See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/287632821

Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses

Article · December 2015

CITATIONS READS

0 8,725

1 author:

Brenda Kalista
Bandung Institute of Technology
1 PUBLICATION   0 CITATIONS   

SEE PROFILE

All content following this page was uploaded by Brenda Kalista on 21 December 2015.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

 Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses
Brenda Kalista*

Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknologi Industri, Institut Teknologi Bandung

Jalan Ganesa No. 10, Bandung, Indonesia
*Corresponding Author: brendakalista@students.itb.ac.id

Abstrak
Produk yang dihasilkan pada suatu industri bioproses biasanya berada dalam konsentrasi yang rendah,
sehingga dibutuhkan proses pemisahan dan pemurnian yang lebih kompleks jika dibandingkan dengan industri
kimia biasa. Proses hilir yang dibutuhkan akan semakin menantang apabila produk yang diinginkan merupakan
produk intraseluler. Sebelum dilakukan pemisahan lebih lanjut, diperlukan suatu metode untuk memecahkan
sel, sehingga produk dapat diproses lebih lanjut. Metode untuk melakukan pemecahan sel secara garis besar
dibagi menjadi metode mekanik dan non-mekanik. Metode non-mekanik diklasifikasikan kembali menjadi
metode pemecahan sel secara fisika, kimiawi, dan biologik. Metode mekanik yang umum digunakan adalah
homogenisasi tekanan tinggi (HPH), penggilingan dengan material abrasif, dan ultrasonikasi. Kavitasi, osmotic
shock, pH shock, dekompresi, termolisis, penggunaan agen biologis dan penggunaan zat aditif seperti enzim,
detergen, agen pengkelat, chaotropic agent dan pelarut tertentu akan dijabarkan lebih dalam. Beberapa kasus
pemecahan sel akan dibahas, seperti pemecahan sel mikroalga untuk memperoleh lipid, pemecahan sel Candida
mogii untuk memperoleh enzim xilosa reduktase, dan pemecahan sel E. coli untuk memperoleh HBcAg
(Hepatitis B core Antigen).
Kata kunci: proses hilir, pemecahan sel, metode mekanik, metode non-mekanik, HPH, osmotic shock,
penggilingan, agen biologis

1. Pendahuluan metabolit, dan sebagainya. Pada bakteri Gram-

negatif, membran sel tersusun atas membran
Pada suatu industri bioproses, produk yang
luar, peptidoglikan, ruang periplasmik, dan
dihasilkan biasanya berada dalam konsentrasi
membran plasma (Harrison, 1991). Dinding
yang rendah, sehingga dibutuhkan proses
serta membran sel bakteri Gram-negatif dapat
pemisahan dan pemurnian yang disebut
dilihat pada Gambar 1. Membran luar
sebagai downstream processing guna
memiliki ketebalan sekitar 8 nm, yang
meningkatkan konsentrasi produk yang
tersusun dari protein dan lipopolisakarida
diinginkan. Tahap pertama dari proses hilir
(Belter, 1988). Peptidoglikan merupakan suatu
industri bioproses adalah memisahkan sel dari
struktur lapisan yang bersifat kaku (Harrison,
kaldu fermentasi. Pada beberapa kasus, produk
1991) dan lebih tipis bila dibandingkan dengan
yang diinginkan tidak berada di dalam kaldu
membran luar. Peptidoglikan berperan
fermentasi, tetapi terdapat di dalam sel.
terutama dalam memberikan kekuatan dan
Produk yang berada di dalam suatu biomassa
ketahan mekanik bagi sel. Ruang periplasmik
disebut produk intraselular (Belter, 1988).
terletak di antara peptidoglikan dan membran
Apabila produk yang diinginkan merupakan
plasma, memiliki ketebalan yang hampir sama
produk intraselular, maka sebelum melakukan
dengan membran luar, yaitu sekitar 8 nm. Pada
pemisahan sel dari kaldu fermentasi, perlu
ruang periplasmik biasanya sering ditemukan
dilakukan pemecahan dinding dan membran
berbagai enzim.
sel, sehingga produk terlarut di dalam kaldu
fermentasi (Katoh dan Yoshida, 2009). Membran plasma sebagian besar tersusun atas
fosfolipid dan mengandung beberapa jenis
2. Membran Sel
protein (Harrison, 1991). Pada sel hidup,
Mikroorganisme memiliki membran sel yang membran sel bertugas untuk mengatur gradien
merupakan suatu struktur agak kaku dan konsentrasi zat-zat terlarut di dalam sel dan
berfungsi sebagai pemisah sel dengan mengatur transpor zat-zat keluar masuk sel.
lingkungan dan transpor nutrien, zat-zat
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses,
2015, 1-13
Membran sel tidak berperan dalam kekuatan
struktur sel dan mudah pecah akibat osmotic
shock apabila tidak terdapat lapisan komponen
yang berstruktur lebih kuat pada sel. Pada
bakteri Gram-positif, susunan membran sel
dari luar ke dalam adalah peptidoglikan, ruang
periplasmik, dan membran plasma.
Peptidoglikan pada bakteri Gram-negatif
memiliki ketebalan 1.5 hingga 2.0 nm (10%
hingga 20% berat kering dari keseluruhan
membran sel), sedangkan pada bakteri Gram-
positif, komposisi peptidoglikan adalah 50%
hingga 80% berat kering dari keseluruhan
membran sel (Harrison, 1991).
Membran luar
Peptidoglikan
Ruang periplasmik
Membran sioplasma
Gambar 1. Struktur membran dan dinding sel
bakteri Gram-negatif
(Belter, 1988)
Pengetahuan mengenai dinding sel bakteri
penting dalam upaya pemecahan sel untuk
memperoleh produk intraselular, agar metoda
yang dipilih mampu memberikan hasil yang
maksimal.
Peptidoglikan
Membran sioplasma
Gambar 2. Struktur membran dan dinding sel
bakteri Gram-positif
(Belter, 1988)
Pada beberapa kasus proses hilir industri
bioproses, produk yang diinginkan merupakan
produk intraselular, sehingga diperlukan
pemecahan sel agar produk dapat memasuki
2
tahap pemisahan dan pemurnian lebih lanjut.
Beberapa produk intraselular terlarut di dalam
sitoplasma. Namun, ada pula produk
intraselular yang tidak terlarut dan merupakan
partikel yang terselubungi protein, disebut
sebagai inclusion bodies. Khusus kasus yang
disebutkan terakhir, diperlukan pelarutan
sebelum tahap pemurnian lebih lanjut (Katoh
dan Yoshida, 2009). Secara umum, metode
pemecahan sel dibagi menjadi dua garis besar,
yaitu metode mekanik dan metode non-
mekanik.
Pada proses mekanik dalam pemecahan sel
secara umum adalah dengan menggunakan
tekanan, agitasi mekanik, penggilingan,
gesekan, dan sebagainya. Perlakuan yang
diberikan dengan metode mekanik seperti
homogenisasi tekanan tinggi, dispersi dan
penggilingan koloid, penggilingan kecepatan
tinggi, impingement jets, ultrasonikasi, dan
solid pressure shear. Kerugian utama dari
pemecahan sel dengan metode mekanik adalah
investasi alat yang cukup tinggi dan kebutuhan
energi yang besar. Metode non-mekanik dapat
dibagi menjadi tiga garis besar, yaitu secara
physical, kimiawi, dan biologik. Secara fisika,
metode non-mekanik memanfaatkan
pemanasan, pendinginan (freezing), osmotic
shock, dekompresi gas, kavitasi ultrasonik dan
kavitasi hidrodinamik. Secara kimiawi, dengan
menggunakan asam, basa, detergen, pelarut,
EDTA, antibiotik, dan agen chaotropic.
Metode non-mekanik secara biologik
memanfaatkan enzim dan agen-agen biologis
(Harrison, 1991). Tidak semua metode
pemecahan sel akan dibahas pada kesempatan
ini.
3. Metode Pemecahan Sel Secara Mekanik
3.1 Homogenisasi Tekanan Tinggi
Homogenisasi tekanan tinggi merupakan
metode pemecahan sel yang sering digunakan
pada industri skala menengah dan besar
(Middleberg, 2000 dan Kleinig dan
Middleberg, 1997). Homogenizer tekanan
tinggi secara esensial merupakan pompa
pemindahan positif yang memompakan
suspensi sel melalui sebuah katup dengan
tekanan hingga 1500 bar (Kleinig dan
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses,
2015, 1-13
Middleberg, 1997). Katup yang biasa
digunakan pada proses ini dapat dilihat pada
Gambar 3. Pada prinsipnya, pada metode ini
suspensi sel dilewatkan secara paksa ke suatu
lubang orifice yang sempit dari suatu katup
sebelum dialirkan ke suatu wadah dengan
tekanan yang lebih rendah (Halim, dkk.,
2011).
Valve spring
loaded) Impact
ring
Homogenate
(Tekanan rendah)
Valve
seat
feed
(Tekanan tinggi)
Gambar 3. Penampang melintang dari katup
pada homogenizer tekanan tinggi (Middleberg,
2000)
Efisiensi dari pemecahan sel dengan
homogenisasi tekanan tinggi dapat
ditingkatkan dengan gap katup yang kecil
sehingga aliran suspensi sel memiliki
kecepatan yang tinggi dan diameter impact
ring yang kecil. Selain itu, perlu dirancang
suatu sistem homogenisasi tekanan tinggi
dengan aliran ganda, karena pada aliran
tunggal, pemecahan sel secara menyeluruh
hampir tidak terjadi.
Sebagai contoh, pada Gambar 4, suspensi sel
dimasukkan ke dalam tangki. Tangki yang
digunakan harus tertutup dengan baik agar
tidak terjadi kebocoran aerosol. Suspensi sel
yang dimasukkan ke dalam tangki disesuaikan
dengan substrat dan produk yang dihasilkan.
Suspensi sel dapat berupa kaldu fermentasi
yang sudah melalui pretreatment, pengurangan
volume, dan pemisahan terhadap medium
fermentasi awal. Kaldu fermentasi di dalam
tangki kemudian diatur konsentrasinya dengan
melakukan dilusi dengan buffer yang sesuai.
3
Selanjutnya, dilakukan pengambilan sampel
awal sehingga diketahui konsentrasi awal
protein supernatan. Three-way valve dari
tangki yang mengandung material untuk
dihomogenisasi kemudian dibuka sehingga
terjadi aliran di antara tangki dan
homogenizer, dan aliran keluar dari
homogenizer diarahkan ke tangki yang lain.
Proses ini terus berlangsung hingga tercapai
kriteria yang diinginkan, yaitu pelepasan
produk maksimum dan ukuran hasil
homogenisasi yang sudah sesuai standar yang
diinginkan.
3-way valve
Validated filters
Cooling
Storage Storage
jacket
tank tank
homogenizer
Gambar 4. Contoh sistem homogenisasi
tekanan tinggi (Middleberg, 2000)
Ukuran partikel hasil homogenisasi (debris
size) diamati secara kualitatif dengan
menggunakan mikroskop phase-contrast.
Apabila dibutuhkan kalibrasi, maka ke dalam
sampel ditambahkan standar lateks dengan
ukuran yang sudah ditentukan. Pada upaya
optimasi proses seringkali dibutuhkan
pengukuran partikel hasil homogenisasi yang
kuantitatif. Namun, metode pengukuran secara
kuantitatif memberikan banyak error dan
ketidakakuratan. Salah satu metode yang
dikembangkan adalah CSA, yaitu cumulative
sedimentation analysis, yang diharapkan dapat
mengatasi keterbatasan metode-metode lain
dan dapat digunakan dengan berbagai alat
yang tersedia pada laboratorium standar,
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses,
2015, 1-13
seperti alat sentrifugasi dengan swing-out
motor,elektroforesis dengan gel SDS-
poliakrilamida (Middleberg, 2000).
Homogenisasi tekanan tinggi banyak
diintegrasikan dengan metode-metode seperti
kavitasi, turbulensi, impingement, shear stress,
gradien tekanan, dan extensional shear
(Kleinig dan Middleberg, 1996).
3.2 Penggilingan (Bead Mill)
Penggilingan merupakan salah satu metode
pemecahan sel secara mekanik dengan
menggunakan media penggilingan seperti
manik-manik kaca (Heim, dkk., 2007). Pada
prinsipnya, penggilingan menggunakan suatu
wadah atau ruang penggilingan vertikal atau
horizontal, dengan piringan atau impeler yang
berotasi. Piringan atau impeler digerakkan
oleh shaft yang terhubung dengan motor
listrik. Pergerakkan secara rotasi ini
mengakibatkan manik-manik kaca atau plastik
yang digunakan menggiling suspensi sel
secara merata. Dengan kata lain, penggilingan
merupakan cara pemecahan sel berdasarkan
gaya gesek solid, dengan mengagitasi suspensi
sel dengan material yang bersifat abrasif
(Gaver dan Huyghebaert, 1991).Pada ruang
atau wadah penggilingan (grinding chamber)
terdapat pelat sehingga manik-manik dapat
dipisahkan dan tertahan di dalam grinding
chamber.
coolant
katup
pompa
udara
Chamber
with beads
Broken Cell
Suspensi sel
suspension
Gambar 5. Skema alat penggilingan
sederhana (Ross, 1962)
4
Pada alat penggilingan dipasang sistem
pendingin dalam bentuk cooling jacket atau
cooled impeller shaft untuk mendisipasi panas
yang terbentuk selama proses penggilingan.
Penggilingan secara horizontal lebih sering
digunakan karena mampu mengurangi efek
fluidising dari proses penggilingan yang sering
terjadi pada penggilingan secara vertikal. Pada
umumnya, penggunaan manik-manik yang
berukuran lebih kecil akan lebih efektif. Untuk
rata-rata dari sel ragi, digunakan manik-manik
berukuran 0.2 hingga 2.8 mm (Harrison,
1991). Penggunaan manik-manik yang lebih
besar bertujuan untuk memperoleh enzim yang
terletak pada ruang periplasmik, sedangkan
manik-manik yang lebih kecil penggunaannya
lebih bertujuan untuk memperoleh produk
pada sitoplasma (Schutte, dkk., 1983).
Tabel 1. Waktu tinggal penggilingan
(Ross, 1962)
Waktu
Mikroorganisme Tinggal
[s]
Aerobacter aerogenes 96
Bacterium cyclo-oxidans 35
Eschericia coli 85
Penicillium chrysogenum < 20
Saccharomyces cerevisiae < 17
Streptomyces noosus 85
Dalam penggilingan, parameter yang perlu
mendapat perhatian antara lain ukuran manik-
manik, densitas dan konsentrasi sel pada
umpan, laju alir umpan, kecepatan agitator,
konfigurasi peralatan, bentuk grinding
chamber, temperatur, waktu tinggal (residence
time) dan struktur dinding serta membran sel
(Harrison, 1991). Pemecahan sel dapat
digambarkan melalui persamaan laju
pelepasan protein yang sebanding dengan
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses, 5
2015, 1-13

jumlah protein yang belum dilepaskan atau Pada prinsipnya ultrasonikasi merupakan cara
masih di dalam sel. Persamaan (1) untuk pemecahan sel berbasis liquid shear, dimana
operasi secara batch dan persamaan (2) untuk liquid shear ini berasal dari gelombang
operasi secara kontinu (Gaver dan ultrasonik (gelombang dengan frekuensi
Huyghebaert, 1991). tinggi). Gelombang ultrasonik ditransmisikan
di dalam medium melalui ujung logam (Woi
(1) Ho, dkk., 2005).

(2)
Pada Tabel 1, dapat dilihat beberapa jenis
mikroorganisme dan perkiraan waktu tinggal
yang dibutuhkan untuk mencapai pemecahan
sel yang sempurna untuk kecepatan
penggilingan 6000 putaran/menit. Efisiensi
dari mesin penggilingan diukur berdasarkan
kemampuan untuk memecahkan sel
mikroorganisme yang ditentukan berdasarkan
analisis Kjeldahl (Ross, 1962).
4. Metode Pemecahan Sel Secara Non-
mekanik
4.1 Kavitasi Hidrodinamik
Proses pemecahan dinding sel dengan kavitasi
hidrodinamik dapat dilihat pada Gambar 6.
Saat cairan dialirkan melalui katup, tekanan
statik akan turun hingga lebih rendah dari
tekanan uapnya.
Suspensi sel

cavities
3.3 Ultrasonikasi
Pemecahan ultrasonik merupakan proses
pemecahan sel dimana digunakan sinyal katup
akustik dengan frekuensi yang tinggi agar
terjadi proses kavitasi. Gelombang ultrasonik
menyebabkan gaya kohesi pada molekul
Pressure
larutan kaldu fermentasi, sehingga gauge
menyebabkan terbentuknya gelembung-
gelembung kavitasi. Akibat kolapsnya Cooling
gelembung kavitasi, timbul gelombang kejut jacket
dan merambat ke medium di sekitarnya pompa
membentuk aliran jet. Aliran jet ini kemudian
menyebabkan kehancuran sel pada kaldu
fermentasi (Onyeche, dkk., 2002). Gambar 6. Cavitating valve
(Pandit, dkk., 1994)
kotak kedap Hal ini menyebabkan terbentuknya
suara Booster gelembung-gelembung atau rongga yang
horns sangat kecil. Apabila laju alir cairan dari
tangki ditingkatkan, tekanan yang melalui
Cooling Sonotroda
celah orifice akan meningkat, sehingga terjadi
jacket penurunan tekanan statik yang sangat besar
Sampel
pada celah sempit (vena contracta), yang
mengakibatkan jumlah rongga dan ukuran
rongga atau gelembung yang lebih banyak dan
besar. Rongga uap kemudian terkondensasi
generator dengan keras dan hebat (collapse of the cavity)
sehingga terbentuk impuls tekanan. Apabila
Gambar 6. Ultrasonic cell distrupter
kandungan gas di dalam rongga cukup sedikit,
(Onyeche, dkk., 2002)
maka impuls tekanan dapat mencapai ratusan
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses,
2015, 1-13
bar, menyebabkan kerusakan pada dinding sel
(Pandit, dkk., 1994).
Peluang terjadinya kavitasi pada rejim aliran
diprediksi dengan perhitungan ratio dari gaya
collapsing cavities terhadap gaya
pembentukan rongga awal (Pandit dan Joshi,
1996). Rasio ini disebut juga sebagai angka
kavitasi (cavitation number) dan disimbolkan
sebagai σ.
(3)
Angka kavitasi yang diperoleh dinilai baik
apabila berada dibawah angka awal kavitasi,
yaitu yang spesifik untuk setiap proses.
4.2 Dekompresi
Pada metode dekompresi, ke dalam suspensi
sel ditambahkan gas superkritik atau gas
subkritik bertekanan selama selang waktu
tertentu. Gas kemudian akan masuk ke dalam
sel sehingga sel menjadi pecah (Middleberg,
1995). Kelebihan dari metode ini adalah lunak
(gentle) dan menghasilkan sisa sel yang masih
berukuran cukup besar. Hal yang disebutkan
terakhir merupakan keuntungan apabila
produk yang diinginkan dapat larut pada
cairan, sehingga proses pemisahan produk
menjadi lebih mudah. Kerugian dari
dekompresi adalah nilai efisiensi yang kecil.
Gas CO2 superkritik pada temperatur 31,1oC
dan 7,38 MPa dapat meningkatkan
permeabilitas membran (Lee, dkk.,2012).
Peningkatan permeabilitas diiringi dengan
efek fisio-kimiawi CO2, sehingga
menyebabkan sel kehilangan viabilitas
(Garcia-Gonzalez, dkk., 2007). Pemecahan sel
E. coli dan S. cerevisiae dengan gas CO2
dilakukan pada tekanan 3 MPa hingga 5 MPa
selama selang waktu 1,5 jam hingga 5 jam
(Debs-Louka, 1999).
4.3 Osmotic Shock
Suspensi sel dilarutkan pada suatu medium
yang memiliki tekanan osmotik tinggi secara
tiba-tiba (Middleberg, 1995). Pada literatur
lain, osmotic shock dilakukan dengan
melarutkan suspensi sel ke dalam larutan
6
dengan kandungan garam tinggi (Harrison,
1991). Akibatnya, sel menjadi lisis. Metode ini
yang disebut sebagai osmotic shock. Contoh
medium yang memiliki tekanan osmotik tinggi
adalah sukrosa 1 M. Teknik ini tidak terlalu
efektif untuk sel-sel yang memiliki struktur
penyokong seperti peptidoglikan. Osmotic
shock biasanya digunakan dalam skala kecil,
karena zat aditif yang mahal dan
meningkatkan nilai BOD pada pengolahan
limbah (Middleberg, 1995). Selain itu,
terdapat kemungkinan produk yang diinginkan
menjadi tercemar oleh garam (Harrison, 1991).
Pada bakteri Gram-negatif, dengan
menggunakan metode ini, protein pada ruang
periplasmik dapat diperoleh dengan baik.
Apabila diinginkan komponen pada
sitoplasma, maka dinding sel harus
dilemahkan terlebih dahulu sebelum
menggunakan metode ini (Harrison, 1991).
4.4 Termolisis
Bakteri Gram-negatif apabila dipanaskan
hingga temperatur 50-550C akan merusak
struktur membran luar, sehingga dapat
diperoleh protein pada ruang periplasmik
(Middleberg, 1995). Pada suhu 900C, dapat
diperoleh protein pada sitoplasma, pada E. coli
(Watson dkk., 1987). Pada bakteri Gram-
positif, metode termolisis kurang efektif.
Termolisis memberikan beberapa keuntungan,
yaitu dapat membunuh inang, sehingga
mengeliminasi organisme rekombinan pada
proses hilir, mendeaktivasi enzim protease,
dan memberikan sisa sel dengan ukuran yang
masih relatif besar, sehingga pemisahan
produk dapat dilakukan dengan mudah
(Middleberg, 1995). Namun, apabila produk
yang diinginkan tidak terlarut dalam kaldu
fermentasinya, maka pemisahan produk
dengan sisa sel akan menjadi sulit.
4.5 Liofilisasi
Liofilisasi atau freeze drying menyebabkan
dinding sel rusak akibat pembentukan kristal
es di dalam sel. Pada freeze drying sampel
diatur sedemikian rupa hingga mencapai
tekanan 1 kPa dan temperatur -40oC. Namun,
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses, 7
2015, 1-13

untuk memecah sel, sampel didinginkan antibiotik kelas β-laktam seperti penisilin.
perlahan agar kristal es yang terbentuk di Penggunaan antibiotik kelas ini relatif mahal
dalam sel lebih besar. Proses ini memerlukan dan cenderung bergantung pada jenis suspensi
konsumsi energi yang tinggi, karena tahapan sel (Geciova, dkk., 2002).
dalam proses ini seperti pembekuan sampel,
Selain itu, terdapat kelas antibiotik kationik
sublimasi, desorpsi dan kondensasi air, serta
polipeptida. Antibiotik kelas kationik
penggunaan pompa vakum untuk menurunkan
polipeptida akan berikatan dan mengubah
tekanan membutuhkan suplai energi yang
struktur membran sitoplasma, sehingga
besar. Konsumsi energi yang besar
membran sitoplasma mengalami lisis. Contoh
menyebabkan peningkatan biaya produksi.
antibiotik kelas kationik polipeptida adalah
Keuntungan dari liofilisasi adalah tidak
polimiksin. Penggunaan antibiotik kelas ini
merusak protein dan enzim di dalam sel,
biasa dikombinasikan dengan lysozyme.
sehingga produk yang diperoleh relatif baik.
Seperti kelas antibiotik β-laktam, antibiotik
(Lee, dkk, 2012)
kelas kationik polipeptida mahal dan
keefektifannya bergantung pada tipe suspensi
sel yang hendak diambil produk
4.6 Ekstrem pH
intraselularnya (Geciova, dkk., 2002).
Pada suasana dengan pH 11.5-12.5, akan
menyebabkan sel pecah dalam 20 hingga 30
menit (Stanbury dan Whittaker, 1984). 4.8 Agen Pengkelat (Chelating Agent)
Efisiensi proses diukur berdasarkan
Agen pengkelat yang sering digunakan adalah
kandungan nitrogen yang berhasil diekstrak
EDTA (ethylenediamine tetra-acetic acid).
dari suspensi sel. Kekurangan pada metode ini
EDTA akan mengganggu membran luar dari
adalah kebanyakan protein menjadi
bakteri Gram-negatif dengan mengikat kation
terdenaturasi dalam keadaan sangat basa
Mg2+ atau Ca2+ pada lipopolisakarida,
(Harrison, 1991). Pemecahan sel dengan
sehingga mengganggu struktur membran luar.
metode ini berbasis pada reaksi saponifikasi.
Penggunaan EDTA sangat bergantung pada
Metode ini bersifat sangat keras, namun efektif
pemilihan buffer (Middleberg, 1995). Bakteri
dan murah apabila produk yang diinginkan
koliform dapat kehilangan kandungan
tahan suasana basa (Middleberg, 1995).
lipopolisakarida hingga 33-50% pada metode
Metode ini berjalan cepat, dapat kurang dari
pemecahan sel menggunakan EDTA
30 detik. Metode pemecahan sel dengan pH
(Harrison, 1991). EDTA tidak efektif apabila
shock biasanya diterapkan pada proses
produk terdapat di dalam sitoplasma, karena
pengolahan PHB, suatu material polimer yang
EDTA tidak berpengaruh banyak terhadap
dapat terbiodegradasi.
membran dalam. Selain itu, EDTA juga tidak
berpengaruh terhadap struktur peptidoglikan
(Middleberg, 1995).
4.7 Antibiotik
Antibiotik sangat efektif untuk bakteri Gram-
negatif. Namun, untuk setiap jenis antibiotik, 4.9 Detergen
akan menyebabkan lisis dengan mekanisme
Detergen merupakan molekul yang mepunyai
yang berbeda (Harrison, 1991). Pada antibiotik
ujung hidrofilik dan ujung hidrofobik. Oleh
kelas β-laktam, akan mempengaruhi sintesis
karena itu, detergen mampu berinteraksi
peptidoglikan. Lisis terjadi akibat sel tidak
dengan air dan lemak. Secara garis besar,
mampu menjaga tekanan osmotik, sehingga
detergen yang dapat melarutkan membran sel
protein intraselular dapat diperoleh.
adalah grup anionik, grup kationik, dan grup
Penggunaan antibiotik pada skala besar hingga
non-ionik. Grup anionik seperti SDS dan
saat ini hampir tidak dilakukan, karena harga
garam dari asam lemak, sedangkan garam
antibiotik yang tinggi dan tidak semua bakteri
tetraalkil amonium tergolong ke dalam grup
dapat secara efektif dipecahkan selnya oleh
kationik. Contoh detergen yang tergolong ke
antibiotik, seperti E. coli. Contoh dari
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses,
2015, 1-13
dalam grup non-ionik adalah triton X dan Brij
series. Dalam pemilihan deterjen, perlu dilihat
efeknya terhadap produk terutama protein.
SDS mampu membuat protein terdenaturasi
(Middleberg, 1995). Triton X-100 bekerja
secara spesifik terhadap membran sitoplasma
E. coli, namun membran luarnya sangat
resisten terhadap pelarutan oleh Triton
(Schnaitman, C.A., 1971). Kemampuan
detergen, terutama SDS dan Triton dalam
melarutkan membran luar dan membran dalam
secara sekaligus dapat ditingkatkan dengan
menaikkan temperatur proses, dalam range 4-
370C (Harrison, 1991). N-lauroyl sarcosinate
(sarkosyl) bekerja secara spesifik terhadap
membran dalam. Namun, kerja sarkosyl tidak
dipengaruhi suhu (Middleberg, 1995).
4.10 Solvent
Pelarut yang umum digunakan antara lain
butanol, toluen (Middleberg, 1995), kloroform
dan aseton (Geciova, dkk., 2002). Pelarut
nonpoloar memiliki kemampuan melarutkan
komponen hidrofobik pada membran sel.
Penambahan 10% toluen ke dalam suspensi sel
dapat mengakibatkan lipid dinding sel
mengabsorb toluen, mengakibatkan dinding
sel pecah (Middleberg, 1995). Namun,
terdapat kerugian, yaitu 25% protein
(termasuk protein sitoplasma) yang
terdenaturasi akibat penggunaan toluen tanpa
kehadiran ion Mg2+, pada sel E. coli. Pada
fungi, penggunaan pelarut dapat memecahkan
sel secara sempurna. Pelarut dengan parameter
solubilitas yang mirip, mempunyai mekanisme
pelarutan envelope sel yang mirip pula (Belter,
1988). Penggunaan pelarut sebagai metode
pemecahan sel tidak terlalu sering digunakan,
karena konsentrasi produk yang diperoleh
tidak terlalu tinggi dan beberapa pelarut
bersifat toksik, sehingga tidak cocok
digunakan pada industri pangan dan
pharmaceutical (Middleberg, 1995).
Penggunaan pelarut biasanya dalam
pemecahan sel skala laboratorium.
Pada Haemotococcus pluvialis yang
merupakan sumber natural dari astaxantin
(golongan karotenoid), dinding selnya berupa
sporopollenin yang tebal. Ekstraksi astaxantin
8
menggunakan 2 mL aseton untuk 30 mg sel.
Suspensi kemudian diaduk perlahn dengan
menggunakan magnetic stirrer selama 16 jam
pada temperatur ruang. Dengan menggunakan
metode ini, karotenoid astaxantin tidak
terdegradasi (Morais, R., dkk., 2001).
4.11 Pemecahan Sel secara Enzimatik
Pemecahan sel dengan menggunakan enzim
menguntungkan dari segi kondisi yang lunak,
kebutuhan energi yang rendah, dan spesifik,
sehingga tidak merusak produk. Secara umum,
pemecahan sel secara enzimatik terbagi
menjadi autolisis, phage lisis dan lisis akibat
penambahan enzim litik. Sebagai contoh,
strain mutan Saccharomyces cerevisiae tidak
stabil pada suhu yang dinaikkan secara
mendadak, misalnya dari 240C menjadi 370C.
akibatnya, sel pecah dan produk intraselular
dapat diperoleh. Hal ini yang disebut sebagai
autolisis. Konsep autolisis menjadi agak abu-
abu karena dalam keberjalanannya
membutuhkan sedikit induksi dengan senyawa
kimia yang mild dan perlakuan fisik tertentu
seperti pH shock dan thermal shock
(Middleberg, 1995). Autolisis dikarakterisasi
dengan menilai seberapa banyak peptidoglikan
yang terdegradasi. Bakteri E. coli dapat
mengalami pemecahan sel dengan
bakteriophage T4. Hal ini disebut phage lysis,
karena pecahnya sel diakibatkan oleh phage
(Middleberg, 1995).
Tiga tipe enzim bakteriolitik yang
teridentifikasi adalah glikosidase,
asetilmuramil-L-alanin amidase, dan
endopeptidase (Harrison, 1991). Glikosidase
memecah rantai polisakarida dari struktur
peptidoglikan. Salah satu contoh glukosida
adalah lysozyme, diperoleh dari telur putih
ayam. Lysozyme merupakan enzim yang
mengkatalisis reaksi hidrolisis ikatan β-1,4-
glikosidik, sehingga dapat merusak struktur
peptidoglikan. Lysozyme sangat efektif untuk
bakteri yang memiliki struktur peptidoglikan,
seperti pada bakteri Gram-positif (Geciova,
dkk., 2002). Asetilmuramil-L-alanin amidase
memecah ikatan polisakarida dan polipeptida.
Endopepidase berfungsi untuk memecah
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses, 9
2015, 1-13

ikatan polipeptida pada struktur peptidoglikan sel akhir (C/Co) dengan konsentrasi sel awal
(Andrews dan Asenjo, 1987). dalam jumlah sel per milimeter kubik, untuk
seluruh tekanan dibawah 0.1.
Pemecahan sel Chlorococcum sp. mencapai
4.12 Chaotropic Agent
73,8% dari sel awal. Grimi, dkk., melakukan
Urea dan guanidin hidroklorida merupakan homogenisasi tingkat tinggi untuk
contoh chaotropic agent yang digunakan Chlorococcum sp.dengan menggunakan
dalam pemecahan sel. Membran E. coli dapat homogenizer NS1001L-PANDA 2K dengan
dilarutkan bagian proteinnya oleh guanidin- nilai Np 1 hingga 10, dengan tekanan 150
HCl, sehingga sel mengalami lisis (Harrison, MPa, Q = 2.78 . 10-3 L.s dan m = 250 g. Katup
1991). Chaotropic agents merupakan ion yang yang digunakan berbahan keramik, dan seat
memfasilitasi perpindahan grup nonpolar ke berbahan stainless steel.
larutan polar seperti air (Hatefi dan Hanstein,
1969). Urea, guanidin, KI, NaClO4, dan
NaSCN menginduksi oksidasi lemak yang
sangat cepat pada mitokondria, mikrosom, dan
sistem transpor elektron. Pada penggunaan
chaotropic agent, oksidasi lipid mitokondria
merupakan akibat dari hancurnya struktur
membran. Penggunaan ion chaotropic simpel,
efektif, dan dapat dikontrol dengan baik.
Namun, penggunannya menyebabkan limbah
sehingga kebanyakan chaotropic agent
digunakan pada skala laboratorium untuk
mengamati kompleks enzim dan mekanisme
membran. Pada bakteri B. subtilis apabila
menggunaan NaSCN dengan konsentrasi 2M, (a)
maka sebanyak 24% protein dapat dilarutkan.
Pada penggunaan NaClO4 dengan konsentrasi
2M, maka sebanyak 21% protein dapat
dilarutkan (Hatefi dan Hanstein, 1969).

5. Aplikasi Metode Pemecahan Sel

5.1 Pemecahan Sel Mikroalgae untuk
Memperoleh Lipid
Sel mikroalgae mengandung kadar lipid yang
signifikan dan tumbuh dengan cepat, sehingga
dapat dimanfaatkan untuk pembuatan biofuel
(Prabakaran dan Ravindran, 2011). Sebagai
contoh, asam-asam lemak yang terkandung di (b)
dalam Chlorella vulgaris bervariasi dari asam Gambar 7. Chlorococcum sp. dilihat melalui
beratom karbon 14 hingga 22 (Steriti, dkk, mikroskop (a) sebelum homogenisasi (b)
2014). Namun, lipid merupakan produk setelah homogenisasi (Halim, dkk., 2011)
intraselular sehingga diperlukan pemecahan
sel untuk memperolehnya. Pada percobaan
yang dilakukan Halim, dkk. menggunakan sel Temperatur awal terukur sebesar 220C dan
Chlorococcum sp. pada tekanan 500 bar dan temperatur hasil homogenisasi adalah sekitar
850 bar. Hasilnya, setelah dilakukan lima pass 300C. Sebelum memasuki homogenisasi
melalui homogenisasi, rasio dari konsentrasi kembali, suspensi didinginkan hingga
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses,
2015, 1-13
temperatur ruang. Konsumsi energi secara
spesifik dihitung sebagai berikut (Anand, dkk.,
2007):
(4)
Grimi, dkk., melakukan percobaan dengan
berbagai metode mekanik, dan HPH (High-
pressure homogenization) memberikan hasil
terbaik, dengan pemecahan sel mencapai 91%
pada HPH dengan 6 pass. Namun, pada
percobaannya HPH memiliki konsumsi energi
spesifik paling tinggi.
5.2 Pemecahan sel Candida mogii untuk
Memperoleh Xilosa Reduktase
Sel Candida mogii dipecahkan dengan metode
penggilingan, dengan menggunakan manik-
manik kaca. Jumlah xilosa reduktase yang
diperoleh meningkat dengan penurunan
diameter manik-manik kaca dan konsentrasi
umpan sel. Pada kondisi yang menggunakan
manik-manik kaca berukuran 300 µm dan 45
g/L sel dan 50 pulses, aktivitas enzim xilosa
reduktase mencapai 0.683 U/ml (Mayerhoff,
dkk., 2008).
5.3 Pemecahan Sel Escherichia coli untuk
Memperoleh Hepatitis B Core Antigen
Hepatitis B core antigen (HBcAg)
diekspresikan secara intraselular oleh E. coli,
sehingga dibutuhkan pemecahan dinding sel.
Pada percobaan yang dilakukan oleh Woi Ho
dkk., pemecahan dinding sel E. coli dilakukan
dengan ultrasonifikasi. Perolehahan HBcAg
optimum untuk volume suspensi 15 ml, dan
waktu sonifikasi 90 menit. Ultrasonifikasi
memberikan hasil 22 kali lebih tinggi
dibandingkan dengan metode enzimatik.
HBcAg yang diperoleh masih dalam keadaan
baik dan aktif. Pada metode enzimatik
menggunakan lysozyme, yang memutus ikatan
b-1,4 dari rantai peptidoglikan untuk bakteri
Gram-negatif seperti E. coli. Keuntungan
dengan menggunakan metode enzimatik
adalah konsumsi energi yang rendah, reaksi
spesifik, dan resiko produk yang diinginkan
10
rusak menjadi kecil. Namun, perolehan hasil
dengan metode enzimatik jauh lebih rendah
dibandingkan jika menggunakan metode
ultrasonifikasi (Ho, C.W., dkk., 2006).
6. Kesimpulan
Pada suatu industri bioproses, produk yang
dihasilkan biasanya berada dalam konsentrasi
yang rendah, sehingga dibutuhkan proses
pemisahan dan pemurnian guna meningkatkan
konsentrasi produk yang diinginkan. Pada
beberapa kasus, produk yang diinginkan tidak
berada di dalam kaldu fermentasi, tetapi
terdapat di dalam sel, yang disebut produk
intraselular. Metoda pemecahan sel secara
garis besar dibagi menjadi dua, yaitu metode
mekanik dan non-mekanik. Homogenisasi
tekanan tinggi, penggilingan, dan ultrasonikasi
termasuk ke dalam metode mekanik. Kavitasi
hidrodinamik, dekompresi, osmotic shock,
termolisis, liofilisasi, ekstrem pH, antibiotik,
chelating agent, detergen, solvent, pemecahan
sel secara enzimatik dan chaotropic agent
termasuk ke dalam metode non-mekanik.
Pada saat memilih metode untuk melakukan
pemecahan sel, maka harus diketahui terlebih
dahulu komposisi dan kompleksitas dinding
serta membran sel. Selanjutnya, pemilihan
metode pemecahan sel harus
mempertimbangkan produk, apakah kerusakan
yang disebabkan oleh metode pemecahan sel
terlalu besar atau masih dalam batas yang
dapat ditoleransi. Ketiga, pemilihan metode
pemecahan sel berdasarkan biaya dan energi
yang dibutuhkan. Apabila produk yang
dihasilkan bernilai rendah dan metode yang
dipilih relatif mahal, maka tidak sesuai.
Daftar Notasi
j jumlah CSTR yang disusun seri
k konstanta laju reaksi
m massa suspensi sel [g]
Np jumlah pass HPH
P tekanan homogenisasi [MPa]
Pd Tekanan discharge [Pa]
Pv Tekanan uap [Pa]
Q laju alir volumetrik [L/s]
R jumlah protein yang dilepaskan
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses, 11
2015, 1-13

Rm jumlah maksimum protein yang process, Biochemical Engineering

dapat dilepaskan Journal, 23 (2005) 247-257.
t waktu treatment [s] Garcia-Gonzales, L., Geeraerd, A.H.,
V Kecepatan cairan rata-rata [m/s] Spilimbergo, S., Elst, K., Genneken,
W konsumsi energi spesifik [kJ/kg] L.V., Debevere, J., Impe, J.F.V.,
densitas suspensi [kg/m3] Devlieghere, F., High pressure carbon
τ rata-rata waktu tinggal [s] dioxide inactivation of microorganisms
σ angka kavitasi in foods: The past, the present and the
σi angka awal kavitasi future, International Journal of Food
Microbiology, 117 (2007) 1-28.
Gaver. D., dan Huyghebaert, Optimization of
Daftar Pustaka yeast cell disruption with a newly
designed bead mill, Enzyme Microb.
Anand, H., Balasundaram, B., Pandit, A.B.,
Technol., 13 (1990) 665-671.
Harrison, S.T.L., The effect of chemical
Geciova, J., Bury, D., Jelen, P., Methods for
pretreatment combined with mechanical
disruption of microbial cells for
disruption on the extent of disruption
potential use in the dairy industry-a
and release of intracellular protein from
review, International dairy journal 12
E. coli, Biochemical Engineering
(2002) 541-553.
Journal, 35 (2007) 166-173.
Godson, G.N., dan Sinsherimer, R.L., Lysis of
Andrews B.A. dan Asenjo J.A., Enzymic lysis
Eschericia coli with a neutral detergent,
and disruption of microbial cells,
Biochim. Biophys. Acta, 149 (1967)
Tibtech, 5 (1967) 273-277. (Journal)
476-488.
Belter, B.A., Cussler, E.L., dan Hu, W.S.,
Grimi, N., Dubois, A., Marchal, L., Jubeau, S.,
Bioseparations, Downstream Processing
Lebovka, N.I., Vorobiev, E., Selective
for Biotechnology, 1988, John Wiley &
extraction from microalgae
Sons, Inc, Canada.
Nannochloropsis sp. using different
Cao, G., Steriti, A., Concas, A., Rossi, R., a
methods of cell disruption, Bioresource
novel cell disruption tehnique to
Techonology, 153 (2014) 254-259.
enhance lipid extraction from
Gunerken E, D’Hondt E, Eppink MHM,
microalgae, Bioresource technology,
Garcia-Gonzalez L, Elst K, Wijffels
164 (2014) 70-77.
RH, Cell disruption for microalgae
Dean, C. R., & Ward, O. P., The use of EDTA
biorefineries, Biotechnology Advances
or polymyxin with lysozyme for the
(2015).
recovery of intracellular products from
Halim, R, Harun, R., Danquah, M.K., Webley,
E. coli. Biotechnology Techniques, 6(2),
P.A., Microalgal cell disruption for
(1992) 133–138.
biofuel development, Applied energy 91
Debs-Louka, E., Louka, N., Abraham, G.,
(2012) 116-121.
Chabot, V., Allaf, K. Effect of
Harrison, S.T.L., Bacterial cell disruption: a
Compressed Carbon Dioxide on
key unit operation in the recovery of
Microbial Cell Viability, Applied and
intracellular products, Biotech. Adv., 9
Environtmental Microbiology, 65
(1991) 217-240.
(1999) 626-631.
Hatefi, Y. Dan Hanstein. W. G., Solubilization
Doucha, J dan Livansky, K., Influence of
of Particulate Proteins and
processing parameters on disintegration
Nanolectrolytes by Chaotropic Agents,
of chlorella cells in various types of
Proc Natl Acad Sci USA 62 (1969)
homogenizers, Appl. Microbiol.
1129-1136.
Biotechnol. 81 (2008) 431-440.
Ho, C.W., Chew, T.K., Ling, T.C.,
Farkade, V.D., Harrison, S., Pandit, A.B., Heat
Kamaruddin, S., Tan, W.S., Tey, B.T.,
induced translocation of proteins and
Efficient mechanical cell disruption of
enzyes within the cell: an effective way
Eschericia coli by an ultrasonicator and
to optimize the microbial cell disruption
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses,
2015, 1-13
recovery of intracellular hepatitis B core
antigen, Process Biochemistry 41 (2006)
1829-1834.
Jacobson, G. R., Takacs, B.J., Rosenbusch,
J.P., Properties of a major protein
released from Eschericia coli by osmotic
shock., Biochemistry, 15 (1976) 2297-
2301.
Katoh, S., Yoshida, F., Biochemical
Engineering: A Textbook for Engineers,
Chemist, and Biologists, Weinheim,
Wiley, 2009, hal 145-153.
Lee, A.K., Lewis, D.M., dan Ashman, P.J.,
Disruption of microalgal cells for the
extraction of lipids for biofuels:
Processes and spesific energy
requirements, Biomass and bioenergy
46 (2012) 89-101.
Mayerhoff, Z.D.V.L., Franco, T.T., Roberto,
I.C., A study of cell disruption of
Candida mogii by glass bead mill for the
recovery of xylose reductase, Separation
and Purification Tech., 63 (2008) 706-
709.
Ma, N.L., Teh, K.Y., Lam, S.S., Kaben, A.M.,
Cha, T.S., Optimization of cell
disruption methods for efficient
recovery of bioactive metabolites via
NMR of three freshwater microalgae
(chlorophyta), Bioresource tech 190
(2015).
McGrath, R., A press for cell disruption by ice
shear, Analytical biochemistry, 52
(1973) 518-521.
Middleberg, A.P.J., Microbial cell disruption
by high pressure homogenization,
Methods in Biotechnology,
Vol.9:Downstream Processing of
Proteins: Methods and Protocols, (2000)
chapter 2, Humana Press Inc., Totowa.
Middleberg, A.P.J., Process - scale disruption
of microorganisms, Biotechnology
Advances, 13 (1995) 491-551.
Middleberg, A.P.J., dan Kleinig, A.R., On the
mechanism of microbial cell disruption
in high-pressure homogenisation,
Chemical Eng. Science, 53 (1998) 891-
898.
Middleberg, A.P.J., dan Kleinig, A.R., The
correlation of cell disruption with
homogenizer valve pressure gradient
12
determined by computational fluid
dynamics, Chemical Engineering
Science, 51 (1996) 5103-3110.
Morais, R., Mendes-Pinto, M.M., Raposo,
M.F.J., Bowen, J., dan Young., A.J.,
Evaluation of different cell disruption
processes on encysted cells of
Haematococcus pluvialis: effects on
astaxanthon recovery and implications
for bio-availaility, Journal of applied
phycology, 13 (2001) 19-24.
Onyeche, T.I., Schlafer, O., Bormann, H.,
Schroder, C., Sievers, M., Ultrasonic
cell disruption of stabilised sludge with
subsequent anaerobic digestion,
Ultrasonics 40 (2002) 31-35.
Save, S.S., Pandit, A.B., Joshi, J.B., Microbial
cell disruption: role of cavitation, The
chemical eng. Journal, 55 (1994) B67-
B72.
Save, S.S., Pandit, A.B., Joshi, J.B., Use of
hydrodynamic cavitation for large scale
microbial cell disruption, Trans IchemE,
75 (1997) 41-49.
Schnaitman, C.A., Solubilization of the
cytoplasmic membrane of Escherichia
coli by Triton X-100, Journal of
bacteriology, 108 (1971) 545-552.
Schutte H., Kroner K.H., Hustedt H dan Kula
M.-R., Experiences with a 20-1itre
industrial bead mill for the disruption of
micro-organisms, Enzyme Microb.
Technol., 5 (1983) 143-148.
Shirgaonkar, I.Z., Lothe, R.R., Pandit., A.B.,
Comments on the mechanism of
microbial cell disruption in high-
pressure and high-speed devices.
Biotechnol. Prog. 14 (1998) 657-660.
Stanbury P.F. and Whitaker A., 1984,
Principle in Fermentation Technology,
hal 206-208. Pergamon Press.
Solecki, M., Heim, A. Kamionowska, U., The
effect of microogranism concentration
on yeast cell disruption in a bead mill,
Journal of food engneering, 83 (2007)
121-128.
Ravindran, A.D. dan Prabakaran, P., A
comparative study on effective cell
disruption method for lipid extraction
from microalgae, Letters in Applied
Microbiology, 53 (2011) 150-154.
 Brenda Kalista, Metode Pemecahan Sel pada Proses Hilir Industri Bioproses, 13
2015, 1-13

Ross J.W., Continuous-flow mechanical cell

disintegrator, Appl. Microbiol., 11
(1962) 33-35.
Terada, A., Xie, L., Bao, Q., Suenaga., T,
Yoshino, H., Hosomi, M., Identification
of a predominant effect on bacterial cell
disruption and released organic matters
by a high pressure jet device,
Biochemical Engineering Journal, 101
(2015) 220-227.
Wang, T., Gerde, J.A, Montalbo-Lomboy, M.,
Yao, L.X., Grewell, D., Evaluation of
microalgae cell disruption by ultrasonic
treatment, Bioresource Technology 125
(2012) 175-181.

View publication stats