Performa dan

Keunggulan Organisme
Akuakultur Transgenik
Metode produksi ikan transgenik
Gen target Teknik kloning
gen

Vektor ekspresi 1. Mikroinjeksi Induk

2. Elektroporasi
3. Transfeksi, etc.

Produksi ikan Produksi ikan transgenik

transgenik “founder” keturunan F2 homosigot
Pemijahan dengan ikan non-
transgenik

Ikan transgenik
Seleksi untuk
keturunan F1
performa spesifik
Seleksi untuk Performa spesifik

Isolasi DNA

F0 PCR
Embrio M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 N M

Transgene
-Actin

Mosaik:
Kondisi ikan “founder” dimana tidak
semua selnya mempunyai transgen
Identifikasi ikan “germ-line transmitter”
Ikan yang membawa transgen dalam sel germinalnya

Gonad yang membawa transgene

Metoda:
1. Test progeni & analisa PCR dengan DNA cetakan
diekstraksi dari embrio hasil persilangan antara
“founder’ & ikan non-transgenik

2. Analisa PCR dengan DNA cetakan diekstraksi dari gonad

Produksi ikan transgenik F1 (heterosigot)

F1 (0 - 40%)
F0
Embrio
Metode produksi ikan transgenik (3)
Gen target Teknik DNA
recombinan

Vektor ekspresi 1. Mikroinjeksi

2. Elektroporasi
3. Transfeksi, etc.

Produksi ikan Produksi ikan transgenik

transgenik “founder” keturunan F2
Pemijahan dengan ikan non-
transgenik

Ikan transgenik Seleksi untuk

keturunan F1 performa spesifik
Seleksi ikan F1 dengan performa spesifik

- Pengamatan langsung (GFP)

- semi-kuantitatif RT-PCR
- Real-time RT-PCR

F1 (0 - 40%)

∑ Copy
Target
gen
Kontrol
internal
20 35
semi-kuantitatif RT-PCR ∑ cycle
Real-time PCR system
 1 2 3 C N P
Target gene

Internal control

3X
Real-time PCR: expression level
Produksi ikan F2 (heterosigot)

Xm Y

X XXm XY
F1 (0 - 40%)
X XXm XY

F2 (~50%)
F1
(Mendelian pattern)
Metode produksi ikan transgenik (3)
Gen target Teknik DNA
recombinan

Vektor ekspresi 1. Mikroinjeksi Induk

2. Elektroporasi
3. Transfeksi, etc.

Produksi ikan Produksi ikan transgenik

transgenik “founder” keturunan F2 homosigot
Pemijahan dengan ikan non-
transgenik

Ikan transgenik
Seleksi untuk
keturunan F1
performa spesifik
Produksi ikan F2 homosigot

Normal

X Heterosigot F2

F1 Homosigot

M
F Xm Y

Xm XmXm XmY X
X XXm XY

F2
Semua transgenik
 Meningkatkan laju pertumbuhan
 Meningkatan resisten thd penyakit
 Meningkatkan adaptasi thd kondisi lingkungan yg ekstrem,
seperti temperatur beku
 Meningkatkan kualitas daging;
 Mengubah jalur biosintesis utk meningkatkan konversi pakan;
 Biosensor;
 Memproduksi strain ikan baru;
Purposes……
 Meningkatkan Laju Pertumbuhan
# Salmonid : 10 fold (Devlin et al., 1994)
# Mud loach : 35 fold (Nam et al., 2001)
# Nile tilapia : 7 fold (Kobayashi, 2006)

 Meningkatkan Resisten thd Penyakit

# Medaka : bacteria; 40% Non-TG vs. 10% TG
(Sarmasik et al., 2002)
# Zebrafsih : bacteria; 100% Non-TG vs. 50% TG
(Yazawa, 2005)
 Meningkatkan laju pertumbuhan
Growth enhancement achieved by DNA
manipulation:

Growth enhancement: ~ 30-fold higher

Nam et al. (2001)

 genetically improved

normal

salmon: tumbuh 10-30x lebih cepat

 genetically improved

normal
Nila:
tumbuh 2-7x lebih cepat
 Transgenik:
31 cm; 291 g

Non-Transgenik:
9,4 cm; 9 g

Ikan mud loach umur ikan 6 bulan (Nam et al. 2001, J.

World Aquaculture Soc., 32(4)
 Tilapia: 80% (Maritinez et al., 1996)

Tilapia 2 - 4 fold higher (Maclean)

Common carp:
- 50% (Rex Dunham)
- 2 fold higher (Wang, 2002);

Channel catfish: 33% faster (Dunham et al., 1995)

Transgenesis:
- pCcBA-PhGH (Cyprinus carpio β-actin promoter ligated with Pangasionodon hypophthalmus GH)
- Sperm mediated gene transfer, by electroporation
M 1 2 3 4 5 P C
(Dewi RRSPS, 2010; Dissertation)
PhGH expression
at caudal fin ◄
control
M 1 2 3 4 5 C N
Number of individual fish

β-actin expression
at caudal fin ◄

F0 fish

F0 TRANSGENIC GH NON-TRANSGENIC
(6 months; 200 g) (6 months;  80 g)
Body weight of 4-month old juvenile
Transgenesis: ikan lele dumbo
- pCcBA-PhGH (Cyprinus carpio β-actin promoter ligated with Pangasionodon hypophthalmus GH)
- Sperm mediated gene transfer, by electroporation

Bobot rerata (g)

transgenik

non transgenik

0 15 30 Hari
45 60 75 90

BPPI Sukamandi (2013)

 Meningkatan resisten thd penyakit

Udang windu yang ditantang dengan virus WSSV (Parenrengi,

2010)
 Meningkatan resisten thd penyakit
 Increase food conversion efficiency

2,5 35,0%
efficiency (x100%)

Transgenic
Food conversion

2,0
Non-
transgenic
1,5

1,0
1 2 3 4 5 6 7 8

Age (week)

Food conversion efficiency in transgenic (red line)

and non-transgenic tilapia (blue line)
(Kobayashi et al., 2007)
Environmental - friendly fish
(n= 5, P < 0,01)
150 ** **
(mg / fish weight / day)
Ammonium excretion

120
34,4% 36,5%
90
**
60 26,1%
**
30 29,6%

0
10 43 235 660

Fish weight (gram)

Ammonium (NH4-N) excretion in transgenic
(red bar) and non-transgenic tilapia (blue bar)
(Kobayashi et al., 2007)
Purposes ……

 Kondisi Lingkungan Ekstrem

# Goldfish : Anti-freeze protein

(Wang et al., 1995)

 Meningkatkan Kualitas Daging dan Mengubah Jalur

Metabolisme utk Peningkatan Konversi Pakan
# Zebrafish : HUFA biosynthesis; EPA & DHA
(Alimuddin et al., 2005; 2006)
 LNA OTA ETA EPA
(18:3n-3) (18:4n-3) (20:4n-3) (20:5n-3)
6-desaturase 5-desaturase
Elongase

EPA/DHA biosynthesis pathway

Elongase
-oxidase ?
6-desaturase ?

DHA THA TPA DPA

(22:6n-3) (24:6n-3) (24:5n-3) (22:5n-3)
Puproses ……

 Biosensor
-Zebrafish (Danio rario) Principle:
Clean water

* *
*
RE GFP Poly (A)

*
-Medaka (Oryzias latipes) *
Polluted
* * ** * * *
** * * **
* ** ** ** * *
RE GFP Po ly (A)
Goals ……

 Produce new fish strain

(Gong, 2003)
THE END