Isolasi dan Identifikasi… (Aprilita dkk.

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA XANTON

DARI EKSTRAK ETIL ASETAT KULIT BATANG SULATRI
(Calophyllum soulattry Burn.f.)

Aprilita Rina Yanti, Harfia Mudahar, dan Ibnu Irawan

Fakultas Farmasi Universitas 17 Agustus 1945 Jakarta

Abstract
Isolation and identification of xanthones substance from ethyl acetate fraction of C. soulattry
Burn.f. Guttiferae bark extract had been carried out. The extract was separated by column
chromatography with silica gel as stationary phase and combination of hexane and ethyl acetate
as mobile phase. Using organoleptic manner, colour reaction, thin layer chromatography, UV
spectrophotometer and FT IR spectrophotometer, the pure isolate was identified as isocowanole.

Keywords: C. soulattry Burn.f. bark Guttiferae, xanthones, isocowanole

PENDAHULUAN ALAT DAN BAHAN

Di bidang kesehatan telah banyak obat yang
diketahui dengan jelas struktur molekulnya dan
digunakan secara global dalam pengobatan berbagai
penyakit. Tetapi mengingat lebih dari 250.000
spesies tumbuhan tinggi terdapat di muka bumi ini,
sehingga logis untuk menduga bahwa masih banyak
obat berguna yang akan ditemukan dari dunia
tumbuhan. (1)
Di antara sekian banyak jenis tumbuhan
obat tersebut terdapat genus Calophyllum yang terdiri
dari 100 spesies, salah satu di antaranya adalah C.
soulattry Burn.f. Di Indonesia ditemukan lebih dari
25 jenis Calophyllum dan tumbuh tersebar di seluruh
hutan tropis Nusantara. Sulatri (C. soulattry Burn.f.)
umumnya tumbuh liar di hutan dataran rendah dari
tepi pantai sampai dataran rendah yang lebih tinggi
(300 – 700 meter di atas permukaan laut). Di
Indonesia bagian-bagian dari tumbuhan ini telah
digunakan sebagai obat tradisional seperti daun, kulit
batang, biji dan bunga. Seduhan daunnya untuk
mencuci mata yang meradang, rebusan kulit
batangnya untuk penyakit rematik, bijinya untuk obat
kudis dan borok (2,3,4,5). Famili tumbuhan
Guttiferae ini umumnya mengandung resin, minyak
atsiri, steroid, tannin dan saponin (2,4). Karena
potensi tumbuhan genus Calophyllum ini sangat
menonjol., maka perlu dilakukan penelitian terhadap
genus ini. Dalam hal ini dilakukan isolasi dan
identifikasi senyawa kimia dari kulit batang C.
soulattry Burn.f .
Pelaksanaan penelitian diawali dengan
melakukan uji pendahuluan (Skrining fitokimia/
pendahuluan) terhadap ekstrak etil asetat.
Berdasarkan hal tersebut maka dicoba untuk
mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa xanton
yang terdapat dalam sulatri khususnya pada ekstrak
etil asetat.
158
Alat
Alat sohxlet, kromatografi kolom,
kromatografi lapis tipis, spektrofotometer UV,
spektrofotometer FT IR.
Bahan
Kulit batang C. soulattry Burn.f. diperoleh
dari Departemen Kehutanan RI, Jakarta Selatan.
METODOLOGI
Pengambilan kulit batang dilakukan dengan
cara mengelupas atau menyayat kulit batang atau
cabang tanaman yang tua.
Setelah kulit batang atau cabang
dikumpulkan kemudian dibersihkan dari kotoran dan
dipotong-potong, lalu dicuci dengan air bersih dan
dikeringkan di tempat sejuk sampai bebas dari air
bekas cucian. Potongan kulit cabang yang sudah
bersih dikerok membujur dari sisi yang berhadapan
dengan menggunakan pisau yang tajam. Kemudian
kulit dikelupas dari kayunya dengan menggunakan
alat yang tumpul dan bukan terbuat dari logam. Kulit
batang dikeringkan dengan cara diangin-anginkan
sampai kering yang ditandai dengan kulit batang
mudah dipatahkan, setelah itu diserbukkan. Sebagian
dari kulit batang yang telah dibersihkan, dilakukan
pemeriksaan skrining fitokimia yang mencakup
pemeriksaan minyak atsiri, lemak, alkaloid, steroid
dan triterpenoid, flavonoid, saponin dan tannin
berdasarkan metode baku (6,7).
Selanjutnya dilakukan isolasi simplisia
kering kulit batang sulatri. Isolasi dilakukan dengan
metode soxhletasi bertingkat menggunakan pelarut
n-heksan dan etil asetat. Ekstraksi dilakukan dengan
cara memasukkan simplisia kulit batang sebanyak 50
gram ke dalam alat soxhlet, basahi dengan pelarut n-
heksan 200 ml yang ditampung dalam labu alas bulat
500 ml dan dipanaskan sampai pelarut n-heksan di
dalam alat soxhlet jernih. Ekstraksi dilakukan
 Jurnal Bahan Alam Indonesia ISSN 1412-2855 Vol. 3, No. 1, Januari 2004
sebanyak empat kali dengan cara dan perlakuan yang
sama. Sari n-heksan dipekatkan dengan
menggunakan rotavapor sampai diperoleh ekstrak
yang kental.
Simplisia yang telah disari dengan n-
heksan dikeringkan, setelah kering di soxhlet dengan
pelarut etil asetat dengan cara yang sama seperti
ekstraksi dengan pelarut n-heksan. Dari proses yang
dilakukan diperoleh ekstrak etil asetat kental,
kemudian 1/3 ekstrak kental diambil dan diuapkan di
atas penangas air sampai seluruh pelarut yang tersisa
habis menguap dan terbentuk ekstrak kering untuk
digunakan pada proses selanjutnya.
Ekstrak kental yang diperoleh dipisahkan
dengan kromatografi kolom menggunakan fase gerak
n-heksan: etil asetat secara gradien dari perbandingan
100:0 sampai perbandingan 0:100 dengan
menggunakan fase diam silika gel.
Tetesan filtrat ditampung dengan
Erlenmeyer masing-masing 100 ml dan filtrat
tersebut diperiksa dengan KLT menggunakan eluen
n-heksan : etil asetat (7 : 3) dengan penampak bercak
H2SO4 10%.
Identifikasi senyawa hasil isolasi
dilakukan secara organoleptik dan fisika,
kromatografi lapis tipis menggunakan plat silika gel
GF 254 dengan perbandingan n-heksan : etil asetat (3
: 2), sebagai pendeteksi digunakan lampu UV
(Camag®) 254 nm dan penampak noda H2SO4 10 %.
Pemeriksaan fisika kimia menggunakan
spektrofotometer infra merah dan Pemeriksaan
elusidasi struktur menggunakan Spektrofotometer IR
5300 Biorad Merlin menggunakan pereaksi geser
yaitu: NaOH 2 N, larutan A1C13 5%, campuran
larutan AlCl3 5 % dan HCl 50 %, Na asetat serta
serbuk Na asetat dan asam borat.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pemeriksaan skrining fitokimia
diketahui bahwa kulit batang dari tanaman C.
soulattry Burn.f. ini mengandung senyawa steroid,
triterpenoid, flavonoid, saponin, tanin. Berdasarkan
pustaka dari beberapa jenis Calophyllum yang telah
diteliti telah berhasil diisolasi senyawa golongan
triterpenoid, flavonoid, xanton dan kumarin. (8,9)
Hasil ekstraksi dari 300 g simplisia kering
kulit batang C. soulattry Burn.f. dengan metode
soxhletasi dihasilkan ekstrak kental sebanyak 54,84
gram dengan rendemen ekstrak sebesar 18,28%.
Pemilihan metode ekstraksi dengan cara soxhletasi
karena memungkinkan dapat menarik senyawa
xanton dari kulit batang C. soulattry Burn.f. tersebut
secara maksimal. Pelarut yang digunakan untuk
menarik senyawa xanton dari kulit batang C.
soulattry Burn.f. adalah pelarut yang bersifat semi
polar, seperti etil asetat.
Ekstrak etil asetat diidentifikasi dengan cara
KLT mendapatkan 3 bercak yang terpisah
menggunakan eluen n–heksan : etil asetat (9:1). Dari
hasil KLT menunjukkan masih banyaknya senyawa
yang terkandung dalam ekstrak etil asetat, dimana
bercak ungu menunjukkan steroid atau triterpenoid
dan bercak berwarna kuning menunjukkan flavonoid
atau xanton (5,10,). Maka untuk memisahkannya
dilakukan kromatografi kolom.
Terhadap ekstrak etil asetat yang diperoleh
kemudian dilakukan pemisahan dengan kromatografi
kolom menggunakan eluen n–heksan : etil asetat
secara gradien dengan perbandingan 100 : 0 sampai 0
: 100. Filtrat yang diperoleh ditampung dalam
Erlenmeyer tiap 100 ml, filtrat-filtrat yang
mempunyai hasil KLT sama digabung menjadi
fraksi.
Setelah diidentifikasi secara KLT, maka
diperoleh fraksi yang mempunyai 1 noda yaitu pada
fraksi b (filtrat 14-19) berwarna kuning yang
menunjukkan senyawa xanton. Fraksi b berupa
kristal berwarna kuning dilakukan KLT mendapatkan
bercak berwarna kuning tua hasil isolasi belum
merupakan senyawa murni, oleh karena itu dilakukan
pemurnian dengan melarutkan kristal dengan pelarut
n-heksan sampai diperoleh isolat yang murni dengan
ditandai bercak pada plat KLT berwarna kuning
lemah.
Identifikasi senyawa hasil isolasi secara
organoleptik menunjukkan bahwa isolat merupakan
kristal berwarna kuning, rasa pahit dan tidak berbau
dengan titik lebur sebesar 93°C, merupakan satu
karakteristik untuk senyawa xanton yaitu Isocowanol
(3,11).
Identifikasi secara kimia terhadap senyawa
hasil isolasi menggunakan pereaksi FeCl3
menghasilkan warna hijau, ini menunjukkan reaksi
warna untuk xanton.
Hasil kromatografi lapis tipis ekstrak kering
yang sudah di-kromatografi kolom, memiliki satu
noda berwarna merah kecoklatan yang dilihat dengan
sinar UV (Camag®) 254 nm, dengan menggunakan
eluen n–heksan: etil asetat (7 : 3) dan n-heksan : etil
asetat (8 : 2). Setelah disemprotkan dengan
penampak noda H2SO4 10 % memberikan warna
kuning muda kehijauan yang dilihat dengan lampu
UV (Camag®) 254 nm menunjukkan adanya senyawa
xanton..
Elusidasi struktur dengan spektrofotometer
UV dengan menggunakan pelarut metanol diperoleh
spektrum dengan tiga puncak (256, 270, 330)
merupakan salah satu dari karakteristik dan
spesifikasi untuk senyawa xanton. Kemudian
dilanjutkan dengan penambahan pereaksi geser
NaOH 2 N terjadi pergeseran batokromik pada
daerah 330 – 350 nm menunjukkan adanya gugus
OH, selanjutnya sampel yang dilarutkan dalam
159
Isolasi dan Identifikasi… (Aprilita RY, dkk.)

metanol (pro analisa) ditambahkan AlCl3 5% terjadi
pergeseran batokromik pada daerah 330-360 nm
menunjukkan adanya gugus OH pada daerah C1,
terjadi perubahan. Kemudian campuran tersebut
ditambahkan HCl 50% terjadi pergeseran. Larutan
sampel dalam metanol ditambah serbuk Na asetat
lalu diperiksa dengan spektrofotometer UV terjadi
pergeseran batokromik pada daerah 330-340 nm
terjadi subtitusi gugus OH pada C3 dan C6 kemudian
dari campuran tersebut ditambahkan asam borat tidak
terjadi pergeseran. Dari semua data pergeseran yang
diperoleh merupakan data murni dari senyawa
tunggal hasil isolasi.
Data hasil spektrofotometer UV dari
senyawa tunggal yang diperoleh, dibandingkan
dengan data dari literatur senyawa xanton yang sudah
ada. Dari hasil perbandingan diperoleh adanya
persamaan data dengan senyawa xanton yaitu
Isocowanol (3, 11).

Tabel I. Perbandingan hasil spektrofotometer UV senyawa isolat dengan senyawa

xanton (isocowanol)

Absorbansi (nm)
Absorbansi (nm)
No Pereaksi Senyawa xanton
senyawa Isolat
(Isocowanol) (3,11)
1. Metanol 256, 270, 330 257,314, 354
2. Metanol + NaOH 242, 270, 350 240, 270, 372
3. Metanol + AlCl3 254, 268, 350 235, 267, 344, 409
4. Metanol + AlCl3 + HCL 252, 270, 332 267, 279, 338, 405
5. Metanol + Na. Asetat 242, 270, 340 240, 361
6. Metanol + Na. Asetat + AlCl3 252, 270, 340 257, 315, 358

Tabel II. Perbandingan hasil spektrofotometer FT IR senyawa isolat dengan

senyawa xanton (isocowanol)

Bilangan
Ikatan yang Bilangan gelombang
gelombang
menyebabkan Senyawa Xanton
Senyawa Isolat
absorpsi (Isocowanol) (cm-1) (3,11)
(cm-1)

OH 3450, 3175 3446, 3178

C–H 2962, 2920 2961, 2918
(CH - alifatik) 1645 1646
Aromatik 1578, 1468 1577, 1461
C-O 1379, 1243, 1115 1381, 1245, 1118

Hasil isolasi senyawa tunggal yang KESIMPULAN

diperoleh setelah dibersihkan dilakukan pengujian
dengan Spektrofotometer FT IR diperoleh hasil
absorpsi pada rentang daerah 3356 cm-1, 1578 cm-1,
1448 cm-1, dan absorbansi pada regang daerah 1373
cm-1 – 1115 cm-1 berturut-turut merupakan tegangan
absorbansi dari gugus – OH, C – H, C = O, C = C
dan C – O. Dari percobaan, diperoleh hasil yang
sama dengan absorbansi regangan yang dihasilkan
dari literatur xanton, memiliki kesamaan dengan data
dari senyawa xanton golongan Isocowanol (3,11).
Dari data yang dihasilkan dari senyawa
tunggal kulit batang C. soulattry Burn.f. dengan
menggunakan pelarut etil asetat, meliputi percobaan
dan identifikasi secara organoleptik, kimia, KLT,
Spektroskopi UV, dan Spektroskopi FT. IR, maka
diduga senyawa yang terkandung dalam kulit batang
C. soulattry Burn.f. tersebut adalah senyawa xanton
yaitu Isocowanol.

160
 Jurnal Bahan Alam Indonesia ISSN 1412-2855 Vol. 3, No. 1, Januari 2004
DAFTAR RUJUKAN
1. Syamsul, A., Peranan Tumbuhan Hutan Tropis
Dalam Pengembangan Obat-Obatan, Prosiding
Simposium Nasional I Tumbuhan Obat dan
Aromatik, 1996
2. Burkil, I.H, A dictionary of The Economic
Product of Malaya Peninsula, Government of
The Malay States by The Crown Agents for The
Colonies Millbank, London, S.W., 1935, 406 –
411.
3. Govindachari.R.T, N. Viswanathan, B.R., Pai,
R. Rao and Srinivasan, Triterpen of
Calophyllum inophyllum, Tetrahedron, 1967,
1901 –1910.
4. Heyne. K, Tumbuhan Berguna Indonesia, Jilid
III, Cetakan ke-1, Badan Litbang Kehutanan
Jakarta, 1987, 1374 – 1380.
5. Lemmens. R.H.M.J, I. Soerianegara, Plants
Resources of South – East Asia, Prosea, Bogor
Indonesia, 1994, 114 – 119.
6. Harbone. J. B, Metode Fitokimia Penuntun Cara
Modern Menganalisis Tumbuhan, ITB,
Bandung, 1988, 4-26.
7. Linskens, H. L., & H. F. Jackson, Modern
Methods of Plant Analysis, vol. 15, Springer
Verlaag, Budapest, 1994, 105.
8. Akpentina. S.S, Pemeriksaan Penggolongan
Senyawa Kimia dari Ekstrak Petroleum Eter,
Kloroform dan Metanol Kulit Batang
Nyamplung (Calophyllum inophyllum) Serta Uji
Aktivitas Terhadap Beberapa Jenis Bakteri
Gram Positif dan Gram Negatif, Skripsi,
Fakultas Farmasi UNTAG`45 Jakarta, 1988.
9. Graham. J. B. and Hiok Huang Lee, Xanton
from Guttiferae, Review Article Number 43,
Department of Chemistry, National University
of Singapore, 1988, 967-994.
10. Stahl E., Analisis Obat Secara Kromatografi
dan Mikroskopik, Diterjemakan oleh Kosasih
Padmawinata dan Iwang Sudiro, ITB, Bandung,
1985, 129- 194.
11. Sultanbawa. M. U. S, Xantonods of Tropical
Plants, Thetrahedron Report Number 84,
Departemen of chemistry, University of
Peradeniya, Sri Langka, 1979, 1465-1501.
161