Translated Copy of 1853-Article Text-2124-1-10-20151031 PDF
Translated Copy of 1853-Article Text-2124-1-10-20151031 PDF
org
www.jexpsciences.comJE
22
rempah-rempah, optimalisasi sehubungan dengan hasil oleoresin dengan sifat penanganan yang diinginkan, dan akhirnya kasus
dan ekonomi desolventizing ke tingkat pelarut sisa yang diizinkan dalam produk akhir, dan pemulihan pelarut. Hexane, aseton,
alkohol, dan etilen diklorida umumnya telah digunakan dalam ekstraksi oleoresin rempah-rempah. Dari pertimbangan kelarutan
konstituen aktif, kurkuminoid yang buruk larut dalam pelarut hidrokarbon. Alkohol dan aseton adalah ekstraktan yang baik dan
hasilnya juga dapat diharapkan tinggi karena ekstraksi komponen tanpa rasa. Ekstraksi Soxhlet bubuk kunyit dengan aseton
memberikan hasil sekitar 5,0% mengandung 42% kurkuminoid dalam 4 sampai 5 jam. Aseton sebagai pelarut sedikit lebih tinggi
daripada alkohol dan etilen diklorida, kandungan kurkuminoid juga berada di sisi yang tinggi, menunjukkan ekstraksi selektif.
Hasil ekstraksi dengan aseton, bagaimanapun, telah dilaporkan memberikan hasil curcuminoids yang tinggi daripada ekstraksi
alkohol [1].
Sejumlah penelitian dilakukan untuk memisahkan pigmen kurkuminoid dengan kromatografi lapis tipis (KLT), kromatografi
lapis tipis berkinerja tinggi (HPTLC), dan kromatografi kolom (CC). Fasa diam yang paling umum digunakan adalah silika gel
dengan sistem pelarut yang berbeda termasuk benzena, etil asetat, etanol, kloroform, asam asetat, heksana, dan metanol untuk
pemisahan kromatografi [6, 12]. Metode HPLC adalah sensitif, tepat, dan akurat untuk deteksi dan kuantifikasi kurkuminoid
dalam ekstrak rimpang Curcuma longa [13]. Pemisahan dengan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dilakukan sebagian
besar pada fase terbalik menggunakan campuran air, asetonitril, etanol, dan metanol [8]. Karena pigmen kurkuminoid bervariasi
dalam struktur kimia, adalah mungkin bahwa karakteristik fisiko-kimia serta sifat-sifat fungsional akan bervariasi di antara
mereka. Karena senyawa DMC dan BDMC tidak tersedia secara komersial, penting untuk mendapatkan pigmen-pigmen ini
dengan kemurnian tinggi untuk studi terperinci mengenai sifat-sifat kimia dan fisiologinya [14]. Oleh karena itu penting untuk
mendapatkan pigmen murni dan mengkarakterisasi mereka secara individual untuk mempelajari sifat-sifat biologis mereka [15].
Penelitian ini menjelaskan skrining sistem pelarut untuk ekstraksi kurkuminoid dari rimpang kunyit menggunakan pelarut
non polar ke polar untuk ekstraksi lengkap, dan isolasi, identifikasi dan pemurnian kurkuminoid oleh kromatografi kolom diikuti
oleh analisis kemurnian oleh HPLC.
Bahan dan Metode
Curcuma longa (Kunyit) rimpang dikumpulkan dari berbagai Assam - Lakhadong. Semua pelarut / Bahan kimia yang
digunakan adalah dari AR / HPLCgrade dan diperoleh dari E-Merck. Standar referensi Curcumin dibeli dari Sigma Chemicals
Co. USA
Metode Ekstraksi kurkuminoid
Rimpang segar dibersihkan dicuci dengan air deionisasi, diiris dan dikeringkan di bawah sinar matahari selama satu minggu
dan sekali lagi dikeringkan pada 50 ° C dalam oven udara panas selama 6 jam . Rimpang kering dipotong kecil-kecil, dibedaki
oleh pabrik elektronik. Sekitar 20 gram sampel diambil menjadi bidal dan ditempatkan dalam alat soxhlet, dibentuk dengan
berbagai pelarut dari non polar ke kutub. 150 ml pelarut ditambahkan dan diekstrak
Revathy et al. / J Exp Sci 2 (2011) 21-25
menurut titik didihnya selama 6 jam. Pelarut yang digunakan adalah Hexane (BP = 69 ̊ C), Chloroform (BP = 61 ̊C), Ethyl acetate
(BP = 77 ̊C), Methanol (BP = 65 ̊C), dan Aseton (BP = 56,53 ̊C). Dan satu sampel diekstraksi dengan heksana selama 2 jam dan
ekstrak heksana dibuang dan bubuk itu diekstraksi ulang dengan metanol selama 6 jam. Setelah selesai ekstraksi, ekstrak coklat
gelap itu kemudian didinginkan, disaring, dipekatkan menggunakan rotary evaporator, dan akhirnya dengan hisap vakum untuk
mendapatkan ekstrak kering mentah yang berwarna oranye hitam. Setiap sampel mentah kunyit diekstraksi dengan metode yang
sama dan hasil dihitung.
Perkiraan kurkuminoid: dengan analisis HPLC Prosedur i) Persiapan Sampel: Ditimbang secara akurat 25mg sampel dan
dilarutkan dalam 25ml aseton. Dari ini dipipis 1ml dan diencerkan sampai 5 ml dengan aseton. Disaring melalui filter membran
0.2μm sebelum injeksi. ii) Kondisi kromatografi
Sampel dianalisis dengan HPLC dalam sistem kromatografi cair Shimadzer LC 20A0 dengan detektor SPD-M20AuV dalam
mode isokratik. 20μl sampel disuntikkan dan elusi dilakukan dengan sistem pelarut gradien dengan laju aliran 1.0ml / menit pada
suhu kamar. Kolom yang digunakan adalah C18 (250X4.6mm), fase gerak THF 40% dan air 60% mengandung asam sitrat 1%,
pH yang disesuaikan sampai 3,0 menggunakan larutan kalium hidroksida pekat dan diukur dalam panjang gelombang 420nm.
Pemisahan kurkuminoid oleh TLC menggunakan sistem pelarut yang berbeda:
Ekstrak aseton diuji di TLC untuk kehadiran tiga curcuminoids. Gel silika pra-dilapisi TLC (Merk-60 F254, 0,25mm tebal)
piring dikembangkan menggunakan tangki kaca Camag twin-trough yang pra-jenuh dengan fase gerak selama 1 jam dan setiap
lempeng dikembangkan ke ketinggian sekitar 10cm. Komposisi fase gerak dioptimalkan dengan menggunakan pelarut seluler
berbeda dari berbagai polaritas. Setelah pelat pengembangan dihapus dan dikeringkan dan bintik-bintik divisualisasikan dalam
sinar UV.
Kolom kromatografi: Preparasi sampel
100 gram rimpang bubuk halus dilakukan ekstraksi soxhlet dan pelarut yang digunakan adalah aseton selama 6 jam. Ekstrak
disaring dan dipekatkan dalam evaporator berputar, menghasilkan olerosin diendapkan dengan petroleum eter dan vakum kering,
campuran curcuminoid mentah ini mengandung kurkumin, demetoksikurkumin, bisdemethoxycurcumin.
Kromatografi kolom gel silika
Ekstrak aseton dikenai kromatografi kolom dalam silika gel (60-120 mesh) kolom gelas. Sekitar 5 gram Curcuminoids
mentah dicampur dengan 8 gm silica gel dan dimuat pada
23
ke kolom 46 × 2 cm dan dielusi dengan kloroform diikuti oleh kloroform: metanol dengan meningkatnya polaritas. Semua fraksi
yang terkumpul dikenakan pada pelat TLC silika gel 60 F254 menggunakan kloroform: metanol (95: 5) sebagai sistem pelarut
yang berkembang dan dideteksi sebagai bintik kuning. Dan fraksi serupa dengan nilai Rf dikumpulkan dan pelarut organik
dihilangkan dengan evaporator berputar. Kandungan kurkuminoid total dari masing-masing kurkuminoid yang dikumpulkan
dianalisis dengan spektrofotometri UV pada 420 nm.
Pemurnian setiap kurkuminoid:
Kurkuminoid individu yang dikumpulkan dari kromatografi kolom dilarutkan dalam metanol dan dipanaskan. Setelah
pelarutan lengkap ditambahkan kloroform untuk mendapatkan rasio metanol: kloroform 5: 2 dan disimpan pada 5 ° C untuk
semalam. Kristal yang diperoleh dipisahkan oleh filtrasi. Kristal diendapkan dengan petroleum eter. Kemurnian Kristal individu
dianalisis dalam HPLC.
Hasil dan Diskusi
Curcuminoids memiliki sifat biologis yang besar di mana curcumin (C) dilaporkan untuk begitu banyak sifat obat. Baru-baru
ini analog kurkumin dilaporkan untuk aktivitas biologis. Demethoxycurucmin (DMC) adalah penghambatan terbaik sel MCF-7
[9]. Bisdemethoxycurcumin (BDMC) aktif untuk modulasi ekspresi gen MDR-1 [17]. Senyawa II dan III tidak tersedia secara
komersial. Oleh karena itu untuk mempelajari sifat biologis kurkuminoid individu kita perlu mengisolasi senyawa dengan
kemurnian tinggi. Dalam penelitian kami, aseton adalah pelarut yang cocok untuk ekstraksi kurkuminoid. Profil HPLC
kurkuminoid mentah yang diekstraksi menunjukkan kurkumin (C), dan analognya DMC dan BDMC untuk hadir di 22,8%,
14,2%, 6,5% masing-masing meningkat dengan standar.
Screening pelarut untuk ekstraksi
Pelarut yang berbeda dengan berbagai polaritas digunakan untuk ekstraksi kurkuminoid dari rimpang kunyit. Berbagai
pelarut yang digunakan adalah Hexane, Chloroform, Ethyl acetate, Methanol, Acetone. Setelah konsentrasi masing-masing
ekstrak, total hasil ditentukan dan komposisi persentase kurkuminoid individu yang ada dalam ekstrak dianalisis dengan HPLC
yang ditunjukkan pada tabel 1, identitas masing-masing puncak dikonfirmasi dengan penentuan waktu retensi dan dengan spiking
dengan standar. Kurkumin ditemukan menjadi senyawa utama dalam semua ekstrak yang diuji diikuti oleh demethoxycurcumin
dan bisdemethoxycurcumin. Dalam penelitian kami, ekstrak aseton menghasilkan jumlah curcuminoids individu yang optimal
dibandingkan dengan semua ekstrak lainnya. Persentase C, DMC, BDMC dalam ekstrak aseton adalah 22,8%, 14,2%, 6,5%.
Oleh karena itu, ekstrak aseton dapat menjadi sumber yang baik untuk isolasi curcuminoids individu.
Revathy et al./J Exp Sci 2 (2011) 21-25
Tabel 1. Skrining pelarut yang berbeda dengan polaritas yang berbeda untuk ekstraksi Curcuminoids Solvent Curcumin
Demethoxycurcumin Bisdemethoxycurcumin Total Total ekstrak
gm Aseton
22,8% 14,2% 6,5% 43,5% 3,49 Kloroform 19,7% 12.15% 5.05% 36,9% 3,09 Hexane 6,5% 1,03% 0,04% 7,57% 0,90 Methanol
15,68% 9,90% 4,73% 30,3% 4,31 etilasetat 18,76% 11,6% 5,2% 35,5% 3,20 Hex / MeOH 18,1% 11,2% 6,1% 35,4%
3.62total ekstrak sampel kunyit ditentukan seperti yang dijelaskan dalam teks. Komposisi persentase dari masing-masing
kurkuminoid diperkirakan oleh HPLC dan hasilnya rata-rata dari tiga percobaan.
Tabel 2: Pemisahan kurkuminoid oleh TLC menggunakan sistem pelarut berbeda TLC Rasio Fase gerak Nilai Rf
C DMC BDMC Benzena: etilasetat 18: 2 0,79
0,69 0,61 Diklorometana: metanol 19: 1 0,8 0,7 0,6 Chloroform: metanol 19: 1 0,75 0,55 0,27 Setiap lempeng dikembangkan
hingga ketinggian sekitar 8cm. C = curcumin, DMC = demethyoxycurcumin, BDMC = bisdemethyoxycurcumin.
Tabel 3: profil elusi kromatografi kolom silika gel. Nomor pecahan Total volume yang
dikumpulkan (mL)
24 Kurkuminoid menyajikan Berat ekstrak
(mg)
Persentase kurkuminoid total oleh spektroskopi UV 1 hingga 31 240 C 906,4 84% 32 hingga 40 360 C + DMC 173,5 22% 41
hingga 67 1080 DMC 597,5 86% 68 hingga 75 320 DMC + BDMC 192,7 46,6% 76 hingga 95 800 BDMC 390,5 80,61% Setiap
fraksi mengandung 40 mL. C = curcumin, DMC = demethyoxycurcumin, BDMC = bisdemethyoxycurcumin.
Elusi oleh kloroform dan kloroform: metanol 98: 2.
Pemisahan kurkuminoid oleh TLC menggunakan sistem pelarut yang berbeda.
Komposisi yang berbeda dari fase gerak diuji di TLC untuk pemisahan curcuminoids individu dan nilai Rf yang ditentukan
ditunjukkan pada tabel 2. Resolusi yang diinginkan pemisahan dicapai menggunakan kloroform: metanol 95: 5 sebagai fase
gerak. Nilai Rf kurkuminoid adalah 0,75, 0,55, dan 0,27, untuk C, DMC, BDMC masing-masing. Resolusi nilai Rf yang lebih
baik menunjukkan bahwa kloroform dan metanol dapat menjadi pelarut yang cocok untuk pemisahan senyawa dalam
kromatografi kolom.
Kolom kromatografi
Dalam penelitian ini ekstrak aseton diendapkan dengan petroleum eter dan menghasilkan kurkuminoid mentah dikenai
kromatografi kolom elusi dilakukan menggunakan kloroform diikuti oleh kloroform: metanol dengan meningkatnya polaritas dan
fraksi yang diperoleh diuji dengan KLT. Pecahan menunjukkan pola yang sama di TLC dikumpulkan dan terkonsentrasi.
Komposisi fraksi yang dikumpulkan selama pemisahan kromatografi kurkuminoid mentah dan fraksi terkonsentrasi diuji untuk
penentuan kurkuminoid total dengan spektroskopi UV ditunjukkan pada Tabel 3.
Analisis spektroskopi UV dari fraksi yang dikumpulkan menunjukkan persentase dari total kurkuminoid yang ada dalam
fraksi. . Dalam persentase penelitian kami dari total kurkuminoid hadir dalam fraksi yang dikumpulkan 84%, 86%, 80,6% dari C,
DMC, dan BDMC masing-masing. Oleh karena itu pemurnian lebih lanjut dilakukan dengan kristalisasi berulang dengan
kloroform dan metanol. Akhirnya
diendapkan dengan petroleum eter. Profil kemurnian kurkuminoid individu terisolasi dianalisis oleh HPLC ditunjukkan pada
gambar 2, C, DMC, BDMC menunjukkan puncak tunggal pada waktu retensi masing-masing 10.81, 12.79, 13.03 menit. Identitas
masing-masing puncak dikonfirmasi oleh penentuan waktu retensi dan dengan spiking dengan standar. Kurkumin terbentuk
sebagai kristal berbentuk jarum berwarna kuning terang, Demethoxycurcumin sebagai kristal kuning muda,
Bisdemethoxycurcumin sebagai kristal warna oranye kemerahan. Senyawa murni ini dipelajari lebih lanjut untuk aktivitas biologi
dan sifat farmasi.
Ucapan Terima Kasih
Para penulis berterima kasih kepada Kepala Sekolah dan Kepala, Departemen Bioteknologi Tanaman, Presidensi College,
Chennai - 600 005 dan Ekstrak Alam Arjuna, Alwaye, Kerala - 683 101, untuk menyediakan fasilitas laboratorium, dan bantuan
teknis.
Referensi [1] VS Govindarjan., 1980. Kunyit - kimia, Teknologi, dan Kualitas. Tinjauan Kritis CRC dalam Ilmu Pangan dan
Nutrisi, 12 (3), 199-301. [2] L.Peret-Almeida, Cherubino, Alves RJ 2005. Pemisahan dan penentuan karakteristik fisiko-kimia
kurkumin, demethoxycurcumin, bisdemethoxycurcumin. Food Research International 38: 1039-1044. [3] Merina Benny Antony.,
2003. Tanaman Obat Asli: ekstrak dan isolat mereka sebagai nilai tambah produk ekspor. Jurnal Agro bios, volume no.1, 39-41.
[4] Schieffer, GW, 2002. Ekstraksi cair curcuminoid dan produk curcuminoid yang bertekanan dari
Revathy et al ./J Exp Sci 2 (2011) 21-25
kunyit (Curcuma longa) dengan tes HPLC berikutnya. J.Liq. Chromatogr. Technol.25 terkait, 3033-3044. [5] Johnson JJ,
Mukhtar H. 2007. Curcumin untuk kemoprevensi kanker usus besar. Cancer Lett 255: 170–81. [6] Ravindran P, Babu KN,
Sivaraman K. 2007. Dalam: Kunyit:
genus Curcuma. Boca 150-155 [7] Revathy.S, Elumalai.S, Merina Benny dan Benny Antony 2011. Evaluasi Curcuminoids
dalam Rimpang Kunyit (Curcuma longa L.) dikumpulkan dari berbagai tempat di India. Biosains, Penelitian Bioteknologi Asia
jilid 8 (1), [8] Jayaprakasha GK, Jaganmohan Rao L, Sakariah KK. 2002. Peningkatan metode HPLC untuk penentuan curcumin,
demethoxycurcumin dan bisdemethoxycurcumin. J Agric Food Chem 50: 3668–72. [9] Simon.A 1998. Efek penghambatan
kurkuminoid pada proliferasi sel MCF-7 dan hubungan struktur-aktivitas. Kanker biarkan., 129, 111-116. [10] Anand P,
Aggarwal BB 2007. Bioavailabilitas kurkumin:
masalah dan janji. Mol Pharmacol 4: 807-18. [11] Benny Antony, Merina Benny, SBRao., 2005. Meningkatkan penyerapan
curcuminoids, Journal of Spices India, 23-26. [12] Gupta AP, Gupta MM, Kuma SJ. 1999. Penentuan kurkuminoid secara
simultan dalam sampel curcuma menggunakan kromatografi lapis tipis kinerja tinggi. Liq Chromatogr Real Time 22: 1561–9.
25
[13] Sompol Paramapojn dan Wandee Gritsanapan., 2009. Penentuan aktivitas pembilasan radikal bebas dan analisis kuantitatif
kurkuminoid dalam ekstrak Curcuma zedoaria rimpang dengan metode HPLC. Sains saat ini, jilid. 97, 1069-1073. [14]
M.Madhava Naidu, Shyamala, Srinivas 2009. Metode HPLC Sederhana untuk Resolusi Curcuminoid dengan Potensi
Antioksidan. Jurnal ilmu makanan vol 74 (4). [15] LD Kapoor, 1990. Buku Panduan CRC dariAyurvedic
tanaman Obat, CRC Press, Inc., Boca Raton, Florida. [16] Ammon HPT, Wahl MA 1991. Farmakologi Curcuma
longa. Planta Med 57: 1-7. [17] Pornngarm, Anuchapreeda 2004. Modulasi gen MDR-1 multidrug-resistance manusia oleh
kurkuminoid alami BMC kanker 4:13. [18] Deepak V.Dandekar, VGGaikar., 2003. Ekstraksi Hidrotropik kurkuminoid dari
Kunyit, Ilmu dan teknologi pemisahan vol 38, 1185-1215. [19] Wisut Wichitnithad 2009. Metode HPLC Isokratis Sederhana
untuk Penentuan Serentak Kurkuminoid Secara Simultan dalam Ekstrak Kunyit Komersial. Phytochem. Anal; 20: 314-319. [20]
Janssen A, Gole TH. 1984. Penentuan kromatografi lapis tipis kurkumin dari kunyit. Chromatogr. 18: 546–9.