Mohamad Bintang Nugraha

141811133155
C-Akuakultur
Resume Praktikum Patologi
PENYAKIT PADA MOLUSKA
1. Menilai status kesehatan bagian epidemologi
1.1 Bahan yang di gunakan
Bahan yang digunakan tergantung spesies, tahap kehidupan, dan ukuran dan tujuan hewan tersebut di
uji (Uji penyakit, pengambilan sampel untuk menunjukkan bahwa sampel tersebut bebas dari penyakit
tertentu).
1.2 Spesifikasi moluska menurut ukuran
Untuk parasit yang tercatat
Juvenile dibawah 1 cm, juvenile dan dewasa berukuran 1-6 cm, moluska berukuran lebih dari 6 cm,
abalon dengan sindrom layu besar kurang dari 20 mm, abalon yang terinfeksi virus herpes
1.3 Spesifikasi berdasar populasi moluska
1. Biasanya moluska yang di budidayakan secara intensif dan yang memiliki interaksi ekstesif dengan
lingkungan alam .
2. Moluska yang dibudidayakan sering memiliki siklus hidup yang saat di alam, namun tidak selalu dapat
diakses utuk observasi
3. Metode kultur ganda untuk spesies yang sama mungkin dalam wilayah yang sama dan dapat mewakili
populasi yang berbeda.
4. Wilayah geografis yang berbeda dan terdiri dari pemilik dan pengolahan yang berbeda dapat
menimbulkan tatangan saat merancang program pengambilan sampel.
5. Dst.
1.4 Spesifikasi berdasar status klinik
Dalam kasus infeksi klinis, selain jaringan organ terget yang menunjukkan kelainan atau lesi
makroskopik juga harus diambil sampelnya.
2. Pengolahan sampel secara umum.
Semua sampel harus dikirim hidup-hidup ke lab yang telah disetujui dan pihak lab harus di beri
informasi mengenai waktu kedatangan sampel, sehingga dapat menyiapkan bahan yang di butuhkan untuk
mengolah moluska tersebut. Sampel harus dikemas sesuai dengan standar yang berlaku untuk menjaga tetap
hidup, jika lokasi pengambilan sampel jauh dari lab dan hewan hampir mati atau sudah mengeluarkan aroma
yang tidak sedap maka sampel tersebut tidak akan berguna di penelitian selanjutnya. Sampel harus disertai
informasi latar belakang, termasuk alasan pengiriman, pengamatan kasar dan parameter lingkungan terkait,
perkiraan prevalensi dan pola kematian, dll.
2.1 Pemeriksaan makroskopis
Pemeriksaan ini meliputi perilaku hewan, permukaan cangkang, cangkang bagian dalam dan jaringan lunak.
Pengamatan di perairan terbuka sering dirasa sulit maka harus di lakukan di fasilitas pemeliharaan tertentu
agar dapat melakukan pengamatan degan jelas apabila terlihat tanda-tanda atau pergerakan dari sampel yang
di amati. Moluska harus dibuka dengan hati-hati agar tidak merusak jaringan lunak, khususnya mantel,
insang, jantung, dan kelenjar pencernaan. Tingkat kerusakan jaringan harus dicatat dan sampel hewan yang
terkena dan tidak terpengaruh dikumpulkan untuk pemeriksaan laboratorium sesegera mungkin.
2.2 Pemeriksaan apabila terjadi mortalitas abnormal
Kematian mendadak biasanya dikatakan sebagai kematian yang abnormal dan terjadi dalam waktu
yang singkat, di tempat penetasan kematian abnormal mengakibatkan gagal produksi larva. Kapanpun
terjadi kematian abnormal harus segera dilakukan investigasi untuk menentukan penanganan yang tepat.
2.3 Metode diagnostik.
Teknik yang dapat diterpkan pada agen penyakit moluska terbatas pada deteksi langsung dari agen
penyebab, metodeserologis klasik tidak dapat tigunakan untuk tujuan diagnostik karena moluska dapat
menghasilkan antibodi. Selain histologis dan sitologi, immunoassay menggunakan antibodi monolokal atau
probe asam nukleat dapat digunakan untuk mendeteksi agen penyakit
2.4 Teknik Histologis
 Histologi adalah teknik yang digunakan untuk mempelajari struktur sel dan jaringan di bawah
mikroskop cahaya. Persiapan jaringan melibatkan langkah-langkah yang berbeda, termasuk fiksasi jaringan,
dehidrasi, impregnasi dan penanaman sampel,
persiapan bagian, pewarnaan dan pemasangan slide.
2.5 Metode mikroskop elektron transmisi
Karena mikroskop elektron transmisi sangat sering digunakan untuk konfirmasi identifikasi agen
penyakit dalam prosedur diagnostik penyakit moluska, pedoman teknis terperinci disediakan dalam bab ini.
Fiksasi untuk mikroskop elektron harus dilakukan segera setelah hewan dibunuh, sebelum fiksasi untuk
histologi. Hanya sampel yang diambil dengan cepat dari hewan hidup yang akan berguna. Persiapan sampel
elektron mikroskopi melibatkan langkah-langkah berikut: fiksasi jaringan, dekalsifikasi sampel (bila perlu),
dehidrasi, impregnasi dan penanaman sampel, persiapan dan pewarnaan ulang bagian-bagian tersebut.
2.6 Metode molekuler
Teknik molekuler biasanya menawarkan keunggulan dalam sensitivitas yang sering kali diimbangi
oleh masalah teknis. PCR sangat bergantung pada kondisi saat PCR dijalankan, dan dapat menghasilkan
hasil positif palsu atau negatif palsu. Namun, penggunaan uji PCR berbasis RNA dapat menunjukkan
adanya parasit hidup tetapi tetap tidak dapat memastikan adanya infeksi atau penyakit. PCR, PCR-RFLP
(batasan polimorfisme panjang fragmen), pengurutan, in-situ hibridisasi dan immuno-histokimia semakin
banyak digunakan dalam identifikasi konfirmasi agen penyakit. Untuk teknik ini, sampel harus disiapkan
untuk mengawetkan DNA patogen. Demikian juga, sampel yang dimaksudkan untuk pengujian dengan
metode berbasis antibodi harus disimpan untuk mempertahankan situs antigenik reaktif untuk antibodi yang
digunakan
2.7 Ekstraksi DNA
Untuk ekstraksi RNA, gunakan 1 mm Tri Reagent (Trizol) per 50 mg jaringan, 5–10 × 10 6 sel atau
10 cm 2 dari piring budaya. Sampel homogen kemudian dibiarkan diatur pada suhu kamar selama 5 menit
untuk memungkinkan terjadinya disosiasi kompleks nukleoprotein. Tambahkan 200 µl kloroform, kocok
kuat-kuat dan diamkan selama 15 menit pada suhu kamar. Centrifuge pada 12.000 g selama 15 menit pada
suhu 4 ° C. Pindahkan fasa air ke tabung baru dan endapkan RNA dari fasa air dengan mencampurkan
secara lembut dengan 0,5 ml isopropanol per 1 ml Reagen Tri. Simpan sampel pada suhu kamar selama 10
menit dan sentrifugasi pada 12.000 g selama 8 menit pada suhu 4 ° C. Hapus supernatan dan cuci pelet RNA
dengan etanol 75% dan sentrifugasi berikutnya pada 7500 g selama 5 menit pada suhu 4 ° C. RNA dapat
dilarutkan dalam air atau larutan lain yang
2.8 Persiapan Slide untuk in-situ hibridasi
Untuk hibridisasi in-situ, moluska difiksasi dalam fiksatif Davidson selama kurang lebih 24 jam dan
kemudian ditanam dalam parafin, sesuai dengan metode yang dijelaskan di atas untuk histologi. Bagian
dipotong dengan ketebalan 5 µm dan ditempatkan pada slide berlapis aminoalkilsilan, yang kemudian
dikeringkan semalaman pada suhu kamar atau dalam oven pada suhu 40 ° C. Bagian-bagian tersebut
mengalami dewax dengan merendam dalam xylene selama 10 menit. Langkah ini diulangi sekali dan
kemudian pelarut dihilangkan dengan pencelupan dalam dua bak etanol absolut berturut-turut selama 10
menit masing-masing. Potongan-potongan tersebut kemudian direhidrasi dengan pencelupan dalam seri
etanol menurun. Protokol mungkin memerlukan langkah permeabilisasi membran yang memungkinkan
akses ke DNA target. Untuk tujuan ini, bagian diperlakukan dengan proteinase K (100 µg ml –1) dalam
buffer TE (Tris [50 mM], EDTA [10 mM]), pada 37 ° C selama 10–30 menit.