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 GENETICA MOLECULAR

¿QUÉ ES LA GENETICA MOLECULAR?

La manifestación última de los genes son los caracteres externos, y todo

carácter puede considerarse resultado de una actividad de proteínas. Éstas
intervienen de forma directa, dando lugar a órganos o sistemas biológicos, o de
forma indirecta, catalizando enzimáticamente los procesos metabólicos que
tienen lugar en la adquisición de los caracteres.

En el genoma (el conjunto de todos los genes de un individuo) hay además

información que no se traduce en proteínas, bien por no ser genéticamente
activa o por participar sólo en la síntesis de ARN de diversas clases.

Los numerosos mecanismos bioquímicos que tienen lugar en las células no se

realizan sin control. Los estudios en microorganismos han revelado que el
control de los procesos está codificado en los genes.

Los procesos que dan lugar a la expresión de los genes y las diversas formas
de regulación de dichos procesos forman, en conjunto, la parte principal de la
Genética Molecular.

ADN: PORTADOR DEL MENSAJE GENETICO.

La prueba definitiva de que el ADN es el portador del mensaje genético la

aportaron O. T. Avery, C. M. MacLeod y McCarty en 1944, al investigar las
transformaciones bacterianas observadas por F. Griffith en 1928. Griffith trabajó
con la bacteria Diplococcus pneumoniae, un neumococo que produce
neumonía en los mamíferos, y de la cual se conocen dos cepas distintas: las S
y las R. Las primeras son virulentas y de cubierta lisa, y las segundas,
producidas por mutaciones de las cepas S, son inofensivas y de cubierta
rugosa.

Al infectar a un ratón con una mezcla de bacterias S (virulentas) muertas, pues

habían sido tratadas previamente con calor, y de bacterias R (no virulentas)
vivas, el ratón enfermaba y moría, y además aparecían en su organismo
bacterias S vivas. Por lo tanto, se había producido una transformación de las
bacterias R en las S. Los investigadores MacLeod y McCarty demostraron que
eran los extractos de las bacterias S muertas los que producían dicha
transformación, y por lo tanto, el ADN era la molécula portadora de la
información biológica. Estos experimentos se realizaron utilizando otros
organismos y otros caracteres con los mismos resultados.

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 EL CODIGO GENETICO.

Figura 1. Equivalencia de cada codon con un aminoácido. En negrita codones

de iniciación (AUG) y de terminación (UAA, UAG y UGA).

El código genético estudia las leyes que rigen la relación entre la secuencia de
bases del ADN y la de aminoácidos de las proteínas. Los componentes de los
ácidos nucleicos son los nucleótidos, que incluyen cuatro bases: A, T, G y C en
el ADN y A, U, G y C en el ARN, (siendo A= Adenina, T= Timina, C= Citosina,
G= Guanina y U= Uracilo). Las proteínas se forman por unión de hasta 20
aminoácidos distintos. Así pues, se trata de averiguar cómo un lenguaje de
cuatro letras puede codificar para los 20 aminoácidos.

En la síntesis proteica, el ADN es transcrito a ARN m respetando la

complementareidad de las bases (A-U, T-A, G-C) de forma que, por ejemplo,
en la transcripción de la secuencia de ADN TACCG, obtendremos un ARN de
secuencia AUGGC.

El código genético se basa en una clave de tripletes, de manera que los

nucleótidos del ARNm se combinan de tres en tres para codificar los
aminoácidos.

El número de variaciones de cuatro elementos tomados de tres en tres es de

64. Así pues, tenemos más posibilidades, de las 20 que se necesitan, para
codificar los distintos aminoácidos.

Mediante numerosos experimentos in vitro e in vivo se vio que el código

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genético es degenerado, es decir, que cada triplete de nucleótidos o codón
codifica para un aminoácido, pero existen aminoácidos que son codificados por
varios tripletes o codones. Tan solo metionina y triptófano poseen un único
vocablo en el código.

Las proteínas se van elaborando por lectura de un ARN m en los ribosomas.

No se requiere puntuación o señal alguna para indicar el fin de un codón y el
comienzo del siguiente. Por lo tanto, la pauta de lectura debe estar
correctamente situada al comienzo de una molécula de ARN m, y después
avanzar secuencialmente desde un triplete hasta el siguiente. Si la pauta de
lectura inicial está desplazada una o dos bases, o el ribosoma omite
accidentalmente un nucleótido del ARNm, todos los codones siguientes estarán
equivocados y se obtendrá una proteína con una secuencia de aminoácidos
equivocada.

Existen tres de los 64 tripletes nucleotídicos posibles que no codifican para

ningún aminoácido conocido. Son UAG, UAA y UGA, se llaman codones sin
sentido, y marcan las terminaciones de las cadenas polipeptídicas. El codón
AUG, además de ser el codón de iniciación, también codifica (en concreto, para
el aminoácido metionina).

El código genético es universal, es decir, que los mismos codones codifican

para los mismos aminoácidos en todos los seres vivos (procariotas y
eucariotas), lo que hace pensar que todas las especies de plantas y animales
poseen un precursor evolutivo común, cuyo código genético ha sido protegido
en el curso de la evolución biológica. Sin embargo, se han descubierto
recientemente algunas excepciones en la síntesis proteica de las mitocondrias.
Así, en las mitocondrias de la levadura el triplete AUA representa el codón de la
metionina en vez de isoleucina, y el UGA, que normalmente es un codón de
terminación, codifica al triptófano. Estas observaciones han despertado mucho
interés y han desencadenado la búsqueda de otras diferencias significativas en
las mitocondrias.

En la mayoría de los casos en los que un aminoácido tiene múltiples codones,

la diferencia entre ellos reside en el tercer nucleótido, es decir, el que se
encuentra en el extremo 3´. Por ejemplo, la alanina es codificada por los
codones GCU, GCC, GCA y GCG, por tanto, las dos primeras bases GC son
comunes a todos los codones de alanina. En realidad, los codones codifican de
tal manera que, en general, el último nucleótido de cada triplete es menos
específico.

Cabría pensar que el triplete anticodón de un ARN t dado sólo reconociese a un

triple codón, con lo cual existiría un ARNt diferente para cada codón. Sin
embargo, el número de ARNt distintos para cada aminoácido no coincide con el
número de codones que posee. Además, algunos ARNt contienen el nucleósido
inosina (I), que posee como base la hipoxantina, que se obtiene por eliminación
del 6-amino de la adenina.

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Se cree que las dos primeras bases de los codones son los que, básicamente,
proporcionan la especificidad codón-anticodón. La tercera base también
contribuye a la especificidad pero, al formar un enlace débil con la base del
anticodón correspondiente, permite la rápida disociación de ls ARN t de los
codones del ARNm, agilizando el proceso de síntesis proteica.
Si las tres bases de los codones se emparejaran con las bases
complementarias de los anticodones con un enlace más fuerte, la asociación
codón-anticodón sería demasiado fuerte, con lo cual los ARN t se disociarían
lentamente de sus codones, lo que limitaría en gran medida la velocidad de la
traducción. (Hipótesis del balanceo formulada por Crick).

TRANSCRIPCION DEL CODIGO GENETICO: BIOSINTESIS DE

ARN.

Es la primera etapa de la expresión génica, en la que se sintetiza una hebra de

ARN complementario, a partir de un molde o hebra de ADN cromosómico. La
síntesis de la molécula de ARN se realiza a partir de sus precursores, que son
los ribonucleótidos trifosfato (ATP, GTP, CTP y UTP), y cuenta con la
intervención del enzima ARN polimerasa, principal enzima que participa en la
síntesis de ARN, y que cataliza la unión de los nucleótidos, según una
secuencia determinada.

Para la formación del ARN se requiere la presencia del ADN que va a actuar
como molde y de los cuatro ribonucleósidos-5´-trifosfatos, simultáneamente. El
polímero de ARN formado posee puentes o enlaces 3´,5´-fosfodiester,
formados entre el OH 3´ libre del ribonucleótido terminal de la cadena y el
átomo de fósforo unido al carbono 5´ del ribonucleótido trifosfato que llega para
unirse a la cadena. La RNA-polimerasa adiciona unidades de ribonucleótidos a
los extremos 3´-hidroxilo de la cadena de ARN y, por tanto, el ARN se forma en
la dirección 5´-> 3´, de manera antiparalela a la hebra de ADN, utilizada como
patrón. La RNA-polimerasa en condiciones intracelulares transcribe sólo una
hebra del ADN dúplex.
En la síntesis del ARN se pueden establecer las siguientes etapas: iniciación,
elongación, terminación y tratamiento post-transcripcional.

A) Etapa de iniciación.

Existen en el ADN sitios específicos de iniciación de la transcripción, que

contienen 10 o más nucleótidos ricos en bases pirimidínicas, los cuales son
reconocidos por la RNA polimerasa. Tales sitios de iniciación están muy
separados en el ADN patrón. Cuando la RNA-polimerasa se une a estos sitios
de iniciación, se separan las dos hebras o cadenas del ADN patrón y la enzima
sufre un cambio conformacional. El primer nucleósido-5´-trifosfato o nucleósido
iniciador es siempre púrico (ATP o GTP); éste se fija a la polimerasa y se forma
el complejo de iniciación. Una vez que se ha captado el segundo nucleósido-5´-
trifosfato que, generalmente, es un nucleósido pirimidínico (UTP o CTP), se
forma el primer enlace internucleotídico o enlace fosfodiester, por ataque del

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grupo 3´-hidroxilo del nucleósido-5´-trifosfato iniciador sobre el átomo de
fósforo a unido al carbono 5´ del segundo nucleósido-trifosfato, y se elimina un
resto pirofosfato inorgánico (PPi), procedente del segundo nucleósido trifosfato.
El nucleósido-5´-trifosfato iniciador, que es el primero de la cadena, conserva
su grupo 5´-trifosfato, incluso después de unirse los restantes nucleósidos, y va
a ser reconocido como extremo de iniciación o extremo 5´-terminal de la
molécula de ARN.

B) Etapas de elongación y terminación.

Una vez que se han unido los dos primeros nucleótidos, la prolongación o
elongación de la cadena se produce rápidamente, mientras prosigue la
transcripción en dirección 5´->3´, sobre la hebra antiparalela 3´->5´ del patrón
ADN. Durante esta etapa, el segmento recién construido de ARN forma
transitoriamente una doble hélice híbrida de cadenas complementarias de
ARN-ADN. Sin embargo, estos dúplex híbridos ARN-ADN son menos estables
que los dúplex ADN-ADN, por lo que la nueva cadena de ARN tiende a
separarse del ADN en la horquilla de transcripción.

Cuando se han incorporado unos 10 nucleótidos, se disocia la subunidad s de

la enzima, llamándose a la enzima sin dicha subunidad polimerasa núcleo o
enzima núcleo, la cual prosigue transcribiendo el ADN patrón. Y la subunidad s,
queda libre para unirse a otra polimerasa núcleo e iniciar una nueva cadena de
ARN.

Existen señales de terminación en el ADN que indican a la polimerasa núcleo

cuándo debe finalizar la elongación de la cadena.
El ARN formado por la RNA-polimerasa tiene una composición en bases
púricas y pirimidínicas que es complementaria de la que existe en la hebra
patrón de ADN; de manera que los restos uracilo del ARN son
complementarios de los restos adenina del ADN patrón. Las dos cadenas del
ADN de doble hélice transcriben ARN, una hebra transcribe unos ARN y la otra,
otros.

Tratamiento post-transcripción o postranscripcional de los ARNs.

En las células eucariotas, los ARNs sintetizados por las RNA-polimerasas-
DNA-dirigidas requieren un tratamiento o modificación después de su
transcripción, antes de que se liberen los productos funcionales acabados,
ARN mensajeros y ARN transferentes. Es un proceso de maduración del ARN.

Uno de estos cambios post-transcripcionales en eucariotas implica la

incorporación de 200 o más restos de AMP, al extremo 3´ terminal de los ARN
mensajeros, proceso que tiene lugar en el núcleo. Parece ser que la adición de
esta cola de poli-A ayuda a la transferencia del ARNm del núcleo al citoplasma;
posteriormente esta cola es eliminada.

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 TRANDUCCION DEL CODIGO GENETICO: BIOSINTESIS DE
PROTEINAS.

La síntesis de proteínas se realiza en los ribosomas a partir de la información

de un ARNm o mensajero obtenido por transcripción de un ADN. Los
aminoácidos, producto del metabolismo interno de las células, son conducidos
hasta los ribosomas por moléculas de ácidos nucleicos especiales que también
se obtienen por transcripción del ADN y se denominan ARN t o de transferencia.

El ARN de transferencia.

El ARNm lleva el mensaje que ha de ser traducido en una secuencia de

aminoácidos. Éstos, a su vez, han de ser transportados hasta los ribosomas
por el ARNt, cuya existencia fue postulada por Crick en 1958 y descubierta por
Zamecnik y colaboradores un año más tarde, aislándolo en hígado de rata. La
necesidad de la existencia de los ARNt fue supuesta por Crick al comprobar
que los radicales laterales de algunos aminoácidos son incapaces de formar
puentes de hidrógeno con las bases del ARN m, requiriendo la presencia de
unos ARN adaptadores como intermediarios.

El ARNt posee dos regiones de gran importancia para el cumplimiento de su

papel de adaptador de los aminoácidos en las proteínas: una región de anclaje
del aminoácido correspondiente y una región de reconocimiento del punto de
inserción de dicho aminoácido en el orden lineal de una proteína.

El número de nucleótidos que contiene el ARNt oscila entre 70 y 90. En algunas

zonas de la molécula se reordenan de 5 a 7 bases complementarias de otras
regiones, lo que da lugar a una estructura secundaria caracterizada por el
empaquetamiento de algunas bases,
adquiriendo el aspecto de hoja de trébol.

Figura 2. Esquema de un RNA de

transferencia.

En el extremo 3´ de la molécula se
encuentra, invariablemente en todos los
ARNt estudiados, un triplete de bases
ACC, siendo ésta la región de captación
del aminoácido.

En uno de los lazos del trébol se encuentra

otro triplete de bases XYZ sin
complementar, que constituye el anticodón
que reconoce al codón o triplete de bases
del ARNm específico de cada aminoácido.

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Los ARNt son muy variables en los distintos tipos de células. Se supone que la
velocidad de traducción del los ARNm puede ser modulada dependiendo de la
presencia de los codones reconocidos por los ARN t más abundantes.

Los ribosomas

Los ribosomas son pequeñas partículas submicroscópicas inmersas en el

citoplasma de las células procarióticas, y libres o unidas al retículo
endoplasmático de los eucariontes. Todos los ribosomas, independientemente
de su origen, constan de dos subunidades de desigual tamaño que están
compuestos por ARN y proteínas.
En conjunto, se puede considerar al ribosoma como un sistema
mecanoquímico que va a actuar como sede para la síntesis proteica, sufriendo
durante el proceso ciertos cambios de conformación.

El mecanismo de la traducción

El proceso de síntesis proteica consta de tres etapas: iniciación, elongación y

terminación. Seguiremos el mecanismo de traducción que ocurre en los
ribosomas de células procariotas y concretamente en células de la bacteria
Escherichia coli.

Figura 3. Esquema de la biosíntesis de proteínas.

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A) Etapa de iniciación.

En E. coli la síntesis comienza con el aminoácido N-formil-metionina, codificado

por AUG. En eucariotas este primer aminoácido es siempre metionina, y es
codificado por el mismo codón que en procariotas.

Por otra parte, el ARNt correspondiente se une al aminoácido formilmetionina

(fMet).

B) Etapa de elongación.

La fijación del ARNt -fMet se realiza por complementación de la región

anticodón frente al codón de iniciación AUG del ARNm sobre la subunidad
pequeña del ribosoma, quedando el ARNt -fMet frente al lugar peptídico P de la
subunidad 50 S.

En la fase de elongación van a ir entrando nuevos ARN t cargados con

aminoácidos en el lugar aminoácido A, según la secuencia específica de los
sucesivos codones del ARNm, para lo cual, el último en entrar en cada
momento pasa a la región peptídica P del ribosoma.

El proceso de elongación se caracteriza por el movimiento del ribosoma sobre

el ARNm, al tiempo que los aminoácidos codificados por la secuencia de sus
bases se van ensamblando para producir el polipéptido.

Una vez ocupados los dos lugares, el peptídico P y el aminoácido A, se

produce el enlace peptídico por ataque nucleofílico del grupo amino del
aminoácido del sitio A sobre el carbono del grupo carbonilo del aminoácido
fMet que está en el sitio P. Este mecanismo está catalizado por la enzima
peptidil-transferasa.

Tras el enlace, el polipéptido en formación pasa al sitio A y queda un ARN t

descargado en el lugar P, que se elimina. A continuación, el ribosoma se
mueve un codón sobre el ARNm, quedando ahora el ARNt-peptidil en el sitio P,
y el sitio A vacío.

C) Fase de terminación.

La terminación de la síntesis proteica está determinada por la entrada en el

ribosoma de uno de los tres codones específicos de terminación: UAA, UAG y
UGA. La separación del ARNt y el péptido es una reacción catalizada por la
enzima peptidil-transferasa. Cuando es liberado el polipéptido, se liberan del
ribosoma el último ARNt y el ARNm.

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 Este tema será evaluado teniendo en cuenta
los siguientes parámetros: resumen y
desarrollo de la actividad y se harán las
respectivas preguntas de forma oral y/o
escrita.

Los procesos que dan lugar a

la expresión de los genes y
las diversas formas de
regulación de dichos
procesos forman, en
conjunto, la parte principal
de la Genética Molecular.

Toda revolución se evapora y

deja atrás sólo el timo de una
buena burocracia
Escrito por: Franz Kafka

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 scrito por: François de la Rochefoucauld
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