BAKTERI

ACHOLEPLASMA LAIDLAWII

DI SUSUN OLEH
NAMA : ALIEF FAIZAL SATYAJAYA
KELAS : XII A FKK
MAPEL : BIOLOGI
PENGAMPU : HERWAN SANUR,M.pd

SMKS 16 FARMASI BHAKTI NUSA

TAHUN PELAJARAN 2020/2021
 KATA PENGANTAR

Dengan menyebut nama Allah SWT yang Maha Pengasih lagi Maha
Panyayang, kami panjatkan puja dan puji syukur atas kehadirat-Nya, yang telah
melimpahkan rahmat, hidayah, dan inayah-Nya kepada kami, sehingga kami
dapat menyelesaikan makalah biologi bakteri acholeplasma laidlawii
Adapun makalah biologi tentang tanaman transgenic ini telah kami
usahakan semaksimal mungkin dan tentunya dengan bantuan berbagai pihak,
sehingga dapat memperlancar pembuatan makalah ini. Untuk itu kami tidak
lupa menyampaikan banyak terima kasih kepada pihak yang telah membantu
kami dalam pembuatan makalah ini. Namun tidak lepas dari semua itu, kami
menyadari sepenuhnya bahwa ada kekurangan baik dari segi penyusun
bahasanya maupun segi lainnya. Oleh karena itu dengan lapang dada dan
tangan terbuka kami membuka selebar-lebarnya bagi pembaca yang ingin
memberi saran dan kritik kepada kami sehingga kami dapat memperbaiki
makalah biologi ini.
Akhirnya penyusun mengharapkan semoga dari makalah biologi ini kita
dapat mengambil hikmah dan manfaatnya sehingga dapat memberikan inpirasi
terhadap pembaca.

Bengkulu, 6 April 2021

Penyusun
 DAFTAR ISI

Halaman
BAB 1 PENDAHULUAN………………………………………………….
A. LATAR BELAKANG……………………………………………
BAB II TUJUAN…………………………………………………………….
BAB III MANFAAT………………………………………………………….
BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN……………………………………..
DAFTAR PUSTAKA………………………………………………………….
 BAB 1
PENDAHULUAN

Kontaminasi kultur sel dan serum yang digunakan untuk

perbanyakan virus hewan dengan mikoplasma merupakan masalah
serius, terutama dalam virologi. Oleh karena itu, tindakan pengendalian
khusus harus digunakan. Untuk mencapai hal ini kami memperkenalkan
PCR untuk mendeteksi spesies mikoplasma dalam kultur sel dan
membandingkan hasilnya dengan ELISA dan kultur mikrobiologis.
Tujuh spesies mikoplasma yang merupakan kontaminan garis sel
yang paling umum (Mycoplasma arginini, M. fermentans, M. hyorhinis,
M. bovis, M. orale, M. hominis, dan Acholeplasma laylawii) digunakan
untuk memverifikasi metode tersebut. Kemudian kami menilai lima baris
sel yang dipilih dan tiga serum sapi dengan metode PCR, ELISA dan
kultur dan membandingkan hasilnya. PCR positif untuk semua spesies
mikoplasma yang diuji. Kit ELISA yang digunakan (Kit deteksi
Mycoplasma, Roche, Jerman) memungkinkan deteksi hanya empat
spesies mikoplasma yang terkontaminasi (Acholeplasma laylawii,
Mycoplasma arginini, M. hyorhinis, dan M. orale).
Semua metode mendeteksi kontaminasi garis sel VERO dan
RK13. Agen kontaminasi ditentukan oleh kit ELISA spesifik spesies
sebagai Mycoplasma arginini dan M. orale, masing-masing. Garis sel dan
serum lain yang diuji tidak terkontaminasi mikoplasma. Hasilnya
menegaskan bahwa metode PCR yang digunakan dalam penelitian ini
adalah metode deteksi kontaminasi mikoplasma yang sensitif, cepat dan
spesifik dan cocok untuk deteksi mikoplasma rutin dalam kultur sel dan
serum sapi. Beberapa spesies mikoplasma, di antaranya adalah
Mycoplasma orale, M. fermentans,

A. LATAR BELAKANG
M. salivarium dan M. hominis, hadir sebagai flora normal pada
manusia, sehingga menjadikan tenaga laboratorium sebagai sumber
kontaminasi yang memungkinkan.
Sumber kontaminasi penting lainnya yang harus
dipertimbangkan, mengingat asal hewannya, adalah reagen seperti tripsin
atau serum janin sapi yang tidak bersertifikat untuk kultur sel, dari mana
spesies M. hyorhinis, M. arginini telah diisolasi terutama. Dan
Acholeplasma laylawii Saat ini, pengujian berdasarkan polymerase chain
reaction (PCR) adalah yang paling banyak digunakan di laboratorium,
karena memiliki sensitivitas tinggi dan mencakup sejumlah besar spesies
yang terkontaminasi, bergantung pada wilayah genom yang dipilih untuk
amplifikasi dan desain oligonukleotida merosot . Untuk mendeteksi
mikoplasma dalam kultur sel, beberapa protokol telah diterbitkan,
masing-masing dengan spesifisitas, sensitivitas dan kondisi
kesederhanaan yang berbeda Untuk alasan ini,
Penggunaan Pengendalian Internal (IC) telah diterapkan dalam
reaksi PCR yang memungkinkan memvalidasi hasil yang diperoleh dari
sampel negatif atau mendeteksi beberapa kegagalan (dengan
penghambatan) di PCRMatriks yang digunakan sebagai sampel negatif
tidak menyebabkan gangguan efek matriks pada pengujian dan mereka
mewakili pekerjaan sehari-hari di laboratorium MYCOLAB, karena
kultur sel VERO dan serum janin sapi terdiri dari 52,5% dan 9,32%
Rata-rata, dari jumlah tersebut. jumlah sampel yang diminta oleh
pelanggan untuk dianalisis dalam satu tahun.
Jumlah sampel yang tinggi ini sesuai dengan kebutuhan
pelanggan untuk menghindari risiko penggunaan bahan baku yang sering
terkontaminasi oleh mikoplasma (Lobo et al 2004 Sobrazo et al 2006 dan
Duorakova et al 2007).
Konsentrasi mikoplasma yang digunakan dalam sampel positif
memastikan hasil yang efektif untuk Mycoplasma arginini dan
Mycoplasma hyohinis, yang sering menjadi kontaminan produk
biofarmasi dan sesuai dengan yang ditunjukkan oleh Duorakova et al
2007 dan Rivera-Tapia et aT 2010 proliferasi dan virulensi beberapa
bakteri asporogenik.
Ditemukan dalam penelitian kami bahwa adaptasi dapat terjadi
dalam kondisi yang tidak menguntungkan Itu adalah mycoplasma
Acholeplasma laylawii di mana-mana, disajikan bahwa adaptasi stres
mikroorganisme yang menginfeksi manusia, hewan, tumbuhan dan
menjadi faktor utama dapat disertai dengan sintesis kontaminan spesifik
dari kultur sel [9] dan metabolit Mycoplasma dengan aktivitas mutagenik
dan antimutagenik penyakit burung dan kontaminan berdasarkan vaksin
virus M. gallisepticum S6 dan cairan kulturnya menghasilkan sel
vegetatif dan sel VBNC dari aktivasi respons SOS.
Nilai untuk mikoplasma diperoleh seperti yang dijelaskan
sebelumnya Media Mikoplasma Kaldu Mycoplasma (MB) didasarkan
pada formulasi Frey et al. (1968). Mediumnya berisi basis kaldu
mikoplasma (Gibco), cystein HCl (BDH), thallous acetate (BDH), fenol
merah (Chroma) dan air suling (pH 7,8).
Formulasi mycoplasma agar (MA) serupa kecuali glukosa dan
fenol merah dihilangkan. A Noble agar (Difco) dulu digunakan untuk
MA. Media ini diautoklaf di 121'C selama 15 menit dan didinginkan
hingga suhu kamar untuk MB dan hingga 50 ° C untuk MA, dilakukan
pengayaan steril lalu ditambahkan. Pengayaan mengandung serum babi
(dinonaktifkan pada 56 ° C selama 30 menit), ekstrak ragi (Difco), DNA
(Koch-Light), NAD (BDH), actidione (UpJohn) dan penisilin G
(Hoechst).
Isolasi Mycoplasma Isolat mikoplasma diambil dari sinus hidung
ayam menggunakan penyeka steril. Penyeka diinokulasi menjadi MB dan
diinkubasi pada suhu 37 ° C hingga 14 hari. Apa saja kultur yang
terkontaminasi disaring menggunakan 0.22 pm filter (Millipore) dan
kemudian diinokulasi ulang ke MB. Saat indikator fenol merah berubah
dari merah menjadi berwarna merah muda (kira-kira pH 6,9) kultur
diinokulasi ke MA dan diinkubasi dalam botol lilin yang dilembabkan di
37 ° C hingga 14 hari. Jika indikator tidak berubah dalam 14 hari kultur
masih juga diinokulasi MA dan diinkubasi seperti dijelaskan di atas.
Koloni mikoplasma tunggal dipilih dan diinokulasi ulang MB dan
diinkubasi pada suhu 37 ° C.
Saat indikator berubah dari merah menjadi merah muda, kultur
kemudian disimpan di-20 ° C.Sekitar 32 fermentasi glukosa dan 18 non-
glukosa organisme fermentasi diisolasi. Namun, 23 keluar dari 32
fermentasi glukosa dan 10 dari 18 non-glukosa organisme fermentasi
gagal dilalui MB dan MA. Isolat lainnya diidentifikasi menggunakan tes
biokimia. Enam isolat MG diperoleh dari Tn. G. Cottew, CSIRO
Australia digunakan sebagai kontrol. Aglutinasi serum cepat (RSA)
digunakan untuk pengujian serologis. Antigen ini telah dibandingkan
dengan antigen MG Nobilis (Intervet) dan tidak perbedaan signifikan
ditemukan.
Antigen Balitvet Penyakit Hewan Vol. XXI No. 38, Semester II
Th. 1989 disimpan di lemari es dan disetarakan di kamar suhu selama 30
menit sebelum digunakan. Dua puluh lima I, d antigen yang diwarnai
ditambahkan ke 25 pl yang diuji serum dalam wadah baki WHO, diaduk
rata dengan disadap baki dan kemudian diputar pada aglutinator putar
untuk 90 detik. Aglutinasi dinilai dari jejak menjadi 4 plus berdasarkan
ukuran rumpun dan derajat membersihkan tanah kembali. Sera positif
dan negatif digunakan untuk kontrol di setiap pelat uji. Tes Biokimia.Tes
biokimia ini mengikuti metode yang dijelaskan oleh Aluotto et al. (1970)
sebagaimana dimodifikasi oleh Soeripto (1987).
Sensitivitas terhadap Digitonin Volume 25 pl dari 1 .5 01o (w /
v) digitonin dalam etil alkohol dioleskan ke cakram kertas saring 6 mm
dan dikeringkan pada suhu 37 ° C. Kultur uji diinokulasi ke mycoplasma
agar dan cakram kering ditempatkan di atasnya permukaan agar-agar.
Piring agar diinkubasi di atmosfer lembab dalam toples lilin hingga 14
hari. Mycoplasma sp. menunjukkan zona hambatan pertumbuhan lebih
besar dari 5 mm sedangkan Acholeplasma sp. menunjukkan
penghambatan kurang dari 5 mm. Idasi dan Uji Fermentasi Dua tabung
tutup ulir berisi 1 ml agar mycoplasma pH 7,8 dengan glukosa 1% (b / v)
masing-masing diinokulasi dengan 50 pI kultur mikoplasma dan satu
dilapisi dengan minyak parafin steril. Dua lainnya tabung dibiarkan tidak
diinokulasi dan salah satunya dilapisi dengan parafin steril sebagai
kontrol. Semua tabung itu diinkubasi dalam suasana yang lembab dalam
toples lilin pada 37 ° C hingga 14 hari.
Reaksi afermentatif adalah ditunjukkan oleh produksi asam di
kedua aerobik dan tabung anaerob sedangkan reaksi oksidatif
ditunjukkan dengan produksi asam hanya dalam tabung aerobik.
Pemanfaatan Glukosa, Arginine dan Urea A1% (b / v) volume glukosa,
arginin atau urea ditambahkan ke kaldu mikoplasma. PH
media glukosa disesuaikan menjadi 7,8 sedangkan Ph arginin dan urea
disesuaikan menjadi 7 .0. Sebuah volume dari 5% kultur uji diinokulasi
ke dalam media ini.
Media glukosa, arginin dan urea yang tidak diinokulasi disajikan
sebagai kontrol. Media uji diinkubasi secara aerob dan anaerob pada 37 °
C hingga 7 hari. Adrop dalam pH 0,5 unit atau lebih dalam media
glukosa dikupas ke media kontrol menunjukkan reaksi positif.
Sebaliknya, kenaikan pH 0,5 unit atau lebih
dalam media arginin atau urea dibandingkan dengan kontrol substrat
diinterpretasikan sebagai tes positif. Pengurangan Tetrazolium Larutan
steril 2,3,5-triphenyltetrazolium klorida ditambahkan pada konsentrasi
0,02% (b / v) ke MA. Plat diinokulasi dengan cul mycoplasma
berkembang biak dan diinkubasi secara aerob dan anaerob di 37 ° C
hingga 14 hari. Perubahan warna merah di dalamnya pertumbuhan koloni
menunjukkan reaksi positif.
Pengurangan Tellurite Konsentrasi kalium 0,001% (b / v) telurit
dimasukkan ke dalam media agar mikoplasma. Piring agar-agar
diinokulasi dengan mikoplasma kultur dan diinkubasi secara aerob dan
anaerob pada 37 ° C hingga 14 hari. Reduksi telurit ditandai dengan
adanya warna hitam di sekitar mikoplasma koloni.
Reduksi Methylene Blue Seratus pl biru metilen 0,1% (b / v)
larutan ditambahkan ke 2,9 ml mikoplasma 24 jam kultur dan diinkubasi
secara aerob dan anaerob pada 37 ° C hingga 24 jam. Pengurangan warna
biru warna menunjukkan reaksi positif. Film dan Formasi Spot
Mycoplasma agar yang mengandung 1 .0% (b / v) telur kuning telur
diinokulasi dengan kultur mikoplasma dan diinkubasi dalam atmosfir
yang dilembabkan dalam wadah lilin di 37 ° C hingga 14 hari. Kehadiran
kerut dan film seperti mutiara pada medium dengan bintik hitam di
bawahnya dan di sekitar koloni menunjukkan hasil positif.
Uji Penghambatan Pertumbuhan Volume 25 pl MG atau M.
gallinarum antiserum diaplikasikan ke disk kertas saring 6 mm dan
dikeringkan dalam lemari biohazard selama beberapa menit. Itu kultur uji
diinokulasi ke MA dan dikeringkan cakram ditempatkan ke permukaan
agar-agar. Pelat agar diinkubasi dalam suasana lembab dalam lilin toples
hingga 14 hari. Hasil positif ditunjukkan di mana zona hambatan lebih
besar dari 3 mm diamatiTes ini dilakukan seperti yang dijelaskan oleh
Manchee dan Taylor-Robinson (1968).
Untuk uji hemadsorpsi, volume 0,5% (w / v) eritrosit ayam
dalam buffer fosfat saline (PBS) dituangkan ke MA yang berisi myco
koloni plasma. Larutan eritrosit yang berlebih ditarik menggunakan pipet
Pasteur dan kemudian MA dikeringkan dalam lemari biohazard. Setelah
15 menit. Piring dicuci 3 kali dengan PBS. Kemampuan sel mikoplasma
untuk menyerap eritrosit tercatat sebagai dijelaskan oleh Manchee dan
Taylor-Robinson (1968). Jika 25% dari sel mikoplasma mampu
mengadsorbsi eritrosit dicatat sebagai 1 +; 50% adsorpsi dicatat sebagai
2+; 75% adsorpsi dicatat sebagai 3 + dan 100% adsorpsi dicatat sebagai
4+.
Untuk uji hemaglutinasi, kultur mikoplasma ditanam dalam 50
ml kaldu mikoplasma. Itu kultur diinkubasi pada suhu 37 ° C. Saat fenol
berwarna merah indikator berubah dari merah menjadi merah muda
(sekitar pH 6,9) kemudian kultur dipanen dan disentrifugasi 8.000 g
selama 15 menit. Cairan supernatan dibuang dan pelet dicuci sebanyak 3
kali dalam PBS steril.
Avolume 25 ltl antigen mikoplasma ditambahkan ke baris
pertama dan kedua dari sumur mikro yang sudah mengandung 25 Al PBS
di masing-masing sumur kecuali di baris pertama. Kemudian seri
pengenceran dua kali lipat dalam PBS dibuat dari baris kedua hingga
baris ke-11. Avolume 25 lal suspensi ayam 0,5% eritrosit ditambahkan
ke setiap sumur, piring itu diketuk ringan dan kemudian 25 Al PBS
ditambahkan ke masing-masing baik. Baki itu ditutup dengan penutup
atau bungkus plastik dan kemudian diinkubasi pada suhu 4 ° C selama
kurang lebih 1 jam. Aglutinasi dicatat seperti yang dijelaskan oleh
Manchee dan Taylor-Robinson (1968).
Hasil tes serologis ditunjukkan di Ini menunjukkan bahwa lebih
dari 50% serum itu positif melawan antigen MG. Farm R menunjukkan
yang terbaik est% reaksi seropositif saat tambak C menunjukkan %
reaksi terendah. Hasil uji biokimia disajikan di Dari 17 isolat
mikoplasma, 8 adalah M. gallinarum, 3 adalah M. gallinaceum, dan 6
adalah M. columborale. Tidak ada MG yang dapat dideteksi dari sinus
hidung dari ayam dalam survei ini. Semua M. gallinarum, M. strain
gallinaceum dan M. columborale tidak dapat ditemukan untuk menyerap
eritrosit tetapi mereka mampu menggumpalkan eritrosit ayam. MG2
ditemukan tidak dapat mereduksi telurit secara aerob dan anaerob, dan
baik MG2 dan MG4 ditemukan tidak mampu mengurangi tetrazolium
secara anaerob.
Freundt (1984) bahwa antigen MG paling sering bersilangan
bereaksi dengan M. synoviae, M. iners atau M. pullorum. Alasan lain
yang mungkin untuk kegagalan mengisolasi MG adalah M. gallinaceum
dan M. columborale tumbuh lebih cepat dari MG sehingga strain MG
tidak memiliki peluang tumbuh sebelum indikator di media mikoplasma
berubah dari merah menjadi kuning. Efek ini dapat dihilangkan dengan
menambahkan M. gallinaceum atau M. columborale antiserum media.
Dalam penelitian ini, semua M. gallinarum, M. Columborale dan
strain M. gallinaceum yang diisolasi dari sinus hidung ayam tidak
menimbulkan gejala klinis dan dikenal sebagai strain non-patogen yang
ditemukan negatif pada uji hemadsorpsi, sedangkan patogen Isolat MG
yang diperoleh dari Australia ditemukan eritrosit mengikat kuat. Temuan
ini sejalan dengan temuan sebelumnya dari Manchee dan
TaylorRobinson (1968), Sobeslavsky et al. (1968), Bredt et Al. (1982),
dan Razin dan Freundt (1984) yang melaporkan bahwa ada hubungan
antara kemampuan mikoplasma untuk menyerap eritrosit dan virulensi
organisme. Semua M. gallinarum, M. strain Gallinaceum dan M.
columborale mampu menggumpalkan eritrosit. MG, tidak ada organisme
yang dapat diisolasi dari usap sinus.
Oleh karena itu, kemungkinan infeksi telah terjadi dibersihkan
sebelum penyeka diambil. Informasi akurat tentang riwayat klinis unggas
sebelumnya untuk meletakkan tidak tersedia dan karenanya tidak
mungkin menilai signifikansi klinis dari tingginya tingkat serokonversi
menjadi MG. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mengisolasi MG
dari ayam dara dan untuk menentukan patogenisitas MG yang ada dalam
flok, untuk menentukan bukti CRD selama masa pemeliharaan, yaitu
umur burung yang serokonversi dan pengaruhnya terhadap produksi telur
oleh organisme.
Sistem pemantauan rutin burung pada berbagai tahap
pertumbuhan dan produksi mungkin bermanfaat bagi peternak dalam
menentukan status kesehatan dan penyakit dari flok. A.planci dapat
berkontribusi bagi dunia kedokteran dan farmasi. Untuk PLA2 sudah
banyak penelitian dilakukan terutama pada PLA2 yang diisolasi dari
racun ular. Penggunaan PLA2 diantaranya sebagai antibakteri
Burkholderia pseudomallei (Samy R. P., et. al., 2006). PLA2 dari racun
lebah dan ular dapat digunakan sebagai inhibitor bagi HIV (Fernard D.,
et. al.,1999).
 Maka dari itu penelitian ini bertujuan untuk mengantisipasi
peledakan populasi A. planci dengan mengisolasi PLA2 dari racun duri
A.planci untuk kepentingan di bidang farmasi. Proses isolasi PLA2
(Savitri et al., 2011) yaitu dengan memadukan proses sonikasi,
pemanasan dan fraksinasi garam amonium sulfat. Sonikasi adalah proses
yang sangat efektif untuk menghancurkan membran sel tumbuhan
maupun hewan. Prinsip dasar dari sonikasi adalah adanya getaran yang
disebabkan oleh frekuensi gelombang ultrasonik pada resonansi 15 – 25
kHz. Gelombang ultrasonik akan menyebabkan terjadi kavitasi yang
dapat merusak dinding sel.
Pemurnian protein menggunakan ammonium sulfat adalah
metode yang sering digunakan karena memiliki daya larut tinggi di
dalam air, relatif murah dan menstabilkan protein. Indonesia merupakan
negara yang termasuk dalam persebaran terumbu karang Indo-Pasific
dengan spesies hewan laut yang beragam. Pada penelitian sebelumnya
dilaporkan terdapat empat spesies A.planci (Vogler et al.,2008).
Berdasarkan warna A.planci terdapat perbedaan anatomi
A.planci dari perairan Papua dengan perairan Maluku. Sehingga pada
penelitian ini PLA2 duri racun A.planci dari perairan Papua disolasia
dengan menggunakan metode Savitri et al., 2011 dan modifikasi metode
Savitri et. al, 2011 yaitu tanpa teknik pemanasan.
 Dan kemudian dikarakterisasi kation terhadap aktifitas spesifik
PLA2. Metode Penelitian 2.1 Bintang Laut Spesimen A.planci diambil
dari Tanjung Kasuari, Sorong-Papua Barat pada bulan April 2011.
A.planci kemudian disimpan dalam lemari es pada temperatur -20oC
sampai akan digunakan. 2.2 Prosedur Isolasi Duri dari A. planci
digunting dan dikumpulkan sebanyak 50 gr. Lalu direndam dalam bufer
fosfat 0.01 M, pH 7.0 sebanyak 100 ml dan 10 ml CaCl 0,1 M lalu
dihomogenisasi dengan cara sonikasi. Proses sonikasi dilakukan selama 8
menit.
Setelah itu duri dan larutan yang mengandung racun dipisahkan
sehingga diperoleh crude venom. Crude venom selanjutnya di refrigerasi
sentrifuse 15.000g selama 30 menit untuk dipisahkan pengotornya.
Supernatannya digunakan untuk fraksinasi ammonium sulfat. 2.3
Pengendapan Fraksinasi Ammonium Sulfat Supernatan hasil isolasi
mulai diendapkan protein enzimnya dengan garam ammonium sulfat
secara bertahap (fraksinasi) 20%, 40%, 60%, 80% dan 100% menurut
derajat kelarutannya.
Setiap pengendapan dilakukan menggunakan magnetic stirrer
dan wadah sampel direndam dalam es supaya terjaga suhunya 0 oC.
Pemisahan endapan dilakukan dengan refrigerasi sentrifuse 15.000g
selama 30 menit. Endapan hasil sentrifuse masingmasing fraksi
dilarutkan dalam bufer fosfat 0,01 M, pH 7.0, sebanyak 1,5 ml 2.4 Uji
Antikoagulan Uji antikoagulan dimaksudkan untuk membuktikan
keberhasilan proses sonikasi mengekstrak racun duri A.planci.
Antikoagulan merupakan ciri khas racun duri A. planci yang
ditandai dengan larutnya koagulan darah. Crude venom dimasukkan ke
dalam substrat darah manusia untuk diamati aktivitas antikoagulan. 2.5
Uji Aktivitas PLA2 Uji aktivitas PLA2 menggunakan metode Marinetti,
1965. Kuning telur sebanyak 0,2 gr dilarutkan dalam labu ukur 100 ml
yang berisi bufer Tris-HCl 0,1 M, pH 8.0. Absorbansi diukur pada
panjang gelombang 900 nm selama 5 menit menggunakan
spektrofotometer. Sebanyak 0,2 ml sampel enzim dimasukkan 3 ml
substrat kuning telur, di-vortex lalu diukur pengurangan absorbansinya
selama 5 menit.
Blanko substrat diukur tanpa menggunakan sampel enzim.
Pengujian aktivitas juga dilakukan dengan melihat pengaruh kation
sebagai kofaktor. Setiap 0,2 ml sampel crude venom ditambahkan 32 l
larutan kation 1 M. Sehingga didapatkan konsentrasi akhir kation adalah
10mM.
 BAB II
TUJUAN BAKTERI ACHOLEPLASMA LAIDLAWII

Acholeplasma adalah bakteri tanpa dinding di kelas Mollicutes.

Mereka termasuk spesies saprotrofik atau patogen. Ada 15 spesies yang
dikenali. Kandungan G + C rendah, berkisar antara 26 - 36% (mol%).
Genom spesies Acholeplasma berkisar dalam ukuran 1,5 hingga 1,65
Mbp. Kolesterol tidak dibutuhkan untuk pertumbuhan. Spesies ini
ditemukan pada hewan, dan beberapa tumbuhan dan serangga. Suhu
pertumbuhan optimal adalah 30 hingga 37 derajat Celcius. [1]
Acholeplasma laylawii adalah kontaminan umum produk media
kultur sel, dan juga telah digunakan dalam studi ekstensif tentang
polimorfisme lipid karena organisme ini mengubah rasio MGlcDG
(monoglucosyl diacylglycerol) menjadi DGlcDG (diglucosyl
diacylglycerol) sebagai respons terhadap kondisi pertumbuhan.
Acholeplasma laylawii merupakan kontaminan potensial serum
sapi dan juga telah ditemukan sebagai kontaminan dalam produk media
kultur sel bebas serum. Bukti anekdot kontaminasi A. laylawii pada
kaldu kedelai tryptone beredar selama beberapa tahun sebelum diketahui
bahwa organisme tersebut dapat mencemari bubuk kaldu mikrobiologis.
Adanya A. laylawii sesekali dalam bubuk kaldu dan mungkin dalam
komponen bubuk media kultur sel sebagai bagian dari beban biologis
normal menimbulkan ancaman serius bagi operasi farmasi dan
biofarmasi rutin di mana penyaringan adalah metode sterilisasi pilihan.
Tidak adanya bukti visual kontaminasi tidak dapat diandalkan
karena ada variasi dengan regangan organisme dan produk media dalam
kemampuan menghasilkan kekeruhan. Strain A. laylawii yang telah
diisolasi dari bubuk kaldu tidak memiliki perbedaan suhu atau preferensi
media yang signifikan dengan strain lainnya. A. laylawii mampu tumbuh
hingga titer tinggi pada pendinginan dan suhu sekitar dalam media
sterilitas bakteriologis yang tidak dilengkapi atau media kultur sel bebas
serum dan dapat bertahan untuk waktu yang lama dalam produk ini.
 BAB III

MANFAAT BAKTERI ACHOLEPLASMA LAIDLAWI

Acholeplasma laylawii ditemukan di tanah, kompos, air limbah, kultur sel

serta di jaringan manusia dan di banyak spesies hewan (burung, sapi, kambing, kuda,

sapi, babi, kucing, hewan pengerat, primata). Spesies Acholeplasma mampu

melakukan biosintesis karotenoid de novo yang terlokalisasi secara eksklusif di

membran sel. Acholeplasma laylawii mampu mensintesis glukosa menggunakan 6-

fosfofruktokinase yang bergantung pada pirofosfat yang juga telah terdeteksi di

acholeplasma lain. Acholeplasma laylawii dan fitoplasma adalah satu-satunya

moluska yang diketahui menggunakan kode genetik universal, di mana UGA adalah

kodon stop.

Kami menyajikan sekuens genom lengkap dan peta proteogenomik untuk

Acholeplasma laylawii PG-8A (kelas Molitik, ordo Acholeplasmatales, famili

Acholeplasmataceae). Genom A. laylawii diwakili oleh satu kromosom melingkar

1.496.992-bp dengan kandungan G + C rata-rata 31% mol. Ini adalah genom

terpanjang di antara Mollicutes dengan urutan nukleotida yang diketahui. Ini berisi
gen polimerase tipe I, respons SOS, dan sistem transduksi sinyal, serta elemen

pengatur RNA, riboswitch, dan kotak T.

Hal ini menunjukkan kemampuan yang signifikan untuk regulasi ekspresi

gen dan respons mutagenik terhadap stres. Acholeplasma laylawii dan fitoplasma

adalah satu-satunya Mollicute yang diketahui menggunakan kode genetik universal,

di mana UGA adalah kodon stop. Dalam kelompok Mollicutes, hanya Acholeplasma

yang tidak memerlukan sterol yang memiliki kapasitas untuk mensintesis asam lemak

jenuh de novo.

Data proteomik digunakan dalam penjelasan utama genom, memvalidasi

ekspresi dari banyak protein yang diprediksi. Kami juga mendeteksi modifikasi pasca

translasi protein A. laylawii: fosforilasi dan asilasi. Ditemukan tujuh puluh empat

kandidat protein terfosforilasi: 16 kandidat adalah protein unik untuk A. laylawii, dan

11 di antaranya adalah protein membran terpisahkan permukaan atau yang

menyiratkan adanya jalur pensinyalan aktif.

Diantara 20 protein terasilasi, 14 mengandung rantai palmitat, dan enam

mengandung rantai stearat. Tidak ada residu asam linoleat atau oleat yang diamati.

Protein terasilasi adalah komponen terutama gula dan sistem transpor ion anorganik

dan merupakan protein berlabuh permukaan yang tidak diketahui Molikut adalah

kelas mikroorganisme yang memiliki ukuran genom terkecil yang diketahui di antara

organisme yang bereplikasi secara otonom, yang terkecil adalah Mycoplasma

genitalium.
 Urutan nukleotida genomik yang terakhir adalah di antara genom bakteri

pertama yang diurutkan, pada pertengahan 1990-an , dan merupakan yang pertama

secara artifisial disintesis dan diklon sebagai kromosom buatan ragi. Selain itu,

kromosom buatan pertama yang ditransplantasikan ke spesies lain adalah genom

Mycoplasma mycoides. Mikoplasma, bersama dengan kelompok Bacillus /

Clostridium, membentuk filum Firmicutes, dan hampir semuanya memiliki ukuran

genom yang kecil, secara mutlak atau sebagian memerlukan sterol yang disuplai dari

luar, memiliki kandungan GC rendah, dan menunjukkan variasi feno- dan genotipe

yang tinggi. Ciri khas Mollicutes adalah tidak adanya dinding sel, serta

ketergantungan metabolik yang jelas pada sumber eksternal (media kultur, sel inang,

dll.)

Kelompok penting Mollicutes adalah fitoplasma, yang merupakan

fitopatogen yang terkenal karena plastisitas genom tinggi yang disebabkan oleh

banyak elemen berulang. Hal ini memungkinkan mereka untuk dengan mudah

mengocok faktor adhesi dan virulensi dan karenanya menginfeksi berbagai organisme

inang .

Sementara hampir 80 genom Mollicutes telah diurutkan sejauh ini, urutan

nukleotida genomik dari perwakilan keluarga Acholeplasmataceae belum

dikarakterisasi. Berbeda dengan keluarga Mycoplasmataceae yang dipelajari dengan

baik, acholeplasma memiliki genom yang relatif besar yaitu 1,5 hingga 1,8 Mbp.
Selain itu, tidak seperti mikoplasma lainnya, mereka tidak memerlukan sterol untuk

budidaya dan mampu mensintesis asam lemak dari prekursor.

BAB IV

KESIMPULAN DAN SARAN

A. KESIMPULAN

Acholeplasma laylawii adalah bakteri kecil yang tidak memiliki

dinding sel. Seperti Acholeplasma dan Mycoplasma lainnya, A. laylawii telah

diidentifikasi sebagai kontaminan umum media pertumbuhan untuk kultur sel.

B. SARAN:

1. Untuk peneliti selanjutnya agar dapat dikembangkan dengan berbagai

genresistensi pada berbagai jenis bakteri.

2. Untuk peneliti selanjutnya agar dapat ditemukan antibiotik lain dalam

pengobatan yang disebabkan oleh bakteri Acholeplasma Laid Lawii

 DAFTAR PUSTAKA

Albert P. R., Morris, S. J. 1994. Antisense oligonucleotides : Molecular Scapels for

Dissection of signal transduction pathways. Trends Pharmacol Sci15:250–
254

Arni, R. K., Ward, J., 1996. Phospholipase A2: a structural review. Toxicon 34,
827-841

Baine, M. S. P. 2006. A major outbreak of crownof-thorn starfish in Bootless

Bay, Central Province, Papua New Guinea. Coral Reefs 25 : 607

Balsinde, J., Perez, R., Balboa, M. A. 2006. Calcium-independent phospholipase

A2 and apoptosis. Biochimia et Biophysica Acta 1761: 1344-1350

Bellwood, D. R., Hughes, T. P., Folke, C. dan Nystrom, M. 2004. Confronting

the coral reef crisis. Nature 429, 827-833

Benzie, John A.H. 1999. Major Genetic Differences between Crown-of-Thorns

Starfish (Acanthaster planci) Populations in the Indian and Pacific Oceans.
Evolution. 53(6). pp. 1782-1795

Bevers, E. M., H.H. Wang, J. A. F. Op den Kamp and L. L. M. van Deenen.

1979. On the Interaction Between Intrinsic Proteins and
Phosphatidylgycerol in the membrane of Acholeplasma laidlawii. Arch.
Biochem. Biophys. 193., 502.

Birkeland C., Lucus J. S. 1950. A.planci : Major Manajemen Problem of Coral

Reefs. Florida :CRC. Press

Capper EA, Marshall LA. 2001. Mammalian phospholipases A(2): mediators of

 inflammation, proliferation and apoptosis. Prog Lipid Res 40:167–197

CRC (2003) Crown-of-thorns starfish in the Great Barrier Reefs: Current State of
Knowledge. Cooperative Research Centers (CRC) Reef Research Center.
Townsville, Australia

Cummings BS, McHowat J, Schnellmann RG. 2000. Phospholipase A(2)s in cell

injury and death. J Pharmacol Exp Ther 294:793– 799

Deutscher, Murray. 1990. Guide to Protein Purification. Farmington : University of

Connecticut Health Center.

Fenard, D.,Lambeau G., Valentin,E., Jean-Claude Lefebvre, Lazdunski,M.,Doglio,

A., 1999. Secreted phospholipases A2, a new class of HIV inhibitors that
block virus entry into host cells. NCBI

Hobbs, J. P. A. dan Salmond, J.K. 2008. Cohabitation of India and Pacific Ocean
species at Chrismas and Cocos Islands. Coral Reefs 27 : 933

Karasudani, I., Koyama, T., Nakandakari, S. and Aniya, Y. 1996. Purifcation of

Anticoagulant factor from the spine venom of the crown-ofthorns starfish
Acanthaster planci. Toxicon 34, 871-879.

Kerns, R.T., Kini, R.M., Stefansson, S., and Evans, H.J. 1999. Targeting of Venom
Phospholipases : The Strongly AnticoagulantPhospholipase A2 from
Naja nigricollis Venom Binds to Coagulation Factor Xa to Inhibit the
Prothrombinase Complex, Biochim. Biophys. 369: 107-113

Koelman J, Roehm KH, Color Atlas Biochemistry. 2nd ed. Marburg: Thieme, 2005.

Koyama, T., Noguchi, K., Aniya, Y., and Sakanashi, M. 1998. Analysis for Sites
of Anticoagulant Action of Plancinin, a New Anticoagulant Peptide
Isolated from the Starfish Acanthaster planci, in the Blood Coagulation
Cascade, Gen. Pharmac. Vol. 31, No. 2, pp. 277–282.

Madl, P., 2002.Acanthaster planci. Marine Boilogy I

Marinetti, G. V. 1965. The action of phospholipase A on lipoproteins. Biochim.

Biophys. Acta 98, 554±565.

Moran PJ (1990) planci (L.): biographical data. Coral Reefs 9:95-96

Mounier, C. M., Bon, C., and Kini, R.M. 2001. Anticoagulant Venom and
Mammalian Secreted Phospholipases A2: Protein-versus Phospholipid –
Dependent Mechanism of Action, Haemostasis. 31: 279-287

Mounier, C.M., Franken, P.A., Verhejj, H. M., and Bon,C. 1996. The Anticoagulant
Effect of the Human Secretory Phospholipase A2 on Blood Plasma and
on a Cell-free System is Due to a Phospholipid-independent Mechanism
of Action Involving the Inhibition of Factor Va, Eur J. Biochem. 237: 778-
785

Mounier, C.M., Luchetta, P., Lecut, C., Koduri, R.S., Faure, G., Lambeau,
G., Valentin, M., Singer, A., Ghomashchi, F., Suzette, B., Gelb, M.H., and
Bon, C. 2000. Basic Residues of Human Group IIA Phospholipase A2
Are Important for Binding to Factor Xa and Prothrombinase Inhibition,
Eur J. Biochem. 267: 4960-4969

Mundy, C., Babcock, R., Asworth, I., Small, J., 1994. A portable, discrete-
sampling submersible plankton pump and its use in sampling starfish
egg. Biological Buletin Marine Biological Laboratory, Woods hole 186,
pp. 168-171

Nevalainen, T.J., Haapamäki, M. M., Gronroos, J.M. 2000. Roles of secretory

phospholipases A2 in inflammatory diseases and trauma. Biochim.
Biophys. Acta 1488: 83- 90.

Noble, J. E., Knight, A. E., Reason, A. J., Di Matola, A., and Bailey, M. J. 2007. A
Comparison of protein quantitation assays forbiopharmaceutical
applications. Mol. Biotechnol. 37, 99–111.

Pearson, R. 1981. Recovery and Recolonsatio of Coral Reefs Marine Ecology.

Progress Series 4 :105:122 Porter, J.W.1972.Predation by Acanthaster
and its Effect on Coral Species Diversity. The American
Naturalist. 106(950): 487-492.

Pratchet, M. S., 2001. Influence of Coral Symbiont on Feeding of

Crown-of-Thorns Starfish planci in Western Pasific. Mal Ecol
Prog Series :214:111-119

Sahlan, Muhamad. 2002. Eksplorasi Enzim Fibrinolitik dari Cacing

Tanah Pheretima sp. Galur Lokal. Skripsi. Institut Teknologi
Bandung.

Sallau, A.B., Ibrahim, M. A., Salihu, A. Patrick, F. U. 2008.

 Characterization of Phospholipase A2 (PLA2) from Echis
ocellatus Venom. African Journal of Biochemistry Research Vol.
2 (4) : 098-101

Samy, R. P., Pachiappan, A., Gopalakrishnakone, P., Thwin, M. M.,

Hian, Y. E., Chow, V. T. 2006. In Vitro Antimicrobial Activity
of Natural Toxins and Animal Venoms. BMC Infectious
Diseases. 6.100.

Saito, K., and Hanahan, D. 1962. A Study of the Purification and

Properties of the Phospholipase A of Crotalus adamanteus,
Biochem J 1, 521.

Satwika, Respatiphala A. 2010. Kombinasi Metode Sonikasi, Pemanasan

Dan Fraksinasi Ammonium Sulfat untuk Ekstraksi Enzim
Fosfolipase -A2 dari Acanthaster planci. Skripsi. Universitas
Indonesia.

Savitri I.K.E., Ibrahim, F., Sahlan, M,. Wijanarko, A. 2011. Rapid and
Efficient Purification Method of Phospholipase A2 from
Acanthaster planci. International Journal of Pharma and Bio
Sciences Vol. 2,

Scope, R. K.,. 1993. Protein Purification, Principles, and Practice, 3rd

Edition. Springer Veriag Newyork. Page : 15 - 21, 44 - 48, and
71 - 92.

Scope, R. K.,. 1993. Protein Purification, Principles, and Practice, 3rd

Edition. Springer Veriag Newyork. Page : 15 – 21, 44 – 48, and
71 – 92.

Shiomi, K. , Itoh, K., Yamanaka, H., Kikuchi, T. 1985. Biological

Activity of Crude Venom from the Crown-ofThorn starfish
Acanthaster planci. Nippon Suisan Gakkaishi 51 : 1151- 1154

Shiomi, K., yamamoto, S., Yamanaka, H., Kikuchi, T. 1988. Purification

and Characterization of Lethal Factor in Venom from Crown-of
Thorn strafih Acanthaster planc. Toxicon 26, 1077-1083.

Shiomi, K., Kazama, A., Yamanaka, H., Kikuchi, T. 1989. Inhibitory

Effect of Antiinflammatory Agenton Cutaneous Capillary
Leakage Induced by Sea Marine Venom. Nippon Suisan
 Gakkaishi 55: 131-134.

Shiomi, K., Kazama, A., Shimakura, K,. Nagashima, Y. P. 1997.

Purification and Properties of Phospholipases A2 From the
Crown-of-Thorns Starfish (Acanthaster planci) venom. Toxicon
Vol. 36, No. 4, pp. 589±599.

Shiomi, K., Midorikawa, S., Ishida, M., Nagai, H., Nagashima, Y. P.

2004. Plancitoxins, Lethal Factor from the Crown-of-Thorns
Acanthaster planci , are deoxyribonucleases II. Toxicon Vol. 44
pp. 499-566

Shuler, M. L. , Fikret, K. 2002. Bioprocess Engineering 2nd Edition.

Prentice Hall International

Shier, W.T., D. Eaker and T. Wadstrom. 1981. Natural Toxin Stimulates

Endogenous Phospholipase A2 Activity and Prostaglandin
Synthesis in Fibroblast, Biochim. Biophys. Acta. 663., 467.

Sindurmata, Mulyawati. 1989. Isolasi dan Beberapa Sifat Fosfolipase A2

dari Bisa Calloselasma rhodostoma (Boei). Desertasi. Institut
Teknologi Bandung

Sweatman, H. Commercia l fishes as Predators of Adult Acanthaster

planci. 1997. Proc 8th Int Coral Reef Sym 1:617-620. Taketo
MM,

Sonoshita M. 2002. Phospolipase A2 and apoptosis. Biochim Biophys

Acta 1585:72–76

Teruya, T., Suenaga, K., Koyama , T., Nakano, Y., and Uemura, T. 2001.
Arachidonic Acid and α-linolenic Acid, Feeding Attractants for
the Crown-of-Thorns Sea Star Acanthaster planci, from the Sea
Urchin Toxopneustes pileolus. Journal of Experimental Marine
Biology and Ecology. 266. 123–134.