RETROVIRUS E LINFOMA T,che a sua volta è stato resopossibile dalla
scoperta di IL-2 (in origine fattore di crescita delle
MALIGNO
Stephen G. Norley & Reinhard Kurt
Sommario I retrovirus sono virus dotati di RNA a
singola elica che possiedono un unico enzima, la
transcriptasi inversa. Questo enzima facilita la
sintesi di intermedi di DNA a doppia elica, in grado
di integrarsi nel genoma della cellula ospite.
Benché sia principalmente un mezzo di
permanenza latente, questa integrazione può avere
l'effetto di trasformare la cellula verso una crescita
maligna, sia mediante l'attivazione di geni di
controllo in cis o trans, sia mediante inserzione di
un oncogene attivato. I linfomi maligni causati da
retrovirus si verificano in diversi animali, dai topi
agli uomini, ed hanno un significato economico e
clinico sempre crescente. HTLV-1 è l'agente
eziologico della leucemia T/linfoma nell'adulto, che
è endemica in alcune regioni del mondo ed è stato
implicato in diverse altre patologie. Il fatto che il
virus sembra diffondersi attraverso gruppi di
tossicodipendenti per via endovenosa più o meno
allo stesso modo del virus dell'AIDS è motivo di
preoccupazione.
Parole chiave Retrovirus - Leucemia - Linfoma - ALV
- FeLV - BLV - HTLV - ATLL
Introduzione Nonostante la dimostrazione fin dal
1911 da Rous [1] del coinvolgimento dei virus nella
trasmissione del cancro, è solo recentemente che
le implicazioni ed i meccanismi sono diventati
chiari. La scoperta nel 1970 [2,3] che alcuni virus
tumorali a RNA contenevano un enzima in grado di
trascrivere una copia di DNA da un modello di RNA
ha chiarito il meccanismo di genesi tumorale, e ha
guadagnato a queste particelle il nome di
retrovirus. La scoperta del primo retrovirus umano,
nel 1980 [4], è stata resa possibile soltanto dallo
sviluppo delle tecniche di coltura per i Linfociti
cellule T, [5]). Questo, fortuitamente, ha gettato le
basi per la scoperta pochi anni dopo del virus
dell'AIDS, l'HIV [6,7], ora oggetto di tale intenso
lavoro di ricerca. In questa breve revisione,
vogliamo discutere quelle proprietà di alcuni
retrovirus, sia negli uomini sia negli animali, che
risultano essere coinvolte in una classe di cancro, il
linfoma maligno/leucemia. Ci siamo concentrati su
quei virus causanti linfoma negli animali domestici
e nell'uomo, con una descrizione di come queste
trasformazioni avvengano a livello molecolare e
come queste si manifestino clinicamente. La
moltitudine dei retrovirus murini, i retrovirus
endogeni (ancora) orfani e i retrovirus citopatici
causanti immunodeficienza non saranno discussi ai
fini di questo articolo.
Struttura dei retrovirus e ciclo infettivo
La struttura generale delle particelle retrovirali è
mostrata schematicamente in figura 1 e può essere
osservata in microscopia elettronica alla figura 2. Il
RNA retrovirali e la transcriptasi inversa associata
sono inclusi in un nucleo interno, la cui forma varia
a seconda delle differenti classi di retrovirus, ma
che è sempre incluso in un guscio nucleico più
esterno. Questo è ulteriormente circondato da un
doppio strato lipidico, derivato dalla membrana
cellulare dell'ospite, all'interno del quale sono
incorporate le glicoproteine dell'envelope
respondabili del riconoscimento delle cellule
bersaglio.
Il ciclo infettivo della famiglia dei retrovirus s'è
rivelato come una delle più grandi sorprese della
biologia molecolare in questo secolo. Nel 1970, i
gruppi di Temin e Baltimora, hanno pubblicato
indipendentemente [2, 3] l'esistenza di una DNA
polimerasi RNA-dipendente (transcriptasi inversa),
trasportata all'interno dello stesso retrovirus.
Questo era del tutto contrario al "dogma centrale"
della biologia molecolare, secondo cui
l'informazione genetica scorreva dall'DNA all'RNA
alle proteine, e le implicazioni degli internedi di
DNA del genoma virale erano approfondite in
termini di meccanismi di latenza ed oncogenesi.
L'infezione di una cellula, indicata
schematicamente in figura 3, procede come qui di
seguito. Al momento del riconoscimento da parte
delle glicoproteine di superficie del proprio
recettore cellulare (ad esempio CD4 per HIV-1), il
virus si fonde con la cellula e in seguito rilascia il
nucleo all'interno del citoplasma. Il genoma virale
RNA con l'associata molecola della transcriptasi
inversa è rilasciato, e l'enzima procede a fabbricare
una copia di DNA negativo a singola elica del
genoma. Una seconda elica di DNA, positiva,
viene così prodotta, e l'originale genoma in RNA è
degradato. La nuova molecola di DNA a doppia
elica, allora, muove verso il nucleo cellulare, dove si
inserisce casualmente all'interno del DNA della
cellula ospite per formare un provirus. E' questa
integrazione all'interno dei cromosomi dell'animale
ospite che dà al virus la capacità di restare latente e
inosservato per lunghi periodi di tempo, e
permette di evitare la stimolazione o il
riconoscimento da parte del sistema immune, e,
quasi incidentalmente, è questo meccanismo ad
essere responsabile della trasformazione cellulare
verso la crescita sregolata, come verrà discusso più
avanti. Una volta incorporato, il provirus può
rimanere nella cellula quasi indefinitamente senza
produrre un singolo virus progenie. Comunque, una
volta attivata, una copia di RNA del genoma
provirale è prodotta nel modo classico ed è
tradotta dai ribosomi cellulari in proteine virali, che
migrano alla membrana cellulare per essere
assemblate in un completo virus progenie (copie
del genoma RNA da incapsulare e transcriptasi
inversa) che "emerge" dalla cellula.
Organizzazione genomica
Il genoma provirale fondamentale consiste in tre
geni: gag (antigeni gruppo-specifici, che cidufucani
per proteine strutturali del nucleo virale), pol
(polimerasi, codificante per la transcriptasi inversa)
ed env (envelope, codificante per glicoproteine di
superficie) Questi tre geni sono affiancati da regioni
conosciute come LTR (long terminal repeats) che
servono per regolare l'espressione genica virale. Il
virus della leucemia murina MuLV è un esempio di
virus causante leucemia con una tale struttura,
Comunque, alcuni retrovirus possono anche
trasportare geni addizionali. I virus della leucemia
acuta, per esempio, sembrano aver acquisito geni
cellulari, gli oncogeni, in un qualche passato, a
spese di qualche parte del loro materiale genetico.
Altri, come HTLV-1, contengono il gene tat
(attivante la transcriptasi), il cui prodotto regola
l'attività dei geni LTR. Queste differenze nella
struttura genomica hanno una profonda influenza
sul meccanismo di carcinogenesi, e da qui la
frequenza e l'origine del risultante linfoma (figura
4).
Meccanismi di carcinogenesi
Come detto sopra, l'integrazione del provirus
all'interno dell'DNA cellulare può esitare nella
trasformazione della cellula attraverso una varietà
di meccanismi, secondo l'organizzazione genomica
del virus. I meccanismi, e i tipi di linfoma che essi
provocano possono essere opportunamente divisi
in tre classi, per i retrovirus cronici, acuti e trans
regolanti.
Virus di leucemia cronica. La
trasformazione delle cellule da parte di
questi virus è dovuta esclusivamente alla
posizione di integrazione del provirus.
L'integrazione è casuale, e in molti casi il
provirus coesiste coi geni dell'ospite, che si
ritrova senza effetti dannosi per la cellula.
Virus di leucemia acuta. I virus della
leucemia acuta trasportano il gene
trasformante, l'oncogene, all'interno del
proprio genoma, e di conseguenza possono
mutare una cellula, indipendentemente da
dove il provirus sia inserito. L'infezione di
cavie da laboratorio con tali virus porta al
rapido sviluppo di un linfoma policlonale,
derivante dalla trasformazione di diverse
cellule. Comunque, questi retrovirus
trasportano l'oncogene in sostituzione di
fondamentali geni virali, e perciò
richiedono la presenza di un retrovirus
efficace che coadiuvi la replicazione per
fornire le proteine codificate dai geni
mancanti. Di conseguenza, le condizioni
indispensabili per mantenere l'infezione
sono rare, e questo gruppo di virus è di
minore importanza da un punto di vista
medico.
Virus di leucemia trans-regolanti. I
retrovirus come HTLV-1 e 2 possono
trasformare una cellula dopo integrazione
del provirus in un punto qualunque del
genoma, nonostante essi non trasportino
oncogeni virali (figura 3c). Come può allora
la presenza di un provirus integrato
attivare i geni regolanti la crescita cellulare
posti a distanza, o addirittura su diversi
cromosomi? La risposta, benché non sia
pienamente compresa, risiede nell'azione
del gene tat. Il suo prodotto genico può
attivare le LTR, che a loro volta regolano la
produzione di proteine virali. In aggiunta
all'induzione dei geni virali, il prodotto del
gene tat può trans-regolare i geni ospiti
responsabili della proliferazione cellulare.
E' interessante osservare che tutte le
cellule trasformate da HTLV-1 esprimono
anomali incrementi del recettore per IL-2 o
per l'antigene Tac [ 8, 9], e che tat
promuove l'espressione del gene per IL-2
[10]. IL-2 è principalmente coinvolta nella
proliferazione T cellulare, ed è possibile che
la trans attivazione dei geni rilevanti per tat
porti ad una proliferazione policlonale delle
T-cell infette, incrementando il potenziale
per trasformazioni successive e
leucemogenesi [11]. I linfomi indotti da
questi virus sono monoclonali in natura. Il
aggiunta al recettore per IL-2, le cellule
trasformate da HTLV esprimono livelli
anomali e alti di recettore per la
transferrina e per HLA di classe II. [ 2, 13].
Patogenesi
Piuttosto che descrivere la patogenesi di
tutti i retrovirus leucemici noti, molti dei
quali (particolarmente i murini) hanno
scarsa rilevanza fuori dal lavoratorio, ci
limiteremo a quei virus leucemogenici di
importanza economica o clinica negli
animali domestici e nell'uomo.
Virus della leucosi avicola.L'avvento
degli allevamenti intensivi di
pollame ha comportato un drastico
aumento del numero di uccelli
morti per neoplasie
ematopoietiche. Di quelle causate
da retrovirus (per un'analisi vedere
[14]). la più comune s'è dimostrata
essere correlata al gruppo
denominato dei virus non difettivi
della leucosi linfoide (LLVs).Benchè
porti di rado a malattia quando
introdotto in un animale adulto,
il virus può essere trasmesso per
via congenita attraverso l'uovo, e i
relativi pulcini spesso cadono per la
leucosi appena crescono. In
aggiunta, lo shedding del virus
permette facilmente infezioni di
giovani polletti suscettibili.
L'infezione si manifesta
principalmente come un linfoma a
cellule B originante nella borsa di
Fabrizio, e in effetti una
bursectomia precoce preverrà la
malattia. Il linfoma metastatico
infiltra il fegato e la milza che
aumentano di dimensioni, e porta
allo sviluppo di anemia (anche se ci
può essere un ruolo virale diretto
in quest'ultimo sintomo. Un
inusitato e infrequente effetto
dell'infezione è lo sviluppo di
osteopetrosi, che in casi estremi
può portare ad un drammatico
ispessimento osseo delle zampe. Il
meccanismo di leucemogenesi
legato all'infezione da LLV è quello
proprio dei virus della Leucemia
Linfatica Cronica. Il linfoma,
quando si manifesta, lo fa di solito
dopo un lungo periodo di latenza;
le cellule neoplastiche sono in
origine monoclonali e non sono
identificabili oncogeni virali nel
genoma del retrovirus.
trasformazione
(apparentemente) innescata da
(rare) inserzioni del provirus nel
genoma ospite, in posizioni
adiacenti all'oncogene cellulare
c-myc, con una risultante
attivazione mediante il LTR virale.
Sono di minore importanza
ecomomica i DLV (Virus Leucemia
Difettivi) che possono causare uno
spettro di sindromi, comprendenti
l'eritroblastosi e la mieloblastosi.
Lo sviluppo di linfoma è acuto, e
avviene attraverso un oncogene
virale ( o in alcuni casi, due
oncogeni) trasportati dal virus in
sostituzione dei propri geni. Di
conseguenza, l'infezione non può
evolversi senza il simultaneo
ingresso di un virus-heper
competente per la replicazione,
che può esso stesso essere
patogeno.
Virus della leucemia felina. La più
comune (e forse unica) causa di
leucemia e linfoma nei gatti è
l'infezione con FeLV [15]. Il virus è
endemico in diverse aree e causa
una vasta gamma di patologie
proliferative, degenerative e
immunosoppressive: da
linfosarcoma, all'eritroleucemia e
leucemia granulocitica, fino
all'AIDS felino. Infatti, il fatto che la
maggioranza dei gatti infetti muoia
non per leucemia ma per anemia o
immunosoppressione è stato
recentemente usato per sviluppare
un possibile modello animale per lo
studio dell'AIDS [16]. Molti gatti
sono esposti al FeLV per diverso
La tempo, ed esso è principalmente
è trasmesso attraverso la saliva. La
natura del linfoma e
l'organizzazione genetica del virus
suggeriscono anche che la
linfogenesi prosegua con
inserimenti a seguito
dell'inserzione del provirus nelle
immediate vicinanze di un
oncogene cellulare. Molte delle
leucemie T cellulari feline
dimostrano un coinvolgimento del
gene c-myc e, fatto interessante, la
genesi nei tumori di particelle FeLV
ricombinanti che trasportano il
gene c-myc, che possono infettare
e trasmettere il gene ad altre
cellule [17]. Resta da dimostrare
che tali virus abbiano un ruolo in
vivo.
Virus della leucemia bovina. Lo
studio dei BLV è di interesse
pratico per due ragioni. Anzitutto, il
virus è presente negli allevamenti
bovini di tutto il mondo ed è di
grande rilevanza economica. In
secondo luogo, BLV sempra essere
strettamente correlato ai virus T
linfotropici umani (HTLV-I e II) e
trasporta un analogo gene tat
capace di attivare il LTR in trans.A
differenza dei virus trans-attivanti
umani, tuttavia, il principale e forse
unico bersaglio del virus è il
linfocita B [19]. Tuttavia, ci può
essere un ruolo di cooperazione
per le T-cellule, attraverso la
produzione di linfochine, nella
replicazione virale. Quando questo
si verifica (dopo un lungo periodo
di latenza) il linfoma a cellule B si
sviluppa nel sangue periferico e
forma tumori linfonodali, che in
origine sono monoclonali, e in tutti
gli altri organi, portando alla
perdita di peso e a disordini
nervosi. La trasmissione del virus è
principalmente orizzontale,
attraverso escrezioni infette e
mediante insetti vettore. La
trasmissione congenita (verticale)
si verifica anch'essa attraverso la
placenta e il latte.
Virus T-linfotropici umani. Il
possibile esito delle infezioni con
differenti retrovirus umani è
riassunto nella tabella 1. HTLV-I è
stato il primo retrovirus umano ad
essere isolato [4] e per diverso
tempo il significato clinico
dell'infezione è rimasto non chiaro.
Ora è stato dimostrato che il virus
è chiaramente l'agente
responsabile per ATLL
(leucemia/linfoma a T-cellule
dell'adulto) ed è stato implicato in
una varietà di altri disordini, incluse
le patologie neurologiche [20].
L'epidemiologia dell'infezione da
HTLV-I mostra un considerevole
raggruppamento di sieropositività
in alcune estese regioni del
Giappone, dell'Africa e dei Caraibi,
così come in alcune popolazioni
nere degli USA e del Regno Unito.
[13]. In maniera allarmante, la
diffusione dellìHTLV-I in gruppi di
tossicodipendenti per via
endovenosa sembra aumentare in
modo analogo all'HIV [21]- Il
raggruppamento epidemiologico è
stato utilizzato come evidenza per
proporre che le storiche rotte di
trasporto, particolarmente degli
schiavi, hanno permesso la
disseminazione del virus dalla sua
origine in Africa. Infatti, la presenza
nelle scimmie del Vecchio Mondo
di un virus (STLV-I) che condivide
più del 95% di omologia con HTLV-I
indica che questi animali sono la
riserva originale del virus [22].
Comunque, la natura endemica del
viru in aree del Giappone con
alcuna storia di contatti con
trasportatori complica la
ricostruzione [23]. HTLV-I sembra
essere relativamente difficile da
contagiare in vivo (ed è anche
difficile contagiare le cellule sane in
vitro) e in condizioni normali
l'infezione è sia congenita,
attraverso la placenta o il latte, sia
sessuale, il che aiuta a spiegare la
precisa diffusione del virus. Inoltre,
l'infezione può anche verificarsi
mediante trasfusione di sangue
infetto, e, come detto sopra,
mediante la condivisione di
siringhe. Il virus si sta perciò
spostando dalle aree endemiche
proprie nella popolazione mondiale
nel suo complesso. Solo una
piccola frazione di individui positivi
per HTLV-I (<0,1%) sviluppa ATLL, e
quelli che lo fanno possono
progredire attraverso tre stadi:
ATLL subclinica, cronica, e infine
acuta, benchè solo metà di quelli
che progrediscono abbia avuto una
ATLL subclinica. Gli ultimi stadi
della ATLL sono caratterizzati, in
aggiunta al Linfoma T-cellulare a
carico del recettore per CD4 e
IL-2, da lesioni cutanee (micosi
fungoide) e ipercalcemia [20]. E'
inoltre presente un ampio spettro
di altri sintomi. Fatto degno di
nota, è stato di recente dimostrato
che i pazienti ATLL presentano
livelli davvero alti di recettore
solubile per IL-2 nei loro sieri,
presumibilmente un'altra
manifestazione della
trans-attivazione del gene per IL-2R
da parte del gene HTLV-I tat [24]. Il
bersagliamento di molecole
citotossiche mediante l'utilizzo di
anticorpi monoclonali contro il
recettore IL-2 è stato utilizzato in
vitro per eliminare le cellule
leucemiche [25]. La ATLL non è la
sola manifestazione dell'infezione
da HTLV-I. Evidenze sierologiche
implicano il virus nel disordine
neurologico noto come paraparesi
spastica tropicale [26], e una
sindrome strettamente correlata,
chiamata Mielopatia associata a
HTLV-I [HAM] è stata descritta in
Giappone [27]. La patogenesi di
questa malattia in rapporto
all'infezione da HTLV-I non è
chiara, e può coinvolgere dei
cofattori. Inoltre, la maggior parte
dei pazienti con Leucemia
linfocitica cronica B è sieropositiva
per HTLV-I [28], sebbene le cellule
linfocitarie non contengano il virus,
indicando un indiretto
coinvolgimento di HTLV-I in questa
malattia. Subito dopo la scoperta
iniziale di HTLV-I, un secondo virus
, HTLV-II, è stato isolato da un
paziente con Leucemia T a cellule
capellute [29]. Il virus è
geneticamente davvero molto
simile a HTLV-I, e può essere una
variante genetica di questo.
Ulteriori isolati son stati difficili da
ottenere, il che ha ostacolato
un'indagine epidemiologica e
clinica sul virus. Di recente
comunque, il riuscito isolamento di
diversi virus HTLV-II da pazienti con
una varietà di disordini
linfoproliferativi suggerisce che
HTLV-II sia diffuso più ampiamente
di quanto prima stimato e che
perdipiù sia non esclusivamente
associato alla leucemia T a cellule
capellute. Infine, il recente
isolamento di un terzo virus
leucemico, HTLV-V (le diciture
HTLV-III e HTLV-IV sono state già
usate e abbandonate), in 5 diversi
azienti con Leucemia a cellule T
[30] sottolinea il ruolo svolto da
 questi virus nella leucemia. I nuovi perchè il corretto marker, IL-2, è stato
isolati, sebbene distinti gli uni dagli identificato. Soltanto ciò ha facilitato la
altri, sono debolmente associati dal scoperta di cinque retrovirus umani,
punto di vista sierologico con HTLV-I, -II, -V, HIV-I e -II nell'ultima decade.
HTLV-I e HIV, e sembrano essere Resta da vedere quanti altri retrovirus e
coinvolti con un sottoinsieme di malattie saranno scoperti assieme ai loro
micosi sottocutanee fungoidi, target identificativi.
interessanti Linfociti T CD4 positivi,
e negativi per il recettore IL-2.
Resta da vedere in che modo altri
linfomi maligni umani siano il
risultato di infezioni retrovirali.

Conclusioni

Il possesso di un unico enzima, la

transcriptasi inversa, permette ai retrovirus
con RNA a singola elica di creare intermedi
di DNA a doppia elica che possono
integrarsi casualmente nel genoma della
cellula ospite. Questo provirus può
rimanere latente per periodi di tempo
davvero molto lunghi, il che è un gran
vantaggio per il virus, in quanto permette
la disseminazione silente del genoma
virale. Comunque, questa rottura del
genoma ospite può occasionalmente
esitare in una incontrollata crescita della
cellula ospite e genesi del linfoma. Questo
avviene sia mediante la cis attivazione di un
oncogene adiacente, sia mediante
inserzione di un oncogene virale, sia
mediante la trans attivazione di remoti geni
per il controllo della crescita cellulare.
Questi meccanismi sono responsabili di una
varietà di linfomi in differenti specie,
compreso i virus T linfotropici umani con
trans attivazione. I disordini causati
dall'ifezione con HTLV-I sono
fortunatamente rari, anche se il virus si sta
diffondendo e la sua presenza sia segnalata
per diverse malattie. Dopo diversi
fallimenti, HTLV-I è stato isolato soltanto