Ekotoksikologi dan Keselamatan Lingkungan 216 (2021) 112158

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Ekotoksikologi dan Keamanan Lingkungan

beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/ecoenv

Efek toksik fluorene-9-bisphenol terhadap ganggang hijau Chlorella vulgaris dan nasib
metaboliknya

Huijun Zhang 1 , Tengda Ding 1 , Xu Luo, Juying Li *

Laboratorium Utama Shenzhen untuk Kimia Lingkungan dan Remediasi Ekologi, Sekolah Tinggi Kimia dan Teknik Lingkungan, Universitas Shenzhen, Shenzhen
518060, Tiongkok

ARTICLEINFO ABSTRAK

Diedit oleh: Dr G. Liu Fluorene-9-bisphenol (BHPF), alternatif bisphenol A (BPA), baru-baru ini menarik perhatian karena penggunaannya
yang luas dan potensi toksisitasnya. Namun, efek toksik dan nasib BHPF pada alga air tawar masih harus dijelaskan.
Kata kunci: Dalam studi ini, dampak BHPF terhadap Chlorella vulgaris dieksplorasi dan pemindahan dan bioakumulasi BHPF oleh
Fluorene-9-bisphenol (BHPF) Chlorella vulgaris diselidiki. Hasil menunjukkan bahwa C. vulgaris sensitif terhadap BHPF pada konsentrasi> 1 mg L - 1,
Toksisitas
dan peroksidasi lipid meningkat secara signifikan di bawah paparan
Menghapus

Akumulasi
s> 0,1 mg BHPF
signifikan L. sel
dalam - 1. Stres oksidatif disebabkan
alga sebesar> 0,5 mg BHPFoleh
L - 1.BHPF, karena
Tingkat aktivitas superoksida
penghapusan dismutase
BHPF meningkat secara(SOD) menurun secara
signifikan
C. vulgaris
dengan penambahan ganggang. Selain itu, bertambahnya akumulasi BHPF pada alga pada konsentrasi yang berkisar antara
0,5 sampai 5 mg L - 1 diamati dan mungkin berkontribusi untuk peningkatan toksisitas BHPF C. vulgaris. Hasil
ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS / MS) menunjukkan bahwa tiga metabolit
BHPF teridentifikasi dalam sel alga, yang dapat menimbulkan efek tak terduga di lingkungan akuatik.

1. Perkenalan
Bisphenol A (BPA) adalah salah satu bahan kimia yang mengganggu endokrin
dan menimbulkan potensi toksisitas bagi organisme non-target di lingkungan
akuatik. Akibatnya, produksi dan penggunaan BPA secara bertahap dilarang atau
dibatasi di beberapa negara maju ( Otoritas Keamanan Pangan Eropa (EFSA), 2015 ).
Serangkaian analog BPA dengan demikian digunakan untuk menggantikan BPA
dalam produksi yang disebut 'BPA-free ' plastik, dan secara bertahap terdeteksi di
perairan alami ( Song dkk., 2014; Yamazaki dkk., 2015; Jin dan Zhu, 2016; Zhou dkk.,
2020 ). Fluorene-9-bisphenol (BHPF), salah satu pengganti BPA yang umum
digunakan, banyak digunakan dalam produksi lapisan pelindung, enkapsulasi
semikonduktor, dan matriks komposit ( Liu dkk., 2008; Dai dkk., 2009 ), yang
mengarah ke sejumlah besar BHPF di lingkungan. Misalnya, konsentrasi BHPF bisa
mencapai 81,47 ng L - 1 dalam botol plastik ( Zhang dkk., 2017 ) dan 0,067 ng L - 1 di
Sungai Liaohe provinsi Liaoning di Cina ( Jin dan Zhu, 2016 ). Meskipun BHPF
ditemukan di perairan alami dengan konsentrasi rendah, hal ini menimbulkan
kekhawatiran yang besar karena pembuangan yang terus menerus ke dalam air
dan potensi toksisitas bagi organisme akuatik. Contohnya, Sun dkk. (2020) telah
melaporkan bahwa BHPF sebesar 200 μ g L - 1 dapat menyebabkan malformasi
fenotipik larva ikan zebra, bahkan mempengaruhi
pacaran ikan zebra jantan dan betina pada 350 μ g L - 1 ( Mi dkk., 2019 ). Alga,
produsen utama yang penting, biasanya digunakan sebagai indikator sensitif
untuk pencemaran air ( OECD, 2011; Zhang dkk., 2012 ). Memahami efek toksik
BHPF terhadap ganggang dapat membantu mengevaluasi risiko ekologisnya.
Studi tentang penghilangan bisphenol oleh alga tidak hanya penting untuk
pengendalian polusi tetapi juga membantu untuk menjelaskan mekanisme
toksisitasnya. Saat ini, sebagian besar bisphenol termasuk BPA, bisphenol AP,
bisphenol F dan bisphenol P dapat dibuang di instalasi pengolahan air limbah kota
(IPAL) menggunakan pengolahan air limbah tradisional, tetapi beberapa bisphenol
seperti bisphenol S, bisphenol AF, bisphenol E dan bisphenol B sulit untuk
menghapus ( Wang dkk., 2019; Frankowski dkk., 2020 ), yang menyebabkan
pelepasannya secara terus menerus ke perairan alami. Banyak penelitian
menunjukkan bahwa biodegradasi adalah metode yang efisien dan lingkungan
untuk menghilangkan bisphenol tahan api ini di lingkungan akuatik. Misalnya,
bisphenol B dapat dihilangkan secara efisien oleh bakteri Cupriavidus basilensis dengan
efisiensi penghilangan 62% ( Zühlke dkk., 2020 ). Tetrabromobisphenol A (TBBPA)
dapat dihilangkan seluruhnya dalam waktu 10 hari oleh alga hijau Scenedesmus
quadricauda dan Coelastrum sphaericum ( Chen et al., 2009). Namun, degradasi
polutan organik yang tidak sempurna dalam alga dapat terjadi

* Penulis yang sesuai.

Alamat email: jyli@szu.edu.cn (J. Li).
1 Dua penulis pertama memberikan kontribusi yang sama.

https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2021.112158
Diterima 12 November 2020; Diterima dalam bentuk revisi 12 Maret 2021; Diterima 14 Maret 2021
Tersedia online 30 Maret 2021
0147-6513 / © 2021 Diterbitkan oleh Elsevier Inc. Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY-NC-ND ( http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ).
H. Zhang dkk.
Gambar 1. Pengaruh BHPF terhadap laju pertumbuhan C. vulgari s selama eksposur 7d. Bilah
kesalahan mewakili kesalahan standar dari mean (n = 3). Tanda bintang *, ** dan
* * * menunjukkan signifikan ( p < 0,05), sangat signifikan ( p < 0,01) dan sangat
signifikan ( p < 0,001) perbedaan antara kontrol dan perlakuan, masing-masing.
metabolit dengan aktivitas yang tidak diketahui, misalnya, persistensi dan
toksisitas tinggi, yang menyebabkan potensi efek merugikan lingkungan di
perairan alami. Namun, sedikit informasi yang tersedia tentang degradasi BHPF
dalam alga dan kemungkinan metabolitnya masih belum diketahui.
Dalam penelitian ini, ganggang hijau Chlorella vulgaris dipilih untuk
mengeksplorasi toksisitas dan biodegradasi BHPF. Nasib metabolisme BHPF
dalam alga juga dipelajari dengan menggunakan spektrometri massa tandem
kromatografi cair kinerja ultra (UPLC-MS / MS). Temuan ini bermanfaat untuk
memahami keberadaan BHPF di perairan alami, yang juga dapat menjadi dasar
untuk penilaian risikonya.
Gambar 2. Pengaruh BHPF terhadap kandungan klorofil dan rasio pigmen C. vulgari s setelah pemaparan 72 jam. Bilah kesalahan mewakili kesalahan standar dari mean (n = 3). Kolom
dengan tanda bintang *, ** dan *** menunjukkan signifikan ( p < 0,05), sangat signifikan ( p < 0,01) dan sangat signifikan ( p < 0,001) perbedaan antara kontrol dan perlakuan,
masing-masing.
2
Ekotoksikologi dan Keselamatan Lingkungan 216 (2021) 112158
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Bahan kimia
BHPF (Standar analitik, kemurnian 97%) dibeli dari Merck (Darmstadt, Hessen,
Jerman). Larutan stok BHPF (10 g L - 1) disiapkan dalam metanol. Semua pelarut
organik yang digunakan adalah kelas HPLC dan bahan kimia lain yang digunakan
untuk media alga diperoleh dari Sinopharm Group Co. Ltd. (Shanghai, China)
dengan tingkat analitik.
2.2. Uji pertumbuhan alga
Alga air tawar Chlorella vulgaris berasal dari laboratorium kami dan
dibudidayakan di media BG11 seperti yang dilaporkan penelitian kami
sebelumnya ( Ding dkk., 2017a ). BHPF dengan konsentrasi 0, 0.1, 0.5, 1, 5, 10 dan
20 mg L - 1 ditambahkan di suspensi alga, masing-masing. Konsentrasi metanol
dalam kultur alga tidak melebihi 0,2%, dan tidak beracun bagi alga dalam kondisi
ini. Alga diinkubasi pada usia 23 ± 1 ◦ C selama 168 jam dalam inkubator. Lampu
pijar yang berfungsi sebagai sumber cahaya disetel ke 4000 lx dengan siklus
terang / gelap otomatis 12/12 jam. Jumlah sel alga dihitung dengan penghitung
sel otomatis (Countstar, IC1000, Shanghai) pada 24, 48, 72, 120, dan 168 jam.
Tingkat pertumbuhan alga spesifik μ ( d - 1) ditentukan oleh jumlah sel alga pada
waktu inkubasi yang berbeda, yang identik dengan penelitian kami sebelumnya ( Ding
dkk., 2017b ). Kandungan klorofil dari C. vulgaris ditentukan dengan menggunakan
metode ekstraksi metanol, yang dilaporkan oleh Xiong dkk. (2016) . Singkatnya,
sebanyak 10 mL suspensi alga dikumpulkan dan kemudian diekstraksi dengan
methanol 90% dalam water bath pada suhu 60 ml. ◦ C selama 15 menit. Setelah itu,
ekstrak disentrifugasi pada 3506 g selama 10 menit dan supernatan dianalisis
dengan spektrofotometer UV2450 (Shimadzu, Kyoto, Jepang) di bawah panjang
gelombang masing-masing 665, 652 dan 470 nm. Berat kering alga dihitung
dengan jumlah sel alga (1 × 10 5 sel mL - 1 ≈ 0,0184 mg mL - 1, Zhang dkk., 2013 ).
2.3. Uji aktivitas enzim antioksidan dan peroksidasi lipid
Suspensi alga (10 mL) dipanen setelah 72 jam setelah sentrifugasi pada 3506 g
selama 20 menit. Pelet alga dicuci dua kali
H. Zhang dkk. Ekotoksikologi dan Keselamatan Lingkungan 216 (2021) 112158

MERUMPUT (Sebuah)
120
KUCING

100
*
Aktivitas enzim (U mg-1)

80 **

**

60
10

0
0 0.1 0,5 1 5 10 20

Konsentrasi BHPF (mg L-1)

Gambar 3. Aktivitas enzim antioksidan (SOD dan CAT) dan kandungan MDA di
C. vulgaris terpajan BHPF setelah 72 jam terpapar. Bilah kesalahan mewakili
kesalahan standar dari mean (n = 3). Kolom dengan tanda bintang *, ** dan ***
menunjukkan perbedaan yang signifikan (p <0.05), sangat signifikan (p <0.01) dan
sangat signifikan (p <0.001) antara kontrol dan perlakuan.

dengan akuades dan disentrifugasi kembali. Supernatan dibuang dan residu

disuspensi kembali dalam 0,1 M Tris-HCl (pH 7,4) dan disentrifugasi pada 8765 g
selama 10 menit pada 4 menit. ◦ C setelah 5 menit sonikasi. Sejumlah supernatan
diambil sampelnya dan kemudian diolah dengan kit uji enzim antioksidan (SOD
superoksida dismutase dan katalase CAT), yang dibeli dari Institut Bioteknologi
Nanjing Jiancheng (Nanjing, Jiangsu, Cina). Setelah sentrifugasi, supernatan
ditentukan dengan spektrofotometer UV2450 (Shimadzu, Kyoto, Jepang). Prosedur
ekstraksi dan perhitungan aktivitas enzim antioksidan didasarkan pada pabriknya ' Protokol
kit pengujian.

Peroksidasi lipid diekspresikan sebagai kandungan malondialdehida (MDA)

dalam alga. Perlakuan awal sampel alga mirip dengan metode uji aktivitas enzim
antioksidan, dan kemudian diekstraksi dengan kit uji MDA. Isi MDA dihitung
menurut pabrikan ' protokol.

2.4. Penyerapan BHPF oleh C. vulgaris

Gambar 4. Tingkat penghilangan BHPF jika ada / tidak adanya C. vulgaris di

Percobaan penyerapan BHPF dilakukan selama 144 jam dalam labu
0,5 mg L - 1 Paparan BHPF (a), 1 mg L. - 1 Paparan BHPF (b) dan 5 mg - 1 Paparan BHPF
Erlenmeyer 100 mL yang berisi 50 mL kultur alga. Tiga konsentrasi BHPF (0,5, 1
(c). Bilah kesalahan mewakili kesalahan standar dari mean (n = 3). Huruf yang
dan 5 mg L - 1) dipilih dan sampel dikumpulkan dalam tabung sentrifus 10mL pada
berbeda menunjukkan perbedaan yang signifikan (p <0,05) antara kontrol dan
0, 1, 4, 8, 12, 24, 48, 72 dan 144 jam, masing-masing. Setelah sentrifugasi, BHPF
perlakuan.
dalam supernatan dianggap sebagai

3
H. Zhang dkk.
Pencahayaan 24 jam
48 jam pemaparan
6 72 jam pemaparan
Konten BHPF intraseluler (mg g-1)
144 jam paparan
4
2 signifikan pada p < 0,05.
0
0,5 1 5
Konsentrasi BHPF (mg L-1)
Gambar 5. Akumulasi seluler dari BHPF oleh C. vulgaris (a) dan faktor
biokonsentrasi (b) di bawah konsentrasi BHPF yang berbeda. Bar kesalahan
mewakili kesalahan standar dari mean (n = 3).
residu BHPF dalam medium. Selanjutnya, residu dalam tabung sentrifus dicuci dua
kali dan disuspensi kembali dengan 10 mL air suling. Supernatan digunakan untuk
menentukan konsentrasi BHPF yang teradsorpsi ke permukaan alga dan pelet
alga disuspensi kembali dengan 4 mL diklorometana: metanol (1: 2, v / v). Sampel
disonikasi selama 1 jam dalam pembersih ultrasonik dan disentrifugasi
selama 20 menit. Supernatan dikeringkan di bawah N 2 mengalir dan dilarutkan kembali
dalam 1 mL metanol untuk mengukur konsentrasi BHPF dalam sel alga. Itu
kontrol kultur alga tanpa BHPF digunakan untuk mendeteksi kontaminasi BHPF
yang berasal dari tempat lain selama percobaan dan media berduri BHPF tanpa
sel alga digunakan untuk menentukan penghapusan abiotik BHPF. Faktor
biokonsentrasi (BCF) BHPF dalam alga dihitung dengan menggambarkan
konsentrasi BHPF dalam sel alga terhadap konsentrasinya dalam air.
2.5. Kuantifikasi BHPF dalam kultur alga
Semua sampel alga yang diekstraksi disaring dengan 0,22- µ m filter ukuran
pori. Konsentrasi BHPF dalam sampel yang disaring ditentukan dengan
kromatografi cair kinerja-ultra (UPLC, ACQUITY, Waters, Milford) ditambah dengan
spektrometri massa tandem tiga kuadrupol (Xevo-TQD, Waters, Milford). Sampel
dan fase gerak (metanol / air, 9/1, v / v) dilewatkan melalui kolom Waters BEH C18
(2.1 × 50 mm, 1,7 µ m) di bawah suhu kolom 40 ◦ C dengan laju alir isokratik 0,3 mL
min - 1. Sumber ionisasi semprotan elektro dan mode ion negatif dipilih di UPLC-MS
/ MS. Serupa
Ekotoksikologi dan Keselamatan Lingkungan 216 (2021) 112158
kondisi kromatografi dipilih untuk mengidentifikasi metabolit BHPF dalam kultur
(Sebuah)
alga dengan UPLC-MS / MS. Mode Pindai dan Produk dipilih. Data diperoleh dan
diproses menggunakan perangkat lunak MassLynx 4.1.
2.6. Analisis statistik
Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga. Perbedaan yang signifikan
dalam indikator toksisitas antara kontrol dan perlakuan BHPF dievaluasi dengan
metode ANOVA satu arah di SPSS 16.0, dan itu dianggap sebagai perbedaan yang
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Toksisitas BHPF terhadap C. vulgaris
Laju pertumbuhan alga biasanya digunakan untuk menilai toksisitas xeno-
biotik terhadap alga air tawar ( OECD, 2011 ). Tingkat pertumbuhan alga
C. vulgaris menurun secara signifikan di bawah paparan BHPF dengan
konsentrasi> 1 mg L - 1 ( Gambar 1 , p < 0,05), menyiratkan bahwa BHPF dengan
konsentrasi tinggi bersifat toksik C. vulgaris. Misalnya, setelah 2 hari pemaparan,
terjadi penurunan yang signifikan dari laju pertumbuhan alga (0,0023
0,0016 d - 1) diamati di 5 mg L - 1 Perawatan BHPF, a ± s dibandingkan dengan itu
(0,0058 ± 0,0019 d - 1) dalam kultur alga tanpa BHPF. Hasil serupa dilaporkan oleh Ji
et al. (2014) itu 50 mg L - 1 BPA menunjukkan toksisitas pada C. vulgaris selama 2
hari pemaparan, menyiratkan bahwa BHPF sebagai pengganti BPA berpotensi
berbahaya di perairan alami. Toksisitas alga dapat diperburuk dengan waktu
pemaparan ( Gambar 1 ). Tingkat pertumbuhan alga jelas menurun dari 0,0055 ± 0,0019
d - 1 pada 2 hari hingga 0,0002 ± 0,0015 d - 1 pada 5 hari di bawah paparan BHPF
pada 10 mg L - 1. Fenomena ini sesuai dengan hasil yang dilaporkan oleh
Zhang dkk. (2014) bahwa EC 50 dari BPA menjadi alga Chlorella pyrenoidosa
menurun dari 75,66 mg L - 1 pada 24 jam sampai 63,53 mg L - 1 pada 96 jam, tapi masuk
bertentangan dengan EC 50 dari BPS kepada C. vulgaris meningkat dari 3,16 mg L - 1 pada 2 d
sampai 25,00 mg L - 1 pada 10 hari ( Ding dkk., 2020 ). Ini menyarankan agar BHPF boleh
menyajikan perilaku toksik yang mirip dengan BPA. Selain itu, pembentukan
beberapa metabolit BHPF bioaktif juga dapat menyebabkan toksisitasnya. Itu juga
konsisten dengan hasil yang ditemukan oleh Cai dkk. (2009) bahwa peningkatan
toksisitas diklofop-metil menjadi C. vulgaris disebabkan oleh produksi metabolit
bioaktif 4- (2, 4-diklorofenoksi) fenol.
Klorofil umumnya dapat mengungkapkan variasi peroksidasi lipid tilakoid dan
degradasi kompleks PSII ( Zhang dkk., 2012 ). Selama inkubasi keseluruhan,
penurunan signifikan kandungan klorofil-a (Chl-a) diamati di bawah paparan
> 0,5 mg L - 1 BHPF ( Gambar 2 ). Misalnya, konten Chl-a adalah
1.60 ± 0,08 dan 0,87 ± 0,29 mg g - 1 dalam pengobatan BHPF 1 dan 10 mg L - 1, masing-masing,
yang secara signifikan lebih rendah dari pada kontrol (2,54 ± 0,54 mg g - 1). Ini mirip
dengan hasil yang diamati oleh Ji et al. (2014) bahwa BPA pada konsentrasi> 10 mg
L - 1 dapat secara signifikan menghambat konten CHL-a dari C. vulgaris. Selain itu,
rasio Chl-a terhadap klorofil (Chl-b) mengungkapkan integritas sel alga di bawah
paparan senyawa xenobiotik, dan nilai yang tinggi dapat menunjukkan
mekanisme perlindungan terhadap kerusakan foto-oksidatif ( Pancha dkk., 2015 ).
Rasio Chl a / Chl-b in C. vulgari s meningkat secara signifikan di bawah paparan 0,5
dan 1 mg L - 1 BHPF ( Gambar 2 ), menyiratkan bahwa BHPF pada konsentrasi ini
tidak menunjukkan kerusakan foto-oksidatif C. vulgari s. Hasil ini konsisten dengan
laju pertumbuhan alga normal pada konsentrasi BHPF yang dijelaskan di atas.
3.2. Pengaruh BHPF pada enzim antioksidan dan kandungan MDA di
C. vulgaris
Stres oksidatif pada alga berkontribusi besar terhadap toksisitas xenobiotik ( Chen
dkk., 2016; Da Costa dkk., 2016 ). Untuk mengais spesies oksigen reaktif (ROS) yang
terakumulasi dalam alga, antioksidan
4
H. Zhang dkk. Ekotoksikologi dan Keselamatan Lingkungan 216 (2021) 112158

Tabel 1
Identifikasi produk transformasi BHPF di C. vulgari s.

Nama majemuk Nama Produk [MH] - Fragmen Waktu retensi (min) Struktur kimia

BHPF - 349 256, 225 0,54

fenil 2-amino-4,4-dihydroxybutanoate TP 211 210 164, 132, 118, 62 0.42

2- (9H-fluoren-9-yl) - Asam 5-hidroksibenzoat TP 302 301 285, 255, 217, 141 0.82

4- (9-cyclohexyl-9H-fluoren-9-yl) fenolat TP 340 339 163 1.29

enzim termasuk SOD dan CAT dapat bertindak sebagai pelindung yang pada
akhirnya mengubah ROS menjadi air ( Liang dkk., 2014 ). Setelah 72 jam
pemaparan, aktivitas SOD menurun dengan konsentrasi BHPF, tetapi aktivitas CAT
pada dasarnya tidak berubah ( Gambar 3 Sebuah). Misalnya, aktivitas SOD menurun
secara signifikan dari 94,70 ± 2,57 U mg - 1 di kontrol ke 82.22 ± 6,23 U mg - 1 pada 1
mg L - 1 Paparan BHPF dan
64.40 ± 3,31 U mg - 1 pada 20 mg L - 1 Paparan BHPF, menunjukkan bahwa SOD tidak
aktif atau rendah diaktifkan di bawah paparan BHPF pada konsentrasi tinggi, yang
menyebabkan kelebihan ROS pada alga. Hal tersebut sesuai dengan temuan yang
dilaporkan oleh Yang and Wang (2019) tempat aktivitas SOD masuk
Microcystis aeruginosa dihambat oleh 2,3 mg BPA L - 1, menyebabkan kerusakan
oksidatif pada alga. Tingkat CAT dalam perlakuan BHPF pada dasarnya identik
dengan kontrol, menunjukkan bahwa peroksida hidrogen yang dihasilkan oleh
reaksi SOD diubah secara efisien menjadi air oleh CAT. Ouada dkk. (2018) melaporkan
bahwa aktivitas CAT di Picocystis sp. juga pada dasarnya tidak berubah di bawah
paparan BPA <25 mg L - 1.
Oleh karena itu, toksisitas BHPF menjadi C. vulgaris terutama disebabkan oleh akumulasi
ROS dalam alga.
Stres oksidatif BHPF dapat menyebabkan peroksidasi lipid dalam alga, yang
biasanya diekspresikan oleh kandungan MDA ( Halliwell, 1987 ). Itu
Isi MDA dalam sel alga meningkat secara signifikan di bawah paparan perlakuan
BHPF dengan konsentrasi> 0,1 mg L - 1
( Gambar 3 b), yang konsisten dengan hasil toksisitas yang dijelaskan di atas. Hasil
serupa juga ditemukan di Picocystis sp. dan Scenedesmus quadricauda dibawah
paparan BPA dengan konsentrasi> 1 mg L - 1
( Ouada dkk., 2018; Xiang dkk., 2018 ). Zhang dkk. (2020) juga melaporkan bahwa
mesotrione pada 18 mg L - 1 dapat menyebabkan peroksidasi lipid
C. vulgaris.
3.3. Penghapusan dan bioakumulasi BHPF oleh C. vulgaris
BHPF segera menghilang dalam media BG 11 setelah 1 jam pemaparan
dengan efisiensi penghilangan> 80% ketika konsentrasi awal BHPF adalah 0,5, 1,
dan 5 mg L - 1 ( Gambar 4 ). Tambahan dari
C. vulgaris dapat mempercepat pembuangan BHPF dalam medium, dan penghapusan BHPF
sebesar C. vulgaris menurun dengan meningkatnya konsentrasi BHPF ( Gambar 4 ). Misalnya,
setelah 1 jam pemaparan, tingkat penghilangan BHPF sebesar C. vulgaris menurun dari 94,58%
pada 0,5 mg L - 1 BHPF ke
88,08% pada 5 mg L - 1 BHPF. Itu sesuai dengan hasil yang dilaporkan oleh
Ji et al. (2014) bahwa penghapusan BPA oleh C. vulgaris menurun dengan BPA

5
H. Zhang dkk. Ekotoksikologi dan Keselamatan Lingkungan 216 (2021) 112158

Gambar 6. Jalur yang diusulkan untuk BHPF di C. vulgari s.

konsentrasi meningkat. Hasil serupa juga ditemukan dalam penelitian kami dalam sel alga menunjukkan bahwa BHPF dapat menimbulkan risiko tinggi bagi
sebelumnya yang menghilangkan ibuprofen pada Navicula sp. dihambat pada organisme akuatik.
konsentrasi yang lebih tinggi ( Ding dkk., 2017b ). Selanjutnya, waktu pemaparan
memainkan peran penting dalam penghilangan BHPF oleh alga ( Gambar 4 ).
3.4. Identifikasi metabolit BHPF dan jalur yang diusulkan di
Efisiensi penyisihan BHPF pada 5 mg L - 1 meningkat menjadi 88,08% pada 1 jam
C. vulgaris
menjadi 89,80% pada 24 jam, dan mencapai kesetimbangan pada 72 jam. Temuan
ini sesuai dengan hasil yang diamati oleh López-Pacheco dkk. (2019) bahwa
Untuk mengidentifikasi metabolit BHPF dalam sel alga, sampel alga
4-nonylphenol telah dihilangkan secara efisien b ´ y C. vulgaris dan efisiensi
mengandung 0,5 mg L - 1 BHPF diekstraksi dan dianalisis dengan UPLC-MS-MS.
penyisihan meningkat dari 82% pada 48 jam menjadi 95% pada 144 jam. Lebih
Tiga metabolit termasuk TP 211, TP 302 dan TP 340 diidentifikasi berdasarkan
dari itu, C. vulgaris juga menyajikan kemampuan penghapusan yang baik untuk
waktu retensi, ion molekuler [MH] - dan data massa yang akurat dalam penelitian
nonylphenol ( Gao dkk., 2011 ), menyiratkan itu C. vulgaris mungkin bahan yang
ini ( Tabel 1 , Gambar S1 ). Spektrum massa yang sesuai ditunjukkan pada Gambar.
cocok untuk menghilangkan bisphenol dari air alami.
S2 - 4 .
Bioakumulasi BHPF di C. vulgari s meningkat dengan konsentrasi awal BHPF ( Gambar
TP 211 mungkin merupakan metabolit terkonjugasi aspartat, yang secara
5 Sebuah). Misalnya, setelah 3 hari paparan, kandungan BHPF intraseluler
tentatif ditentukan menjadi fenil 2-amino-4, 4-dihidroksibutanoat. Ion fragmen
meningkat secara signifikan dari 0,30 ± 0,06 mg g - 1 dalam 0,5 mg L - 1 Pengobatan
pada m / z 164 untuk TP 211 kemungkinan besar dihasilkan karena hilangnya
BHPF untuk
gugus karboksil. Ion fragmen pada m / z 132 menunjukkan residu aspartat, dan
5.08 ± 0,88 mg g - 1 dalam 5 mg L - 1 Pengobatan BHPF. Ding dkk. (2017b) melaporkan
hilangnya gugus hidroksil dapat menghasilkan ion pada
bahwa ibuprofen mudah terakumulasi dalam sel alga dan meningkat seiring
m / z 118 ( Gambar S2 ). TP 302 untuk sementara diidentifikasi sebagai asam 2-
dengan konsentrasinya. Selanjutnya, akumulasi BHPF meningkat dengan waktu
(9H-fluoren-9- yl) -5-hydroxybenzoic. Ion fragmen di m / z 285 dan 255 dapat
pemaparan, menunjukkan bahwa akumulasi BHPF dapat bereaksi dengan
dikaitkan dengan hilangnya gugus hidroksil dan selanjutnya dua unsur oksigen,
makromolekul dalam sel alga dan dengan demikian mempengaruhi fungsi normal
masing-masing. Fraktur cincin benzen berikut ini dapat menghasilkan ion pada m /
alga ( Ding dkk., 2018 ). Bioakumulasi yang berkelanjutan dapat menyebabkan
z 217 dan 141 ( Gambar S3 ). TP 340 mungkin merupakan produk reduksi dari
toksisitas alga yang diperburuk dengan waktu pemaparan seperti yang dijelaskan
BHPF, yang secara tentatif ditentukan menjadi 4- (9-sikloheksil-9H-fluoren-9-yl)
di atas.
fenolat. Ion fragmen pada m / z 163 mungkin berhubungan dengan hilangnya dua
Nilai BCF memberikan referensi penting untuk penilaian risiko ekologi akuatik
cincin benzena dan dua gugus metilen setelah fraktur sikloheksana ( Gambar S4 ).
xenobiotik ( Mackay dan Fraser, 2000; Skoglund dan Swackhamer, 1999 ). BCF dari
Jalur degradasi yang mungkin dari BHPF di C. vulgari s telah diusulkan dan
BHPF (1 dan 5 mg L - 1) di C. vulgari s terkait erat dengan waktu pemaparan ( Gambar
ditampilkan di Gambar 6 . Metabolisme BHPF masuk C. vulgaris dapat dibagi
5 b). Pada pemaparan 5 mg L - 1 BHPF, nilai BCF meningkat dari 3415.0 ± 1053.1
menjadi tiga jalur. Pertama, hilangnya gugus hidroksil dan reduksi BHPF dapat
pada 1 d hingga 30.707.0 ± 3754.0 pada hari ke 6. Namun perlu diperhatikan
terjadi pada alga karena adanya sitokrom P-450 (CYP 450) ( Thies et al., 1996 ), yang
bahwa nilai BCF dari BHPF sebesar 0.5 mg L - 1 meningkat dari 8478,8 ± 2737.6
mengarah pada pembentukan metabolit TP 340. Selain itu, hilangnya gugus fenol
pada 1 hari sampai
dari BHPF dapat menyebabkan pembentukan Intermediate I, dan karboksilasi
28.188.7 ± 2077.0 pada hari ke-3 dan kemudian secara signifikan menurun menjadi
selanjutnya dapat menghasilkan metabolit TP 302. Selain itu, asam aspartat
4862.8 ± 3413.4 pada hari 6. Hal ini mungkin disebabkan oleh peningkatan
adalah yang umum asam amino dalam alga, yang dapat memberikan dukungan
penyerapan BHPF pada permukaan alga dengan 3 hari pertama dan
untuk pertumbuhan alga. Fenol (Intermediate II) yang hilang dari BHPF dapat
kesetimbangan tercapai setelahnya. Hasil serupa juga ditemukan dalam penelitian
terkonjugasi dengan asam aspartat, sehingga menghasilkan TP 211.
kami sebelumnya ( Ding dkk., 2017a ) bahwa nilai BCF naproxen dalam sel alga
menunjukkan pola yang berbeda dengan waktu di bawah paparan konsentrasi
naproxen yang berbeda. Selanjutnya nilai BCF semakin tinggi dari BHPF

6
H. Zhang dkk.
4. Kesimpulan
Efek toksik BHPF terhadap C. vulgaris adalah konsentrasi dan waktu. Stres
oksidatif kemungkinan merupakan mekanisme utama yang bertanggung jawab
atas toksisitas BHPF yang terakumulasi secara biologis C. vulgaris. Selain itu,
tingginya pemindahan atau serapan BHPF sebesar C. vulgaris dapat berkontribusi
untuk toksisitasnya. Tiga metabolit BHPF ditemukan dalam sel alga dan mungkin
juga berkontribusi pada efek toksik yang disebabkan oleh BHPF. Namun,
penyelidikan lebih lanjut harus dilakukan untuk menjelaskan potensi toksisitas
dari metabolit BHPF.
Pernyataan kontribusi kepenulisan CRediT
Huijun Zhang: Metodologi, Investigasi, Penulisan - draf asli.
Tengda Ding: Konseptualisasi, Kurasi data, Perangkat Lunak, Penulisan - tinjauan
& pengeditan, Akuisisi pendanaan. Xu Luo: Metodologi, Validasi. Juying Li: Konseptualisasi,
Mackay, D., Fraser, A., 2000. Bioakumulasi bahan kimia organik yang persisten:
Penulisan - review & editing, Administrasi proyek, Akuisisi pendanaan.
Mi, P., Zhang, QP, Zhang, SH, Wang, C., Zhang, SZ, Fang, YC, Gao, JZ, Feng, DF, Chen, DY, Feng,
OECD, 2011, Tes No. 201: alga air tawar dan cyanobacteria, uji penghambatan pertumbuhan.
Deklarasi Persaingan Minat
Ouada, SB, Ali, RB, Leboulanger, C., Ouada, HB, Sayadi, S., 2018. Pengaruh bisphenol
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak mengetahui persaingan
kepentingan keuangan atau hubungan pribadi yang dapat mempengaruhi
pekerjaan yang dilaporkan dalam makalah ini.
Ucapan Terima Kasih
Pekerjaan ini didukung oleh National Natural Science Foundation of China
(Grant No. 21777104 and 22076126), Natural Science Foundation of Guangdong
Province (No. 2020A1515011243), Sci- ence and Technology Planning Project of
Shenzhen Municipality (Nos. JCYJ20170818142823471, JCYJ20190808152817031),
dan Natu- ral Science Foundation of SZU (Grant Nos. 860 - 000002110238 dan
2019027).
Lampiran A. Informasi pendukung
Data tambahan yang terkait dengan artikel ini dapat ditemukan dalam versi
online di doi: 10.1016 / j.ecoenv.2021.112158 .
Referensi
Cai, XY, Ye, J., Sheng, GY, Liu, WP, 2009. Degradasi dan toksisitas yang bergantung waktu
dari diklofop-metil dalam suspensi alga. Mengepung. Sci. Polut. Res. 16, 459 - 465 .
Chen, ZW, Song, SF, Wen, YZ, Zou, YQ, Liu, HJ, 2016. Toksisitas Cu (II) ke
ganggang hijau Chlorella vulgaris: perspektif fotosintesis dan stres oksidan.
Mengepung. Sci. Polut. R 23, 17910 - 17918 .
Da Costa, CH, Perreault, F., Oukarroum, A., Melegari, SP, Popovic, R., Matias, WG,
2016. Pengaruh nanopartikel kromium oksida (III) pada produksi spesies oksigen reaktif
dan aktivitas fotosistem II di alga hijau Chlamydomonas reinhardtii. Sci. Lingkungan
Total. 565, 951 - 960 .
Dai, Z., Li, YF, Yang, SG, Zhao, N., Zhang, XL, Xu, J., 2009. Kinetika dan termal
sifat resin epoksi berdasarkan struktur fluoren bisphenol. Eur. Polym. J.45, 1941 - 1948 .
Ding, TD, Li, W., Yang, MT, Yang, B., Li, JY, 2020. Toksisitas dan biotransformasi
bisphenol S dalam alga hijau air tawar Chlorella vulgaris. Sci. Lingkungan Total. 747,
141144 .
Ding, TD, Lin, KD, Bao, LJ, Yang, MT, Li, JY, Yang, B., Gan, J., 2018. Biouptake,
toksisitas dan biotransformasi triclosan di diatom Cymbella sp dan pengaruh asam humat.
Mengepung. Polut. 234, 231 - 242 .
Ding, TD, Lin, KD, Yang, B., Yang, MT, Li, JY, Li, WY, Gan, J., 2017a.
Biodegradasi naproxen oleh alga air tawar Cymbella sp. dan Scenedesmus
quadricauda dan toksisitas komparatif. Bioresour. Technol. 238, 164 - 173 .
Ding, TD, Yang, MT, Zhang, JM, Yang, B., Lin, KD, Li, JY, Gan, J., 2017b. Toksisitas,
degradasi dan nasib metabolisme ibuprofen pada diatom air tawar Navicula sp.
J. Hazard. Mater. 330, 127 - 134 .
Otoritas Keamanan Pangan Eropa (EFSA), 2015. Pendapat ilmiah tentang risiko terhadap publik
kesehatan terkait dengan adanya bisphenol A (BPA) dalam bahan makanan. Bagian I:
penilaian eksposur. EFSA J. 13, 3978 .
Frankowski, R., Zgo ł a-Grze ´ śkowiak, A., Smu ł ek, W., Grze ´ śkowiak, T., 2020. Penghapusan dari
bisphenol A dan potensi penggantinya dengan biodegradasi. Appl. Biochem.
Biotechnol. 191, 1100 - 1110 .
Ekotoksikologi dan Keselamatan Lingkungan 216 (2021) 112158
Gao, QT, Wong, YS, Tam, NFY, 2011. Penghapusan dan biodegradasi nonylphenol
berbeda Chlorella jenis. Mar. Pollut. Banteng. 63, 445 - 451 .
Halliwell, B., 1987. Oksidan dan penyakit manusia: beberapa konsep baru. Faseb J 1,
358 - 364 .
Ji, MK, Kabra, AN, Choi, J., Hwang, JH, Kim, JR, Abou-Shanab, RAI, Oh, YK,
Jeon, BH, 2014. Biodegradasi bisphenol A oleh mikroalga air tawar
Chlamydomonas mexicana dan Chlorella vulgaris. Ecol. Eng. 73, 260 - 269 .
Jin, HB, Zhu, LY, 2016. Terjadinya dan partisi analog bisphenol dalam air
dan sedimen dari Cekungan Sungai Liaohe dan Danau Taihu, Cina. Res air. 103, 343 - 351 .
Liang, YL, Ji, HB, Zhu, Y., 2014. Efek toksik untuk bisphenol A hingga Chlamydomonas
reinhardtii dan bioakumulasi dan biodegradasi. Mengepung. Sci. Technol. 37, 25 - 31 .
Liu, W., Wang, J., Qiu, QH, Ji, L., Wang, CY, Zhang, ML, 2008. Sintesis dan
karakterisasi 9,9-bis (4-hidroksipenil) -fluorena yang dikatalisis dengan penukar
kation. Pigm. Resin Technol. 37, 9 - 15 .
Ló́pez-Pacheco, IY, Salinas-Salazar, C., Silva-Núñez, A., Rodas-Zuluaga, LI, Donoso-
Quezada, J., Ayala-Mar, S., Barceló, D., Iqbal ˜, HMN, Parra-Saldívar, R., 2019.
Penghapusan dan biotransformasi ´ 4-nonylphenol oleh Arthrospira maxima dan
Chlorella vulgaris konsorsium. Mengepung. Res. 179, 108848 .
mekanisme dan model. Mengepung. Polut. 110, 375 - 391 .
XZ, 2019. Efek fluorene-9 -bisphenol pada ikan zebra betina ( Danio rerio) perilaku
reproduksi dan eksplorasi. Kemosfer 228, 398 - 411 .
Pedoman OECD untuk Pengujian Bahan Kimia, Bagian 2: Efek pada Sistem Biotik.
A pada strain mikroalga ekstrimofilik Picocystis sp. (Chlorophyta) dan kemampuan menghilangkan
BPA yang tinggi. Ekotoksikol. Mengepung. Saf. 158, 1 - 8 .
Pancha, I., Chokshi, K., Maurya, R., Trivedi, K., KumarPatidar, S., Ghosh, A., Mishra, S.,
2015. Stres oksidatif yang diinduksi salinitas meningkatkan potensi produksi biofuel
mikroalga Scenedesmus sp. CCNM 1077. Bioresour. Technol. 189, 341 - 348 .
Skoglund, RS, Swackhamer, DL, 1999. Bukti penggunaan karbon organik sebagai
matriks sorbing dalam pemodelan akumulasi PCB dalam fitoplankton. Mengepung. Sci.
Technol. 33, 1516 - 1519 .
Song, SJ, Song, MY, Zeng, LZ, Wang, T., Liu, RZ, Ruan, T., Jiang, GB, 2014.
Keberadaan dan profil analog bisphenol dalam lumpur limbah kota di Cina. Mengepung.
Polut. 186, 14 - 19 .
Sun, LM, Ling, YH, Jiang, JH, Wang, DT, Wang, JX, Li, JY, Wang, XD, Wang, H.
L., 2020. Mekanisme perbedaan mengenai triclosan vs. bisphenol A dan fluorene-9-
bisphenol diinduksi gangguan metabolisme lipid ikan zebra oleh RNA-Seq. Kemosfer
251, 126318 .
Thies, F., Backhaus, T., Bossmann, B., Grimme, LH, 1996. Biotransformasi Xenobiotik
dalam ganggang hijau uniseluler - Keterlibatan sitokrom P450 dalam aktivasi dan
selektivitas metflurazon pro-herbisida piridazinon. Tumbuhan Physiol. 112, 361 - 370 .
Wang, H., Liu, ZH, Zhang, J., Huang, RP, Yin, H., Dang, Z., Wu, PX, Liu, Y., 2019.
Wawasan tentang mekanisme pembuangan bisphenol A dan analognya di instalasi
pengolahan air limbah kota. Sci. Lingkungan Total. 692, 107 - 116 .
Xiang, R., Shi, J., Yu, Y., Zhang, H., Dong, C., Yang, Y., Wu, Z., 2018. Pengaruh
bisphenol A terhadap pertumbuhan, morfologi, peroksidasi lipid, aktivitas enzim antioksidan, dan
PS II dalam Cylindrospermopsis raciborskii dan Scenedesmus quadricauda.
Lengkungan. Mengepung. Contam. Toksikol. 74, 515 - 526 .
Xiong, JQ, Kurade, MB, Abou-Shanab, RAI, Ji, MK, Choi, J., Kim, JO, Jeon, BH,
2016. Biodegradasi karbamazepin menggunakan mikroalga air tawar
Chlamydomonas mexicana dan Scenedesmus obliquus dan penentuan nasib
metaboliknya. Bioresour. Technol. 205, 83 - 190 .
Yamazaki, E., Yamashita, N., Taniyasu, S., Lam, J., Lam, PKS, Bulan, HB, Jeong, Y.,
Kannan, P., Achyuthan, H., Munuswamy, N., 2015. Bisphenol A dan analog bisphenol lainnya
termasuk BPS dan BPF dalam sampel air permukaan dari Jepang, Cina, Korea dan India.
Ekotoksikol. Mengepung. Saf. 122, 565 - 572 .
Yang, M., Wang, X., 2019. Interaksi antara Microcystis aeruginosa dan hidup berdampingan
bisphenol A pada tingkat fosfor yang berbeda. Sci. Lingkungan Total. 658, 439 - 448 .
Zhang, F., Yao, X., Sun, S., Wang, L., Liu, W., Jiang, X., Wang, J., 2020. Pengaruh
mesotrion pada stres oksidatif, struktur subselular, dan integritas membran
Chlorella vulgaris. Kemosfer 247, 125668 .
Zhang, JY, Ding, TD, Zhang, CL, 2013. Respons biosorpsi dan toksisitas terhadap arsenit
(Sebagai [III]) di Scenedesmus quadricauda. Kemosfer 92, 1077 - 1084 .
Zhang, W., Xiong, B., Sun, WF, An, S., Lin, KF, Guo, MJ, Cui, XH, 2014. Akut dan
efek toksik kronis dari bisphenol a pada Chlorella pyrenoidosa dan Scenedesmus obliquus. Mengepung.
Toksikol. 29, 714 - 722 .
Zhang, W., Zhang, M., Lin, KF, Sun, WF, Xiong, B., Guo, MJ, Cui, XH, Fu, RB, 2012.
Efek eko-toksikologi karbamazepin pada Scenedesmus obliquus dan Chlorella
pyrenoidosa. Mengepung. Toksikol. Phar. 33, 344 - 352 .
Zhang, ZB, Hu, Y., Guo, JL, Yu, T., Sun, LB, Xiao, X., Zhu, DS, Nakanishi, T.,
Hiromori, Y., Li, JY, Fan, XL, Wan, Y., Cheng, SY, Li, J., Guo, X., Hu, JY, 2017.
Fluorene-9-bisphenol adalah anti-estrogenik dan dapat menyebabkan hasil kehamilan yang
merugikan pada tikus. Nat. Komun. 8, 14585 .
Zhou, N., Liu, YH, Cao, SQ, Guo, RX, Ma, YN, Chen, JQ, 2020. Biodegradasi
senyawa bisphenol di permukaan air Danau Taihu dan pengaruh asam humat. Sci.
Lingkungan Total. 723, 138164 .
Zühlke, MK, Schlüter, R., Mikolasch, A., Henning, AK, Giersberg, M., Lalk, M.,
Kunze, G., Schweder, T., Urich, T., Schauer, F., 2020. Biotransformasi analog bisphenol A oleh
bakteri pendegradasi bifenil Cupriavidus basilensis - Sebuah
struktur-hubungan biotransformasi. Appl. Mikrobiol. Biot. 104, 3569 - 3583 .