Estudio de la población bacteriana de un depósito de almacenamiento

interino en húmedo de combustibles gastados de reactores de

investigación

Ana F. Forte Giacobone (1)-Ramón A. Pizarro(2)

(1) División Corrosión. Departamento de Materiales. GAEN. CNEA
(2) División Radiomicrobiología. Departamento de Radiobiología. GATEN. CNEA

Resumen
La biocorrosión es un fenómeno que ocurre en los metales como consecuencia de la acción de microorganismos adheridos a los mismos. En la industria nuclear este proceso ocasiona no solamente pérdidas
económicas sino también un alto riesgo medio ambiental. Para que exista biocorrosión es condición necesaria aunque no suficiente la existencia de biofilms. El objetivo del presente trabajo ha sido identificar las
cepas bacterianas cultivables presentes en un depósito de almacenamiento interino en húmedo de combustibles gastados de reactores de investigación (repositorio nuclear) que pudiesen tener una mayor
relevancia desde un punto de vista de la inducción de corrosión microbiológica. Para ello se tomaron muestras de agua de los 50cm superiores de los canales de monitoreo del repositorio, se las concentró y lavó
(para disminuir su actividad) y se las sembró en distintos medios de cultivo. Las colonias que aparecieron tras 72 hs de incubación a 25ºC (todas ellas aerobias) se aislaron y caracterizaron mediante la aplicación
de técnicas bacteriológicas convencionales. Por último se procedió a la identificación de los aislamientos mediante secuenciación del gen del ARNr 16S. La evaluación de la capacidad de formación de biofilms se
realizó en cultivos estacionarios de 14 días mediante el método del tubo de ensayo empleando como medio de cultivo caldo nutritivo (CN) y caldo nutritivo diluido 30 veces en agua milliq (CN 1/30). Este último es
un medio pobre, de características cercanas a las del repositorio. Por otra parte se evaluaron cambios de pH en el medio como consecuencia de la acción microbiana.Se identificaron 21 cepas bacterianas, de las
cuales 18 tienen capacidad de formar biofilms estables aun en un medio muy diluído .Todas las bacterias aisladas alcalinizan el medio. Por otra p arte , en base a los resultados obtenidos, se seleccionó una cepa
de Bacillus cereus y se evaluó su capacidad de inducir corrosión en un medio muy diluído, determinándose formación localizada de depósitos debajo de los cuales se observa ataque de tipo picado no
cristalográfico asociuado a inclusiones MgSi. En vista de los resultados obtenidos y considerando que la matriz de los elementos almacenados es de aleación de aluminio 6061, un material altamente susceptible a
sufrir tanto corrosión bajo depósito como ataque alcalino en partículas catódicas a pH superiores a 6, se comprende tanto la necesidad de realizar estudios específicos de biocorrosión como de implementar un
programa de monitoreo microbiológico del repositorio

Cementerio Centro Atómico Ezeiza Toma de muestras Resultados secuenciación 16sRNA

• Se tomaron muestras liquidas de los 50 cm
superiores. Se concentraron y lavaron las
muestras con sf hasta que la actividad
remanente resultó idéntica a la del fondo.
• Actividad inicial 0,5 mSv/h
• Actividad fondo 0,15 mSv/h
• Dosis admitidas : 1mSv/año población gral
100 mSv/5años ind nucl.
Pruebas efectuadas a
bacilos gram positivos:
-Tinción de esporas
-Producción de lecitinasa
-Movilidad
-Reducción de nitratos
Se extrajeron muestras de agua de los canales Nº 164; 147 ,181,198 -Catalasa
AA 6061 Pruebas efectuadas a cocos
gram +:
? Elementos combustibles de reactores experimentales
Catalasa
Oxidasa
Motilidad
Capacidad de oxidar glucosa
Producción de H2S
Lecitinasa
U3O8 + Al Capacidad de degradar almidón
Ureasa
0,5 mm
(análisis por Blast)
• Bosea sp.
• Plaqueo de las muestras concentradas en
• Rhizobium sp.
Caldo Nutritivo, Caldo Nutritivo diluído 10
veces, Medio Postgate (anaeróbicas).
• Leifsonia sp.
• Micrococcus sp.
• Incubación a 25ºC 1 semana • Bacillus firmus
• Tipificación de las colonias obtenidas • Sinorhizobium sp. (2 cepas)
• Pseudomonas sp. (2 cepas)
a) pruebas bioquímicas • Pseudomonas lurida
b) Secuenciación 16s RNA • Arthrobacter sp. (2 cepas)
• Acinetobacter sp.
• Aminobacter sp.
• Rhodococcus sp. (2 cepas)
• Mesorhizobium sp.
Pruebas efectuadas a bacilos gram positivos: • Bacillus cereus (2 cepas)
Capacidad de fermentar carbohidratos • Microbacterium aerolatum (2 cepas)
Oxidasa
Catalasa
Movilidad
Presencia de pigmento
Capacidad de oxidar glucosa
Capacidad de oxidar acetato
Capacidad de degradar Tween 80
ONPG
Hidrólisis de gelatina
Esculina
Producción de DNasa
Producción de H2S
+++ Biofilm en Caldo Nutritivo 1/30

Placa Marco
Vista de perfil del ensamble
Placa - Marco - Placa • Pseudomonas sp.
Al término de su ciclo de quemado se depositan en piletas de agua
• Micrococcus sp.
desmineralizada en almacenamiento interino prolongado (30 o 40 años)
• Acinetobacter sp.
• Evaluación de formación de
• Aminobacter sp.
FeAl3 FeAl3
Si SEGUNDAS FASES:
biofilms por método del tubo de
Si
Mg2Si
• Microbacterium sp.
Si
FeAl3
ensayo.(CN y CN 1/30) • Bacillus cereus
a-(Fe,Cr,Mn)3SiAl12
Mg2Si
b-(Fe,Cr,Mn)2Si2Al9
p-FeMg3Si6Al8
p-(Fe,Cr,Mn)Mg3Si6Al8
2080 X
TiAl3

+++ Biofilm en Caldo Nutritivo

Composición AA 6061 en % peso : Mg: 0,95%-1,10%; Si: 0,55%- • Pseudomonas sp. (todas las
0,65%; Fe: 0,15%-0,45%; Cu: 0,2%-0,4%; Cr: 0,10%-0,2%; Mn: 0,1 %;
Zn: 0,25%; Ti: 0,03%-0,07%; Al: hasta completar 100%.
cepas)
• Micrococcus sp.
• Acinetobacter sp.
• Aminobacter sp.
• Microbacterium sp.
• Bacillus cereus
• Bacillus firmus
Coposici ón AA 6061 en % peso : Mg: 0,95%-1,10%; Si: 0,55%-0,65%; Fe: 0,15%-0,45%;
• Rhizobium sp.
Cu: 0,2%-0,4%; Cr: 0,10%-0,2%; Mn: 0,1 %; Zn: 0,25%; Ti: 0,03%-0,07%; Al: hasta • Mezorhizobium sp.
completar 100%.
• Sinorhizobium sp.

AA 6061 en medio aireado a 25ºC

MEDIO Ecorr Epicado (Epicado-Ecorr)

Conclusiones
(mVCS) (mVCS)

NaCl 3,5 % -1080 -672 408

(0,65M)
NaCl 10-3 M -867 -473 394 • Las mayor parte de las cepas aisladas
(60 ppm) presentan capacidad de formar biofilms en
medios muy diluídos.
En presencia de bacterias con NaCl 2,8 x 10-3 M la AA 6061
presenta ataque al Ecorr en medio aireado a 25ºC. • Una de las cepas encontradas ocasiona
Ataque corrosión localizada de tipo picado en la
Dañodebajo
bajo del depósito
depósito
(SEM)
aleación AA6061 en un medio muy diluído.
Depósitos sobre AA 6061 Resultados obtenidos a partir de curvas • El ataque localizado estaría relacionado con
Depòsitos sobre AA6061 inclusiones Mg Si
de polarización.
20 dias CN1/30.
Microscopìa Electrónica de
Barrido (SEM)

Estudios preliminares de
Corrosión Inducida
Microbiológicamente sobre
AA6061 por B. cereus Agradecimientos:
Al personal del Departamento de Materiales y del
Departamento Radiobiología que contribuyeron de una
u otra forma a la realización de este trabajo.
A los oficiales de radioprotección de los sectores Plantas
Químicas (CAE-CNEA) y Combustibles (CAC-CNEA).

Daño bajo depósito

Microscopía Electrónica de
Barrido (SEM) Análisis de dispersión de rayos X
(EDAX)