LANGKAH UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI NANDA

1. Preparasi Pertumbuhan Bakteri Uji (Staphylococcus aureus) dan Preparasi Uji Aktivitas
Pembuatan medium NA
a. Timbang bubuk media NA sebanyak 20 gr/L (tergantung merk, ini tak contohin merknya (Merck
Milipore bu Sigma Aldarich). Ini tergantung ya kamu mau buat berapa petri, hitungannya adalah
1 petri ± 20 mL. Contoh : aku mau buat 20 petri medium NA. Berapa gram bubuk NA yang harus
aku timbang?
W1/V1 = W2/V2
20 gr /1000 mL = x / (20 mL x20 petri)
20 gr/ 1000 mL = x / 400 mL
x = 400*20/1000
x = 8 gram
Jadi yang aku timbang adalah 8 gram
b. Kemudian larutkan dalam aquades, karena aku mau bikin 20 petri jadi aquades yang
ditambahkan 400 mL.
c. Masukkan magnet stirer, kemudian aduk dan panaskan dengan hot plate stirer hingga mendidih
dan homogen.
d. Sterilisasi pada suhu 121◦C, kemudian tuangkan dalam petri. Tunggu mengeras, kemudian
simpan dalam kulkas jika belum mau digunakan.
Pembuatan Medium NB
a. Timbang bubuk medium NB sebanyak 8 gr/L, (tergantung merk, ini tak contohin merknya (Merck
Milipore bu Sigma Aldarich).
b. Larutkan dalam aquades sesuai dengan kebutuhan (rumus perhitungan sama dengan pembuatan
medium NA, tetapi biasanya volume yg digunakan pertabung reaksi 7 mL/tergantung kebutuha
kayake kalo kamu 10 mL).
c. Masukkan magnet stirer, kemudian aduk dan panaskan dengan hot plate stirer hingga mendidih
dan homogen.
d. Tuangkan sebanyak 7mL pertabung reaksi. Tutup rapat tabung reaksi yang sudah diisi dengan
kapas penutup.
e. Sterilisasi pada suhu 121◦. Jika sudah dingin simpan dalam kulkas jika belum mau digunakan.
2. Kultur bakteri Staphylococcus aureus dari stock
a. Stock biasanya dalam keadaan beku, biarkan stock mencair dalam suhu dingin (nanti stock
dimasukkan dalam box yang diisi dengan es agar stock tidak rusak).
b. Ambil 1 ose bakteri dalam stock dengan jarum ose, lalu streak sebanyak 3 pengenceran dalam
media NA. Setiap pengenceran, jarum ose dipanaskan. Inkubasi 24 jam/ 37◦C.

Pengenceran pertama Pengenceran kedua Pengenceran ketiga

c. Kemudian ambil 1 koloni bakteri dari agar dengan ose dan celupkan koloni dalam medium NB
hingga koloni jatuh.
d. Inkubasi 24 jam/ 37◦C.
3. Perhitungan konsentrasi Stapylococcus aureus (metode OD dengan spektrofotometri)
a. Bakteri yang sudah ditumbuhkan pada NB diukur OD kekeruhannya untuk menentukan estimasi
yang diinginkan.
b. Ambil 0,5 mL NB yang sudah dikultur bakteri (vortex dulu) dan masukkan ke dalam kuvet.
c. Buat larutan blanko dengan NB steril dan masukkan 0,5 mL dalam kuvet.
d. Spektro kedua kuvet tersebut untuk melihat nilai ODnya.
e. OD kekeruhan bakteri = OD kekeruhan terbaca-OD blanko
f. Biasanya OD untuk bakteru uji adalah 0,1, untuk mencari OD tersebut biasanya dilakukan
pengenceran kekeruhan bakteri dengan menambahkan NB steril pada kultur bakteri hingga OD
kekeruhannya menjadi 0,1. Penambahan NB steril dilakukan dengan rumus perhitungan
M1V1=M2V2.
g. Setelah ketemu OD yang diinginkan, bakteri siap digunakan untuk uji aktivitas.
h. Untuk mengetahui estimasi besar bakteri dalam CFU/mL, kultur yang sudah disesuaikan ODnya
dapat ditumbuhkan pada medium medium NA dengan metode spread untuk menghitung jumlah
koloninya. (Dalam jurnalmu tadi yang diharapkan adalah konsentrasi 10 5-108 CFU/mL.
4. Uji Aktivitas Antibakteri Staphylococcus aureus
 a. Bakteri yang sudah disesuaikan ODnya kemudian ditambahkan diambil 1 ose dan dikultur
kembali dalam 10 mL NB dan diinkubasi di waterbath shaker dengan kecepatan 150 rpm selama
24 jam.
b. Kemudian diambil 1mL kultur bakteri dari NB dan dikultur pada medium NA dengan metode
spread selama 30 menit.
c. Setelah itu, tambahkan sampel film ukuran 3x3 cm di atas kultur medium NA.
d. Dihitung zona hambatnya (biasanya zona bening).

Catatan : Nda jajal golek jurnal lain juga, soale iki sk tk pahami seko chat WA mu mau ngene sk bagian uji
aktivitas, aku gur ngganti dengan cara OD udu MCFarland. Nk meh jajal nggo MCFarland yo rapopo,
neng aku rung begitu paham nk MCFarland.