Anda di halaman 1dari 4

Jika terdapat sejumlah Ag dalam larutan seperti serum, sulit memisahkan pita presipitasi yang

timbul pada setiap reaksi Ab-Ag, bila hanya menggunakan cara difusi di atas. Komponen serum
dipisahkan dengan elektroforesis dalam agar gel dan antiserum dibiarkan berdifusi melalui
komponen yang dihasilkan pada pita-pita yang terbentuk.

Prinsip Immunoelectrophoresis
Ketika arus listrik dialirkan ke kaca objek yang dilapisi dengan gel, campuran antigen yang
ditempatkan dalam sumur dipisahkan menjadi komponen antigen individu sesuai dengan muatan
dan ukurannya. Setelah elektroforesis, antigen yang terpisah direaksikan dengan antisera spesifik
yang ditempatkan di palung paralel dengan migrasi elektroforesis dan difusi dibiarkan terjadi.
Antiserum yang ada di palung bergerak menuju komponen antigen yang menghasilkan
pembentukan garis presipitin terpisah dalam waktu 18-24 jam, masing-masing menunjukkan
reaksi antara protein individu dengan antibodinya.

Imunoelektroforesis arus balik bergantung pada pergerakan antigen menuju anoda dan antibodi
menuju katoda melalui agar di bawah medan listrik. Pengujian dilakukan pada slide kaca dalam
gel agarosa dengan aliran elektro-endosmotik tinggi. Sepasang sumur dilubangi di mana satu
sumur diisi dengan antigen dan yang lainnya dengan antibodi. Arus listrik kemudian dialirkan
melalui gel. Migrasi antigen dan antibodi sangat difasilitasi di bawah medan listrik, dan garis
presipitasi sebagai busur presipitin terlihat dalam 30-60 menit, yang menunjukkan reaksi positif.

Prosedur Pemeriksaan Immunoelectrophoresis


Gel agarose disiapkan di atas slide kaca yang diletakkan dalam posisi horizontal.
Menggunakan templat sampel, sumur ditanggung di zona aplikasi dengan hati-hati.
Sampel diencerkan 2: 3 dengan larutan pengencer protein (larutan antigen 20μl + pengencer
10 μl).
Dengan menggunakan pipet 5 μl, 5 μl kontrol dan sampel diterapkan di setiap celah yang
sesuai (Celah kontrol dan Celah sampel).
Gel ditempatkan ke dalam ruang elektroforesis dengan sampel di sisi katodik, dan
elektroforesis dijalankan selama 20 menit / 100 volt.
Setelah elektroforesis selesai, 20 μl antiserum yang sesuai ditambahkan ke dalam bak di ruang
lembab dan diinkubasi selama 18-20 jam pada suhu kamar dalam posisi horizontal.
Gel agarosa ditempatkan pada posisi horizontal dan dikeringkan dengan lembaran blotter.
Gel dalam larutan garam direndam selama 10 menit dan pengeringan dan pencucian diulang
dua kali lagi.
Gel dikeringkan pada suhu kurang dari 70 ° C dan dapat diwarnai dengan larutan pewarnaan
protein selama sekitar 3 menit diikuti dengan penghilangan warna gel selama 5 menit dalam bak
larutan suling.
Gel dikeringkan dan hasilnya dievaluasi.

Adanya busur presipitin elips merepresentasikan interaksi antigen-antibodi.


Tidak adanya pembentukan endapan menunjukkan tidak adanya reaksi.
Antigen (protein) yang berbeda dapat diidentifikasi berdasarkan intensitas, bentuk, dan posisi
garis presipitasi.

 Lydyard, P.M., Whelan,A.,& Fanger,M.W. (2005).Immunology (2 ed.).London: BIOS


Scientific Publishers.
 Parija S.C. (2012). Textbook of Microbiology & Immunology.(2 ed.). India: Elsevier India.
 Actor, J.K. (2014). Assessment of Immune Parameters and Immunodiagnostics. Introductory
Immunology. Pages 135-152
 Sastry A.S. & Bhat S.K. (2016). Essentials of Medical Microbiology. New Delhi : Jaypee
Brothers Medical Publishers
PRINSIP: Imunoelektroforesis adalah elektroforesis campuran antigen yang ditentukan dalam
gel agarosa yang memungkinkan pemisahan antigen yang berbeda di sepanjang slide gel, dan
kemudian difusi lateral antibodi di dalam gel. Counter Current Immunoelectrophoresis adalah
modifikasi dari immunoelectrophoresis dimana antigen dan antibodi bergerak berlawanan arah
dan membentuk endapan di area antara sel-sel tempat mereka bertemu dalam konsentrasi
proporsi yang optimal.

Dalam metode ini, imunopresipitasi terjadi ketika antigen di katoda disebabkan untuk bermigrasi
dalam medan listrik melalui media difusi yang sesuai melawan aliran antibodi yang bermigrasi
dari anoda karena aliran endosmotik. Ini adalah elektroimunodifusi ganda satu dimensi di mana
antibodi dan antigen digerakkan satu sama lain oleh medan listrik yang diterapkan, karena gel
disangga pada pH antara titik isoelektrik antigen dan antibodi. Antigen dan antibodi ditempatkan
di sumur terpisah di piring gel Agarose. Gel bersifat basa dan antibodi (Imunoglobulin) pada pH
7,6 memiliki muatan mendekati nol. Selama elektroforesis, matriks agarosa menyerap ion OH- di
permukaan sehingga menghasilkan peningkatan bersih ion positif pada jarak yang jauh dari
matriks. Ion positif ini bermigrasi menuju kutub negatif dengan pelindung pelarut, menghasilkan
aliran pelarut bersih yang disebut endosmosis. Oleh karena itu, molekul antibodi, yang tidak
memiliki muatan, bergerak menuju katoda bersama dengan perisai pelarut karena fenomena ini.

BAHAN: Agarose, Antigem, Uji antiserum, Antiserum positif, Buffer Pengujian, Peralatan
Electrophoreis, Slide kaca.

PROSEDUR: Siapkan 10 ml agarose 1,0% (0,1 g / 10 ml) dalam 1X Assay Buffer dengan
pemanasan perlahan sampai agarosa larut sepenuhnya. Berhati-hatilah agar tidak membuahkan
solusi.
2. Tandai ujung slide kaca sebagai + ve dan -ve, sehingga ketika kaca slide diletakkan di dalam
alat elektroforesis, tanda + ve menghadap ke arah anoda dan tanda negatif menghadap ke arah
katoda.
3. Tempatkan pelat kaca atau geser pada permukaan horizontal. Pipet dan oleskan 5 ml agarosa
pada kaca objek. Biarkan mengeras selama 15 menit. Berhati-hatilah agar slide tidak terganggu
dan biarkan gel mengeras. 4. Potong lubang sesuai template menggunakan pelubang gel. Jarak
antara kedua sumur tidak boleh lebih dari 0,5 cm. 5. Letakkan kaca objek di tangki elektroforesis
dan isi tangki dengan buffer elektroforesis 1X hingga buffer menutupi permukaan gel. Jangan
menambahkan buffer yang berlebihan. 6. Tambahkan 10μl antigen di masing-masing dua sumur
menuju katoda (elektroda negatif) dan 10μl antiserum kontrol positif dan uji antiserum di dalam
sumur menuju anoda (elektroda positif) seperti yang ditunjukkan.
7. Hubungkan kabel daya ke catu daya elektroforetik sesuai dengan ketentuan: merah: anoda dan
hitam: katoda. 8. Terapkan 50 V dan biarkan elektroforesis berlanjut selama sekitar 45 menit. 9.
Perhatikan garis endapan antara sumur antigen dan antisera.

INTERPRETASI: a) Garis presipitin menunjukkan adanya antibodi untuk antigen dalam serum
uji. b) Tidak adanya garis presipitin menunjukkan tidak adanya antibodi untuk antigen dalam
serum uji. HASIL: Adanya garis presipitin antara antigen dan antibodi menunjukkan
spesifisitasnya sedangkan tidak adanya garis presipitin menunjukkan tidak adanya spesifisitas.