LAPORAN PRAKTIKUM ANALISA MIKROBIOLOGI

I. Judul : Analisa Pewarnaan Gram

II. Tujuan :

• Siswa mampu menganalisa kandungan glukosa dari suatu bahan pangan

menggunakan metode Luff Schoorl

• Siswa mampu menganalisa kadar karbohidrat dengan metode kuantitatif

dengan cara menghitung kadar gula pereaksi dalam sampel roti gabin

III. Teori Dasar :

Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah suatu metode empiris untuk
membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, yakni gram positif dan gram negatif,
berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka. Bakteri Gram-negatif adalah bakteri yang
tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif
akan mempertahankan zat warna metil ungu gelap setelah dicuci dengan alkohol, sementara
bakteri gram negatif tidak. Pada uji pewarnaan Gram, suatu pewarna penimbal (counterstain)
ditambahkan setelah metil ungu, yang membuat semua bakteri gram negatif menjadi berwarna
merah atau merah muda.

a.  Bakteri Gram Negatif

Bakteri gram negative adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada
metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan warna ungu gelap
setelah dicuci dengan alcohol, sementara bakteri gram negative tidak.

b.  Bakteri Gram Positif

Bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna metil ungu sewaktu
proses pewarnaan Gram. Bakteri jenis ini akan berwarna biru atau ungu di bawah mikroskop,
sedangkan bakteri gram negative akan berwarna merah muda

IV. Alat dan Bahan :

ALAT BAHAN
Autoclave Kristal violet

Oven Iodin
 Inkubator Safranin

Hot plate NaOH

Lampu Spiritus HCl

Neraca Analitik Indikator PH

Mikroskop Aluminium Foil

Kawat ose Kapas penyumbat

Spatula

Pipet tetes

Cawan Petri

Botol semprot

V. Prosedur dan Data Pengamatan :

Prosedur Pengamatan
Membuat apusan secara aseptis
1. Menyiapkan preparat, jarum ose,
pembakar spiritus, biakan bakteri dan
aquades

2. Mengambil aquades dengan menggunakan

jarum ose dan taruh di permukaan preparat
yang telah di sterilkan dengan alkohol

3. Mensterilkan jarum ose ke pembakar

spiritus

4. Mengambil contoh dari biakan koloni

menggunakan jarum ose.

5. Menjaga agar tidak mengambil contoh

terlalu tebal, cukup hingga aquades sedikit
keruh

6. Membiarkan olesan kering

7. Mengamati preparat biakan koloni dengan
mikroskop.

Pewarnaan Gram
1. Menyiapkan apusan/olesan

2. Meneteskan pewarna Kristal violet pada

olesan kemudian biarkan selama satu
menit

3. Membilas objek dengan aquades

4. Meneteskan olesan dengan iodin,

miringkan ke kanan dan kiri untuk
mengeringkan. Meneteskan kembali iodin
dan biarkan selama 1 menit

5. Membilas kembai dengan aquades

6. Meneteskan alkohol pada olesan secara

merata dan menambahkan kembali
alkohol sampai mengalir selama 5 – 10
detik

7. Segera bilas dengan aquades

8. Meneteskan safranin dan membiarkan

selama kurang lebih 30 detik. Membilas
dengan aquades

9. Mengeringkan secara perlahan dengan

menggunakan tisu

10. Mengamati di bawah mikroskop dari

perbesaran kecil