KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum Wr. Wb

Petunjuk praktikum Farmakokinetik ini disusun sebagai salah satu pedoman bagi para
mahasiswa untuk dapat lebih memahami ilmu farmakokinetika melalui praktek di laboratorium.
Pemahaman ilmu farmakokinetika ini akan memberikan penjelasan mengenai tentang nasib obat di
dalam tubuh, dan mahsiswa memiliki bekal dalam melakukan penelitian di bidang farmakokinetik.

Buku petunjuk ini mungkin masih jauh dari sempurna, karena itu berbagai saran dan
masukan sangat penyusun harapkan untuk dapat menyempurnakan buku ini.

Wassalamu’alaikum Wr. Wb

Banjarbaru, Juli 2018

Tim Dosen Penyusun

 DAFTAR ISI
Kata Pengantar
Percobaan 1. Validasi Metode Kadar Paracetamol
Percobaan 2. Penetapan Waktu Pengambilan Cuplikan
Percobaan 3. Penetapan Kadar Paracetamol Setelah Pemberian Dosis Tunggal Menggunakan Data
Darah
Percobaan 4. Pembuatan Profil Kadar Paracetamol dalam Darah
Percobaan 5. Penentuan {arameter Farmakokinetik Obat Salisilat Dengan data Urin
Percobaan 6. Penggunaan Parameter Farmakokinetika Dalam Penelitian Interaksi Obat
Percobaan 7. Penggunaan Parameter Farmakokinetika dalam Penelitian Klinis/ TDM
 Tabel I konversi perhitungan dosis antar jenis hewan

( Laurance & Bachrach, 1964)

Hewan
Mencit Tikus Marmut Kelinci Kucing Kera Anjing Manusia
dan BB
20 g 200 g 400 g 1.5 kg 2.0 kg 4.0 kg 12.0 kg 70 kg
rata-rata
Mencit
1.0 7.0 12.29 27.8 28.7 64.1 124.2 387.9
20 g
Tikus
0.14 1.0 1.74 3.9 4.2 9.2 17.8 60.5
200 g
Marmut
0.08 0.57 1.0 2.25 2.4 5.2 10.2 31.5
400 g
Kelinci
0.04 0.25 0.44 1.0 1.06 2.4 4.5 14.2
1.5 kg
Kucing
0.03 0.23 0.41 0.92 1.0 2.2 4.1 13.0
2.0 kg
Kera
0.016 0.11 0.19 0.42 0.45 1.0 1.9 6.1
4.0 kg
Anjing
0.008 0.06 0.10 0.22 0.24 0.52 1.0 3.1
12.0 kg
Manusia
0.0026 0.018 0.031 0.07 0.76 0.16 0.32 1.0
70.0 kg
Tabel II. Volume maksimum larutan obat

Jenis Hewan dan Cara pemberian dan volume maksimum dalam milliliter
BB i.v i.m i.p s.c p.o

Mencit (20 – 30 0.5 0.05 1.0 0.5 – 1.0 1.0

g)
1.0 0.1 2.0 – 5.0 3.0 – 5.0 5.0
Tikus (100 g) 2.5
- 0.1 1.0 – 5.0 2.5
Hamster (50 g) 2.0 – 5.0 5.0
- 0.25 2.0 10.0
Marmut (250 g) 2.0
2.0 0.5 10.0 – 20.0 10.0
Merpati (300 g) 5.0 –
5.0 – 10.0 0.5 10.0 – 20.0 10.0 20.0
Kelinci (2,5 kg) 5.0 –
5.0 – 10.0 1.0 20.0 – 50.0 50.0
10.0
Kucing (3 kg)
10.0 – 20.0 5.0 100.0
10.0
Anjing (5 kg)

Catatan : volume yang diberikan = volume ½ volume maksimum

 PERCOBAAN 1
VALIDASI METODE KADAR PARACETAMOL

TUJUAN

Mahasiswa mampu melakukan validasi metode kadar paracetamol dalam darah

DASAR TEORI

Farmakokinetika adalah ilmu yang mempelajari nasib obat di dalam tubuh, yang meliputi absorpsi,
distribusi, eliminasi. Harga parameter akan berubah bila organ yang mengatur tersebut terganggu (
Shargel and Vu, 1999). Parameter farmakokinetika obat diperoleh berdasarkan dasil pengurkuran
kadar obat utuh dan atau metabolitnya di dalam cairan hayati ( darah, urin, saliva, atau cairan tubuh
lainnya). Oleh karena itu, agar nilai-nilai parameter farmakokinetika obat dapat dipercaya, metode
penetapan kadar harus memenuhi berbagai kriteria yaitu meliputi perolehan kembali ( recovery),
presisi, dan akurasi. Persyaratan yang dituntut bagi suatu metode tersebut dapat memberikan nilai
perolehan kembali yang tinggi ( 75-90% atau lebih ), kesalahan acak dan sistematik yaitu kurang
dari
10%. Kepekaan dan selektivitas merupakan kriteria lain yang penting dalam, hal mana nilainya
tergantung pula dari alat ukur yang dipakai.

Metode penetapan kadar obat dalam cairan hayati menjadi sangat penting sebagai salah satu kunci
dalam mendapatkan nilai parameter farmakokinetika, karena apabila metode tersebut tidak valid,
nilai konsentrasi obat dalam cairan hayati juga menjadi tidak tepat. Oleh karenanya pada setiap
penelitian farmakokinetika selalu didahului dengan validasi dan optimasi metode penetapan kadar
obat dalam cairan hayati. Masing-masing langkah optimasi analisis obat dalam cairan hayati
tergantung pada metode penetapan akdar tiap-tiap obat.

ALAT DAN BAHAN

Bahan :Etil asetat pa, methanol pa, paracetamol, akuades, TCA 5%

Alat : Alat gelas laboratorium, timbangan analitik, kandang hewan, Spuit oral 10 mL, Effendrof,
Spektrofotometer UV (Shimadzu UV-2450 PC®), Sentrifuge (Hettich®), Mikropipet (Rainin®),
Hot Plate (SJ Analytics GmbHD-55122 Mainz®), Silet, Pisau cukur (Gilette®), Holder, Tabung
darah beserta anti koagulan EDTA 3 mL (Vakuntainer®), Vortex mixer, dan Oven (Memmert®).

CARA KERJA

a. Penetapan panjang gelombang maksimum paracetamol

1. Digunakan larutan baku paracetamol dengan kadar 6 ppm dan diukur resapannya pada
panjang gelombang 200 nm sampai 300 nm

b. Pembuatan kurva baku paracetamol

Ditimbang baku pembanding parasetamol sebanyak 10 mg dan di larutkan dengan methanol
15 mL dalam gelas beaker, larutan dimasukkan kedalam labu takar 100 mL kemudian
ditambahkan akuades hingga 100 mL dan diperoleh larutan induk baku parasetamol dengan
kadar 10mg/100 mL atau setara dengan 100 ppm. Dari larutan induk tersebut dibuat variasi
konsentrasi sebesar 4, 6, 8, 10, 12 dan 13 ppm.
c. Linearitas dan Rentang
Dihitung persamaan regresi linear paracetamol dengan model y = bx + a
 d. Uji akurasi
Dilakukan sebanyak dua kali yaitu uji akurasi pada sampel tanpa preparasi dan pada sampel
yang melalui proses preparasi. Uji akurasi sampel tanpa preparasi dilakukan dengan cara
membuat seri konsentrasi larutan baku parasetamol 4 ppm, 12 ppm dan 13 ppm kemudian
diukur serapannya menggunakan spektrofotometri UV, masing-masing seri konsentrasi di
replikasi sebanyak 3 kali. Uji akurasi pada sampel yang melalui proses preparasi dilakukan
dengan cara membuat larutan baku parasetamol 4 ppm ; 6 ppm ; 13 ppm, yang kemudian
dipreparasi sesuai dengan prosedur penetapan kadar parasetamol dalam darah yang
digunakan pada penelitian ini. Masing masing seri konsentrasi direplikasi sebanyak 3kali.

e. Uji Presisi
Dihitung nilai koefisien variasi dari kadar parasetamol yang diperoleh dari hasil uji
akurasi.

f. Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi

Diukur respon baku pembanding sebanyak 3 kali replikasi kemudian dihitung simpangan
baku respon baku pembanding dan nilai LOD dan LOQ metode yang
digunakan.

PEROLEHAN KEMBALI

Hitung perolehan kembali ( recovery) dan kesalahan sistemik untuk tiap besaran kadar

𝑘������𝑟 ��𝑒 𝑟 𝑢��𝑢𝑟

Perolehan kembali = 100%
𝑘������𝑟 ��𝑖𝑘����𝑎ℎ𝑢𝑖
Recovery merupakan tolak ukur efisiensi analisis

Kesalahan sistemik merupakan tolak ukur inakurasi penetapan akdar

KESALAHAN ACAK

Hitung kesalahan acak untuk tiap besaran kadar

��𝑖��𝑝 ��𝑛𝑔��𝑛 𝑏 ��𝑘𝑢
Kesalahan acak = ℎ����𝑔𝑎 𝑟������−𝑟����𝑎𝑥 100%

Kesalahan acak merupakan tolak ukur inprecision suatu analisis dan dapat bersifat positif dan
negatif. Kesalahan acak edentik dengan variabilitas pengukuran dan dicerminkan oleh tetapan
variasi.
 PERCOBAAN 2

PENETAPAN WAKTU PENGAMBILAN CUPLIKAN

TUJUAN

Mahasiswa dapat menentukan penetapan waktu pengambilan cuplikan.

DASAR TEORI

Tahapan penting selanjutnya setelah memahami cara analisa obat dalam cairan hayati adalah
menetapkan waktu pengambilan cuplikan. Setelah memahami analisis obat dalam cairahn hayati
dan diikuti dengan perkiraan model kompartemen. Keterkaitan kedua faktor ini sedemikian rupa
sehingga kesalahan waktu pengambilan cuplikan dapat menyebabkan kesalahan dalam penentuan
model kompartemen.

Kesalahan dalam penetapan moel farmakokinetika tersebut dapat dihindari. Pada penentuan waktu
sampling untuk obat yang diberikan secara inavena, titik waktu pertama pengambilan obat
hendaknya dilakukan sedemikian mungkin sesudah pemberian obat. Oleh karena itu, perlu adanya
percobaan pendahuluan untuk menetapkan waktu pengambilan cuplikan. Jika kinetika obat setelah
pemberian ekstravaskuler mengikuti model dua kompartemen terbuka, maka dianjurkan bahwa
distribusi pencuplikan adalah sebagai berikut: tiga titik pada tahap absorpsi, sekitar puncak
distribusi dan eliminasi. Pencuplikan pada tahap distribusi tidak diperlukan jika kinetiknya
mengikuti model satu kompartemen terbuka. Lama pengambilan cuplikan pada sampel darah
dilakukan 3-5 kali t ½ eliminasi obat. Jika sampel yang digunakan urin maka lama pengambilan
cuplikan 7-10 kali t ½ eliminasi.

Percobaan pendahuluan dilakukan sebaiknya dengan pemberian intavena. Data yang diperoleh
dibuat grafik kadar obat dalam darah vs waktu pada kertas grafik semilog atau plot kecepatan
eksresi vs waktu pada kertas grafik normal ( pada data urin). Kinetika obat mengikuti model satu
kompartemen jika kurva merupakan garis lurus sedangkan untuk model 2 kompartemen kurva yang
berbentuk bifasik.

ALAT DAN BAHAN

Bahan dan peralatan yang digunakan untuk penetapan kadar paracetamol sama seperti
yang tercantum pada percobaan 1

CARA KERJA

Dua ekor tikus jantan dipuasakan selama 18 jam kemudian diberi larutan parasetamol dosis
tunggal 9 mg/200 gBB secara oral. Cuplikan darah diambil pada menit ke- 10, 20, 30, 40, 60, 90,
120,180, 240, 300 dan 360 melalui vena ekor tikus. Cuplikan sampel darah tiap waktu diproses
sesuai dengan prosedur penetapan kadar parasetamol dalam darah yang digunakan pada penelitian
ini. Setelah itu, ditetapkan harga T1/2 untuk penetapan jadwal sampling sebenarnya.
 PENETAPAN KADAR PARACETAMOL SETELAH PEMBERIAN DOSIS TUNGGAL
MENGGUNAKAN DATA DARAH

Agar mahasiswa mampu menetapkan dan menghitung parameter farmakokinetika obat setelah
pemberian dosis tunggal berdasarkan data kadar obat dalam darah plasma vs Waktu

DASAR TEORI

Parameter farmakokinetika adalah besaran yang diturunkan secara matematis dari model berdasar
hasil pengukuran kadar obat utuh dan atau metabolitnya dalam darah, urin, atau cairan hayati
lainnya.

Kegunaan menetapkan parameter farmakokinetika suatu obat adalah untuk mengkaji kinetika
absorpsi, distribusi, dan eliminasinya di dalam badan. Dimana hasilnya memiliki arti penting dalam
menetapkan aturan dosis.

ALAT DAN BAHAN

Bahan :Etil asetat pa, methanol pa, paracetamol, akuades, TCA 5%

Alat : Alat gelas laboratorium, timbangan analitik, kandang hewan, Spuit oral 10 mL, Effendrof,
Spektrofotometer UV (Shimadzu UV-2450 PC®), Sentrifuge (Hettich®), Mikropipet (Rainin®),
Hot Plate (SJ Analytics GmbHD-55122 Mainz®), Silet, Pisau cukur (Gilette®), Holder, Tabung
darah beserta anti koagulan EDTA 3 mL (Vakuntainer®), Vortex mixer, dan Oven (Memmert®).

CARA PERCOBAAN

Hewan uji dipuasakan selama 18 jam, kemudian diberikan parasetamol tunggal secara oral
sebanyak
9 mg/200 gBB. Hewan uji pada kelompok 1 (kontrol PCT) hanya diberikan obat parasetamol,
Pengambilan sampel darah dilakukan dari vena ekor tikus pada menit ke- 10, 20, 30, 40, 60,90,
120,
180, 240, 300 dan 360. Sebanyak 0,5 Ml darah hewan uji ditampung di dalam tabung berisi EDTA.
Ditambahkan 1 mL TCA 5%, disentrifugasi selama 5 menit kecepatan 2500 RPM, diambil
beningan atau plasmanya. Plasma ditambahkan dengan 2 mL etil asetat kemudian divortex, bagian
beningannya diambil, diuapkan etil asetatnya sampai diperoleh residu parasetamol. Residu
dilarutkan kembali dengan 2 mL metanol, diukur absorbansi larutan dengan menggunakan alat
spektrofotometer UV pada panjang gelombang
243 nm (Rusdiana, et al., 2009) Dari data absorbansi, dihitung kadar parasetamol pada tiap
cuplikan waktu menggunakan persamaan regresi linear kurva baku parasetamol.
 PERCOBAAN 4
PEMBUATAN PROFIL KADAR PARACETAMOL DALAM DARAH

TUJUAN

Agar mahasiswa mampu menetapkan profil kadar pracetamol dalam darah

DASAR TEORI

Parameter farmakokinetika adalah besaran yang diturunkan secara matematis dari model berdasar
hasil pengukuran kadar obat utuh dan atau metabolitnya dalam darah, urin, atau cairan hayati
lainnya.

CARA KERJA

Berdasarkan data darah yang didapat dari setiap waktu, dapat dibuat suatu kurva Lnkonsentrasi
plasma (Cp) terhadap waktu (t)Konsentrasi plasma sebagai sumbu y dan waktu sebagai sumbu x.
Dari kurva tersebut dapat menentukan profil farmakokinetik (Pakarti, 2009; Rusdianaet al., 2009)
 PERCOBAAN 5

PENENTUAN PARAMETER FARMAKOKINETIK OBAT SALISILAT DENGAN

DATA URIN

A. TUJUAN

Untuk menentukan parameter farmakokinetik obat salisilat setelah pemberian dosis tunggal
menggunakan data eksresi obat lewat urin.

B. DASAR TEORI

Parameter farmakokinetika dapat ditentukan dari data kadar obat dalam darah atau dari
kadar obat dalam urin sebagai obat utuh atau metabolit aktif.keberadaan obat dalam tubuh
(Time course of drug in the body) ditentukan oleh proses ADME. Data laju eksresi obat
dalam urin analog dengan data kadar obat dalam plasma setiap waktu. Oleh karena itu
parameter farmakokinetika suatu obat dapat ditentukan dengan menggunakan data urin.

C. Bahan
- Asam asetilsalisilat (asetosal)/tablet aspirin
- Natrium salisilat p.a
- Ferri nitrat p.a
- Merkuri klorida p.a
- Asam klorida p.a
- Air suling

D. Alat
- Spektrofometri
- Alat pemusing
- Vortex mixture
- Venoject
- Labu ukur
- Pipet volume
E. CARA KERJA
1. Pembuatan pereaksi Thinder
Menimbang merkuri klorida sebanyak 40 gram dilarutkan dalam air panas 850 ml
dan didihkan sampai larut, Kemudian ditambahkan 120 ml asam klorida 1N dan 40
gram ferri nitrat. Jika semua ferri nitrat sudah dilarutkan, volume larutan dibuat
1000 ml dengan air suling

2. Pembuatan larutan baku kerja salisilat

Membuat larutan baku induk 1000 mcg/ml dari 116 mg natrium salisilat, dilarutkan
dalam 100 ml air suling, Membuat larutan baku kerja salisilat dengan cara
mengencerkan larutan baku induk dengan air suling sampai didapat larutan dengan
kadar 20, 50, 100, 150, dan 200 mcg/ml

3. Penentuan panjang gelombang maksimum

Panjang gelombang maksimum ditentukan dengan menggunakan larutan

baku kerja 100 dan 200 mcg/ml, Mereaksikan larutan baku kerja 100 dan 200
mcg/ml sesuai prosedur penetapan kadar salisilat dan amati nilai serapan pada
panjang gelombang antara 530 – 560 nm. Membuat kurva serpan terhadap panjang
gelombang dari larutan baku kerja 100 dan 200 mcg/ml pada kertas grafik berskala
sama! Tentukan lamda (panjang gelombang) maksimum!

4. Pembuatan kurva baku

Melakukan pengamatan serapan dari larutan baku kerja pada 2 yang telah
direaksikan seperti pada metode penetapan kadar salisilat dalam urin dengan
metode dari Trinder, pada panjang gelombang maksimum yang telah didapat dari
3. Sebagai kontrol menggunakan air suling ditambah 5 ml pereaksi Trinder.
Membuat tabel hasil pengamatan dan membuat kurva kadar larutan baku kerja
terhadap serapan pada kertas grafik berskala sama! Hitung koefisien korelasinya,
dan buat persamaan garisnya!
5. Penetapan kembali kadar salisilat yang ditambahkan dalam urin (recovery)

Membuat larutan baku induk 1000 mcg/ml dari 116 mg, natrium salisilat, dilarutkan
dalam 100 ml urin blanko dari 3. Buatlah larutan baku kerja salisilat dengan cara
mengencerkan larutan baku induk dengan urin blanko sampai didapat larutan dengan
kadar 20,50,100,150 dan 200 mcg/ml. Digunakan larutan baku kerja dengan kadar
20,50,100,150 dan 200 mcg/ml.!

6. Pengumpulan sampel urin

Membuat jadwal penampungan sampel urin (dengan mempertibangkan waktu

paruh eliminasi salisilat,didapat dari pustaka) selama kurang lebih 7 x t ½.
Melakukan penampungan urin,catat secara tepat volume dan waktu
penampungannya

7. Penetapan kadar salisilat dalam urin

Tetapkan kadar salisilat dalan cuplikan urin dengan metode dari Trinder dan amati
serapannya pada panjang gelombang maksimum. Memasukkan data serapan ke
persamaan garis recovery untuk mendapatkan data kadar salisilat dalam urin dari
setiap waktu pengamb
 PERCOBAAN 6

PENGGUNAAN PARAMETER FARMAKOKINETIKA DALAM

PENELITIAN INTERAKSI OBAT

TUJUAN

1. Mahasiswa mampu memahami aplikasi penggunaan parameter

farmakokinetika dalam penelitian interaksi obat
2. Mahasiswa mampu menentukan dan membahas perbedaan
farmakokinetika primer dalam menjelaskan sebuah kemungkinan kejadian
interaksi obat.

CARA PERCOBAAN

ALAT DAN BAHAN

Bahan :Etil asetat pa, methanol pa, paracetamol, kurkumin, alcohol, akuades,
TCA 5%

Alat : Alat gelas laboratorium, timbangan analitik, kandang hewan, Spuit oral 10
mL, Effendrof, Spektrofotometer UV (Shimadzu UV-2450 PC®), Sentrifuge
(Hettich®), Mikropipet (Rainin®), Hot Plate (SJ Analytics GmbHD-55122
Mainz®), Silet, Pisau cukur (Gilette®), Holder, Tabung darah beserta anti
koagulan EDTA 3 mL (Vakuntainer®), Vortex mixer, dan Oven (Memmert®).

CARA PERCOBAAN

Hewan uji dipuasakan selama 18 jam, pada masing-masing kelompok diberikan

kurkumin dan alkohol 30 menit sebelum diberikan parasetamol tunggal secara
oral sebanyak 9 mg/200 gBB. Hewan uji pada kelompok 1 (kontrol PCT) hanya
diberikan obat parasetamol, Pengambilan sampel darah dilakukan dari vena ekor
tikus pada menit ke- 10, 20, 30, 40, 60,90, 120, 180, 240, 300 dan 360. Sebanyak
0,5 Ml darah hewan uji ditampung di dalam tabung berisi EDTA. Ditambahkan 1
mL TCA 5%, disentrifugasi selama 5 menit kecepatan 2500 RPM, diambil
beningan atau plasmanya. Plasma ditambahkan dengan 2 mL etil asetat kemudian
divortex, bagian beningannya diambil, diuapkan etil asetatnya sampai diperoleh

13
residu parasetamol. Residu dilarutkan kembali dengan 2 mL metanol, diukur
absorbansi larutan dengan menggunakan alat spektrofotometer UV pada panjang
gelombang
243 nm (Rusdiana, et al., 2009) Dari data absorbansi, dihitung kadar parasetamol
pada tiap cuplikan waktu menggunakan persamaan regresi linear kurva baku
parasetamol.

14
 PERCOBAAN 7

PENGGUNAAN PARAMETER FARMAKOKINETIKA DALAM

PENELITIAN KLINIS / TDM

TUJUAN

1. Mahasiswa mampu memahami aplikasi penggunaan parameter

farmakokinetika dalam penelitian klinis
2. Mahasiswa mampu menentukan dan membahas perbedaan
farmakokinetika primer dalam menjelaskan sebuah kemungkinan kejadian
klinis.

PERCOBAAN

1. Masing-masing kelompok mencari jurnal yang berhubungan dengan judul

percobaan ini.
2. Masing-masing kelompok menganalisis jurnal tersebut
3. Masing-masing kelompok mempresentasikan hasil diskusi jurnal tersebut.

15
 DAFTAR PUSTAKA

1. Shargel, L amd Yu, 2004, Applied Biopharmaceutical and

pharmacokinetics, 5th ed, Appleton and Lange, Norwalk, Connecticut.
2. Ritchell, W.A, 1992, Handbook of Basic Pharmacokinetics, 2 nd ed, Drug
Intelligence Publication, Inc, Hamilton.

3. Bonosari, J, 2007, Pengaruh Susu Kedelai dosis 50 mg/KgBB terhadap

bioavaibilitas teofilin pada tikus putih jantan, Skripsi, Jurusan farmasi,
fakultas MIPA UII.
4. Simaremare, P, Andrie M, Wijianto, B. 2 0 1 3 . Effect of Durian
Juice (Durio zibethinus Murr) TO Pharmacokinetic Profile of
Paracetamol on Wistar Male Rats (Rattus Norvegicus L.).

16