Teknologi DNA

rekombinan
Rekayasa genetik
Transgenik

• Tanaman kapas-Bt dan tomat-Bt

tahan terhadap serangan hama
karena menghasilkan toksin yang
dapat membunuh hamanya.
• Toksin pada kapas-Bt dan tomat-
Bt disandikan oleh gen yang
berasal dari bakteri Bacillus
thuringiensis(Bt = Bacillus
thuringiensis)
• Tanaman kapas-Bt dan tomat-Bt
= tanamantransgenik
Transgenik
• Organisme transgenik: organisme yang
membawa gen yang berasal dari jenis
organisme lainnya.
• Organisme transgenik dihasilkan melalui
Rekayasa Genetika
• Rekayasa Genetika menggunakan
Teknologi DNA Rekombinan
• Teknologi DNA Rekombinan: kumpulan
teknik atau metoda yang digunakan
untuk mengkombinasikan gen-gen secara
buatan. (Proses: rekombinasi; Hasil:
rekombinan)
• Teknologi DNA Rekombinan
meliputi:
• -Teknik untuk mengisolasi DNA.
• -Teknik untuk memotong DNA.
• -Teknik untuk menggabung atau
menyambung DNA.
• -Teknik untuk memasukkan DNA
ke dalam sel hidup sehingga DNA
rekombinan dapat bereplikasi dan
dapat diekspresikan.
Percobaan Lederberg dan Tatum (1946)

• menunjukkan: bakteri • DNA dapat masuk ke dalam sel

mempunyai mekanisme seksual: bakteri melalui 3 cara:
menyebabkan terbentuknya • 1.Konjugasi
kombinasi gen-gen yang berasal
dari dua sel yang berbeda. • 2.Transformasi
• -merupakan pertukaran DNA atau • 3.Transduksi
gen dari satu sel ke sellainnya.
Mekanisme seksual pada bakteri
ini tidak bersifat reproduktif
(tidak menghasilkan anak atau
zuriat).
• 1.Konjugasi: perpindahan DNA dari • 2.Transformasi: pengambilan DNA
satu sel (sel donor) ke dalam sel oleh bakteri dari lingkungan
bakteri lainnya (sel resipien) melalui disekelilingnya.
kontak fisik antara kedua sel.

• 3.Transduksi: cara pemindahan DNA

dari satu sel ke dalam sel lainnya
melalui perantaraan fage.
• DNA yang masuk ke dalam sel
bakteri：a.dapat berintegrasi
dengan DNA atau kromosom
bakteri sehingga terbentuk
DNA rekombinan atau • Perangkat utama yang
kromosom rekombinan. digunakan pada pembentukan
DNA rekombinan:
•plasmid
•enzim restriksi
•DNA ligase
•bakteri
• b. tidak dapat berintegrasi
dengan DNA atau kromosom
bakteri
Perangkat utama yang digunakan pada
pembentukan DNA rekombinan

1. Plasmid:
• Terdapat pada bakteri
• DNA selain kromosom
• Berbentuk sirkuler
• Umumnya berukuran kecil (lebih kecil
dari ukuran kromosom bakteri)
• Jenis, jumlah, dan ukurannya
bervariasi antar sel dan antar jenis
bakteri
Perangkat utama yang digunakan pada
pembentukan DNA rekombinan

2. Enzim Restriksi untuk

memotong DNA:
• Contoh: Enzim EcoRI telah diisolasi
pertama kali oleh Herbert Boyer
pada tahun 1969 dari E.coli. Enzim
EcoRI memotong pada bagian
antara basa G dan A pada sekuens
GAATTC.
• Setiap enzim restriksi (endonuklease restriksi) mengenal sekuen
pemotongan yang khas dan memotong DNA pada situs yang khas.
Perangkat utama yang digunakan pada
pembentukan DNA rekombinan

• 3. Enzim DNA ligase

untuk menyambung
DNA
Menggunakan enzim restriksi dan DNA ligase: Jackson, Simon & Berg (1972) berhasil membuat DNA
rekombinan.
Fungsi Plasmid pada pembentukan DNA
rekombinan:
a. digunakan sebagai vektor untuk
mengklonkan gen atau mengklonkan
fragmen DNA atau mengubah sifat
bakteri.
b. untuk memperbanyak gen (copy
gene) yang telah disisipkan dengan
bantuan sel bakteri
Contoh vektor
Bagaimana menyimpan seluruh informasi genetik
dari suatu organisme??

• Pustaka Genom digunakan untuk

menyimpan gen atau fragmen DNA
yang telah diklonkan.
• Isolasi gen menggunakan pendekatan
“shotgun” dapat menghasilkan ribuan
potongan DNA (fragmenDNA)
• Potongan disimpan untuk sementara
waktu di dalam pustaka plasmid atau
pustaka fage
 Bagaimana mendeteksi DNA atau fragmenDNA?

Teknik Elektroforesis digunakan untuk memisahkan fragmen-fragmen DNA berdasarkan ukurannya.

Fragmen DNA yang lebihbesarbergeraklebihlambat, fragmenyang lebih kecil bergerak lebih cepat.
Bagaimana membuat dan menyisipkan DNA rekombinan pada tanaman: Bakteri
Agrobacterium tumefaciens untuk menyisipkan gen kedalam genom tanaman.
Prinsip:

Gen yang diinginkan dimasukkan ke dalam sel tanaman dengan cara menitipkannya
(menyisipkan) pada T-DNA.
Agrobacterium yang digunakan untuk menginfeksi sel tanaman adalah Agrobacterium yang
sudah tidak patogen
Manfaat

• Teknologi DNA rekombinan telah memberikan manfaat dibidang ilmu

pengetahuan maupun dibidang terapan.
• Contoh:
• A. Bidang Kesehatan:
• A1.Insulin manusia Telah diproduksi secara massal menggunakan bakteri E.coli
dan telah diperdagangkan untuk mengobati penyakit diabetes.
• Merek dagang: HumulinR
• A2. Vaksin hepatitis B digunakan untuk mencegah infeksi virus hepatitis. Telah
diproduksi secara komersial menggunakan S.cereviciae dalam skala industri
• A3.Hormon tumbuh manusia (GH) diproduksi menggunakan E.coli dan
digunakan untuk mengobati kelainan pertumbuhan (misal: cebol).
A4.Therapi gen untuk penyakit
dilakukan dengan menggantikan gen yang
mengalami kerusakan dengan gen yang
normal, digunakan untuk mengobati
penyakit-penyakit keturunan (genetic
disorders) dan penyakit lain yang
disebabkan oleh kerusakan gen (misal:
kanker)

SelBone marrow mengandung stem sel yang mampu

miningkatkan semua sel-sel darah dan sistem imun
B. BidangPertanian:

B1. Bakteri Ice- (ice minus): bakteri yang telah direkayasa sehingga tidak
membeku pada suhu rendah. Digunakan (disemprotkan) pada tanaman agar
tanaman tidak membeku dimusim dingin.
Telah diperdagangkan dengan merek FrostbanR
B2. mikroba pendegradasi limbah.
B3. Tanaman tahan hama, misal kapasBt, tomatBt
B4. Tanaman tahan herbisida.
B 5. Peningkatan nilai nutrisi

Tanaman Penambahan nutrisi Keuntungan

Rice Provitamin Vitamin A supplement

Tomato Flavonoid Antioxidant

Sugar beet Fructants Low calori
Bioteknologi Kelautan
Penggunaan hormon pertumbuhan untuk meningkatkan
ukuran ikan
C. BidangHukum

• Pelaku kejahatan dapat diidentifikasi dengan menggunakan analisis Sidik

Jari DNA misalnya: kasus perkosaan
• pola pita DNA pada darah pelaku ke 2 sama dengan pola pita yang
diperoleh dari tempat kejadian orang ke2 adalah pelaku kajahatannya
Hubungan keluarga berdasarkan DNA Fingerprint

Bagaimana mencari siapa ibu kita?

-DNA mitokondria diwariskan melalui ibu
Perbedaan pada urutan DNA dapat diketahui dengan teknik RFLP (restriction fragment length polymorfism)

-untuk menentukan keturunan,

-perbedaan antar satu organisme dengan yang lain.
D. Bidang pengembangan ilmu
pengetahuan:
• D1. Membantu upaya memahami terjadinya kelainan pada manusia
(penyakit genetik) misalnya kanker payudara, Huntington’s disease.
• Huntington’s disease disebabkan oleh gen dominan
• •Gejala sakit mulai terlihat setelah usia pertengahan
• •Gejalanya antara lain: kemunduran mental, gerakan tubuh tak
terkontrol, kesulitan bicara. Biasanya meninggal 10 –20 tahun setelah
timbul gejala.

• D2. Kemajuan Teknologi DNA telah mendorong parai lmuwan (konsorsium

ilmuwan internasional) untuk mewujudkan proyek genom manusia dan
genom organisme lainnya
Teknologi DNA Rekombinan juga mengandung
resiko.