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Introducción

La esclerosis lateral amiotrófica (ALS) es caracterizada por una degeneración progresiva de los
motoneuronas
La excitotoxicidad es uno de los diversos mecanismos estudiados en la degeneración de las
motoneuronas en la (ALS)
Se piensa que la excitotoxicidad es debida a una excesiva entrada de Ca2+ a las motoneuronas.
La entrada de Ca2+ ocurre principalmente por dos mecanismos, la apertura de canales permeables a
Ca2+ y la activación de canales de calcio dependientes de voltaje durante la generación de un potencial
de acción
La activación de los receptores glutamatérgicos NMDAR y AMPAR permiten la entrada de Ca2+

Estudios recientes han mostrado que los mecanismos de entrada de Ca2+ en un modelo de ratón con
ALS están alterados en un etapa temprana.

Hipótesis
Cambios en las sinápsis y excitabilidad intrinseca de las motoneuronas pueden jugar un papel
importante en excitotoxicidad durante ALS
Las aferencias sinápticas, que modulan de la actividad de las motoneuronas, se encuentran alteradas en
el ratpon modelo con ALS

Objetivos
Estudiar la excitabilidad neuronal espinal en ratones con ALS
Estudiar cambios en las aferencias sensoriales de corta latencia y las aferencias interneuronales a las
motoneuronas en el modelo de ratón con ALS
Medir las salidas motrices registrando en las raíces ventrales en repuesta a aferencias monisinápticas en
el modelo de ratón con ALS
Observar las ráfagas sincronizadas generadas por circuitos espinales en el modelo de ratón con ALS

Métodos
Se utilizaron ratones transgénicos que sobreexpresan el gen humano mutado SOD1 y su camada no
transgénica

Se registro la actividad en las raíces ventrales de los segmentos sacros 1-3

Los ratones se dividieron por edades en tres grupos de 50-60, de 90-100 y de 120-130 días de nacidos y
se registraron los reflejos de corta latencia SR provocados por la estimulación de las raíces dorsales

Se realizaron experimentos para medir las ráfagas sincronizadas provocadas por interneuronas
espinales sobre las raíces ventrales

Se seleccionaron motoneuronas en los segmentos S1-S3 ya que no hay presencia de motoneuronas


resistentes a la ALS

Figura 1

OBJETIVO
Evaluar los cambios en las aferencias sensoriales de corta latencia en los ratones mSOD1. Buscar el
tipo de receptor que media los SR
MÉTODO
Estimulación de la raíz dorsal y medición de los SR en las raíces ventrales
RESULTADOS (LO QUE SE VE)
A. SR ante distintas intensidades de estimulación, siendo al máximo a 2xT
B. Inhibición de los reflejos de raíz por acción de un agonista a los AMPAR
C. Relación entre la intensidad de estimulación y la amplitud de los reflejos de raíz para los res grupos
de edades
D. Gráfica de los reflejos de raíz máximos entre ratones NT y mSOD1
CONCLUSIÓN
El SR monosináptico esta mediado por AMPAR
La amplitu de los SR puede deberse a la muerte progresiva de motoneuronas y no por la pérdidad de
sinpasis de corta latencia.

Figura 2

OBJETIVO
La amplitud de los SR se puede reducir debido a la muerte de motoneuronas, Para evaluar esta
posibilidad se probó la TMA
MÉTODO
Se midió la respuesta antidrómica con un electrodo en la raíz ventral proximal ante estimulación
eléctrica de la raíz ventral distal
RESULTADOS (LO QUE SE VE)
A. TMA provocado antidrómicamente a diferentes intensidades de estimulación
B. Gráficas de relación intensidad-amplitud de la TM
CONCLUSIÓN
Se observan resultados similares a los observados en las mediciones de SR, por lo que la disminución
de los SR y la TMA ante una progreso de la enfermedad puede ser debidada a la muerte de
motoneuronas descartando que los SR son responsbles de la excitotoxicidad

Figura 3

OBJETIVO
Estudiar la excitabilidad de los circuitos neuronales
MÉTODO
Análisis de las ráfagas sincronizadas en la raíz ventral bloqueando las sinápsis inhibitorias
RESULTADOS (LO QUE SE VE)
A. Ráfagas producidas por la aplicación de picrotoxina y estricnina, se bloquean en presencia de
DNQX. Las ráfagas son originadas por IN premotoras
B. En este ejemplo no ocurren ráfagas sincronizadas ante picrotoxina y estricnina, aplicación de
NMDA produce disparos espontáneos
C. Ráfagas sincronizadas tras aplicar picrotoxina y estricnina, bloqueados con antagonista a los
NMDAR, posterior aplicación de de AMPA solo produce disparos tónicos, sugiere que la actividad
sincronizada de ráfagas no son originados con los AMPAR

CONCLUSIÓN

Figura 4

OBJETIVO
Estudiar las diferencias en las características de las ráfagas sincronizadas entre los ratones NT y los
mSDO1
MÉTODO
Se induce actividad mediante la aplicación de 100 µ M de picrotoxina y 5 µ M de estricnina
RESULTADOS (LO QUE SE VE)
Estas ráfagas parecen ser simultáneas, por lo que se consideran sincronizadas
A. Diferentes sub ráfagas entre los ratones NT y los mSDO1
B. inicio de las ráfagas en los niveles segmentales a Ráfagas completas y b escala de tiempo expandida
a nivel de milisegundos, se observa el inicio de las ráfagas, y se contó cuantas veces cada segmento era
el primero en iniciar durante la actividad sincronizada
CONCLUSIÓN

Tabla
Los ratones mSOD1 mostraron significativamente mas sub-ráfagas que los ratones NT
En los ratones NT la mayoría de las ráfagas comenzaban en S3 y se propagaban a S2 y S1, mientras
que en los ratones mSOD1 una mayor cantidad de ráfagas sincronizadas iniciaban en S1
Por lo que el orden segmental de excitabilidad en los ratones mSOD1 es alterado

Figura 5

OBJETIVO
MÉTODO
RESULTADOS (LO QUE SE VE)
A. NMDA produce ráfagas sincronizadas en ratones NT y mSOD1.
B. Gráfica del curso temporal de la inducción de ráfagas por NMDA
CONCLUSIÓN
La aplicación de picrotoxina, estrcnina y DNQX demostró que las ráfagas pueden ser generadas y
coordinadas por interneuronas premotoras

Figura 6
OBJETIVO

MÉTODO

RESULTADOS (LO QUE SE VE)


A1 La ocurrencia de ráfagas varía con la concentración de Mg2+
A2 Izq. Registro con 0mM de Mg2+, las rafagas se bloquean con DNQX indicando que las ráfagas se
generan a través de interneuronas, Der. Expansión muestra sincronización entre las raíces S2 y S3
B registro que muestra que las ráfagas espontaneas y sincronizadas bloqueadas de manera dependiente
a la dosis por un antagonista de los NMDAR
CONCLUSIÓN

Conclusión
Un incremento en la actividad de las neuronas que hacen sinapsis en la motoneuronas puede provocar
un aumento en la despolarización y una subsecuente excitotoxicidad

Los estudios en los ratones mSOD1 indican que probablemente las aferencias monosinápticas a las
motoneuronas no son la fuente de un exceso de aferentes excitantes

Cambios en los patrones de ráfagas sincronizadas sugieren que la actividad de las interneuronas
cambien durante el progreso del padecimiento

Las ráfagas sincronizadas provocadas por el bloqueo de los receptores inhibidores fue más común en
los ratones mutados, lo cual sugiere que incremento en la excitabilidad de esas células o un cambio en
su conectividad sináptica.

Se observo un notable incremento en las ráfagas espontáneas en los ratones mSOD1 con temblores aun
sin la administración de bloqueadores de la inhibición

El bloqueo de los receptores AMPA o NMDA elimino las ráfagas, sin embargo unicamente la
administración de NMDA posterior al bloqueo de AMPAR indujo nuevamente las ráfagas.

Las ráfagas que se desarrollan cuando la enfermedad es más severa fueron sensibles a la aplicación de
APV sugiriendo un aumento en la actividad de los circuitos de interneuronas que tienen NMDAR, estos
cambios pueden ser los responsables del temblor que característico de las últimas etapas de la
enfermedad.

Los resultados obtenidos muestran que los reflejos producidos por las aferencias sensoriales fueron
similares en los ratones NT y los mSOD1 hasta que se desarrollaron los síntomas

Los reflejos de corta latencia se disminuyen en relación al progreso de la enfermedad, esto puede ser
debido a la pérdida de varias motoneuronas, por lo que las aferencias sesoriales no son la razón del
incremento de la excitotoxicidad

La excitotoxicidad puede ser un mecanismos importante para la degeneración de las motoneuronas en


la ALS, estos resultados indican que los NMDAR en las interneuronas espinales pueden ser la fuente
potencial de una sobre excitación de las motoneuronas, pudiendo se un objetivo potencial para el
desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas