yang diberi makan dengan diet EAA gratis. Dengan demikian, kualitas dan kuantitas larutan gula yang diumpankan ke lebah madu,
data kami menunjukkan bahwa proporsi EAAs (sebagaimana ditentukan oleh konsentrasi trehalosa dalam hemolimf diatur secara ketat ke tingkat yang
EAA yang dihasilkan ketika protein dicerna) juga dapat mempengaruhi total konstan (Blatt andRoces, 2001, 2002a, b) karena trehalosa adalah gula
asupan karbohidrat, mungkin melalui dua mekanisme yang berbeda. utama, bersama dengan glukosa, yang digunakan. untuk menghasilkan
glukosa-6-fosfat sebagai substrat untuk produksi ATP untuk bahan bakar penerbangan
Studi kami adalah yang pertama meneliti secara rinci kebutuhan nutrisi untuk otot (Beenakkers et al., 1984). Sebaliknya, kami menemukan bahwa pada lebah,
protein / EAA dan karbohidrat lebah pekerja dewasa. Lebah dalam eksperimen konsentrasi trehalosa bervariasi dengan komposisi makanan, tetapi konsentrasi fruktosa
kami sangat mengatur asupan karbohidrat harian mereka untuk mencapai tetap konstan. Jika pemeliharaan penyimpanan karbohidrat di hemolimf memfasilitasi
minimal 45 mg sukrosa sehari. - 1. Pekerjaan kami sebelumnya juga telah penerbangan, kami memperkirakan bahwa sifat diet-invarian dari hemolimf fruktosa
menunjukkan bahwa lebah madu pekerja dewasa memprioritaskan asupan menunjukkan bahwa lebah menggunakan fruktosa daripada trehalosa untuk bahan
karbohidrat mereka daripada EAAs / protein (Altaye et al., 2010; Paoli et al., 2014a, bakar penerbangan. Menariknya, studi enzimatik pada otot terbang lebah telah
b; Archer et al., 2014), dan bahwa kebutuhan karbohidrat meningkat ketika pekerja menunjukkan bahwa lebah unik di antara serangga karena mereka mengandalkan
lebah madu menjadi penjelajah (Paoli et al., 2014a, b). Dalam penelitian kami fruktosa-6-fosfat dan fruktosa-1,6-difosfat sebagai substrat bersepeda untuk otot terbang
Jurnal Biologi Eksperimental
dengan lebah madu, kami memperkirakan bahwa IT untuk lebah madu yang baru (Staples et al., 2004; Clark et al., 2004; Clark et al., 2004; Clark et al. ., 1973; Beenakkers et
muncul yang diberi makan diet EAA gratis adalah 1:50 mol / mol. IT yang kami al., 1984) daripada glukosa dan glukosa-6-fosfat yang dihasilkan dari trehalosa yang
amati untuk lebah yang diberi makan diet EAA gratis adalah 1: 255mol / mol - nilai digunakan oleh serangga lain (Beenakkers et al.,
yang sangat mirip dengan perkiraan kami tentang IT untuk penjelajah lebah madu
( ∼ 1: 250 mol / mol, Paoli dkk., 2014a, b). Lebah pekerja memiliki kebutuhan yang 1984). Fruktosa-6-fosfat dan fruktosa-1,6-fosfat dapat diproduksi dari
signifikan akan karbohidrat untuk bahan bakar penerbangan (Joos et al., 1997; glukosa dan fruktosa, tetapi produksi fruktosa-1,6-fosfat - salah satu substrat
Suarez et al., 1996; Harrison dan Roberts, 2000; Darveau et al., 2014) dan juga untuk produksi ATP dalam siklus fruktosa-6-fosfat / fruktosa-1,6-fosfat - membutuhkan
memiliki tingkat metabolisme istirahat yang tinggi (Harrison dan Roberts, 2000). lebih sedikit langkah enzimatik daripada jika trehalosa digunakan sebagai
Sumber karbohidrat makanan utama mereka adalah nektar bunga: larutan yang substrat (Beenakkers et al., 1984; Berg et al., 2012). Untuk alasan ini, akan
mengandung AAs bebas tetapi komposisinya sebagian besar adalah sukrosa, lebih cepat dan membutuhkan ATP yang lebih sedikit Bombus sp.
glukosa dan fruktosa (Baker dan Baker, 1982; Petanidou et al., 2006; Nicolson dan menggunakan fruktosa daripada trehalosa sebagai karbohidrat
Thornburg, penyimpanan hemolimf. Penelitian selanjutnya tentang topik ini mungkin
2007). Jadi, berbeda dengan serangga herbivora atau karnivora, dengan cara memakannya mengungkapkan bahwa fruktosa memainkan peran penting dalam makanan
799
ARTIKEL PENELITIAN The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
mencari makan lebah karena alasan ini. Kami juga memberikan laporan pertama
Tabel 5. Rasio sumber makanan EAA: C
yang kami ketahui yang menunjukkan sukrosa dalam hemolimf serangga, tetapi
Sumber EAA diet EAA: C (w / w) EAA: C (m / m)
signifikansinya tidak diketahui.
Kasein 1: 500 -
Diet tinggi protein menyebabkan kematian pekerja eusosial 1: 250 -
1: 100 -
Selain membutuhkan diet tinggi karbohidrat untuk bahan bakar penerbangan,
1:75 -
lebah dalam penelitian kami, serta lebah madu dan semut pekerja, juga
1:50 -
menunjukkan tingkat kematian yang tinggi saat diberi makan diet tinggi protein 1:25 -
atau EAA (Pirk et al., 2010; Paoli et al., 2010; Paoli et al., 2010; Paoli et al., 2010; 1:10 -
Paoli et al., 2010; Paoli et al., 2010; Paoli et al., 2010; al., 2014a, b; Dussutour dan Asam amino esensial 1: 230 1: 100
Simpson, 2012) tetapi dapat bertahan hidup dengan diet sukrosa saja selama 1: 206 1:90
1: 153 1:75
beberapa hari (Paoli et al., 2014a, b). Faktanya, selain memiliki kebutuhan protein
1: 115 1:50
yang sederhana, lebah memiliki diversifikasi yang signifikan dari gen yang
1:57 1:25
mengkode enzim yang diperlukan untuk metabolisme gula (Kunieda et al., 2006). 1:23 1:10
Sebagian besar hewan yang diberi makanan dengan protein lebih tinggi daripada
IT mereka yang sebenarnya dapat mengubah AA makanan menjadi bahan bakar
melalui glukoneogenesis; kami tidak dapat menemukan banyak laporan di mana metionin, triptofan, leusin, lisin, valin, arginin, isoleusin, fenilalanin,
diet tinggi protein membunuh hewan secara langsung, meskipun beberapa asam
treonin dan histidin (semuanya dari Sigma-Aldrich). AAs ini penting
untuk banyak spesies serangga dan diidentifikasi sebagai ' penting '
amino yang melimpah, seperti metionin, telah dikaitkan dengan toksisitas atau
untuk lebah madu oleh de Groot (1953). Kedua sumber EAA dilarutkan dalam
penurunan umur (Harper et al., 1970; Grandison et al., 2009). Studi ini, dalam
0,5 mol l - 1 larutan sukrosa dibuat dengan air deionisasi. Diet dibuat untuk
kombinasi dengan data kami, menunjukkan bahwa kebutuhan untuk diet tinggi
protein spesifik terhadap rasio karbohidrat (P: C), di mana konsentrasi
karbohidrat adalah ciri umum pekerja sosial Hymenoptera dan dapat karbohidrat tetap konstan (0,5 mol l - 1 sukrosa) (Tabel 4 dan 5). Solusi kaseinat
menyarankan bahwa pekerja dalam garis keturunan ini telah mengalami didasarkan pada proporsi berat-ke-berat; solusi EAA didasarkan pada rasio
pertukaran metabolik yang mungkin telah meningkatkan kemampuan mereka molar dari EAAs-sukrosa seperti dalam Paoli et al. (2014a, b). Makanan kami
untuk menggunakan karbohidrat tetapi pada biaya untuk dapat menggunakan tidak memiliki proporsi EAA yang sama: setelah hidrolisis asam (lihat di
EAA secara efisien sebagai substrat untuk produksi energi. bawah), kaseinat dicerna dengan proporsi tertentu dari EAA dan non-EAA
yang didominasi oleh isoleusin, fenilalanin, asam glutamat dan tirosin (Tabel
BAHAN DAN METODE 4). Lebih lanjut, asam amino yang paling pekat dalam beberapa kasus tiga
Hewan percobaan atau empat kali lipat lebih tinggi daripada asam amino yang paling pekat.
Empat belas lebah besar yang dibesarkan secara komersial ( Bombus terrestris terrestris Sebaliknya, diet EAA kami hampir ekuimolar dengan proporsi yang sama w /
Linnaeus 1758) koloni (Koppert Ltd, Inggris dan Syngenta Bioline) disimpan dalam w.
ruangan dengan suhu terkontrol atau inkubator dipertahankan pada suhu 28 ° C dan Tabung diet ditimbang dan diganti setiap 24 jam. Untuk mengatur
kelembaban relatif 60% di Universitas Newcastle (Inggris). Sebelum percobaan, setiap penguapan, laju penguapan untuk setiap larutan diukur dalam kotak berisi
koloni memiliki akses ke sumber makanan cair yang disediakan oleh koloni dan larutan (tanpa lebah). Nilai rata-rata untuk setiap larutan dikurangi dari
∼ 3 g serbuk sari yang dikumpulkan lebah madu diberikan setiap hari untuk setiap bobot akhir untuk konsumsi setiap larutan diet. Nilai jumlah karbohidrat
koloni. Lebah pekerja betina dikeluarkan dari koloni dengan membuka lubang atau protein dan EAA yang dikonsumsi ditentukan dengan membagi berat
terbang dan menangkap lebah individu dalam botol plastik; lebah yang muncul larutan yang dikonsumsi dengan kepadatannya (1,06) untuk mendapatkan
dari pintu keluar koloni digunakan dalam percobaan. Lebah dibius sebentar di atas volumenya. Jumlah masing-masing zat terlarut dalam larutan kemudian
es sampai aktivitas dikurangi untuk memindahkannya ke ruang makan. Hanya diperoleh untuk volume larutan yang dikonsumsi; jumlah ini digabungkan
lebah betina yang digunakan; untuk mengidentifikasi betina, alat kelamin untuk memberikan nilai tunggal untuk konsumsi protein dan karbohidrat
diperiksa selama anestesi dingin untuk mengetahui keberadaan claspers jantan setiap hari. Konsumsi total adalah ukuran dari jumlah total yang dimakan
(Hannan et al., 2012). Pekerja dari semua ukuran ditangkap dan digunakan dalam selama periode 7 hari.
percobaan dan perawatan diberikan untuk mendistribusikannya secara acak di
Pengaruh diet pada komposisi hemolimf
seluruh perawatan.
Kami mengukur gula hemolimf dan AAs dengan tujuan untuk mengidentifikasi
bagaimana diet kaseinat atau EAAs mempengaruhi keadaan nutrisi dan karenanya
Kamar eksperimental menyeimbangkan nutrisi (Simpson dan Raubenheimer, 1993). Untuk melakukan
Lebah ditempatkan secara individual dalam kotak plastik (16,5 × 11 × 6,5 cm) dengan 20 ini, kami membatasi lebah individu selama 3 hari ke salah satu diet berikut:
lubang (2 mm) dibor di setiap ujung tutupnya untuk ventilasi. Pada tiga sisi kotak dibuat sukrosa saja, kaseinat rendah (1: 140 b / b), kaseinat tinggi (1:20 b / b), EAA rendah
lubang untuk memasukkan tabung microcentrifuge berukuran 2 ml; setiap tabung (1: 600 mol / mol), atau EAA tinggi (1:30 mol / mol) menggunakan protokol yang
memiliki empat lubang (2 mm) yang dibor dalam satu garis di salah satu sisi tabung dijelaskan di atas. Setelah 3 hari, hemolimf diambil dari setiap lebah. Lebah dibius
untuk memfasilitasi pemberian makan oleh lebah. Dua tabung diisi dengan larutan dingin, dan jarum suntik digunakan untuk memotong sayatan di belakang kepala
Jurnal Biologi Eksperimental
makanan; tabung yang tersisa diisi dengan air deionisasi. Selembar kertas laboratorium posterior oselus. Hemolimf dari individu lebah dikumpulkan menggunakan 10 µl
penyerap ditambahkan ke kotak perumahan, menutupi alasnya. Setelah ditempatkan di tabung kapiler dan dikeluarkan ke dalam tabung microcentrifuge 0,2 ml dengan
dalam kotak, lebah dibiarkan menyesuaikan diri pada suhu kamar sebelum larutan pakan volume yang sama yaitu 0,1 mol l. - 1
ditambahkan. Lebah kemudian dipindahkan ke ruang suhu terkontrol 28 ° C atau
asam perklorat menjadi hemolimf. Setiap sampel mewakili hemolimf
inkubator dan disimpan dalam kegelapan selama 7 hari, selama percobaan berlangsung.
dari satu lebah. Volume rata-rata hemolimf yang dikumpulkan dari
Setelah digunakan dalam pengobatan, lebah dibunuh dengan cara dibekukan - 20 ° C.
individu adalah 6,16 µl (volume hemolimf tidak berbeda antar
kelompok perlakuan). Sampel dibekukan - 20 ° C sampai analisis HPLC.
Untuk analisis HPLC, 4 µl campuran asam hemolimf-perklorat
Percobaan dan diet penyeimbang nutrisi dari setiap lebah diencerkan sampai 1:30 dengan gradien HPLC grade H. 2 O.
Untuk menguji bagaimana sumber makanan EAA mempengaruhi target asupan Setiap sampel melewati 0,45 μ m filter ujung jarum suntik (Whatman
lebah pekerja dewasa, setiap lebah disajikan dengan dua pilihan solusi: a Puradisc 4, nilon, 4 mm) sebelum analisis.
0,5 mol l - 1 larutan sukrosa dan larutan lain yang mengandung 0,5 mol l - 1 Dalam setiap sampel, kami menggunakan HPLC untuk mengukur glukosa,
sukrosa dengan protein (natrium kaseinat, Sigma-Aldrich, C8654) atau 10 trehalosa, fruktosa dan sukrosa dan rangkaian EAAs dan non-EAAs. Gula dihitung
EAA pada konsentrasi ekuimolar (Tabel 5). AAs yang digunakan adalah: menggunakan sistem HPLC Dionex DX500 dengan elektrokimia ED40
800
ARTIKEL PENELITIAN The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
unit deteksi. Fase gerak adalah 100 mmol l - 1 NaOH. Aliquot terpisah dari persamaan (GEEs) digunakan untuk menguji perbedaan gula hemolimf dan
sampel asam hemolimf-perklorat asli diencerkan menjadi 1: 200 total EAA dan non-EAA. Analisis diskriminan kanonik (CDA) digunakan untuk
dengan air deionisasi suling. Dua puluh mikroliter sampel ini mengidentifikasi perbedaan dalam perawatan dalam jumlah dan proporsi
diinjeksikan ke kolom Carbopac PA-100 (Dionex, Sunnyvale, California, AAs spesifik di hemolimf.
USA). Gula dielusi secara isokratis dengan 100 mmol l - 1 NaOH dengan
laju alir 1 ml min - 1. Profil elusi dianalisis dengan perangkat lunak Ucapan Terima Kasih
Chromeleon (Thermo Fisher Scientific). Penulis ingin berterima kasih kepada Steve Simpson atas komentarnya pada naskah, Kerry
Kami menghitung 21 AAs dalam sampel menggunakan sistem Dionex Ultimate Simcock atas bantuannya dengan pengumpulan hemolimf, Eileen Power atas bantuannya dengan
deteksi asam amino HPLC dan Sistem Biologi Koppert untuk menyumbangkan koloni lebah.
3000 RS yang dilengkapi dengan kolom Accucore RP-MS (Thermo Scientific) 150 ×
2,1 mm. Sebelum diinjeksikan ke kolom, 10 µl sampel yang diencerkan diencerkan
terlebih dahulu selama 1 menit dengan 15 µl 7,5 mmol l. - 1 o-phthaldialdehyde
Minat yang bersaing
(OPA) dan 225 mmol l - 1 3-mercaptopropionic acid (MPA) dalam 0,1 mol l - 1 sodium
Para penulis menyatakan tidak ada persaingan atau kepentingan finansial.
borat (Na 2 B 4 HAI 7 · 10H 2 O, pH 10,2), lalu dengan 10 µl 96,6 mmol l - 1
9-fluroenylmethoxycarbonyl chloride (FMOC) dalam 1 mol l - 1 asetonitril untuk
Kontribusi penulis
1 menit, dilanjutkan dengan penambahan 6 µl 1 mol l - 1 asam asetat. Volume akhir 30 µl DS melakukan dan merancang percobaan, menganalisis data dan merevisi naskah; PP
dari sampel yang diolah kemudian diinjeksikan ke dalam sistem HPLC. Pelarut elusi yang melakukan percobaan; SWN membantu merancang eksperimen dan merevisi naskah; GAW
digunakan adalah: A, asetonitril / metanol / air (45/45/45 v / v / v) dan B, merancang eksperimen, menganalisis data, dan menulis manuskrip.
10 mmol l - 1 Na 2 HPO 4, 10 mmol l - 1 Na 2 B 4 HAI 7 · 10H 2 O, 0,5 mmol l - 1 sodium
azida (NaN 3), disesuaikan dengan pH 7,8 dengan HCl pekat. Elusi kolom
terjadi pada laju aliran konstan 500 µl menit - 1 dengan gradien linier Pendanaan
dari 3 hingga 100% (v / v) eluen A dan 97 hingga 0% eluen B. Turunan asam amino Pekerjaan ini didanai bersama oleh hibah dari Biotechnology and Biological Sciences Research
Council, Natural Environment Research Council, Wellcome Trust, Departemen Lingkungan,
terdeteksi secara fluorometri (Ultimate 3000 RS Fluorescence Detector, Dionex,
Pangan, dan Urusan Pedesaan, dan Pemerintah Skotlandia di bawah Insect Pollinators Initiative
Thermo Fisher Scientific) dan profil elusi dianalisis menggunakan perangkat lunak
[BB / I000968 / 1 ke GAW dan
Chromeleon (Thermo Fisher Ilmiah).
SWN]. Disimpan di PMC untuk segera dirilis.
panas dalam lemari asam, dibuka tutupnya dan dipanaskan pada suhu 70 ° C Blatt, J. dan Roces, F. ( 2001). Kadar gula hemolimf dalam lebah madu yang mencari makan ( Apis
mellifera carnica): ketergantungan pada tingkat metabolisme dan pengukuran in vivo dari
untuk menguapkan asam. Setelah kering, 200 µl air tingkat gradien UHPLC
tingkat maksimal sintesis trehalosa. J. Exp. Biol. 204, 2709-2716.
deionisasi ditambahkan ke setiap sampel. Kedua sampel AA bebas
Blatt, J. dan Roces, F. ( 2002a). Kontrol proventrikulus pada lebah madu
(supernatan) dan AA yang terikat protein terhidrolisis (pelet tercerna) ( Apis mellifera carnica L.) I. Sebuah proses dinamis yang dipengaruhi oleh kualitas dan
disentrifugasi selama 1 menit dan disaring melalui filter ujung jarum suntik kuantitas pangan? J. Serangga Physiol. 48, 643-654.
0,45 µm (Whatman Puradisc 4, nilon, 4 mm). Blatt, J. dan Roces, F. ( 2002b). Kontrol proventrikulus pada lebah madu
( Apis mellifera carnica L.) II. Mekanisme umpan balik. J. Serangga Physiol. 48,
Analisis statistik 683-691.
Blouet, C. dan Schwartz, GJ ( 2010). Penginderaan nutrisi hipotalamus dalam pengendalian
Analisis dilakukan dengan menggunakan IBM SPSS v19. Jumlah makanan yang
homeostasis energi. Berperilaku. Res otak. 209, 1-12.
dikonsumsi (mg) dianalisis menggunakan analisis varians multivariat (MANOVA)
Boisen, S., Hvelplund, T. dan Weisbjerg, MR ( 2000). Profil asam amino ideal sebagai dasar evaluasi
dan analisis volume menggunakan analisis varian dua arah (ANOVA). Kedua protein pakan. Sci. Produksi Peternakan. 64, 239-251.
Jurnal Biologi Eksperimental
analisis tersebut memasukkan koloni dan ukuran lebah sebagai kovariat. Buch, S., Melcher, C., Bauer, M., Katzenberger, J. dan Pankratz, MJ ( 2008). Efek berlawanan dari
Š idák ' s post hoc tes digunakan untuk beberapa perbandingan. Data log alam diubah sebelum protein dan gula makanan mengatur target transkripsi dari pensinyalan peptida mirip insulin
analisis. (Perhatikan bahwa kami menggunakan berat lebah sebagai proksi untuk ukuran lebah drosophila. Metab Sel. 7, 321-332.
Carter, C., Shafir, S., Yehonatan, L., Palmer, RG dan Thornburg, R. ( 2006). Peran baru prolin dalam
berdasarkan analisis faktor yang mengidentifikasi bahwa berat lebah memiliki korelasi terkuat
nektar bunga tanaman. Naturwissenschaften 93, 72-79.
dengan empat parameter terukur lainnya: perut dan lebar dada, panjang kepala, total panjang
Clark, MG, Bloxham, DP, Holland, PC dan Lardy, HA ( 1973). Estimasi siklus substrat fruktosa
lebah.) ditentukan oleh post hoc perbandingan jumlah protein / EAA dan karbohidrat yang
difosfatase-fosfofruktokinase pada otot terbang
dimakan pada setiap perlakuan diet; perlakuan ransum yang tidak berbeda nyata pada keduanya Bombus affinis. Biokimia J. 134, 589-597.
dirata-ratakan untuk menentukan target asupan rasio P: C atau EAA: C. Data kelangsungan hidup Masak, SM, Awmack, CS, Murray, DA dan Williams, IH ( 2003). Apakah lebah madu ' preferensi
dianalisis menggunakan analisis regresi Cox (Coxreg) dengan perlakuan diet sebagai kovariat; mencari makan dipengaruhi oleh komposisi asam amino serbuk sari? Ecol. Entomol. 28, 622-627.
perbandingan antar kelompok dievaluasi dengan menggunakan ' indikator ' kontras. Rasio bahaya
Darveau, C.-A., Billardon, F. dan Be ́ ĺanger, K. ( 2014). Variasi intraspesifik dalam laju metabolisme
(HR) dihitung untuk setiap perbandingan terhadap kelompok indikator, yang selalu merupakan
penerbangan pada lebah bumblebee Bombus impatiens: pengulangan dan penentu
perlakuan EAA: C atau P: C paling encer. Estimasi umum
fungsional pada pekerja dan drone. J. Exp. Biol. 217, 536-544.
de Groot, AP ( 1953). Kebutuhan protein dan asam amino lebah madu ( Lebah
mellifera.dll L.). Physiol. Comparate et Oecologia 3, 197-285.
801
ARTIKEL PENELITIAN The Journal of Experimental Biology (2015) 218, 793-802 doi: 10.1242 / jeb.114249
Dussutour, A. dan Simpson, SJ ( 2009). Nutrisi komunal pada semut. Biol Saat Ini. Peters, JC dan Harper, AE ( 1985). Adaptasi tikus untuk diet yang mengandung berbagai tingkat
19, 740-744. protein: efek pada asupan makanan, konsentrasi asam amino plasma dan otak dan
Dussutour, A. dan Simpson, SJ ( 2012). Pekerja semut mati muda dan koloninya runtuh saat diberi metabolisme neurotransmitter otak. J. Nutr. 115, 382-398.
makanan tinggi protein. Proc. R. Soc. B berbagai. Sci. 279, 2402-2408. Pirk, CWW, Boodhoo, C., Manusia, H. dan Nicolson, SW ( 2010). Pentingnya jenis protein dan rasio
Tukang Kebun, MC dan Gillman, MP ( 2002). Rasa nektar: area ekologi penyerbukan yang protein terhadap karbohidrat untuk kelangsungan hidup dan aktivasi ovarium lebah madu
terabaikan. Oikos 98, 552-557. yang dikurung (Apis mellifera scutellata). Apidologie 41,
Grandison, RC, Piper, MDW dan Partridge, L. ( 2009). Ketidakseimbangan asam amino menjelaskan 62-72.
perpanjangan umur dengan pembatasan makanan di Drosophila. Alam 462, Purpera, MN, Shen, L., Taghavi, M., Munzberg, H., Martin, RJ, Hutson, SM
1061-1064. dan Morrison, CD ( 2012). Metabolisme asam amino rantai cabang yang terganggu mengubah
Hannan, M., Alqarni, A., Owayss, A. dan Engel, M. ( 2012). Lebah kayu besar di Arab Saudi tengah, perilaku makan dan meningkatkan ekspresi neuropeptida orexigenic di hipotalamus. J.
Endocrinol. 212, 85-94.
dengan catatan biologi Xylocopa sulcatipes Maa (Hymenoptera, Apidae, Xylocopinae). ZooKeys 201,
Raubenheimer, D. dan Simpson, SJ ( 1993). Geometri pemberian makan kompensasi pada
1-14.
belalang. Anim. Berperilaku. 45, 953-964.
Harper, AE, Benevenga, NJ dan Wohlhueter, RM ( 1970). Pengaruh konsumsi asam amino dalam
Raubenheimer, D. dan Simpson, SJ ( 1997). Model integrasi keseimbangan nutrisi: aplikasi untuk
jumlah yang tidak proporsional. Physiol. Putaran. 50, 428-558.
serangga dan vertebrata. Nutr. Res. Putaran. 10, 151-179.
Harrison, JF dan Roberts, SP ( 2000). Respirasi penerbangan dan energik. Annu.
Roubik, DW, Yanega, D., Aluja, S., Buchmann, SL dan Inouye, DW ( 1995). Tentang pengambilan
Pdt. Physiol. 62, 179-205.
nektar yang optimal oleh beberapa lebah tropis (Hymenoptera: Apidae).
Hendriksma, HP, Oxman, KL dan Shafir, S. ( 2014). Pengorbanan asam amino dan karbohidrat oleh
Apidologie 26, 197-211.
pencari nektar lebah madu dan implikasinya bagi tanaman - interaksi penyerbuk. J. Serangga
Sanahuja, JC dan Harper, AE ( 1963). Pengaruh pola asam amino diet terhadap pola asam amino
Physiol. 69, 56-64.
plasma dan asupan makanan. Saya. J. Physiol. 204, 686-690.
Inouye, DW dan Waller, GD ( 1984). Tanggapan lebah madu (Apis Mellifera) terhadap larutan asam
Schwartz, GJ ( 2013). Penginderaan leusin sentral dalam pengendalian homeostasis energi. Endokrinol.
amino yang meniru nektar bunga. Ekologi 65, 618-625.
Metabol. Clin. North Am. 42, 81-87.
Joos, B., Lighton, JRB, Jon, FH, Suarez, RK dan Roberts, SP ( 1997). Pengaruh tekanan oksigen
Simcock, NK, Grey, HE dan Wright, GA ( 2014). Asam amino tunggal dalam sukrosa memodulasi
ambien pada kinerja penerbangan, metabolisme, dan kehilangan air pada lebah madu. Physiol. pemberian makan dan pembelajaran asosiatif pada lebah madu.
Zool. 70, 167-174. J. Serangga Physiol. 69, 41-48.
Jordi, J., Herzog, B., Camargo, SMR, Boyle, CN, Lutz, TA dan Verrey, F. Simpson, SJ dan Raubenheimer, D. ( 1993). Analisis multi-level perilaku makan: geometri
(2013). Asam amino spesifik menghambat asupan makanan melalui area postrema atau aferen keputusan nutrisi. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B
vagal. J. Physiol. 591, 5611-5621. 342, 381-402.
Karnani, MM, Apergis-Schoute, J., Adamantidis, A., Jensen, LT, de Lecea, L., Simpson, SJ dan Raubenheimer, D. ( 2012). Sifat Nutrisi: Pemersatu
Fugger, L. dan Burdakov, D. ( 2011). Aktivasi neuron orexin / hipokretin sentral oleh asam Kerangka dari Adaptasi Hewan hingga Obesitas Manusia. Princeton, NJ: Princeton University
amino makanan. Neuron 72, 616-629. Press.
Kunieda, T., Fujiyuki, T., Kucharski, R., Foret, S., Ament, SA, Toth, AL, Simpson, SJ dan Simpson, CL ( 1992). Mekanisme pengendalian modulasi oleh asam amino
Ohashi, K., Takeuchi, H., Kamikouchi, A., Kage, E. et al. ( 2006). Gen metabolisme karbohidrat hemolimf dari respon gustatory pada belalang. J. Exp. Biol.
dan jalur pada serangga: wawasan dari genom lebah madu. 168, 269-287.
Serangga Mol. Biol. 15, 563-576. Simpson, SJ, Simmonds, MSJ, Blaney, WM dan Jones, JP ( 1990). Pemilihan makanan pengganti
Laeger, T., Reed, SD, Henagan, TM, Fernandez, DH, Taghavi, M., terjadi pada larva Locusta migratoria tapi tidak
Addington, A., Munzberg, H., Martin, RJ, Hutson, SM dan Morrison, CD Spodoptera littoralis setelah kurang makan satu kali selama pemberian makan ad libitum.
(2014). Leusin bekerja di otak untuk menekan asupan makanan tetapi tidak berfungsi sebagai Physiol. Entomol. 15, 235-242.
Simpson, SJ, Sibly, RM, Lee, KP, Behmer, ST dan Raubenheimer, D.
sinyal fisiologis dari protein makanan rendah. Saya. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 307, R310-R320.
(2004). Optimal mencari makan saat mengatur asupan banyak nutrisi. Anim. Berperilaku. 68, 1299-1311.
Lee, KP ( 2007). Efek interaktif kualitas protein dan ketidakseimbangan makronutrien pada
Solon-Biet, SM, McMahon, AC, Ballard, JWO, Ruohonen, K., Wu, LE,
keseimbangan nutrisi dalam herbivora serangga. J. Exp. Biol. 210,
Cogger, VC, Warren, A., Huang, X., Pichaud, N., Melvin, RG dkk. ( 2014). Rasio makronutrien,
3236-3244.
bukan asupan kalori, menentukan kesehatan kardiometabolik, penuaan, dan umur panjang
Morrison, CD, Reed, SD dan Henagan, TM ( 2012). Regulasi homeostatis dari asupan protein:
pada tikus yang diberi makan ad libitum. Metab Sel. 19, 418-430.
mencari mekanisme. Saya. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 302, R917-R928.
Staples, JF, Koen, EL dan Laverty, TM ( 2004). ' Siklus yang sia-sia ' enzim di
otot terbang lebah Amerika Utara. J. Exp. Biol. 207, 749-754.
Nicolson, S. dan Thornburg, R. ( 2007). Kimia nektar. Di Nektar dan Nektar
Suarez, RK, Lighton, JR, Joos, B., Roberts, SP dan Harrison, JF ( 1996). Metabolisme energi, kapasitas
(ed. S. Nicolson, M. Nepi dan E. Pacini), hlm. 215-264. Belanda: Springer.
fluks enzimatik, dan laju fluks metabolik pada lebah madu terbang. Proc. Natl. Acad. Sci.
Paoli, PP, Wakeling, LA, Wright, GA dan Ford, D. ( 2014a). Diet
Amerika Serikat 93, 12616-12620.
Proporsi asam amino esensial dan Sir2 mempengaruhi umur lebah madu.
Tasei, J.-N. dan Aupinel, P. ( 2008). Nilai nutrisi dari 15 serbuk sari tunggal dan campuran serbuk
USIA 36, 1239-1247. sari yang diujikan pada larva yang dihasilkan oleh pekerja lebah (Bombus terrestris,
Paoli, PP, Donley, D., Stabler, D., Saseendranath, A., Nicolson, SW, Hymenoptera: Apidae). Apidologie 39, 397-409.
Simpson, SJ dan Wright, GA ( 2014b). Keseimbangan gizi asam amino esensial dan karbohidrat Zanotto, FP, Raubenheimer, D. dan Simpson, SJ ( 1996). Kadar asam amino hemolimf dan gula
lebah madu pekerja dewasa bergantung pada usia. Asam amino 46, 1449-1458. pada belalang yang diberi makanan bergizi tidak seimbang. J. Comp. Physiol. B 166, 223-229.
Petanidou, T., Van Laere, A., Ellis, WN dan Smets, E. ( 2006). Apa yang membentuk komposisi asam Zhong, H., Marcus, SL dan Li, L. ( 2005). Hidrolisis asam dengan bantuan gelombang mikro
amino dan gula dalam nektar bunga Mediterania? Oikos 115, dikombinasikan dengan kromatografi cair MALDI MS / MS untuk identifikasi protein. Selai. Soc.
155-169. Spektrum Massa. 16, 471-481.
802