BIOSEGURIDAD, MICROSCOPIA Y

OBSERVACION DE HONGOS Y BACTERIAS 12 de marzo de 2011

ASOCIACION PRIVADA UNIVERSIDAD SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE ENFERMERIA

Nombre: Vanessa Otero Yparraguirre

Curso: Microbiología y Parasitología

Tema: Bioseguridad, Microscopia,
observación de hongos y bacterias con
azul de metileno y como hacer un frotis.
Docente: Esther Valencia.
Aula: 29
Año: 2011

Introducción:
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BIOSEGURIDAD:

La bioseguridad es una lista de normas básicas de práctica de seguridad de

laboratorio que deben ser seguidas por todos. Muchas de estas reglas son
simplemente sentido común. Comer, tomar y fumar está prohibido en el
laboratorio. Si se es principiante nunca trabaje en el laboratorio sin supervisión de
un instructor, es recomendable no realizar un experimento no autorizado, cualquier
experimento hágalo en un laboratorio acondicionado. Si no se está seguro de lo
que debe hacer, por favor pregunte a su superior. Nunca succione líquidos con la
boca. Evite inhalar y nunca pruebe el sabor de cualquier químico en el laboratorio.
Nunca fuerce las tuberías de vidrio sobre tapones de goma. Si debe insertar un
tubo en un tapón u otro dispositivo de goma lubricar tanto el tubo como la goma
(glicerol o agua jabonosa). Proteja sus manos envolviendo el tubo en una tela
antes de insertarla.

Siempre tenga en cuenta que el vidrio, el metal o la cerámica CALIENTE tienen el

mismo aspecto FRIO, extreme el cuidado antes de tocarlos.

I. Esterilización:

Todo lo que usamos debe de estar esterilizado antes y después de la

muestra.

LIMPIO ESTERIL

La esterilización en si es la desinfección y destrucción de

microorganismos en objetos inanimados que asegura la eliminación de

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toda forma de vida microbiana y no asegura la eliminación de las

esporas bacterianas.

La esterilización evita consecuencias graves, riesgo para la salud del

personal y del paciente, protección del ambiente
Nuevos equipos / nuevos procesos, elimina patógenos emergentes,
contribuye a la reutilización de artículos de uso único.

PROCEDIMIENTO DE ESTERILIZACION:

LAVADO Y
SECADO
RECEPCION

INSPECCION EMPAQUE

PREPARACIO
NY ESTERILIZA
EMPAQUE CION

ALMACENAMIEN
TO Y
DISTRIBUCION

• En el caso de la Placa Petri, envolverla en papel Craft .

• Utilizar los instrumentos anteriores, no los recientemente esterilizados.

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AUTOCLAVE:

La esterilización, tanto del material y medios contaminados, es un proceso

esencial en todo laboratorio. Esta esterilización suele efectuarse con calor
húmedo en unos aparatos denominados autoclaves.

¿Qué sucede en la AUTOCLAVE?

El manómetro registra la presión

(15 libras), equivalente a 121 C°).
Contamos 15 minutos.
Dejamos enfriar.
No abrir inmediatamente.
Extraer los instrumentos y lavar con
detergente, escobillar, y remojar
en agua destilada.

HORNO DE CALOR SECO:

Se lleva a 180 C° por 60 minutos.

Después retirar el material.

NOTA: Es importante saber que cada fracción

de temperatura daña algo. Si abres las puertas
a medio proceso pues la temperatura bajara
y este no será el ideal.

+ TEMPERATURA - TIEMPO
- TEMPERATURA + TIEMPO

Ejemplo: 180° 60’

160° 90’

Indicador Biológico: Una espora.

Indicador de Calor: Termómetro.

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MICROSCOPIA:

Estamos rodeados por misteriosos y minúsculos seres llenos de formas de vida,

de cuya existencia solo supimos cuando un holandés enfoco con su tosco y
primitivo microscopio una gota de agua recogida de un charco. Este aparato nos
ha permitido acceder a una dimensión increíble e invisible a nuestros ojos y ha
revolucionado muchas disciplinas, especialmente las ciencias de la vida.

Un microscopio compuesto es un aparato óptico hecho para agrandar objetos,

consiste en un número de lentes formando la imagen por lentes o una
combinación de lentes posicionados cerca del objeto, proyectándolo hacia los
lentes oculares u el ocular. El microscopio compuesto es el tipo de microscopio
más utilizado.

Un microscopio óptico, también llamado "microscopio liviano", es un tipo de

microscopio compuesto que utiliza una combinación de lentes agrandando las
imágenes de pequeños objetos. Los microscopios ópticos son antiguos y simples
de utilizar y fabricar.

Un microscopio electrónico es uno de los más avanzados e importantes tipos de

microscopios con la capacidad más alta de magnificación. En los microscopios de
electrones los electrones son utilizados para iluminar las partículas más pequeñas.

Partes del microscopio:

Lentes Oculares
Brazo
Base
Iluminador

Tabla

Torre

Lentes objetivos

Lentes condensadores

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Por examen directo:

Coloración:

Las coloraciones en microbiología se utilizan para observar la morfología

bacteriana.
Los tipos de coloraciones se dividen de acuerdo a la complejidad y a la afinidad
estructural.

Las coloraciones de acuerdo a la complejidad se sub dividen en 2 tipos que son la

TINCION SIMPLE y la TINCION DIFERENCIAL.

TINCION SIMPLE se llama así porque nada mas usan un solo colorante, que
puede ser azul de metileno, cristal violeta o carbol fucsina. Con este tipo de tinción
tu vas a poder crear un contraste con el medio dónde estás haciendo el frotis o
tinción y vas a poder observar la morfología y la disposición bacteriana. La
importancia está en que es muy fácil de aplicar. Un ejemplo de uso de tinción
simple esta cuando se quiere ver levaduras y diferenciar las vivas de las muertas.
Las levaduras muertas se tiñen en su interior y se ven con el mismo color del tinte
que aplicaste. Las levaduras vivas no se tiñen por dentro.

TINCION DIFERENCIAL es aquella donde usas más de un colorante. Así se

podrá observar morfología, tamaño, organización de las bacterias y además
categorizar los microorganismos en varios grupos, según su afinidad con el
colorante que se está utilizando. Hay varios tipos de tinción diferencial pero las
que uno más usa son la TINCION DE GRAM O COLORACION DE GRAM y la
COLORACION DE ZIEHL NEELSEN.

COLORACION SIMPLE: AZUL DE METILENO MORFOLOGIA

AZUL DE LACTOFENOL HONGOS
TINTA CHINA CAPSULA DE HONGO

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AZUL DE METILENO: AZUL DE ACETILENO:

Método liquido Método solido

Suero
fisiológico

Lo fija el calor Azul de acetileno

(exponer de 2 a 5 minutos)

Observamos:

AZUL DE METILENO:

COCOS: ESPUTO:

AZUL DE LACTOFENOL: TINTA CHINA:

HONGOS:

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OBSERVACION:

Gracias al Azul de metileno podemos esclarecer la morfología y darnos cuenta

qué microorganismos aun están vivos o muertos, apreciamos su tamaño, sus
dimensiones, estructura.

Esta misma función cumplen los colorantes como la tinta china y azul de
lactofenol.

En las bacterias apreciamos cocos en cadenas, y en el esputo se pueden ver

células con núcleo.

COMO HACER UN FROTIS:

Frotis es una preparación para el microscopio hecha tomando parte de un tejido,

membrana o líquido que se necesita examinar.

Examen directo en frasco: Se puede apreciar la morfología sin colorear.

PROCEDIMIENTO:

1. Ponemos el mechero junto a la aza de siembra.

2. Colocamos la gota de orina y la llevamos al microscopio.

Coloración Simple:

1. Tomamos una gotita.

2. La extendemos en la lámina.
3. Esterilizamos el aza de siembra.
4. Exponemos al mechero la laminilla.
5. La muestra se fijará.
6. Finalmente la teñimos con azul de metileno y observamos.

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CONCLUSIONES:

La bioseguridad es importante para mantener el cuidado del personal del

laboratorio, ya que si incumplimos alguna de estas normas nuestra integridad
peligra. Podríamos adquirir virus o sufrir laceraciones en la piel y hasta la muerte
si no hay una acción rápida del supervisor o compañeros.

La esterilización es considerada la manera más segura y definitiva de mantener

libre de microorganismos y bacterias los instrumentos ya utilizados en operaciones
e intervenciones quirúrgicas, así como material de laboratorio. Esta puede ser en
autoclave u horno de calor seco a muy altas temperaturas ya que el calor impide
que estos microorganismos sigan habitando en los instrumentos.

El microscopio sin duda alguna es el instrumento que sumado más la curiosidad

del hombre por descubrir cada vez a criaturas más pequeñas logro resolver
muchas dudas y encontrar el origen de muchas enfermedades, virus y hasta de la
vida, el cómo actúan las células, estudiar el comportamiento de estas, y su forma.

Las coloraciones para el estudio de microorganismos son esenciales ya que

gracias a estas nos permite conocer la morfología, si la célula o microorganismo
está vivo o muerto, si posee núcleo o no, tamaño y disposición bacteriana.

El frotis es un tipo de examen de laboratorio que nos permite determinar si hay o

no bacterias, si se forma o no una colonia, aparte se considera que es una
preparación para el microscopio hecha tomando parte de un tejido, membrana o
líquido que se necesita examinar.

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