LEMBAR KERJA 5

Topik : Uji Sterilitas (Interpretasi dan Analisis Hasil)

Nama : Nita Oktaviani Permatasari
NRP : 110118213
Kp/kelompok : A2
Uji Sterilitas Menurut Farmakope Indonesia VI dan USP

1. Sebutkan jenis media yang direkomendasikan untuk uji sterilitas sesuai dengan
Farmakope Indonesia VI dan USP dan peruntukannya!
jawab :
Media yang direkomendasikan untuk oengujian sterilitas sesuai deng FI V dan USP 40, ada 2
macam yaitu :
• Media Cair Tioglikolat
digunakan untuk pertumbuhan bakteri anaerob, termasuk juga untuk mendeteksi
bakteri aerob
• Soybean-Casein Digest Medium
digunakan untuk pertumbuhan kapang dan bakteri aerob
(FI VI p. 1832/ pdf 1853)
2. Berdasarkan jenis media yang diuraikan pada nomor 1, sebutkan komponen
penyusun media, jumlah, dan f ungsinya (susun dalam bentuk tabel)!
jawab :
• Media Cair Tioglikolat
Komponen Jumlah Fungsi
L-Sistin P 0,5 g Antioksidan
Natrium klorida P 2,5 g Bahan pengisotonis
Dekstrosa monohidrat /
5,5/5,0 g Nutrien
anhidrat P
Agar P 0,75 g Nutrien dan pembentuk media
Yeast extract (larut
5,0 g Nutrien
dalam air)
Pancreatic digest of
15,0 g Nutrien
casein
Natrium tioglikolat P
0,5 g Antioksidan
atau
Asam tioglikolat P 0,3 ml Antioksidan
Larutan natrium
resazurin P (1 dalam 1,0 ml Indikator bebas
1000) dibuat segar
Air murni 1000 ml Pelarut
• Soybean-Casein Digest Medium
Komponen Jumlah Fungsi
Pancreatic digest of
17 g Nutrien
casein
Papaic digest of
3,0 g Nutrien (spesifik khusus jamur)
soybean meal
Natrium klorida P 5,0 g Bahan pengisotonis
Kalium fosfat dibasa P 2,5 g Buffer atau dapar
72
 Dekstrosa monohidrat /
2,5/2,3 g Nutrien
anhidrat P
Air murni 1000 ml Pelarut
(FI VI p. 1832-1833/ pdf 1853-1854)
3. Bagaimanakah proses penyiapan media untuk melakukan uji sterilitas dengan
metode inokulasi langsung bagi produk penisilin dan sef alosporin?
• Masukkan secara aseptik pada setiap wadah media sejumlah ß-laktamase untuk
menginaktifkan sejumlah antibiotik dalam zat uji
• Tetapkan jumlah ß-laktamase yang diperlukan untuk menginaktifkan antibiotik
menggunakan sediaan ß-laktamase yang sebelumnya sudah diuji inaktivasi daya
hambat dari penisilin atau sefalosporin. [Catatan Media yang telah mengandung ß-
laktamase dapat juga digunakan untuk pengujian dengan metode penyaringan
membran]
• Sebagai alternatif (Lakukan uji di daerah yang benar-benar terpisah dari tempat uji
sterilitas), tetapkan jumlah ß-laktamase yang diperlukan di dalam media seperti yang
tertera pada Uji kesesuaian metode menggunakan Staphylococcus aureus kurang dari
100 koloni (lihat Tabel 1) sebagai bakteri tantang
• Amati pertumbuhan mikroba yang khas sebagai konfirmasi bahwa kadar ß-laktamase
sudah tepat.
(FI VI p. 1833/ pdf 1854)
4. Uraikanlah galur mikroba uji yang sesuai untuk uji f ertilitas masing-masing media!
jawab :

Bakteri Aerob
Staphylococcus aureus ATCC 6538; CIP 4.83; NCTC 10788; NCIMB
9518; NBRC 13276
Bacillus subtilis ATCC 6633; CIP 52.62; NCIMB 8054; NBRC
3134
Pseudomonas aeruginosa1 ATCC 9027; NCIMB 8626; CIP 82.118;
NBRC 13275
Bakteri Anaerob
2 ATCC 19404; CIP 79.3; NCTC 532 atau
Clostridium sporogenes
ATCC 11437; NBRC 14293
Kapang
Candida albicans ATCC 10231; IP 48.72; NCPF 3179; NBRC
1594
Aspergillus brasiliensis (Aspergillus niger) ATCC 16404; IP 1431.83; IMI 149007; NBRC
9455
1. Alternatif untuk Pseudomonas aeruginosa adalah Kocuria rhizophila (Micrococcus luteus)
ATCC 9341
2. Alternatif untuk Clostridium sporogenes, jika diinginkan mikroba yang bukan pembentuk
spora adalah Bacteroides vulgatus ATCC 8482.
Prosedur uji fertilitas :
• Inokulasikan sejumlah Media Cair Tioglikolat dengan sejumlah mikroba berikut (tidak
lebih dari 100 koloni), menggunakan sejumlah media terpisah untuk setiap spesies
mikroba: Clostridium sporogenes, Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus aureus.
• Inokulasikan sejumlah Media Tioglikolat Alternatif dengan sejumlah Clostridium
sporogenes (tidak lebih dari 100 koloni). Inokulasikan sejumlah “Soybean Casein Digest
Medium” dengan sejumlah mikroba berikut (tidak lebih dari 100 koloni) menggunakan
sejumlah media terpisah untuk setiap spesies mikroba: Aspergillus brasiliensis, Bacillus
subtilis dan Candida albicans. Inkubasi tidak lebih dari 3 hari untuk bakteri dan tidak
73
 lebih dari 5 hari untuk kapang. Teknik pemeliharaan lot benih kultur (sistem lot benih)
untuk mikroba viabel yang diinokulasikan tidak lebih dari 5 pasase yang diturunkan dari
lot benih master asli. Media dapat digunakan jika terlihat pertumbuhan mikroba dengan
jelas.
(FI VI p. 1833-1834/ pdf 1854-1855)
5. Bagaimanakah prosedur pengamatan dan interpretasi hasil uji sterilitas menurut
Farmakope Indonesia VI dan USP 40!
jawab :
Farmakope Indonesia VI
- Pada interval waktu tertentu dan akhir periode inkubasi, amati secara visual adanya
pertumbuhan mikroba dalam media. Jika bahan uji menimbulkan kekeruhan pada media
sehingga tidak dapat ditetapkan secara visual ada atau tidaknya pertumbuhan mikroba, 14
hari sejak mulai inkubasi, pindahkan sejumlah media (tiap tabung tidak kurang dari 1 mL)
ke dalam media segar yang sama, kemudian inkubasi bersama-sama tabung awal selama
tidak kurang dari 4 hari
- Jika tidak terjadi pertumbuhan mikroba, maka bahan uji memenuhi syarat sterilitas. Jika
terbukti terjadi pertumbuhan mikroba, maka bahan uji tidak memenuhi syarat sterilitas,
kecuali dapat ditunjukkan bahwa uji tidak absah disebabkan oleh hal yang tidak
berhubungan dengan bahan uji. Uji dikatakan tidak absah jika satu atau lebih kondisi
dibawah ini dipenuhi:
a. Data pemantauan mikrobiologi terhadap fasilitas uji sterilitas menunjukkan
ketidaksesuaian
b. Pengkajian prosedur uji yang digunakan selama pengujian menunjukkan
ketidaksesuaian
c. Pertumbuhan mikroba ditemukan pada kontrol negatif
d. Setelah dilakukan identifikasi mikroba yang diisolasi dari hasil uji, pertumbuhan
mikroba (beberapa mikroba) dapat dianggap berasal dari kesalahan pada bahan uji,
atau teknik pengujian yang digunakan pada prosedur uji sterilitas.
- Jika pengujian dinyatakan tidak absah, lakukan uji ulang dengan jumlah bahan yang sama
dengan uji awal. Jika tidak terbukti terjadi pertumbuhan mikroba pada uji ulang, maka
contoh memenuhi syarat uji sterilitas. Jika ditemukan pertumbuhan mikroba pada uji
ulang, maka contoh tidak memenuhi syarat uji sterilitas.
(FI VI p. 1838-1839/ pdf 1859-1860)
USP 40
- Pada interval selama masa inkubasi dan pada kesimpulannya, periksa media untuk
mencari bukti makroskopis mikroba pertumbuhan. Jika bahan yang diuji membuat
medium keruh sehingga tidak ada atau tidaknya pertumbuhan mikroba mudah ditentukan
dengan pemeriksaan visual, 14 hari setelah ubin mulai dari bagian transfer inkubasi
(masing-masing tidak kurang dari 1 mL) dari wadah sedang hingga segar dari media yang
sama, lalu inkubasi wadah asli dan transfer selama tidak kurang dari 4 hari.
- Jika tidak ditemukan bukti pertumbuhan mikroba, produk yang akan diperiksa memenuhi
uji sterilitas. Jika bukti ditemukan pertumbuhan mikroba, produk yang akan diperiksa
tidak memenuhi uji sterilitas, kecuali dapat dibuktikan dengan jelas bahwa pengujian
tersebut tidak valid karena penyebab yang tidak terkait dengan produk yang akan
diperiksa. Tes hanya dapat dianggap tidak valid jika satu atau lebih dari kondisi berikut
terpenuhi:
1. Data pemantauan mikrobiologi dari fasilitas pengujian sterilitas menunjukkan adanya
kesalahan.

74
 2. Sebuah tinjauan dari prosedur pengujian yang digunakan selama test tersebut
mengungkapkan kesalahan. 3. Pertumbuhan mikroba ditemukan pada kontrol negatif.
4. Setelah penentuan identitas mikroorganisme yang diisolasi dari tes, pertumbuhan
spesies ini (atau spesies ini)dapat secara tegas dianggap berasal dari kesalahan
sehubungan dengan bahan dan atau teknik yang digunakan dalam melakukan prosedur uji
sterilitas.
- Jika tes dinyatakan tidak valid, maka tes diulang dengan jumlah unit yang sama seperti
pada tes aslinya. Jika tidak ada bukti pertumbuhan mikroba ditemukan dalam uji ulang,
produk yang diperiksa sesuai dengan uji sterilitas.Jika pertumbuhan mikroba ditemukan
dalam tes ulang, produk yang diperiksa tidak sesuai dengan tes sterilitas.
The Test for Sterility of Medicinal Products

1. Berdasarkan artikel tersbut, uraikanlah keterbatasan pelaksanaan uji sterilitas!

jawab :
- Tidak hanya ada batasan dengan hasil tes sterilitas, tetapi juga ada batasan dalam
melakukan tes itu sendiri. Risiko mendapatkan hasil positif palsu selama pengujian
harus dikelola seketat mengelola pemrosesan aseptik batch itu sendiri.
- Ada sejumlah area risiko potensial yang dapat menyebabkan hasil positif palsu:
➢ Zona uji sterilitas yang dikompromikan oleh teknisi, mungkin karena tindakan
berulang dan ergonomis yang buruk.
➢ Pembentukan lingkungan aseptik yang buruk sebelum melakukan pengujian,
biasanya karena kurangnya proses kontaminasi biologis.
➢ Ketergantungan yang berlebihan pada teknologi penghalang untuk
menyingkirkan kontaminasi mikroba dapat berarti bahwa teknik aseptik yang
baik tidak digunakan.
➢ Intervensi pemantauan lingkungan dapat membahayakan zona pengujian aseptik
jika bukan bagian dari desain sistem.
2. Apakah keunggulan metode f iltrasi membrane dalam uji sterilitas suatu produk
dibandingkan metode inokulasi langsung?
jawab :
Keunggulan metode filtrasi membran dalam uji sterilitas suatu produk jika
dibandingkan dengan metode inokulasi langsung adalah :
➢ Semua produk volume kecil dapat difiltrasi atau setidaknya separuh isi
produk volume besar dapat difiltrasi melalui fiter membrane, sehingga
volume sampel yang diuji jauh lebih besar dibanding metode inokulasi
langsung.
➢ Sesuai untuk semua produk berair, beralkohol, berminyak dan pelarut
yang dapat melewati filter steril 0,45 μm.
75
 ➢ Setiap mikroorganisme yang ada jauh lebih mungkin untuk dipisahkan
dari zat yang berpotensi menghambat dalam produk melalui filtrasi
atau dapat dihilangkan dengan membilas membran.
3. Apakah alasan EP dan USP memperpanjang lama inkubasi dari 7 hari menjadi 14
hari? Jelaskan!
jawab :
Hal ini karena diperkirakan bahwa 30% dari kegagalan uji sterilitas terjadi antara
tujuh dan empat belas hari karena waktu yang dibutuhkan untuk mikroorganisme
yang rusak secara halus atau tertekan untuk tumbuh. Mikroorganisme yang
diisolasi dari uji sterilitas lebih cenderung mengalami stres karena perpindahan
dari lingkungannya ke lingkungan yang lebih tidak bersahabat (produk) dan
kemudian ke lingkungan kaya nutrisi yang sama sekali berbeda (media kultur).
Mikroorganisme ini juga cenderung jumlahnya sedikit (hanya satu sel). Faktor-
faktor ini berkontribusi pada fase lag yang relatif lama pada awal siklus
pertumbuhan sel mikroba dalam media kultur.
4. Bagaimanakah strategi yang dilakukan apabila suatu produk membentuk
suspensi/kekeruhan/f lokulasi pada media saat dilakukan uji sterilitas dengan
metode inokulasi langsung?
jawab :
Untuk produk yang berbentuk suspense dan menghasilkan flokulasi dan kekeruhan atau
endapan sehingga ada atau tidaknya pertumbuhan mikroba tidak dapat langsung terlihat,
diperlukan langkah subkultur. Untuk subkultur, sebagian media kultur yang sesuai
dipindahkan ke wadah dari jenis media yang sama dan diinkubasi untuk jangka waktu
selanjutnya (seperti dibahas di bawah). Barang yang diinkubasi harus diberi label yang
jelas dengan identitas produk; media yang digunakan; suhu inkubasi dan tanggal
pengujian. Selama inkubasi uji sterilitas, artikel harus diperiksa secara teratur untuk
pertumbuhan (ini sering setiap hari atau dua hari sekali). Saat memeriksa item pada tes
perawatan harus dilakukan untuk mencegah agitasi yang tidak semestinya, terutama dari
media tioglikolat. Jika kondisi anaerob tidak dipertahankan, ini akan ditunjukkan oleh
indikator resazurin. Pada akhir masa inkubasi, artikel harus diperiksa, dengan memutar
perlahan, untuk mengetahui kekeruhan yang terlihat terhadap sumber cahaya buatan.
5. Mengapa proses monitoring lingkungan menjadi hal yang krusial dilakukan dalam
pelaksanaan uji sterilitas?
jawab :
Proses monitoring lingkungan menjadi hal yang krusial dilakukan dalam
pelaksanaan uji sterilitas dimana uji sterilitas harus dilakukan di lingkungan yang
tidak menimbulkan kontaminasi dan mengarah pada potensi yang menyebabkan
terjadinya positif palsu. Lingkungan yang sesuai yaitu perangkat aliran udara
searah yang diadakan di dalam cleanroom atau isolator. Pemantauan lingkungan
harus dilakukan selama setiap sesi pengujian untuk menunjukkan lingkungannya
berada dalam kendali
6. Apakah tujuan melakukan validasi uji sterilitas?
jawab :
untuk menunjukkan bahwa produk dengan media kultur tidak memiliki aktivitas anti-
mikroba (ini kadangkadang disebut sebagai bakterostasis dan fungistasis). Validasi juga
dilakukan jika ada perubahan substansial pada produk yang telah divalidasi sebelumnya
atau pada media kultur.
7. Parameter apakah yang harus diinvestigasi bila terjadi kegagalan pada uji
sterilitas? Uraikanlah!
jawab :

76
 Parameter yang harus diinvestigasi apabila terjadi kegagalan uji sterilitas, yaitu :
➢ Spesifikasi organism
➢ Rekaman hasil dan penyimpangan laboratorium
➢ Pamnadan lingkungan produksi
➢ Personil pemantauan
➢ Bioburden pra-sterilisasi produk
➢ Review catatan produksi
➢ Sejarah manufaktur
8. Apakah yang dimaksud dengan Rapid Microbiological Methods ? Se b utk a n tiga
prinsip dasar pengujian dengan Rapid Microbiological Methods!
jawab :
Rapid Microbiological Methods adalah metode yang dapat mendeteksi
mikroorganisme dengan masa inkubasi yang lebih cepat dari prosedur yang tertera
pada Farmakope yang membutuhkan waktu inkubasi lebih lama. 3 prinsip dari
Rapid Microbiological Methods adalah :
1. Metabolic or growth based (berbasis pertumbuhan atau metabolik)
2. Berbasis viabilitas
3. Berdasarkan teknologi yang menganalisis komponen sel seperti asam
nukleat.
9. Bagaimanakah prinsip kerja metode berikut ini dalam uji sterilitas:
jawab :
a. ATP-bioluminescence Merupakan metode cepat yang paling mapan yang menggunakan
enzim untuk memecah ATP mikroba dari sel yang sedang tumbuh dan menghasilkan cahaya
tampak yang dapat diukur dengan detektor ATPbioluminescence. Metode ini dianggap
sensitif dan mampu memberikan hasil seperti prosedur monograf dalam waktu kurang dari 7
hari Sistem Deteksi Cepat Celsis dan Sistem Deteksi dan Pencacahan Mikrobiologi Cepat
Milliflex adalah contoh komersial. Namun metode ini seperti prosedur monograf adalah
produk yang merusak dan berbasis pertumbuhan (yaitu dengan media tertentu dan kondisi
inkubasi, meskipun waktu pertumbuhan berkurang secara signifikan).
b. Colorimetric growth detection Sesuai dengan namanya metode ini didasarkan pada
sistem deteksi warna sensitif yang dapat mendeteksi karbondioksida yang dihasilkan oleh
sel mikroba yang sedang tumbuh. Dilaporkan bahwa metode ini dapat menghasilkan hasil
dalam 3 hari BacT / ALERT 3D Dual-T Sistem Deteksi Microbila dari bioMerieux adalah
contoh komersial. Metode ini juga merusak produk dan berbasis pertumbuhan.
c. Autofluorescence detection Metode ini belum dapat dikomersialkan untuk tujuan
pengujian sterilitas didasarkan pada kenyataan bahwa semua sel hidup menghasilkan
sejumlah kecil fluoresensi yang dapat diperkuat dari sel tumbuh yang ditempatkan pada
permukaan padat (seperti agar) dan dibuat dapat dideteksi dengan mata telanjang.
Dinyatakan bahwa hasil dapat diperoleh dalam waktu kurang dari 3 hari. Sekali lagi metode
ini juga tampaknya merusak produk dan berbasis pertumbuhan.
d. Cytometry systems Penghitungan sitometri tidak bergantung pada pertumbuhan tetapi
menggunakan teknik pelabelan sel fluoresen. Biasanya, sel mikroba diberi label
menggunakan pewarna fluoresen atau substrat non-fluoresen yang kemudian diubah
menjadi sel yang layak fluorescent. Deteksi dicapai dengan pemindaian laser baik dalam sel
aliran o pada fase padat seperti filter membran. Scan RDI adalah contoh komersial yang
diklaim mendeteksi 1 CFU. Metode ini, meskipun destruktif tetapi tidak berbasis
pertumbuhan dan cepat, memang tampaknya mengatasi dua kelemahan utama dari metode
monograf (yaitu spektrum / kekuatan deteksi dan penundaan).

77
Performance Survey and Comparison Between Rapid Sterility Testing Method and
Pharmacopoeia Sterility Test

1. Apakah alasan pengembangan Rapid Sterility Testing Method?

jawab :
➢ Deteksi mikroorganisme yang lebih cepat
➢ Periode inkubasi kurang
➢ Biaya lebih rendah
2. Bagaimanakah prinsip deteksi mikroorganisme dengan BacT/Alert® 3D system?
jawab :
deteksi mikroba didasarkan pada deteksi kolorimetri CO2 yang dihasilkan dari
pertumbuhan mikroba dalam media kultur cair.
3. Parameter validasi apakah yang harus dievaluasi pada validasi pengujian
mikrobiologi secara kualitatif seperti uiji sterilitas? Uraikan!
jawab :
- Spesifitas
Spesifitas dari metode alternatif didasarkan pada kemampuan untuk mendeteksi
berbagai mikroorganisme yang berpotensi ada dalam produk.
- Batas deteksi
Batas deteksi mengacu pada jumlah terkecil mikroorganisme yang dapat dideteksi di
bawah kondisi eksperimental yang telah ditetapkan.
4. Uraikanlah mikroorganisme apakah yang digunakan pada uji f ertilitas untuk
masing-masing media sesuai artikel tersebut!
jawab :
- BacT / Alert® SA, BacT / Alert® FA, BacT / Alert® iAST, BacT / Alert®
iLym, dan media konvensional SCDM dievaluasi menggunakan strain:
• S. aureus
• P. aeruginosa
• B. subtilis
• A. brasiliensis
• C. albicans
- BacT / Alert® SA, BacT / Alert® FA, BacT / Alert® iAST, BacT / Alert®
iLym, dan media konvensional FTM dievaluasi menggunakan strain:
• S. aureus
• P. aeruginosa
• B. subtilis.

78
 - BacT / Alert® SN, BacT / Alert® FN, BacT / Alert® iNST, dan media
konvensional FTM dievaluasi menggunakan strain :
• S. aureus
• P. aeruginosa
• B. subtilis
• A. brasiliensis
• C. sporogenes.
5. Bagaimanakah prosedur uji sterilitas menurut Farmakope yang dilakukan pada
penelitian tersebut?
jawab :
➢ Sistem 3D BacT / Alert® dievaluasi dengan membandingkannya dengan metode
pengujian sterilitas filtrasi membran farmakope, mengenai deteksi mikroorganisme
yang digunakan untuk sengaja mencemari larutan natrium klorida 0,9% komersial
dan larutan metronidasol komersial, keduanya dalam kantong 100 mL.
➢ Unit dari setiap produk (P1 dan P2) terkontaminasi secara artifisial dengan
suspensi yang mengandung 2 CFU / 5 mL, dan jumlah unit yang sama juga
terkontaminasi dengan suspensi yang mengandung 0,25 CFU / 5 mL dari setiap
strain mikroorganisme yang digunakan untuk mengevaluasi media kultur BacT /
Alert®.
➢ Setiap sampel disaring ke selulosa nitrat filter yang memiliki ukuran pori nominal
tidak lebih dari 0,45 μm dan diameter kira-kira 50 mm, dalam kondisi aseptik.
➢ Setelah penyaringan sampel, membran itu dicuci tiga kali dengan menyaring 100
mL Cairan A melalui membran. Kemudian, membran dipotong secara aseptik
menjadi dua bagian yang sama, dan satu setengah dipindahkan ke media kultur
konvensional (FTM dan SCDM) yang diinkubasi di bawah kondisi yang
direkomendasikan untuk uji sterilitas: FTM pada 32,5 ± 2,5 ° C dan SCDM pada
22,5 ± 2,5 ° C, selama 14 hari.
➢ Kedua jenis media kultur dievaluasi setiap hari untuk mendeteksi adanya
pertumbuhan mikroba.
➢ Setelah inkubasi 18 jam, 10 mL aliquot dari SCDM tersebut ditransfer ke botol
BacT / Alert® SA dan 10 mL aliquot dari FTM dipindahkan ke sebotol BacT /
Alert® SN; Media BacT / Alert® diinkubasi hanya pada suhu 32,5 ± 2,5 ° C 14
hari, dan pembacaan otomatis dilakukan setiap 10 menit.
➢ Prosedur yang sama dilakukan untuk pasangan lain Media BacT / Alert®: setelah
inkubasi 18 jam, aliquot 10 mL dari SCDM dipindahkan ke sebotol BacT / Alert®
FA dan 10-mL alikuot dari FTM dipindahkan ke botol BacT / Alert® FN; dan 10-
mL alikuot dari SCDM dipindahkan ke botol BacT / Alert® iAST dan 10-mL
alikuot dari FTM dipindahkan ke sebotol BacT / Alert® iNST. Semua media BacT
/ Alert® diinkubasi hanya pada suhu 32,5 ± 2,5 ° C selama 14 hari, dan pembacaan
otomatis dilakukan setiap 10 menit.
➢ Kontrol negatif yang terdiri dari penyaringan masing-masing matriks yang tidak
sengaja terkontaminasi disertakan dalam semua pengujian. Kontrol negatif kultur
media juga digunakan untuk memastikan sterilitas reagen ini. Kontrol positif dari
inokulum digunakan untuk memastikannya viabilitas dan kemampuan untuk
tumbuh di media budaya.
➢ Semua termos berisi media kultur, baik untuk wadah konvensional dan metode
BacT / Alert® 3D, yang memiliki pertumbuhan mikroba dilakukan pewarnaan
Gram dan disubkultur untuk mengidentifikasi mikroorganisme. Tes diulang lima

79
 kali, pada hari yang berbeda, sampai total 10 ulangan untuk setiap produk di setiap
konsentrasi mikroba dari setiap mikroorganisme.
6. Apakah yang dimaksud dengan kontrol negatif dan kontrol positif ? Uraikanlah
f ungsinya dalam uji sterilitas!
jawab :
• Kontrol negatif adalah suatu kelompok di mana keadaan atau kondisi
percobaan dibuat sedemikian rupa sehingga pasti menghasilkan hasil
yang negatif. Kontrol negatif kultur media digunakan untuk memastikan
sterilitas reagen.
• Kontrol positif adalah suatu kelompok di mana keadaan atau kondisi
percobaan dibuat sedemikian rupa sehingga pasti menghasilkan hasil
yang positif. Kontrol positif dari inokulum digunakan untuk
memastikannya viabilitas dan kemampuan untuk tumbuh di media budaya.
7. Bagaimanakah perbandingan antara Rapid sterility testing dan Pharmacopeia
sterility test dalam mendeteksi pertumbuhan mikroorganisme?
jawab :
Tidak ada perbedaan yang signifikan antara kemampuan metode untuk mendeteksi bakteri
kontaminasi, sistem 3D BacT/Alert® terdeteksi pertumbuhan mikroba lebih cepat dari
metode farmakope, yang menunjukkan kinerja yang unggul, terutama mengingat bahwa
sistem 3D BacT/Alert® menggunakan suhu inkubasi 32,5°C untuk mendeteksi semua
mikroorganisme dievaluasi, sedangkan metode konvensional membutuhkan dua suhu
inkubasi.

80