LAPORAN iiPRAKTIKUM ii

KIMIA iiDASAR ii

KROMATOGRAFI
ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii ii
ii ii

ii ii ii ii ii ii ii i i ii ii ii ii ii

OLEH ii: ii

NAMA ii ii ii i i i i: iiZAHRA iiRAMADHANIA ii ii

NIM ii ii ii : iiL1C021084 ii

ASISTEN ii i ii i ii: iiANISA iiRAHMASARI

KEMENTERIAN iiPENDIDIKAN, iiKEBUDAYAAN, iiRISET iiDAN

iiTEKNOLOGI

LABORATORIUM ii iiKIMIA ii ii

JURUSAN iiILMU iiKELAUTAN

ii ii ii ii ii ii ii iiFAKULTAS iiPERIKANAN iiDAN iiILMU iiKELAUTAN

UNIVERSITAS iiJENDERAL iiSOEDIRMAN

PURWOKERTO

ii ii ii i ii ii ii ii ii ii ii2021 ii ii ii ii ii ii ii
 i ii ii ii ii ii ii ii ii ii
ii ii ii ii ii ii ii ii iiDAFTAR iiISI ii
ii
DAFTAR iiISI ii........................................................................................................ ii
JUDUL iiPERCOBAAN ii....................................................................................... 1
I. TUJUAN ii.........................................................................................,,......... 1ii
II. TINJAUAN iiPUSTAKA ii..................................................................,......... 1ii
III. METODOLOGI iiPERCOBAAN ii........................................................,...... 4
3.1 Alat ii...................................................................................................... 4
3.2 Bahan ii................................................................................................... 4 i
3.3 Cara iiKerja............................................................................................. 4
3.4 Skema iiKerja ii...................................................................................... 6
IV. HASIL iDAN iPEMBAHASAN i................................................................ 7
4.1 Data iPengamatan i................................................................................. 7
4.2 Pembahasan i......................................................................................... 9
V. KESIMPULAN iDAN iSARAN i................................................................. 22i
5.1 Kesimpulan i.......................................................................................... 22
5.2 Saran i.................................................................................................... 23
DAFTAR iPUSTAKA i........................................................................................... 24
i

ii

ii

ii

i
 KROMATOGRAFI

I. TUJUAN ii
- Mengidentifikasi iiadanya iilogam iiHg, iiPb iidan iiBi iidalam
iilarutan iisampel. iI
- Membuat ibercak isampel ipada ikertas ipada ikertas ikromatografi
idengan idiameter imaksimal i4 imm. i
- Mengelusikan ibercak isampel idalam iruang ipemisah. i

II. TINJAUAN iiPUSTAKA ii

Kromatografi iiadalah iisuatu iiistilah iiumum iiyang iidigunakan
iiuntuk iibermacam-macam iiteknik iipemisahan iiyang iididasarkan iiatas
iipartisi iisampel iidiantara iisuatu iirasa iigerak iiyang iibisa iiberupa iigas
iiataupun iicair iidan iirasa iidiam iiyang iijuga iibisa iiberupa iicairan iiataupun
iisuatu iipadatan. ii

Penemu iiKromatografi iiadalah iiTswett iiyang iipada iitahun ii1903,

iimencoba iimemisahkan iipigmen-pigmen iidari iidaun iidengan
iimenggunakan iisuatu iikolom iiyang iiberisi iikapur ii(CaSO4). iilstilah
iikromatografi iidiciptakan iioleh iiTswett iiuntuk iimelukiskan iidaerah-daerah
iiyang iiberwarna iiyang iibergerak iikebawah iikolom ii. iiPada iiwaktu iiyang
iihampir iibersamaan, iiD.T. iiDay iijuga iimenggunakan iikromatografi iiuntuk
iimemisahkan iifraksi-fraksi iipetroleum, iinamun iiTswett iilah iiyang
iipertama iidiakui iisebagai iipenemu iidan iiyang iimenjelaskan iitentang
iiproses iikromatografi. iHasil iikarya iiyang iibaik iisekali iidari iiMartin iidan
iiSynge iipada iitahun ii1941 ii(untuk iiini iimereka iimemenangkan iiNobel)
iitidak iihanya iimengubah iidengan iicepat iikroinatografi iicair iitetapi
iiseperangkat iiumum iilangkah iiuntuk iipengembangan iikromatografi iigas
iidan iikromatografi iikertas. iiPada iitahun ii1952 iiMartin iidan iiJames
iimempublikasikan iimakalah iipertama iimengenai iikromatografi iigas.
iiDiantara iitahun ii1952 iidan iiakhir iitahun ii1960 iian iikromatografi iigas
iidikembangkan iimenjadi iisuatu iiteknik iianalisis iiyang iicanggih.
iKromatografi iidigunakan iiuntuk iimemisahkan iisubstansi iicampuran
iimenjadi iikomponen-komponennya.
1
 2
iiSeluruh iibentuk iikromatografi iiberkerja iiberdasarkan iiprinsip iiini.
IiSemua iikromatografi iimemiliki iifase mdiam ii(dapat iiberupa iipadatan,
iiatau iikombinasi iicairan-padatan) iidan iifase iigerak ii(berupa iicairan iiatau
iigas).iFase iigerak iimengalir iimelalui iifase iidiam iidan iimembawa
iikomponenkomponen iiyang iiterdapat iidalam iicampuran

Komponen-komponen iiyang iiberbeda iibergerak iipada iilaju iiyang

iiberbeda iiProses iikromatografi iijuga iidigunakan iidalam iimetode
iipemisahan iikomponen iigula iidari iikomponen iinon iigula iidan iiabu
iidalam iitetes iimenjadi iifraksi-fraksi iiterpisah iiyang iidiakibatkan iioleh
iiperbedaan iiadsorpsi, iidifusi iidan iieksklusi iikomponen iigula iidan iinon
iigula iitersebut iiterhadap iiadsorbent iidan iieluent iiyang iidigunakan
ii(Hongisto iidan iiHeikkila, ii1977; iiKantasubrata, ii1993; iiSchneider,
ii1987) ii ii ii ii ii ii ii ii ii

Kromatografi ikertas iyaitu ikertas imengadsorpsi iair idari ilingkungan

isekitar. iAir itersedia idilingkungan idalam ibentuk ikelembaban idan
ibertindak isebagai isalah isatu ikomponen idalam ilarutan ipengelusi i(fase
igerak). iAir ijuga ibertindak isebagai ifase idiam. iKromatografi ikertas
imenggunakan isistem i“cair-cair”. iKromatografi ikertas ibanyak idigunakan
iuntuk ikeperluan ianalitis, idan itermasuk idalam ikelompok ikromatografi
iplanar, idimana ipemisahannya imenggunakan imedium ipemisah idalam
ibentuk ibidang i(umumnya ibidang idatar) iyaitu ibentuk ikertas
i(Sastrohamidjojo, i1991). iPrinsip ikromatografi ikertas iyaitu imetode
ipemisahan idari isubstansi imenjadi ikomponen-komponennya iyang
ibergantung ipada idistribusi isuatu isenyawa ipada idua ifase iyaitu ifase idiam
idan ifase igerak, ipelarut ibergerak ilambat ipada ikertas, ikomponen-
komponen ibergerak ipada ilaju iyang iberbeda idan icampuran idipisahkan
iberdasarkan ipada iperbedaan ibercak iwarna. iBerbagai ijenis ipemisahan
idengan ikromatografi ikertas idilakukan iyang idikenal isebagai i"analisa
ikapiler". iMetoda iini isangat isesuai idengan ikromatografi iserapan idan
ikromatografi ikertas isebagai iperkembangan idari isistem ipartisi
i(Suryadarma, i2014). iSalah isatu izat ipadat iyang idapat idigunakan iuntuk
imenyokong ifasa itetap iyaitu ibubuk iselulosa. I
 3

Proses ipemisahan idan ipemurnian isatu izat idari izat ilain iyang itidak
idiinginkan, imerupakan iproses iyang isangat ipenting ipada ipembuatan isuatu
isenyawa. iAda iberbagai icara ipemisahan idan ipemurnian isuatu izat idari
icampurannya isecara ifisik iantara ilain. iPemisahan icair-cair idapat
idilakukan idengan icara idestilasi, iekstraksi idan ikoagulasi. iPemisahan
ipadat icair, idapat idilakukan idengan icara idekantasi, ifiltrasi, iadsorpsi, idan
idestilasi. iKromatografi iadalah imetoda iyang idigunakan iuntuk imemisahkan
icampuran imolekular iberdasarkan idistribusi imolekul-molekul idalam
icampuran itersebut idalam ifasa idiam i(adsorben) idan ifasa igerak i(eluen).
iDistribusi imelokul idapat iberupa idistribusi ifasa iadsorpsi iatau idistribusi
ifasa ipartisi i(Akhmad, i2008). iKromatograf idapat idigunakan iuntuk
imenentukan ikonsentrasi isuatu isampel idan ikomponen-komponen iyang
iterdapat idalam isuatu isampel imelalui iharga iRf idari imasing-masing
ikomponen. iRf iadalah ijarak itepuh isuatu izat ipada isaat ielusi idan idihitung
idengan icara iberikut i: i

Harga iRf imerupakan iparameter ikarakteristik ikromatografi ikertas

idan ikromatografi ilapis itipis. iHarga iini imerupakan iukuran ikecepatan
imigrasi isuatu isenyawa ipada ikromatogram idan ipada ikondisi ikonstan
imerupakan ibesaran ikarakteristik idan ireprodusibel. iHarga iRf ididefinisikan
isebagai iperbandingan iantara ijarak isenyawa idari ititik iawal idan ijarak itepi
imuka ipelarut idari ititik iawal. iRf i= iJarak ititk itengah inoda idari ititik
iawal, iJarak itepi imuka ipelarut idari ititik iawal i(Adam, i2008). i
III. METODOLOGI iiPERCOBAAN ii

3.1 Alat ii

Alat iiyang iidibutuhkan iiuntuk iipratikum iikimia iiKromatografi iisebagai

iiberikut:
 Ruang iipemisah
 pipet iikapiler
 pengering iirambut
 labu iisemprot
 klip

3.2 Bahan ii

Bahan-bahan iiyang iidigunakan iiuntuk iipraktikum iikimia iiKromatografi

iiialah: ii
 Eluen iicampuran iidari iiHNO3 iidan iiMetanol ii24:76 ii
 Larutan iisampel iidari iisistein ii
 Larutan iistandar iiPb(NO3 ii)2 ii
 Larutan iistandar iiHg(NO3)2 ii
 Larutan iistandar iiBi(NO3)2 ii
 Larutan iipewarna ii0,5% iiKI ii

3.3 Cara iiKerja

o Pada iikertas iikromatografi iiWhatman iino. ii1 iidengan iiukuran ii15

iix ii15 iicm, iibuatlah iigaris iistart iisetinggi ii2,5 iicm iidari iitepi
iibawah iidengan iipensil. iiDi iiatas iigaris iistart iisetinggi ii10 iicm
iibuatlah iigaris iifront. Ii

4
 5
o Pada iigaris iistart iibuatlah iiempat iibuah iititik iidengan iipensil iipada
iijarak ii3 iicm iidari iitepi iikiri iikertas iidengan iiinterval ii3 iicm. Ii
o Pada iikeempat iititik iiyang iiada iidi iitengah iigaris iibuatlah iibercak
iiberturut-turut iidari iilarutan iistandar iiPb, iiHg, iiBi iidan iilarutan
iisampel iidengan iidiameter iibercak iimaksimal ii4 iimm. iiCara
iimembuat iibercak iisatu iiper iisatu iidengan iipipet iikapiler iiyang
iiberbeda. iiSetiap iibercak iiditetesi ii3 iikali iikemudian iidikeringkan
iidengan iipengering iirambut. ii
o Masukkan iikertas iikromatografi iike iidalam iiruang iipemisah iiyang
iisudah iiberisi iieluen iidan iidijenuhi iidengan iiuap iieluen iidengan
iiarah iielusi iinaik. iiTinggi iipermukaan iieluen iitidak iiboleh
iimelebihi iitinggi iigaris iistart. ii
o Tutuplah iiruang iipemisah iidengan iirapat iidan iibiarkan iieluen iinaik
iisampai iigaris iifront. ii
o Setelah iieluen iisampai iipada iigaris iifront iiangkatlah iikertas
iikromatogrsi iidan iikeringkan iidengan iipengering iirambut. iI
o Semprotlah iikertas iikromatografi iiyang iisudah iikering iidengan
iilarutan iipewarna ii0,5% iiKI iidengan iikabut iiyang iihalus iisampai
iitimbul iiwarna iikuning, iikemudian iipenyemprotan iisegera
iidihentikan iisupaya iiwarna iiyang iitimbul iitidak iihilang iiatau
iiluntur. ii
o Kertas iikromatografi iidikeringkan iilagi iidengan iipengering
iirambut. ii
o Ukurlah iijarak iimasing-masing iibercak iikomponen iisampel iidan
iibercak iistandard. ii
o Hitunglah iiRf iimasing-masing iibercak. ii
o Atas iidasar iiRf iistandard iidan iiwarna iibercak iitetapkan iimacam
iilogam iidan iimasingmasing iibercak iikomponen iidari iisampel.
iiKesimpulan iiapakah iiyang iidapat iianda iitarik. ii
 6

3.4 Skema iiKerja

Kertas kromatografi Whatman no. 1 dengan

ukuran 15 x 15 cm, buatlah garis start setinggi 2,5
cm dari tepi bawah dengan pensil.

buatlah empat buah titik dengan pensil pada jarak

3 cm dari tepi kiri kertas dengan interval 3 cm.

Buatlah bercak berturut-turut dari larutan standar

Pb, Hg, Bi dan larutan sampel dengan diameter
bercak maksimal 4 mm.

Masukkan kertas kromatografi ke dalam ruang

pemisah yang sudah berisi eluen. Lalu, tutup.

Semprotlah kertas kromatografi yang sudah kering

dengan larutan pewarna 0,5% KI

Kertas kromatografi dikeringkan dan ukurlah jarak

masing-masing bercak komponen sampel dan
bercak standard.

Hitunglah Rf masing-masing bercak.

IV. HASIL iDAN IPEMBAHASAN

4.1 Data iPengamatan

No. Perlakuan i Hasil iPengamatan i

1. i Membuat igaris istart idan Kertas iWhatman idengan
igaris ifront ipada ikertas igaris istart isetinggai i2,5 icm
ikromatografi iWhatman idan igaris ifront isetinggi i10
iberukuran i15×15 icm i icm i
2. i Membuat iempat ibuah ititik Kertas iWhatman idengan
imenggunakan ipensil i iempat ibuah ititik iberjarak i3
icm idari itepi ikiri ikertas
idengan iinterval i3 icm i
3. i Membuat ibercak idari ilarutan Kertas iWhatman idengan i4
istandard iPb, iHg, iBi, idan ibercak iyang iterdiri idari
ilarutan isampel iberdiameter ilarutan istandard iPb, iHg,
imaksimal i4 imm isebanyak iBi, idan ilarutan isampel
i3 itetes ikemudian iyang itelah ikering i
idikeringkan idengan
ipengering irambut i
4. i Memasukkan ikertas Eluen inaik isampai igaris
iWhatman ike idalam iruang ifront ipada ikertas iWhatman i
ipemisah iyang isudah iberisi
ieluen idan iuap ieluen, ilalu
itutup idengan irapat i
5. i Angkat ikertas iWhatman idan Kertas iWhatman iyang
imengeringkannya idengan i iterkena iuap ieluen
pengering irambut i imengering itanpa iadanya
iwarna ibercak i(warna imasih
ibelum inampak) i
6. i Menyemprot ilarutan ipewarna Timbul iwarna ikuning ipada
i0,5 i% iKI ipada ikertas i ibercak ilarutan istandard idan
Whatman i isampel ipada ikertas
iWhatman i
7

7. i Mengeringkan ilagi ikertas
ikromatografi imenggunakan i
pengering irambut i
8. i Mengukur ijarak
imasingmasing ibercak
ikomponen isampel idan
ibercak istandard, ilalu
imenghitung iRf
imasingmasing ibercak i
9. i Menentukan ilogam idan
imasing-masing ibercak i
komponen idari isampel i
8
Kertas ikromatografi ikering
idengan ibekas ibercak i
berwarna ikuning i
Jarak ibercak ikomponen
istandard idengan ikomponen
isampel itelah iterukur i
Logam i dan i komponen i
standard iterdeteksi i

DATA iPERHITUNGAN i i

Menggunakan iRumus:

NO Komponen Jarak iNoda Jarak ieluen Nilai

i(cm) i(cm) iRf

1. i Sistein 4,0 icm 10 icm 0,4

2. Pb(NO3)2 O,8 icm 10 icm 0,08

3. Hg(NO3)2 5,5 icm 10 icm 0,55

4. Bi(NO3)2 3,9 icm 10 icm 0,39

Dapat idisimpulkan ibahwa iPb idan iBi iyang imendekati inilai iSustain
 9

4.2 Pembahasan

Kromatografi imerupakan iteknik icampuran izat iyang iberdasarkan

iatas iperbedaan ikecepatan imigrasi idari imasing-masing ikomponennya ipada
ifasa idiam idibawah ipengaruh isuatu ipelarut i(eluen) iyang ibergerak iatau
idisebut ifasa igerak.. iPrinsip idari ikromatografi iadalah iprinsip imetode
ipemisahan ikromatografi iyaitu iadanya iperbedaan idistribusi ikomponen-
komponen ifasa idiam idan ifasa igerak iberdasarkan isifat ifisik ikomponen
iyang iakan idipisahkan. Kromatografi imemiliki ibeberapa icara iyang
ibermacam-macam. iMacam-macam idari ikromatografi iantara ilain,
iKromatografi ikertas imerupakan ijenis ikromatografi iyang imenggunakan
ifase ikertas istasioner. iKertas iini imerupakan ikertas idengan ikandungan
iselulosa, isementara ifase igeraknya imenggunakan ipelarut iatau icampuran
ipelarut iyang icocok. iKertas idi isini iakan ibertindak isebagai ifase idiam
iyang inantinya iakan idicelupkan ike idalam ipelarut iatau isampel.
iKromatografi icair, iJenis ikromatografi iberikutnya iini iadalah
ikromatografi icair iyang ijadi isalah isatu iteknik iyang ipaling icocok isaat
iakan imemisahkan imolekul iatau iion iyang iterkandung iatau iterlarut idalam
isuatu ilarutan. iSaat ilarutan isampel iakhirnya iberinteraksi idengan ifase
idiam, imaka imolekul-molekul idi idalam ilarutan iakan iberinteraksi iterhadap
ifase idiam. Selanjutnya, ikromatografi ilapis itipis idapat idisebut isebagai
iteknik iyang imemungkinkan iuntuk imelakukan ianalisa idalam iproses
ikualitatif. iProses iini iberasal idari isampel idan iakan idiuji idengan icara
imemisahkan ikomponen isampel idengan iberdasarkan ipada iperbedaan
ipolaritasnya. iUntuk ikromatografi ilapis itipis iini iprinsip ikerjanya iadalah
imemisahkan isampel iberdasarkan ipolaritas idari ipelarut idan isampel iyang
inantinya idigunakan. iKromatografi ikolom iadalah ijenis ikromatografi
iyang idapat idilakukan idengan ikolom igelas. iPada iumumnya, ijenis
ikromatografi ikolom iini idigunakan iuntuk imelakukan ipemisahan ipigmen
ipada itanaman. isebuah icampuran idalam ipigmen itersebut ikemudian
iditempatkan idalam ikolom igelas idengan ikandungan ikonten ialumina.
iPelarut ilalu iakan idikeringkan iuntuk imembawa icampuran iyang iakan
imelewati ikolom. iPigmen iakan ibergerak iturun imelalui ikolom idi itingkat
itertentu, ibergantung ipada idaya iserap ipigmen iterhadap ialumina. iPigmen
iyang idiserap isedikit ipada ialumina iakan imelewati ikolom ilebih icepat.
iPigmen iyang idiserap ikuat ioleh ialumina iakan imelewati ikolom ilebih
ilambat. iSelanjutnya, ipigmen iakan idisimpan idan imenyatu ipada ititik ilain
ibegitu ikeluar idari ikolom.
 10
Sistein imerupakan iasam iamino ibagi imanusia iyang imemiliki
iatom iS ikarena imengandung iatom iS, isistein imenjadi isumber iutama
idalam isintesis isenyawa-senyawa ibiologis ilain iyang imengandung
ibelerang. i
Rf idan iFaktor iyang imempengaruhi inilai iRf ihasil ipemisahan
idianalisis iberdasarkan iharga iatau inilai ifaktor iretardasi i(Rf) ipada imasing-
masing inoda, ibercak iatau ispot iyang idihasilkan ipada ipelarut iyang isama.
iMengidentifikasi inoda-noda idalam ikertas imenggunakan iharga iRf
i(Retordation ifactor) iyang ididefinisikan isebagai: i i

iiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii

Ada ibeberapa ifaktor iyang imenentukan iharga iRf iyaitu i: i i

1) Pelarut i i

Pelarut idisebabkan ipentingnya ikoefisien ipartisi, imaka

iperubahan-perubahan iyang isangat ikecil idalam ikomposisi ipelarut
idapat imenyebabkan iperubahan-perubahan iharga iRf. i i i i
2) Suhu. i i

Perubahan idalam isuhu imerubah ikoefisien ipartisi idan ijuga

ikecepatan ialiran. i i
3) Ukuran idari ibejana i

Volume idari ibejana imempengaruh ihomogenitas idari

iatmosfer, ijadi imempengaruhi ikecepatan ipenguapan idari
ikomponen-komponen ipelarut idari ikertas. iJika ibejana ibesar iyang
idigunakan, iada ikecenderungan iperambatan ilebih ilama, iseperti
iperubahan-perubahan ikomposisi ipelarut isepanjang ikertas, imaka
ikoefisien ipartisi iakan iberubah ijuga. iDua ifaktor iyaitu ipenguapan
idan ikomposisi imempengaruhi iharga iRf. i i
 11
4) Kertas i i

Pengaruh iutama iyaitu ikertas ipada iharga-harga iRf iyang

iterjadi idari iperubahan iion idan iserapan iyang iberbeda iuntuk
imacam-macam ikertas. i. i i
5) Sifat idari icampuran. i i

Berbagai isenyawa imengalami ipartisi idi iantara ivolume iyang

isama idari ifasa itetap idan ibergerak, isehingga iakan
imempengaruhi ikarakteristik idari ikelarutan iyang isatu iterhadap
ilainnya ihingga iterhadap iharga iRf. i

Untuk imengukur iRf iperlu imelokalisir ipermukaan ipelarut.

iHarga iRf ibiasanya idinyatakan isebagai ifraksi/bagian. iCara iyang
ipaling imudah idalam ipengukuran iRf iadalah idengan imenggunakan
ipenggaris. iUjung inol iditempatkan ipada ititik imulamula idan iujung
iyang ilain idirentangkan ike iarah ipermukaan ipelarut idan iharga iRf
ilangsung idapat idibaca ipada ititik idi imana iangka ipenggaris itepat
ipada inoda. iDalam ipenentuan iRf iperlu imengukur idari ipusat ipita
iatau inoda. i

Karakteristik ibahan iyang idipakai i

Alat-alat i yang i digunakan i untuk i percobaan
ipraktikum ikromtografi iadalah, iRuang ipemisah, ipipet ikapiler,
ipengering irambut, ilabu isemprot, iklip, ikertas ikromatografi, ipensil,
idan ipenggaris. i
Bahan-bahan iyang idigunakan idalam ipraktikum ikromatografi
idiantaranya iadalah, ieluen icampuran idari iHNO3 idan iMentol i24:76,
ilarutan isampel idari isistein, iPb(NO3)2, iHg(NO3)2, iBi(NO3)2, idan
ilarutan ipewarna i0,5% iKI. i
Dalam iPraktikum ikromatografi iini iperlu idi iperhatikan
ibahanbahan inya, ibaik ibahan istandar, ibahan ikimia idan ibahan
isampelnya. iPraktikum idengan ihasil iyang ibaik iharus ididasari ioleh
ialat idan ibahan iyang ibaik ipula. iBerikut ikarakteristik ibahan ibahan
iyang idipakai idalam ipraktikum ikromatografi. I
 12
a. Bahan istandar i i

Bahan i standar i iuntuk i analisis ikromatografi i kertas

idisiapkan iberupa ikertas isaring isebagai ifasa idiam idan ipembuatan
ilapis itipis iuntuk ipengujian ikromatografi ilapis itipis iyaitu ibahan
istandar iyang idigunakan isebagai ifasa idiam idan ifasa igerak, iserta
ibahan istandar iuntuk ikromatografi ikolom iyang iberupa ibubur
i(slury) idari ibubuk ialumina iyang idigunakan isebagai ifasa idiam
idan ifasa igeraknya iadalah iberupa ilarutan iatau iair. i i

b. Bahan ikimia i i

Jenis ibahan ikimia iyang iharus idisiapkan iuntuk ianalisis

ikromatografi isecara iumum iadalah ibahan ikimia iberupa ipelarut
iorganik iyang imemilki itingkat ikepolaran itinggi, imisal
ikhloroform, ibenzen, iaseton, in-heksan idan iair. i i
i

c. Sampel i i

Sampel idari isampel iorganik iatau ianorganik idapat

idiketahui ijenis idan iatau ijumlah ikomponen iyang imenyusunnya
imelalui iprosedur ianalisis ikromatografi itertentu, ibaik ikualitatif
imaupun ikuantitatif. iSampel iorganik iatau ianorganik ibiasanya
iberbentuk icampuran iheterogen iatau icampuran ihomogen idalam
ifasa ipadat, icair, imaupun igas. i i
Beberapa isyarat iyang iharus idipenuhi isebelum isampel
itersebut idianalisis isecara ikromatografi, iantara ilain iukuran
isampel iharus idiketahui isekian imesh/mikrometer iatau iberapa
ikonsentrasinya. iJadi, isampel iyang iakan idi ianalisis iharus
imemiliki iukuran iyang isesuai idengan istandar iyang imenjadi
imetode idalam ianalisis itersebut, isehingga ihasil ianalisis imenjadi
iakurat idan ipresisi. i
i
 13

Kertas iserap isebagai ifase idiam i i

Kromatografi ikertas iadalah iteknik imetode ianalisis iuntuk

imemisahkan idan imengidentifikasi icampuran iyang ibisa iberwarna
i(terutama ipigmen) iyang iterdiri idari idua ifasa iyaitu ifasa idiam idan
ifasa igerak. iFase idiam ipada ikromatografi ikertas iadalah ikertas iserap
iyang isangat iseragam idan ifase igeraknya iadalah ipelarut iatau
icampuran ipelarut iyang isesuai. i i
Kertas iterdiri idari iserat-serat iselulosa iyang imengandung
i“kotoran” itergantung idari ijenis ikertasnya. iMisalnya ikotoran iyang
iberupa iion ilogam i( iCa2+, iMg2+, iFe3+, iCu2+, idll i) idapat
imengganggu ikarena iterjadi ipertukaran iion. iKertas iyang ikhusus
idibuat iuntuk ikromatografi itelah imengalami iproses-proses
ipemurnian, imisalnya ipencucian idengan iHCl idan ilain-lain iuntuk
imenghilangkan iion-ion ilogam. iAdapula ipada ipembuatannya, ikertas
iitu iserat-serat iselulosanya itersusun imenurut iarah itertentu. iPada
ikartas ikromatografi isering itanda i( i→ i) iuntuk imenunjukkan iarah
ielusi. iElusi isebaiknya idilakukan imenurut iarah ipanah iitu i(arah
iserat) isupaya idiperoleh inoda-noda iyang ilebih inyata. i i
Kertas ikromatografi ibanyak ijenisnya. iAliran ipelarut i(eluen)
ipada ikertas ipada isuhu itertentu idipengaruhi ioleh ikerapatan iatau
iketebalan ikertas. iKertas iantara ilain imempengaruhi i: i i
a) baik itidaknya ipemisahan i i

b) jelas iatau itidaknya inoda i i

c) pembentukan i“ekor” inoda i i

d) kecepatan imengalir ipelarutnya i i

e) harga iRf i i

Kertas iyang ibanyak idipakai iadalah ikertas iWhatman. iKertas

iWhatman iNo. i4 imempunyai ikarakteristik imirip iseperti ino.1, itetapi
imemberikan iefek idua ikali ilebih icepat. iKertas-kertas iyang ilebih
itebal i( iWhatman ino.3 i) ibiasanya idigunakan iuntuk ipemisahan
jumlah iyang ilebih ibesar, ikarena idapat imenempuh ilebih ibanyak
i“cuplikan” itanpa imenaikkan iarea idari inoda imula-mula. i
I
 14

Perbedaan iantara ijenis-jenis ikertas iterletak ipada i: i i

a) kerapatan iserat-serat i i

b) kecepatan imengalir i(flow irate) ilarutan ielusi i i

c) tebal ikertas i i

d) kehalusan ipermukaan i i

e) cara ipembuatan idan ipemurnian i i

i
Adanya ikertas iyang idipakai iharus ididapar i(buffer) idulu
iuntuk imendapatkan ihasil iyang ilebih ibaik. iDapar i/ ibuffer iyang
ibiasa idipakai iadalah i: i i
a) sitrat-fosfat ipH i8 i- i9 iuntuk ibarbital i i

b) fosfat ipH i8 idan iborat ipH i8 i i

Pelarut isebagai ifasa igerak i i

Larutan ielusi ipada ikromatografi ipembagian iumumnya iterdiri

idari i2 ifase, iyaitu ifasa iair i(stasioner) idan ifasa imobil i(pelarut
iorganik). iPemilihan ilarutan ielusi iditentukan ioleh ibanyak ifaktor,
iterutama ioleh ikelarutan izat iyang idiperiksa idalam ipelarut.
iPerbandingan idi iatas imenentukan iharga iRf, imakin ibesar iperbedaan
inilai itersebut imakin ibaik ipemisahan. iKecepatan imengalir ilarutan
ielusi ijuga iberpengaruh. iUmumnya ilarutan ielusi iyang ilambat
ibergeraknya imemberi inodanoda iyang ijelas. iRf iterutama isekali
idipengaruhi ioleh ikoefisien ipembagian iitu, iselain iitu idipengaruhi
ioleh itemperatur i/ isuhu, itekanan iuap i/ ikelembaban iudara. i
Selama ielusi iruang ikromatografi iharus ijenuh iuap ilarutan iitu,
imaka isebelum ielusi idimulai iharus idisediakan iwaktu iuntuk
imenjenuhkan iruangan iitu idengan iuap ilarutan ielusi. iTemperatur
iselama ielusi iharus ikonstan. iKarena idalam ipraktek itidak iselalu
idapat idiadakan ipada ikeadaan-keadaan iyang isudah iditentukan,
iseringkali idigunakan izat ipembanding iuntuk imembantu iidentifikasi.
ii
 15

Syarat ilarutan ielusi i: i i

a) tidak iboleh ibereaksi idengan izat. i i

b) harus icukup istabil, isehingga iwaktu ipenguraian itidak imengalami

iperubahan. i i

c) mudah imenguap isehingga ikertas imudah idikeringkan. i i

d) viskositas itidak iterlalu ibesar isehingga ipengaliran itidak
iterlalu ilama. i i

Sedangkan ikecepatan imerambat ielusi iselain itergantung ipada

iviskositas ijuga itergantung idari imutu ikertas, iberat ijenis idan
itegangan ipermukaan. i
Larutan isampel iyang idigunakan i

a. iLarutan isistein i

Sistein imerupakan isalah isatu idari i20 imacam iasam

iamino inon iesensial iyang imerupakan isumber isulfur iyang
ipenting ipada iproses imetabolisme. iSementara iitu, idefisiensi iatau
ikekurangan isistein iberhubungan idengan ipertumbuhan iyang
ilambat, ihair iepigmentation, iedema, ilesu, ikerusakan ihati,
imuscle iand ifat iloss, iluka ipada ikulit idan itubuh ilemah i(Xiao,
iet ial., i2011). i
Sistein imerupakan iasam iamino ibukan iesensial ibagi
imanusia iyang imemiliki iatom iS, ibersama-sama idengan
imetionina. iAtom iS iini iterdapat ipada igugus itiol i(dikenal ijuga
isebagai isulfhidril iatau imerkaptan). iKarena imemiliki iatom iS,
isisteina imenjadi isumber iutama idalam isintesis isenyawasenyawa
ibiologis ilain iyang imengandung ibelerang. iSisteina idan
imetionina ipada iprotein ijuga iberperan idalam imenentukan
ikonformasi iprotein ikarena iadanya iikatan ihidrogen ipada igugus
itiol. i
Sisteina imudah iteroksidasi ioleh ioksigen idan imembentuk
isistina, isenyawa iyang iterbentuk idari idua imolekul isisteina iyang
iberikatan ipada iatom iS imasing-masing. iReaksi iini imelepas isatu
imolekul iair i(reaksi idehidrasi).
 16
b. Pb(NO3)2
Timbal(II) iNitrat iMemiliki irumus ikimia iPb(NO3)2.
iTimbal(II) initrat iumumnya imerupakan ikristal iyang itidak
iberwarna iatau iberbentuk ibubuk iputih, idibandingkan idengan
igaram itimbal iyang ilain imaka igram itimbal iini isangat imudah
ilarut idalam iair. iTimbal(II) initrat isangat ibersifat iracun iterhadap
imanusia idan imerupakan ioksidator. i
Cara imembuat itimbal initrat iadalah idengan imelarutkan
ilogam iPb ipada ilarutan iasam initrat iatau idengan imelarutkan
iPbO idalam iasam initrat. i
3 iPb(s) i+ i8 iH+(aq) i+ i2 iNO3 i(aq) i i i i i i i i i i i i3 iPb2+(aq) i+
i2 iNO(g) i+ i4 iH2O(l) i
PbO(s) i+ i2 iH+(aq) i i i i i i i i i i i i i iPb2+(aq) i+
iH2O(l) i
Larutan i Pb(NO3)2 ibereaksi i dengan i KI i
mebentuk iPbI2 iyang iberwarna ikuning. iIntensitas iwarna
ikuning iini itergantung idari ibanyaknya ijumlah ireaktan iyang
idigunakan. i
Pb(NO3)2 i(s) i+ i2 iKI i(s) i i i iPbI2 i(s) i+ i2 iKNO3
i(s) i
i
c. iHg(NO3)2 i
Mercury i(II) initrate; iMercury ipernitrate; iNitric iacid,
iMercury(2+) isalt; iMercury idinitrate; iMercury i(2+) initrate.
iKeadaan ifisiknya iberupa ipadatan, ibentuk iserbuk ikristal,
ihigroskopis, iputih ihingga ikuning, ibau iseperti iasam initrat. iTitik
ileburnya ipada isuhu i79oC i(air i= i1). iBerat ijenis i4,39 ipada
i20oC i(air i= i1). iLarut idalam iair, iaseton, iamonia, iasam initrat,
iasam iencer idan itidak ilarut idalam ialkohol. iHg(NO3)2 istabil
ipada isuhu idan itekanan inormal, itidak iterjadi ipolimarisasi.
iHg(NO3)2 imerupakan ihasil iurai ipada ipemanasan imenghasilkan
iuap iHg iyang isangat iberacun idan ioksida initrogen. iTidak iboleh
idicampurkan i(incompatible) idengan ibahan imudah iterbakar,
isianida, iasam, igaram-garam ilogam idan ibahan ipereduksi. i
 I17
d. Bi(NO3)2 i
Bismut i(III) initrat imerupakan isuatu isebagian ibismut
iyang iterdiri idaripada iion ibismut i(III) idan iion initrat idengan
iformula ikimia iBi(NO3)2.. iGaram ibismut i(III) initrat imemiliki
idua ijenis ikeadaan, iyaitu ikontang idan ipentahidrat,
iBi(NO3)3·5H2O iyang ilebih ibiasa idigunakan. iGaram iini isering
idigunakan idalam ipenghasilan isebagian-sebagian ibismut iyang
ilain. iSenyawa iini iumumnya idijumpai isebagai ikristal itak
iberwarna iatau iserbuk iputih idan, itidak iseperti ikebanyakan
igaram itimbal(II) ilainnya, ilarut idalam iair. i
i
e. iKI i
Kalium iiodida ibersifat iionik, iK+I−. iSenyawa iini
imengkristal idalam istruktur inatrium iklorida. iIa idiproduksi
isecara iindustri idengan imereaksikan iKOH idengan iiodin.
iSenyawa iini imerupakan isuatu igaram iputih, iyang imerupakan
isenyawa iiodida iyang ipaling isignifikan isecara ikomersial,
idengan isekitar i37,000 iton iyang idiproduksi ipada itahun i1985.
iSenyawa iini ikurang imudah iuntuk imenyerap iair idaripada
inatrium iiodida, isehingga ilebih imudah iuntuk ibekerja
idengannya. iSampel iyang ilanjut iusia idan itidak imurni iberwarna
ikuning ikarena ioksidasi ilambat igaram imembentuk ikalium
ikarbonat idan iiodin ielemental. i i
4 iKI i+ i2 iCO2 i+ iO2 i→ i2 iK2CO3 i+ i2 iI2 i
i
Penjelasan iprosedur idan ifungsi iperlakuan iGambar ipraktikum i
Prosedur ipercobaan ikromatografi iyang itelah idilaksanakan
iadalah isebagai iberikut. i
1. Kertas ikromaografi iWhatman iNo.1 idipotong idengan iukuran
i15x15cm, ikemudian idibuat igaris istart isetinggi i2,5 icm idari itepi
ibawah idan igaris ifront i10 icm idiatasnya idengan imenggunakan
ipensil. iKita iharus imenggunakan ipensil isaat imenggambar igaris
ikarena ipensil iterbuat idari igravit iyang itidak iakan ibereaksi, i
 18
sedangkan ijika ikita imenggunakan ipulpen itintanya iakan iluntur
idan ibereaksi. i
iiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii

i
i
2. Pada igaris istart idibuat i4 ibuah ititik idengan ijarak imasing-masing
i3cm. i
iiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii

i
i
3. Pada ikeempat ititik itersebut idibuat ibercak iberturut-turut idari
ilarutan istandar iPb, iHg, iBi idan ilarutan isampel idengan idiameter
ibercak imaksimal i4mm idengan imenggunakan ipipet ikapiler iyang
iberbeda itiap ibercak idan idiulangi itetesannya isebanyak i3 ikali
ilalu idikeringkan. iKedua ijarak iyang idiatur imaksimal i4 imm
iagar itidak iterlalu ilebar iantara isatu ilarutan istandard idengan
ilarutan istandard ilainnya imaupun ilarutan istandard idengan
 19
isampelnya. iKalau iterlalu idekat ijaraknya ijuga iberesiko iuntuk
ikedua ilarutan itercampur. i
iiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiI i

i
4. Masukan ikertas ikromatografi ike idalam iruang ipemisah iyang
isudah iberisi ieluen idan idijenuhi idengan iuap ieluen idengan iarah
ielusi inaik. iTinggi ipermukaan ieluen itidak iboleh imelebihi itinggi
igaris istart. iKetika ikertas idimasukkan ike iruang ipemisah itidak
iboleh ibersandar iagar itidak imerembes. i

iiiiiiiiiiiiiii iiiiii
iiiiiiiii
i
5. Ruang ipemisah iditutup idengan irapat idan ieluen idibiarkan inaik
ihingga igaris ifront. iMenutup iruang ipemisah iharus irapat isupaya
ieluen itidak imenguap. I
 20
6. Setelah imencapai igaris ifront ikertas ikromatografi idiangkat idan
idikeringkan. iHal iini ibertujuan iuntuk imempercepat iproses
ipengeringan iserta ikeringnya imenjadi imerata. i

iiiiiiiiiiiiii iiiiiiiiiiiiiii
i
7. Semprot ikertas ikromatografi iyang isudah idikeringkan idengan
ipewarna iKI i0,5% isampai itimbul iwarna ikuning. iKertas iharus
idisemprot imenggunakan ilarutan i0,5% iKI iagar imemunculkan
inoda. i
Pada iproses iini iterjadi ireaksi iantar ilarutan idengan iKI, iberikut
iReaksi iyang iterjadi: i
i i i i i i i i i i i i i i i i

iiiiiiiiiiiiii iiiiiiiiiiii
iiii
 21
8. Kertas idikeringkan ilagi idengan ipengering irambut. i

iiiiiiiiiiiii iiiiiiiiiii
iiiii
i
9. Jarak imasing-masing ibercak ikomponen isampel idan ibercak
istandar idiukur. i

iiiiiiiiiiiii iiiiiiiiiii
iiiii
i
Hasil idibandingkan idengan ireferensi i
Setelah imembandingkan idengan ireferensi iwarna iyang
iterbentuk idari ihasil ipraktikum isesuai idengan ireferensi iyaitu iPb
iberwarna ikuning. iUntuk iHg, iBi idan isampel itidak ididapatkan ihasil
ibercak ikuning. iHal iini iterjadi idikarenakan ibeberapa ifaktor.
iBerdasarkan ireferensi inilai iRf iuntuk isetiap iion ilogam iberbeda. iHal
itersebut iterjadi ikarena iadanya iperbedaan ikelarutan ikomponen iion
ilogam itersebut idalam ieluen isehingga imenyebabkan ikecepatan
ibergerak ikomponen ijuga iberbeda. iIon ilogam imemiliki inilai iRf
 iyang ipaling ibesar idisebabkan ikarena ilogam itersebut imemiliki
ikelarutan iyang ibesar. iSehingga ikomponen iyang imemiliki isifat
iyang isama idengan ilarutan ipengembang iakan ibergerak ilebih icepat,
isehingga inilai iRf iakan ibesar ipula i(Khopkar, i2008). i
i
Reaksi iyang iterjadi i
Berikut ireaksi iyang iterjadi ipada ipercobaan ikromatografi
ikertas idengan imenggunakan ieluan. i

V. KESIMPULAN iDAN iSARAN i

5.1 Kesimpulan
- Pemilihan ilarutan ielusi iditentukan ioleh ibanyak ifaktor, iterutama
ioleh ikelarutan izat iyang idiperiksa idalam ipelarut. i
- Bercak isampel ipada ikertas ikromatografi idiberi ijarak isupaya itidak
iterjadi ipercampuran iantara isampel isatu idengan iyang ilainnya. i
- Berdasarkan idata iperhitungan, ididalam ilarutan iPb idan iHg
imengandung ilarutan isampel iyang idigunakan, ikarena ihasil iRf-nya
imasih ihanya iberselisih i0,03 idan i0,05. iBerdasarkan idata
ipengamatan, ihanya ilarutan ididalam iPb iyang imengangung ilarutan
isampel ikarena ihanya ilarutan iPb iyang imengeluarkan ibercak
ikuning isetelah idisemprot ilarutan i0,5% iKI. i i
ii

22
 23
5.2 Saran
Sebelum imemulai ipraktikum, ipraktikan iharus isudah
imempersiapkan ialat idan ibahan iyang iakan idigunakan idalam
ipraktikum. iMengecek isemua ibahan idan ialat ipraktikum iyang iakan
idigunakan idalam ikondisi ibaik idan ibersih isupaya ihasilnya isesuai
idengan iketentuan.
 DAFTAR iiPUSTAKA
IBS, i“Pengertian iKromatografi iDan iJenis-Jenisnya i| iIBS i-” i(ibs.co.idMay i7,
i2020) i
<https://ibs.co.id/id/pengertian-kromatografi-dan-jenis-jenisnya/> i

Dewanti, iiE. iiP., iiDwiyani, iiS., ii& iiParwat, iiD. ii(2004). iiFarmasi-effendy2
iiRelated iipapers ii
KROMAT iiOGRAFI iiCAIR iiKINERJA iiT iiINGGI iiDALAM iiBIDANG
iiFARMASI iiEFFENDY iiDE iiLUX iiPUT iiRA iialya iicahyaa16 iiPenent
iiuan iiKadar iiParaset iiamol iidan iiKafein iiDengan iiTeknik iiHPLC.

Iriani, iiR., ii& iiNoor iiElfa, iidan. ii(n.d.). iiPENGGUNAAN iiKITIN iiSEBAGAI ii
ALTERNATIF iiFASE iiDIAM iiKROMATOGRAFI iiLAPIS iiTIPIS iiDALAM
iiPRAKTIKUM iiKIMIA iiORGANIK.

Hardjono iSastrohamidjojo, iDr., i1991, iKromatografi, iPenerbit iLiberty, iUGM,

iYogyakarta. i

Ir. iDian iNurdiani, idkk. i2008, iMelaksanakan iAnalisis iSecara iKromatografi

iKonvensional iMengikiuti iProsedur, iKemendikbud, iJakarta. i i

Khopkar, iS.M. i2008. iKonsep iDasar iKimia iAnalitik iJakarta. iUniversitas

iIndonesia. i

24