Fase de cultivo celular.

1. Fixeches dous cultivos, un partindo dunha colonia non

fluorescente baixo luz UV e outro partindo dunha fluorescente. Que se
trata de demostrar facendo isto?

Lo que se trata de demostrar es que los dos cultivos tienen presente la proteina
verde fluorescente, pero que en uno de los cultivos no se manifiesta porque no
esta presente la arabinosa.

2. Que papel cumplen no proceso de clonación o iluminador de UV, a

estufa de incubación e a axitación mecánica antes ou durante a
incubación?

ILUMINADOR UV: poder visualizar la fluorescencia de la proteina.

ESTUFA: para que crezca el cultivo
AGITACIÓN MECANICA: para homogenizar.

3. Para que se fan medrar as bacterias en caldo nutritivo

previamente a facer a purificación? Non sería máis sinxelo tomar
directamente as colonias da placa de agar?

Se hacen crecer en caldo nutritivo para concentrar las bacterias y aumente el

número de bacterias.
No, porque sino no tendriamos ese aumento de concentración de las bacterias.

Fase de concentración celular e lise

1. Indica o papel nesta fase do protocolo, da ultracentrífuga, a lisocima e

o conxelador.

ULTRACENTRIFUGA: se utiliza para separar el sobrenadante de la “pelotilla”

bacteriana.
LISOCIMA: para inicie la digestión enzimatica de la pared bacteriana.
CONGELADOR: rompe la bacteria por comple.

2. Porque eliminamos o sobrenadante logo da primeira centrifugación?

Para quedarnos solo con la pelota bacteriana y que el resto de los productos
actúen directamente sobre ella y no este tan diluidos.

3. Como pode a conxelación, un dos principais procesos de

conservación, romper ás membranas celulares?

Porque durante el proceso de congelación se produce la cristalización de los

componentes interiores de la celula y actuan como cuchillos con la membrana
 4. Cal é o propósito de lisar as bacterias?

Para liberar las proteinas de las celulas.

5. Que cor ten o concentrado celular? Que color debería ter o

sobrenadante? Interpreta estas observacións.

El color del concentrado es verde, el sobrenadante no deberia de tener ningun

color.
El concentrado es verde porque alli se encuentra la proteina vede y en el
sobrenadante no.

6. Porque eliminamos o concentrado celular nesta fase do

procedemento?

Porque el concentrado celular son restos celulares y la proteinas se encuentra

en el supernadante.

Fase de cromatografía

1. Describe brevemente o proceso de cromatografía por interacción

hidrofóbica. Relaciona a expliación co caso concreto de
purificación desta práctica.

CROMATOGRAFIA SEPARACION HIDROFOBICA: separa las proteínas en

base a su hidrofobicidad superficial, y se caracteriza por la adsorción de las
biomoléculas a la superficie débilmente hidrofóbica de la resina en una
solución fuertemente salina y su posterior elución mediante una gradiente
salino negativo.

2. Cubre a seguinte táboa indicando as observacións realizadas logo

de correr os tres tampóns de cromatografía.

Tubo de recolleita Predicción Observación baixo luz

UV (columna e tubo)
#1. Mostra en tampón de Se observa sin color Tubo-> sin color verde
ligazón verde bajo la UV porque Columna-> aparece en la
en el tubo no deberia matriz una linea verde
haber proteina ultravileta.

#2. Mostra con tampón Se observa sin color Tubo-> sin color verde
de lavado verde bajo la UV porque Columna-> aparece en la
en el tubo no deberia matriz una linea verde
haber proteina ultravileta
#3. Mostra con tampón
de elución
 3. Tendo en conta os resultados, indica o papel de:
• O tampón de equilibrado: estabilizar los cationes y aniones en la
columna de intercambio catódico.
• O tampón de ligazón: ayuda al descenso de las disociaciones.
• O tampón de lavado: arrastra los restos que quedan en la columna.
• O tampón de elución (TE): ayuda en la elución de las proteínas.

4. Que tampóns teñen concentración salina maior e cal menor? Que

se pode decir sobre o papel da salinidade?

Los tampones que tienen mayor concentración son los primeros después van
disminuyendo. La superfiecie hidrofobica es muy salina y al disminuir la
concentración de la sal en el tampón, contraresta y hace que se eluda mejor.

5. O resultado da práctica foi exitoso? Xustifica a resposta en base os

datos experimentais.

Si fue exitoso porque gracias a la luz UV pudimos seguirle el rastro a la

proteína verde fluorescente y si aparecia cuando debía.