Parasit Chua et al. Vektor Parasit (2019) 12: 364 https://doi.org/10.

1186/s13071-019-3627-0
& Vektor
PENELITIAN Pengaruh berbagai tipe habitat

terhadap kelimpahan dan waktu menggigit

Anopheles balabacensis Baisas (Diptera:

Culicidae) di kabupaten Kudat Sabah,

Malaysia
Tock H. Chua1 *, Benny O. Manin1, Indra Vythilingam2, Kimberly Fornace3 dan Chris J. Drakeley3
Abstrak Latar Belakang: Kami menyelidiki efek dari lima tipe habitat umum terhadap keanekaragaman
dan kelimpahan Anoph- eles spp. dan tentang laju dan waktu gigitan Anopheles balabacensis (saat ini
satu-satunya vektor yang diketahui untuk Plasmodium knowlesi di Sabah) di desa Paradason, Kudat,
Sabah. Habitatnya adalah tepi hutan, area bermain, rumah panjang, perkebunan kelapa sawit dan area
semak-semak. Pengambilan sampel Anopheles dilakukan setiap bulan menggunakan metode tangkapan
manusia di semua tipe habitat selama 14 bulan (Oktober 2013 hingga Desember 2014, tidak termasuk
Juni 2014). Anopheles Spesiesyang morfologi diidentifikasi dan dikenai uji PCR untuk mendeteksi
Plasmodium. parasit Generalized alised linear mixed models (GLMM) diaplikasikan untuk menguji variasi
kelimpahan dan laju gigitan An. balabacase dalam berbagai tipe habitat. Hasil: Sebanyak 1599
Anopheles spesimendikumpulkan di desa, di mana sekitar 90% adalah An. balabacase. Anopheles
balabacensis hadir sepanjang tahun dan merupakandominan Anopheles yang spesiesdi semua tipe
habitat. Habitat semak semak memilikitertinggi Anopheles keanekaragaman spesiessementara tepi hutan
memiliki jumlah terbesar Anopheles individuditangkap. Analisis GLMM menunjukkan bahwa
An.balabacensis kelimpahantidak dipengaruhi oleh jenis habitat, dan itu lebih aktif selama awal dan larut
malam dibandingkan dengan fajar dan fajar. Uji PCR menunjukkan bahwa 1,61% daridiuji An yang.
balabacensis positif untuk parasit malaria, yang sebagian besar ditangkap di perkebunan kelapa sawit
dan terinfeksi satu hingga dua Plasmodium spesies. Kesimpulan: Identifikasi vektor yang terinfeksi di
berbagai habitat, termasuk daerah pertanian dan pertanian, menggambarkan potensi manusia untuk
terpapar P. knowlesi di luar kawasan hutan. Temuan ini berkontribusi pada bukti yang melibatkan
perubahan lingkungan akibat deforestasi, perluasan area pertanian dan pertanian, dan pengembangan
pemukiman manusia dekat pinggiran hutan dalam kemunculan P. knowlesi di Sabah. Kata kunci:
Anopheles balabacensis, Kelimpahan, Jenis habitat, Waktu menggigit, Vektor malaria, Plasmodium
knowlesi, Sabah, Malaysia
© Penulis (s) 2019. Artikel ini didistribusikan dengan ketentuan Lisensi Internasional Creative Commons Attribution 4.0 International (http: // creat iveco
mmons .org / licen ses / by / 4.0 /tanpa batasan), yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksidalam media apa pun, asalkan Anda
memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli dan sumbernya, memberikan tautan ke Materi Iklan Lisensi bersama, dan menunjukkan jika ada
perubahan. Pengabaian Dedikasi Domain Publik Creative Commons (http: // creat iveco mmons .org / publi cdoma di / nol / 1.0 /) berlaku untuk data
yang tersedia di artikel ini, kecuali dinyatakan lain.

Akses Terbuka
* Korespondensi: thchua@ums.edu.my 1 Departemen Patobiologi dan Diagnosis Medis, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universiti
Malaysia Sabah, Kota Kinabalu, Sabah, Malaysia Daftar lengkap informasi penulis tersedia di akhir artikel
Halaman Chua et al. Vektor Parasit (2019) 12: 364 2 dari 13 Latar
Belakang Pulau Borneo, pulau terbesar ketiga di dunia,
terkenal akan beragam flora dan fauna yang unik. Sayangnya, Pulau Kalimantan baru-baru ini mengalami kehilangan
hutan. Dari tahun 1975 hingga 2015, sekitar 18,5 juta hektar (Mha) hutan tua ditebang untuk perkebunan industri [1]. Pada
2015, diperkirakan 7,9 Mha dari total daratan Kalimantan (73,7 Mha) ditanami kelapa sawit. Perubahan lingkungan akibat
deforestasi, terutama untuk pengembangan, penebangan dan perkebunan pertanian, juga mengubah ekologi hewan di
pulau itu, termasuk ekologi anopheline [2]. Dengan berlanjutnya penggundulan hutan di seluruh Kalimantan [3],
fragmentasi yang dihasilkan dari kawasan hutan dapat meningkatkan risiko penyebaran penyakit zoonosis, yang ditularkan
melalui vektor karena meningkatnya kontak antara manusia dan waduk dan vektor penyakit [4].
Sabah, negara bagian kedua terbesar di Malaysia, terletak di Pulau Kalimantan bagian utara dengan perkiraan luas 73.620
km2 baru-baru ini mengalami kerugian hutan yang luar biasa. Sebelum tahun 1980-an, sekitar 80% dari Sabah ditutupi
dengan sebagian besar hutan dipterocarp [5]. Namun, pada pertengahan 1980-an, hanya 60% dari Sabah ditutupi dengan
hutan, kehilangan 20% dalam waktu singkat karena kegiatan penebangan dan pertanian. Pada tahun 1995, sekitar 90%
hutan primer di Sabah telah hilang, dengan luas berkurang dari sekitar 2,8 menjadi 0,3 Mha [5].
Salah satu penyakit yang ditularkan oleh nyamuk utama saat ini di Sabah adalah malaria zoonosis knowlesi yang
disebabkan oleh Plasmodium knowlesi yang ditularkan dari kera ekor panjang dan ekor babi oleh Anopheles nyamuk[6].
Pada 2016, 93% kasus malaria knowlesi di Malaysia (1263/1357) dilaporkan dari Borneo Malaysia [ 7]. Deforestasi dan
perubahan lahan telah dianggap sebagai alasan utama di balik peningkatan kasus malaria knowlesi dengan menciptakan
tipe habitat baru yang cocok untuk Anopheles vektor[8].
Di Asia Tenggara, Anopheles spesieshadir dalam keragaman tinggi, termasuk kompleks spesies yang terjadi pada
sympatry tetapi memiliki perilaku yang berbeda [9, 10]. Keragaman yang tinggi dari vektor-vektor ini dan kompleksitas
spesies dapat menyebabkan kesalahan identifikasi yang dapat mempengaruhi keberhasilan program pengendalian vektor
[11, 12]. Di Malaysia Timur, An. balabacensis dan An. laten telah dikonfirmasi sebagai vektor utama untuk P. knowlesi di
Sabah dan Sarawak, masing-masing [13, 14]. Di Semenanjung Malaysia, beberapa spesies Anopheles milik kelompok
Leucosphyrus telah diidentifikasi sebagai vektor alami untuk P. knowlesi [15]. Namun demikian,lain Anophones sp.
(misalnya An. kochi) dapat bertindak sebagai vektor untuk P. knowlesi tetapi studi lebih lanjut diperlukan untuk
menetapkan peran mereka dalam transmisi [16].
Di Asia, P. knowlesi mungkin merupakan malaria simian pertama yang dikonfirmasi menyebabkan infeksi manusia luas
setelah sekelompok penduduk desa ditemukan terinfeksi secara alami di Kapit, Sarawak, Malaysia Timur pada tahun 2004
[17]. Spesies ini sebelumnya salah diidentifikasi sebagai P. falcipapum atau P. malariae [18] sampai teknik molekuler
diperkenalkan. Sejak itu, P. knowlesi kasusjuga telah dilaporkan di Sabah[19-21]dan Semenanjung Malaysia[22-
24].Demikian pula, banyak negara lain di Asia Tenggara juga telah melaporkan kasus, misalnya Kalimantan, Indonesia
[25, 26]; Sumatra, Indonesia [27]; Brunei [28]; Thailand [29, 30]; Vietnam [31, 32]; Singapura [16, 33]; Filipina [34];
Myanmar [35]; Kamboja [36]; dan baru-baru ini Laos [37].
Dalam penelitian ini, kami melakukan penyelidikan entomologis untuk menentukan keanekaragaman dan kelimpahan
Anopheles spesies, terutama An. balabacensis, di lima jenis habitat yang sekarang umum ditemukan di daerah pedesaan
Sabah. Anopheles balabacensis telah dikenal sebagai spesies dominan di Divisi Kudat, terutama di Pulau Banggi yang
terletak di lepas pantai utara Sabah dekat Teluk Marudu [38]. Perubahan terkini dalam lanskap kabupaten Kudat Divisi
Kudat telah menyediakan habitat baru untuk An. balabacensis yang lebih dekat dengan pemukiman manusia, telah
mengubah distribusinya, meningkatkan kesempatan mereka memberi makan pada manusia dan menginfeksi mereka
dengan parasit malaria.
Metode Lokasi pengambilan sampel Divisi Kudat di Sabah adalah divisi terkecil, dan mencakup distrik Kudat, Pitas,
Kota Marudu, Bambrawangan, Pulau Banggi dan beberapa pulau lainnya. Iklim di Sabah adalah tropis dengan suhu rata-
rata 32 ° C untuk daerah dataran rendah dan 21 ° C untuk daerah dataran tinggi, biasanya panas dan cerah sepanjang tahun.
Curah hujan umum terjadi sepanjang tahun dan dipengaruhi oleh timur laut (November hingga Maret) dan musim hujan
barat daya (Mei hingga September).
Studi ini dilakukan di kabupaten Kudat (Gambar 1) yang menerima volume hujan tinggi selama musim timur laut tetapi
lebih sedikit hujan selama musim barat daya. Populasi kabupaten Kudat adalah sekitar 85.300 pada Juli 2010 dengan
mayoritas etnis Rungus [39]. Mereka tinggal di beberapa dusun yang masing-masing terdiri dari beberapa rumah atau
rumah panjang. Penduduk desa mempraktikkan pertanian swidden, menanam padi, jagung, dan sayuran untuk konsumsi
mereka sendiri. Beberapa keluarga mungkin memiliki perkebunan kecil kelapa, karet atau kelapa sawit sendiri tetapi
banyak yang bekerja sebagai buruh di perkebunan kelapa sawit.
Pengambilan sampel Anopheles nyamukdilakukan di desa Paradason [40] (6 ° 46′11,75′ ′N, 116 ° 47′3,23′ ′E) yang
memiliki 28 rumah tangga dan 122 penduduk di bulan Oktober
. Chua et al. Vektor Parasit (2019) 12: 364 3 dari 13 2013 sensus (Gbr. 1). Sebelum dan dalam periode penelitian, lima kasus
malaria knowlesi telah dilaporkan dari desa ini. Monyet ekor panjang juga terlihat di daerah sekitarnya. Desa ini memiliki
luas sekitar 1,98 km2 yang terdiri dari kawasan hutan, perkebunan, pertanian dan pemukiman manusia. Lima jenis habitat
dipilih: tepi hutan antara hutan sekunder dan area gundul (FE); area bermain (atau area terbuka) yang dikelilingi oleh
pohon-pohon kecil termasuk pohon bambu, kelapa dan karet tempat para pemuda desa berkumpul pada malam hari untuk
bermain sepak bola (PG); sebuah area di luar rumah panjang (LH); sebuah pertanian yang diubah menjadi perkebunan
kelapa sawit (OP); dan area semak semak dengan rumput kecil dan tinggi dekat dengan perencanaan kelapa (BU) (Gbr. 2).
Nyamuk Anopheles dikumpulkan dengan metode human landing catch (HLC), dengan dua orang dalam satu tim, yang
melibatkan mengekspos bagian bawah kaki mereka untuk menarik nyamuk. Nyamuk yang mendarat dengan kakinya
ditangkap menggunakan tabung spesimen plastik (diameter 2 cm x 6 cm). Setiap nyamuk yang ditangkap ditempatkan
dalam tabung spesimen terpisah yang diberi label dengan waktu penangkapan. Nyamuk diambil sampelnya dari pukul 18:
00-06: 00 (12 jam). Pengambilan sampel dilakukan sebulan sekali selama 14 bulan mulai Oktober 2013 dan berakhir pada
Desember 2014 tanpa sampel pada Juni 2014. Data meteorologis seperti suhu, kelembaban, dan curah hujan diperoleh dari
stasiun meteorologi Kudat yang terletak 17 km dari desa Paradason .
Identifikasi morfologi dari Anopheles nyamuk Anopheles nyamuk tewas dengan menjaga mereka dalam freezer(- 20 °
C) dan setiap individu diidentifikasi berdasarkan karakteristik morfologi menggunakan diterbitkan tombol[41-44].
Anopheles Spesimendipasang pada strip Nu poly menggunakan pin mikro-headless ultra-tipis dan diidentifikasi di bawah
mikroskop senyawa. Setiap nyamuk individu disimpan secara terpisah dalam tabung microfuge yang bersih dan diangkut
ke Fakultas Kedokteran & Ilmu Kesehatan, Universiti Malaysia, Sabah, untuk diproses lebih lanjut.
Komposisi spesies, keanekaragaman dan kemerataan Indeks keanekaragaman Anopheles nyamukdi setiap tipe
habitat ditentukan menggunakan indeks Shannon-Wiener, H [45]. Indeks ini biasanya digunakan untuk mengkarakterisasi
keanekaragaman spesies dalam suatu komunitas yang bertanggung jawab atas kelimpahan dan kemerataan spesies yang
ada. Evenness mengasumsikan nilai antara 0 dan 1 dengan 1 menjadi formula lengkap, dari evenness. H = spesies dan Pi
Σ
adalah Si = 1 Piln indeks (proporsi Pi) adalah di mana dihitung dari berdasarkan S adalah spesies individu.

pada jumlahith Ekstraksi DNA total dari Anopheles nyamuk Setiap Anopheles individu ditempatkan secara terpisah
dalam mortar bersih dan jaringan dihomogenkan menggunakan alu steril. Total DNA diekstraksi dari setiap individu
menggunakan metode DTAB-CTAB [46] dengan
Gambar. 1 Peta yang menunjukkan lokasi kabupaten Kudat, lokasi desa Paradson dan lima jenis habitat (atau lokasi pengambilan sampel)
yang diberi label FE, PG, LH, OP dan BU. Singkatan: FE, tepi hutan antara hutan dan area gundul; PG, area bermain dikelilingi oleh pohon-
pohon kecil termasuk bambu, kelapa dan pohon karet; LH, area di luar rumah panjang; OP, perkebunan kelapa sawit; BU, daerah semak-
semak dengan rumput kecil dan tinggi di dekat perkebunan kelapa
Page Chua et al. Parasites Vectors (2019) 12: 364 4 dari 13 beberapa
modifikasi. Pertama, 600 μl larutan DTAB ditambahkan ke
dalam mortar dan jaringan ditumbuk menggunakan alu sampai dihomogenisasi. Kemudian, jaringan yang dihomogenisasi
dipindahkan ke dalam tabung microcentrifuge 1,5 ml yang bersih dan diinkubasi pada suhu 68 ° C selama 30 menit.
Selanjutnya, 700 μl kloroform ditambahkan ke dalam tabung microcentrifuge yang terbalik sepuluh kali untuk mencampur
isinya dan disentrifugasi pada 13.000× rpm selama 5 menit. Kemudian, 400 μl lapisan air atas dengan hati-hati
dipindahkan ke dalam tabung microcentrifuge 1,5 ml baru yang bersih dan dicampur dengan 900 μl pembalik μl steril
dHmicrocentrifuge 2O dan 100 μl tabung CTAB beberapa kali larutan. oleh gen- Tabung kemudian dibiarkan duduk pada
suhu kamar selama 5 menit dan berputar pada 13.000× rpm selama 10 menit. Supernan dibuang dan pelet DNA
ditangguhkan kembali dalam 300 μl larutan 1,2 M NaCl. Total DNA dipreparasi dengan menambahkan 750 μl etanol
absolut dan disentrifugasi pada 13.000× rpm selama 5 menit. Kemudian, supernatan dibuang dan DNA dicuci dengan 500
μl etanol 70% dan disentrifugasi pada 13.000× rpm selama 2 menit. DNA pelet adalah udara kering pada 45 ° C selama 10
menit, re-mempertahankan satu pended dalam 30 ml Tris-EDTA (pH8.0) buffer dan disimpan di - 30 ° C sampai
digunakan.
Deteksi parasit malaria Kehadiran parasit malaria di nyamuk terdeteksi menggunakan uji PCR bersarang dengan
menargetkan gen RNA ribosom (subunit ribosomal,subunit kecilSSU rRNA) Plasmodum. Pasangan primer PCR rPLU1
dan rPLU5 digunakan
dalam reaksi PCR pertama, sedangkan rPLU3 dan rPLU4 digunakan dalam reaksi kedua [47]. Untuk kontrol internal,
reaksi PCR bersarang lain dilakukan secara terpisah pada saat yang sama untuk memperkuat gen sitokrom c oksidase
subunit 2 (cox2) dari Anopheles [48]. Ketika spesimen ditemukan positif untuk parasit malaria, identifikasi lebih lanjut
dari Plasmodium sp. dilakukan menggunakan sembilan primer spesifik spesies (file tambahan 1: Tabel S1). Untuk kontrol
positif, DNA positif yang diketahui dari setiap Plasmodium spesiesdiperoleh dari Laboratorium Parasitologi dan
Entomologi Medis, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universiti Malaysia Sabah dan diuji dengan sembilan
primer PCR spesifik spesies (file tambahan 2: Gambar ure S1).
Reaksi spesifik genus PCR dan spesies spesifik dilakukan dalam volume akhir 25,0 μl. Komponen reaksi disusun dengan
mencampur 5,0 μl5× bufferPCR (Promega, Madison, WI, USA), 0,5 μl (10 mM) dNTPs (Promega), 3,0 μl (25 μM)
forward dan reverse primer, mM) MgCl0 .3 μl dari (5.0 2, 1.0 μl dari (10 U / μl) Taq DNA polimerase (Promega), 2.0 μl
dari templat DNA dan steril daridHpertama2PCRO, hingga 2.0 25.0 μl dari μl volume PCR akhir produk Setelah selesai
digunakan sebagai templat DNA pada PCR kedua. Reaksi dilakukan menggunakan thermal cycler (T100 TM Thermal
Cycler, Bio-Rad, California, CA, USA) dengan kondisi sebagai berikut: awal denaturasi pada 95 ° C selama 5 menit; 35
siklus denaturasi pada 94 ° C selama 1 menit, anil selama 1 menit dan ekstensi pada 72 ° C selama 1 menit, ekstensi akhir
pada 72 ° C
Gambar. 2 Jenis habitat di mana nyamuk berada sampel adalah: a FE, tepi hutan antara hutan dan daerah berhutan; b PG, area bermain
dikelilingi dengan pohon-pohon kecil termasuk bambu, kelapa dan pohon-pohon karet; c LH, daerah di luar rumah panjang; d OP,
perkebunan kelapa sawit; dan e BU, area semak belukar dengan rumput kecil dan tinggi di dekat perkebunan kelapa
Page Chua et al. Vektor Parasit (2019) 12: 364 5 dari 13 selama
5 menit. Suhu anil yang digunakan didasarkan pada suhu optimal
untuk setiap set primer (Tambahan file 1: Tabel S1). Produk PCR dianalisis pada elektroforesis gel agarosa 1,5% yang
diwarnai denganRedSafeTM larutan pewarnaan asam nukleat(iNtRON Bioteknologi, Jungwon-Seongnam, Korea Selatan)
dan divisualisasikan menggunakan UV transilluminator.
Analisis hubungan antara An. balabacensis dan data meteorologi Korelasi antara jumlah An. balabacensis yang
ditangkap per orang per malam dengan suhu, kelembaban relatif, dan curah hujan dari stasiun meteorologi Kudat diperiksa
menggunakan koefisien korelasi linear Pearson (r) dan diperiksa untuk signifikansi. Tes dilakukan menggunakan SPSS
v.18 untuk Windows 10.
Analisis kelimpahan An. balabacensis Analisis statistik kelimpahan nyamuk dilakukan dengan menggunakan
perangkat lunak pemrograman R untuk analisis statistik (v.3.2.2). Generalized linear mixed models (GLMM) dibuat untuk
menguji variasi kelimpahan An. balabacensis terkait dengan bulan pengumpulan, jenis habitat dan waktu menggigit.
Model ini termasuk variabel prediktor tetap dan acak dalam analisis. Waktu menggigit dikategorikan menjadi empat
periode untuk total tangkapan An. balabacensis: 18: 00–21: 00 h (dini hari); 21:00 - 00:00 h (tengah malam); 0: 00–03: 00
h (dini hari); dan 03: 00- 06:00 (subuh). Dalam analisis, jenis habitat dan waktu menggigit dianggap sebagai efek tetap.
Bulan dipasang secara alternatif sebagai tetap (untuk memprediksi nilai bulanan) dan efek acak (untuk menguji perbedaan
antara jenis
habitat dan waktu menggigit sambil mengendalikan variasi musiman). Untuk menentukan model terbaik, distribusi
binomial dan Poisson negatif termasuk nol inflasi diuji dalam model.Tukey post-hoc Tesdigunakan untuk membandingkan
cara yang diprediksi antara efek tetap dan interaksi antara dua efek tetap.
Hasil Anopheles spesies komposisi, keragaman dan kemerataan Sebanyaksepuluh Anopheles spesiestercatat dari
desa Paradason (Tabel 1).Jumlah spesies terbanyak dicatat dari semak belukar (BU, 10 spesies) dan paling sedikit berasal
dari perkebunan kelapa sawit (OP, 4 spesies). Anopheles balabacensis adalah spesies dominan di semua jenis habitat
dengan jumlah total yang ditangkap mencapai 90% (1437/1599). Jumlah tertinggi Anopheles tercatat dari tepi hutan (FE,
21,58%) diikuti oleh kelapa sawit (OP, 20,39%) dan semak semak (BU, 20,39%), rumah panjang (LH, 19,07%) dan taman
bermain (PG, 18,57) %). Secara keseluruhan, keanekaragaman Anopheles nyamukdi desa Parada dianggap rendah seperti
ditunjukkan oleh nilai kemerataan 0,2.
Kelimpahan An. balabacensis menurut bulan dan tipe habitat Total 1437 individu An. balabacensis ditangkap
selama 70 malam pengambilan sampel mengumpulkan semua habitat di desa Paradason, setara dengan 10,3 ± 0,47 gigitan
per orang per malam. Fluktuasi dalam jumlah bulanan An. balabacensis yang ditangkap di lima jenis habitat menunjukkan
tren yang sama (Gambar 3). GLMM memperkirakan angka bulanan rata-rata tertinggi dari An. balabacensis untuk
 Tabel 1 Jumlah total Anopheles yang spesiesditangkap dari setiap jenis habitat dari Oktober 2013 hingga Desember
2014
Spesies FE PG LH OP BU Total
An. balabacensis 316 264 274 299 284 1437 An. barbumbrosus 13 14 20 21 24 92 An. donaldi 9 4 2 0 4 19 An. maculatus 2 10 5 0 5 22 An.
nigerrimus 3 0 1 0 1 5 An. peditaeniatus 0 3 0 0 1 4 An. separatus 0 0 0 0 1 1 An. sundaicus 0 0 1 0 1 2 An. tessellatus 2 2 2 4 4 14 An.
umbrosus 0 0 0 2 1 3 Total no. dari spesimen 345 297 305 326 326 1599 Total no. spesies 6 6 7 4 10 10 indeks Shannon-Wiener, H 0,40
0,50 0,45 0,34 0,57 0,47 Hmaks 1,79 1,79 1,95 1,39 2,30 2,30 Kerataan 0,22 0,28 0,23 0,25 0,25 0,25 0,20
Singkatan: FE, tepi hutan; PG, taman bermain; LH, rumah panjang; OP, perkebunan kelapa sawit; BU, semak semak
Halaman 6 dari 13 Chua et al. Vektor Parasit (2019) 12: 364
 Gambar. 3 Jumlah An. balabacensis terperangkap di lima jenis habitat di setiap bulan dari Oktober 2013 hingga Desember 2014. FE, tepi
hutan antara hutan dan kawasan hutan gundul; PG, area bermain dikelilingi oleh pohon-pohon kecil termasuk bambu, kelapa dan pohon
karet; LH, area di luar rumah panjang; OP, perkebunan kelapa sawit; dan BU, area semak semak dengan rumput kecil dan tinggi di dekat
perkebunan kelapa
(15,0 ± 3,06 gigitan per orang per malam) dan terendah untuk
Page Chua et al. Vektor Parasit (2019) 12: 364 7 dari 13 Februari
Agustus (5,40 ± 1,52 gigitan per manusia per malam). Menyesuaikan model dengan distribusi Poisson dan
membandingkan rata-rata yang diperkirakan antara semua bulan menunjukkan bahwa ada perbedaan yang signifikan
hanya antara Desember 2013 dan Agustus 2014 (12,0 ± 1,55 gigitan per orang per malam dibandingkan 5,40 ± 1,52
gigitan per orang per malam, Z = 3,44, P = 0,0372) dan antara Februari 2014 dan Agustus 2014 (15,0 ± 3,06 gigitan per
orang per malam dibandingkan 5,40 ± 1,52 gigitan per manusia per malam, Z = - 3,59, P = 0,0231).
Gigitan rata-rata per orang per malam untuk setiap jenis habitat yang diprediksi oleh GLMM adalah 10,7 ± 1,67, 10,1 ±
1,58, 9,8 ± 1,03, 9,3 ± 1,50 dan 9,0 ± 1,50 untuk tepi hutan, perkebunan kelapa sawit, semak-semak, rumah panjang dan
taman bermain, masing-masing. secara aktif. Namun, menggunakan distribusi Poisson dalam model, tidak ada perbedaan
yang terdeteksi dalam jumlah yang ditangkap antara berbagai jenis habitat.
Selama periode penelitian, kisaran suhu rata-rata bulanan, kelembaban relatif dan curah hujan di kabupaten Kudat adalah
25,9–28,4 ° C, masing-masing 80,4–87,5% RH dan 0–27,8 mm (Gbr. 4). Analisis jumlah An. balabacensis yang
tertangkap pada setiap malam pengambilan sampel terhadap faktor lingkungan pada hari itu menunjukkan korelasi yang
signifikan antara jumlah An. balabensens ditangkap dengan suhu (r = - 0,243, P = 0,043), tetapi tidak dengan kelembaban
relatif (r = 0,220, P = 0,067) dan curah hujan (r = 0,204, P = 0,090) (Gbr. 5).
Menggigit waktu An. balabacensis Secara keseluruhan, waktu menggigit An. balabacensis dari berbagai jenis habitat
serupa dengan waktu menggigit puncak 19: 00-20: 00 jam di PG, LH, OP dan BU dan 20: 00–21: 00 jam di FE (Gambar
6). Lebih An. balabacensis ditangkap dalam tiga jam pertama setelah senja (18: 00–21: 00 h) dengan jumlah menurun
secara bertahap sampai fajar. Hanya
satu gigitan nyamuk per orang atau kurang dalam setiap jam setelah tengah malam direkam. Pas model dengan distribusi
Poisson, ada perbedaan yang signifikan antara hasil tangkapan di awal malam dibandingkan dini hari, malam dini
dibandingkan fajar, larut malam dibandingkan dini hari, larut malam dibandingkan fajar, dan dinihari dibandingkan fajar
(Tabel 2).
Analisis interaksi antara tipe habitat dan periode waktu menunjukkan bahwa hanya tiga interaksi yang signifikan, yaitu FE
× dini hari versus FE × subuh, BU × dini hari versus BU × subuh, dan BU × larut malam versus BU× subuh (file
tambahan 3: Tabel S2).
Kehadiran parasit malaria dalam Anopheles spesimen Sebanyak 1586 Anopheles spesimendiuji untuk parasit
malaria menggunakan uji PCR, dan hanya 23 (1,45%) yang ditemukan positif. Ini semua adalah An. balabacensis,
merupakan 1,6% atau 23/1425 dari spesies yang dikumpulkan. Sebagian besar spesimen yang terinfeksi ditangkap di
perkebunan kelapa sawit dan semak belukar, dan pada awal dan larut malam. Ini An. balabacensis terinfeksi dengan satu
atau dua spesies malaria simian dengan P. inui menjadi spesies yang paling umum, sedangkan P. knowlesi hanya
ditemukan di dua nyamuk saja (Tabel 3; angka-angka representatif dari gel aga-rose ditunjukkan pada file tambahan 4:
Gambar S2 ).
Diskusi Kami melakukan survei di desa Paradason, di distrik Kudat, Sabah untuk menyelidiki apakah keragaman dan
kelimpahandewasa Anopheles dipengaruhi oleh jenis habitat yang umumnya ditemukan di daerah pedesaan Sabah, yaitu
tepi hutan, taman bermain, rumah panjang. , perkebunan kelapa sawit dan semak belukar.
Kami mengumpulkan sepuluh Anopheles spesiesdari semua habitat, di antaranya An. balabacensis adalah spesies dominan
di semua jenis habitat. Dominasi spesies ini di Divisi Kudat juga dicatat sebelumnya [14],
Gambar. 4 Suhu rata-rata bulanan, kelembaban relatif dan curah hujan dan jumlah An. balabacensis dikumpulkan di kabupaten Kudat dari
Oktober 2013 hingga Desember 2014
Halaman Chua et al. Vektor Parasit (2019) 12: 364 8 dari 13 Gambar. 5 Plot of An. balabacensis (gigitan / pria / malam) yang ditangkap pada setiap
malam pengambilan sampel (n = 70) terhadap faktor lingkungan: suhu rata-rata harian; berarti kelembaban relatif harian; dan rata-rata curah hujan
harian

meskipun penelitian kami di desa Tajau Laut yang terletak lebih berbeda di seluruh negara bagian Sabah yang lebih luas, mungkin
jauh di utara Kudat menunjukkan bahwa An. balabacensis dan karena heterogenitas di lingkungan sekitarnya. Misalnya, di
An. tessellatus hampir sama-sama umum [48]. Namun, perbedaan daerah utara kabupaten Ranau, An. maculatus tercatat sebagai
dalamdominan Anopheles spesiestelah dilaporkan di lokasi yang spesies dominan, diikuti oleh An. balabacensis dan An. donaldi
 [49], sementara di distrik Kinabatangan An. donaldi adalahlingkungan buatan, dengan kepadatan yang relatif tinggi di
spesies dominan menggantikan An. balabacensis, mungkindaerah perencanaan dan pertanian. Ini terbukti dengan kehadiran
karena perkembangan dan aktivitas pengendalian malaria yangAn.balabacensis situs penangkarandiamati di perkebunan kelapa
dilakukan di sana [50]. Data terakhir kami dari desa Paus disawit dekat pemukiman manusia. Kesimpulan serupa ditarik
bagian selatan kabupaten Ranau menunjukkan bahwa spesiesuntuk An. cracens di Semenanjung Malaysia [54] dan An. dirus
yang dominan adalah An. donaldi diikuti oleh An. balabacensis(sl.) di Thailand [55], keduanya telah beradaptasi dan menjajah
dan An. barbumbrosus (data tidak dipublikasikan). Lebih jauh ketepi hutan dan perkebunan setelah deforestasi.
selatan di distrik Keningau, di desa Keritan Ulu, An. maculatus, Habitat semak semak mencatat jumlah tertinggi
An. balabacensis dan An. barbum-brosus hampir samaAnopheles spesies. Ini bisa jadi akibat semak dan semak-semak
banyaknya (File tambahan 5: Tabel S3). Secara keseluruhan,yang menyediakan tempat berlindung yang cukup untuk
keanekaragaman Anopheles spesiesdi desa Paradason dianggapberistirahat sebelum dan sesudah makan darah [56], dan tempat
rendah seperti yang ditunjukkan oleh indeks kerataan karenateduh untuk tempat berkembang biak di badan air permanen dan
melimpahnya jumlah An. balabacensis di semua jenis habitat. sementara. Di daerah Paradason, habitat semak ini diamati dekat
Anopheles balabacensis telah dikenal sebagaidominan dandengan pemukiman manusia, pertanian, perkebunan dan daerah
umum Anopheles spesiesdi Divisi Kudat Sabah sejak 1980-angundul, yang bisa menjadi sumberinfektif Anopheles. Selain itu,
[38] dan sebagai vektor malaria manusia yang efisien di Sabahpasukan kera ekor panjang juga diamati di lokasi penelitian
sejak 1950-an [51, 52]. Sekarang, hampir 40 tahun kemudian,terutama di pagi hari (06: 00-07: 00 jam) dan malam (16: 00-18:
spesies ini masih menduduki peringkat tinggi di antaradominan00 h) yang datang dari daerah hutan terdekat ke kebun kelapa
Anopheles spesiesdi kabupaten Kudat meskipun ada untuk mencari makan. Monyet-monyet ini positif untuk P.
perubahan penggunaan lahan dan tutupan lahan yang signifikan, knowlesi [57],seperti orang-orang di bagian lain dari Malaysia
karena pengembangan pemukiman, infrastruktur, pertanian dan yang mencatat 50-97% positif[58-60].
perkebunan manusia [8, 53]. Temuan kami menunjukkan bahwa Meskipun kegiatan hutan sebelumnya telah dikaitkan
An. balabacensis dapat beradaptasi dan mampu berkembang di dengan peningkatan risiko manusia P. knowlesi dalam
Halaman Chua et al ini. Parasites Vectors (2019) 12: 364 9 dari 13 Gambar. 6 Rata-rata jumlah gigitan / pria / malam (dan 95% bar kesalahan
standar) dari An. balabacensis dicatat dalam setiap jam untuk berbagai jenishabitat

kawasan[61], analisis GLMM menunjukkan bahwa tidak adaMeskipun HLC dilakukan pada malam yang berbeda di setiap
perbedaan dalam jumlah An. balabacensis yang ditangkap ditipe habitat yang dapat menimbulkan bias di antara pengambilan
berbagai tipe habitat, mengindikasikan individu memiliki risikosampel, An. balabacensis diketahui memiliki jarak terbang
terkena nyamuk yang terinfeksi di seluruh tipe habitat. pendek dengan rata-rata jarak terbang maksimum
Page Chua et al. Vektor Parasit (2019) 12: 364 10 dari 13 Tabel 2 Laju menggigit rata-rata untuk setiap periode waktu tangkapan
seperti yang diprediksi oleh GLMM

Periode waktu Waktu Rata-rata ± SE (gigitan / lelaki / periode waktu) Perbedaan yang signifikan a

Dini malam 18: 00–21 : 00 h 3,9 ± 0,72 Malam dini vs Larut malam: P = 0,2472;
Early night vs Predawn: P
<0,0001; Larut malam 21: 00–00: 00 jam 2,8 ± 0,53 Dini malam vs Dawn: P <0,0001;
Larut malam vs Predawn: P =
0,0024; Predawn 00: 00–03: 00 h 1.4 ± 0.29 Larut malam vs Dawn: P <0.0001;
Predawn vs Dawn: P =
0,0011 Fajar 03: 00-06: 00 h 0,7 ± 0,11

a Terdeteksi oleh tes Tukey antara pasangan periode waktu

Tabel 3 Jumlah Plasmodium yangterinfeksi An. balabacensis tertangkap dari setiap jenis habitat, kali menggigit mencatat
dan Plasmodium spesiessebagai dideteksi menggunakan PCR assay

Habitat No. An terinfeksi.balabacensis Waktu menggigit Plasmodium spp.

Tepi hutan (FE) (n = 315) 4 Dini malam P. knowlesi + P. cynomolgi

Larut malam (n = 2) P. inui, P. cynomolgi Predawn P. inui Playground (PG) (n = 260) 1 Dini malam P. inui Longhouse (LH) (n = 270) 4
 Larut malam P. inui
Predawn (n = 2) P. inui, P. cynomolgi Fajar P. coatneyi Perkebunan kelapa sawit (OP) (n = 299) 7 Dini malam (n = 4) P. inui (n = 3), P. coatneyi
Larut malam (n = 2) P. inui, P. fieldi + P. cynomolgi Fajar P. inui Semak belukar (BU) (n = 281) 7 Awal malam (n = 2) P. inui, P. inui + P. cynomolgi
Larut malam (n = 2) P. coatneyi, P. knowlesi + P. inui Predawn (n =
2) P. cynomolgi (n = 2) Fajar P. inui + P. cynomolgi

Singkatan: n, jumlah spesimen

kurang dari 500 meter [62]. Ini menyarankan An. balabacase(18: 00–00: 00 h) dibandingkan dengan mereka yang tinggal di
cenderung tetap dekat dengan tempat berkembang biak, sepertidalam [64]. The number of Anopheles mosquitoes seeking blood
yang diamati dengan An. farauti (sl) [10] dan melakukan HLCmeals at night might be dependent on natural prefer- ences, host
pada malam yang berbeda di antara tipe-tipe habitat tidakavailability and environmental conditions such as temperature,
mungkin secara substansial mempengaruhi hasil penelitian ini. relative humidity, rainfall, moon- light and wind speed [65–67].
Data pada waktu menggigit menunjukkan bahwa An.Anopheles balabacensis in this study area showed a significant
balabensensis mulai menggigit secara aktif segera setelah harinegative correlation with temperature but did not show a
gelap, terutama di tepi hutan atau daerah semak-semak yang telahsignificant correla- tion with the increment of relative humidity
ditebangi, menyoroti perlunya langkah-langkah pengendalianand rainfall. The lack of correlation between the mosquito catch
vektor yang menargetkan saat ini ketika orang tidak mungkinand rainfall could be due to the localized variations in rain- fall
tidur di bawah kelambu. . Sebuah studi sebelumnya [63] jugaand microclimate as data was only available from the Kudat
menunjukkan lebih banyak An. balabacensis menggigit manusiameteorological station, located 17 kilometers from the sampling
di hutan bekas tebangan dibandingkan dengan hutan cagar primersite at Paradason village.
dan perawan. Studi ini tidak mengidentifikasi perbedaan yang Only 1.45% of all Anopheles specimens were found
signifikan dalam kelimpahan An. balabacensis antara awal daninfected with simian Plasmodium and of these only An.
larut malam; Namun, paparan manusia mungkin lebih tinggi dibalabacensis was positive. However, since whole mos- quitoes
malam hari ketika orang lebih cenderung mengunjungiwere processed, infectious (oocyst positive) and infective
lingkungan ini. Sebuah studi sebelumnya di Kudat menunjukkan(salivary glands positive) individuals cannot be differentiated.
risiko digigit oleh An. balabacensis lebih tinggi bagi merekaMost of the infections were by single
yang tinggal di luar rumah setelah senja
Page Chua et al. Parasites Vectors (2019) 12:364 11 of 13 species, P. inui (47.8%), followed by P. cynomolgi (17.4%). In
addition, the two mosquitoes infected with P. knowlesi were also co-infected either with P. inui or P. cynomolgi. These
two specimens were caught at the forest edge and shrub bushes habitats, respectively, where a troop of long-tailed
macaques had been observed.
Anopheles balabacensis is a vector for P. knowlesi as well as for other simian malaria parasites [14, 64]. Fur- thermore, we
could not detect any human malaria par- asites by PCR in the Anopheles specimens although P. falciparum and P. vivax
cases have been reported in Kudat district [19, 68]. This contrasts with findings in Vietnam in which An. dirus (sl.), a
primary vector for P. knowlesi, had co-infections with P. vivax and P. falci- parum [31, 69]. The majority of the positive
An. balaba- censis was infected with P. inui, another species of simian malaria parasite that has a high possibility of
becoming zoonotic. Although there has not yet been a report of naturally acquired P. inui in humans, experimentally it has
been shown that humans are susceptible to this spe- cies and will develop fever if infected [70]. Another sim- ian
Plasmodium that is of great concern is P. cynomolgi as this has been reported infecting humans under natu- ral conditions
[71, 72]. Furthermore, the real number of P. cynomolgi infection in humans might be underesti- mated as this species
could be misidentified as P. vivax by microscopy [71].
Although there was no difference in vector densities, molecular results indicated that a higher proportion (65.2%) of
infected An. balabacensis was caught earlier in the evening between 18:00 h and midnight. Although these numbers are
limited, this suggests people may be at a higher risk of getting infected with malaria during this period, especially when
they are still outside their houses.
Conclusions The dominant Anopheles species in Kudat district is An. balabacensis which could be found equally
abundant in different types of habitats, suggesting people are at a risk of exposure to infected vectors across a range of
environ- ments. Further work is needed to characterise the breed- ing sites within these different habitats. While limited
numbers of infected An. balabacensis were caught, the presence of infected vectors in oil palm estates demon- strates the
need for vector control measures targeting these habitats. Furthermore, mixed infections with P. knowlesi and other
 zoonotic malaria species illustrates the potential for spillover into human populations and the need for further surveillance.
While deforestation and agricultural expansion can create economic oppor- tunities, these changes may also increase
spatial over- lap between human, macaque and vector populations
in new habitat types, presenting a challenge for malaria elimination.
Additional files
Additional file 1: Table S1. PCR primers used for detecting Plasmodium spp. in Anopheles specimens.
Additional file 2: Figure S1. Amplification of known Plasmodium DNA using Plasmodium genus and species-specific PCR primers. Lanes
M: 1.0 kb DNA ladder (Promega); Lane a: genus Plasmodium, 240 bp (rPLU3 + rPLU4); Lane b: P. coatneyi, 504 bp (PctF1 + PctR1); Lane
c: P. inui, 479 bp (PinF2 + INAR3); Lane d: P. fieldi, 421 bp (PfldF1 + PfldR2); Lane e: P. cynomolgi, 137 bp (CY2F + CY4R); Lane f: P.
knowlesi, 424 bp (PkF1140 + PkR1550); Lane g: P. falciparum, 370 bp (NewPLFshort + FARshort); Lane h: P. vivax, 476 bp (NewPLFshort
+ VIRshort); Lane i: P. malariae, 241 bp (New- PLFshort + MARshort); Lane j: P. ovale, 407 bp (NewPLFshort + OVRshort); Lane k: negative
control (no DNA template).
Additional file 3: Table S2. Mean interaction statistic between habitat type and time period as predicted by GLMM. Habitat types: FE: forest
edge; PG: playground; LH: longhouse; OP: oil palm plantation; BU: shrub bushes. Time periods are: early night (18:00–21:00 h); late night
(21:00–00:00 h); predawn (00:00–03:00 h); dawn (03:00–06:00 h).
Additional file 4: Figure S2. Detection and identification of Plasmodium in Anopheles. Top: Anopheles specimens PD171-PD183 using
Plasmodium genus-specific PCR primers. Internal control targeting cox2 gene of Anopheles was used. The numbers represent replicate 1
and 2. Lanes M: 1.0 kb DNA ladder; J: infected Anopheles with Plasmodium; K: non-infected Anopheles; L: negative control (no DNA
template). Bottom: Anopheles specimen PD178 using nine species-specific PCR primers. Lanes M: 1.0 kb DNA ladder; a: genus
Plasmodium; b: P. coatneyi; c: P. inui; d: P. fieldi; e: P. cynomolgi; f: P. knowlesi; g: P. falciparum; h: P. vivax; i: P. malariae; j: P. ovale; k:
negative control.
Additional file 5: Table S3. Total Anopheles specimens collected at study sites in Paus, Ranau and Keritan Ulu, Keningau.
Abbreviations PCR: polymerase chain reaction; GLMM: generalised linear mixed model; MHa: million hectares; HLC: human landing catch;
DNA: deoxyribonucleic acid; DTAB: dodecyltrimethylammonium bromide; CTAB: cetyltrimethylammonium bromide; SSU rRNA: small subunit
ribosomal RNA; cox2: cytochrome c oxidase subunit II.
Acknowledgments The authors would like to acknowledge the Universiti Malaysia Sabah for all the research facilities provided, Mr Fazreen
and Mr Nemran for helping in the fieldwork. We would also like to acknowledge the community of Paradason for their cooperation and warm
hospitality during this study.
Authors' contributions THC, IV, KF and CJD designed the conceptualization of the study. CJD acquired the funding. THC, BOM, IV and
CJD designed the experiments. BOM and THC implemented the experiments and collected the data. BOM identified the specimens and
carried out molecular analysis. THC and BOM carried out statis- tical analysis. BOM and THC drafted the manuscript. All authors contributed
to drafting the manuscript. Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.
Funding This study was funded by the Medical Research Council, Natural Environment Research Council, Economic and Social Research
Council, and Biotechnology and Biosciences Research Council through the Environmental and Social Ecol- ogy of Human Infectious
Diseases Initiative, grant no. G1100796.
Availability of data and materials The datasets supporting the conclusions of this article are included within the article and its additional
files.
Page 12 of 13 Chua et al. Parasites Vectors (2019) 12:364

Ethics approval and consent to participate This study was approved by Infectious and Tropical Diseases, London School of Hygiene and Tropical
the National Medical Research Register of the Malaysian Ministry of Health Medicine, London, UK.
(NMRR, Reference No. NMRR-12-786-13048). Con- sent to carry out
mosquito collection was obtained from the village council or the village Received: 18 March 2019 Accepted: 19 July 2019
headman and the land owners. All volunteers who carried out mosquito
collections signed informed consent forms and were provided with
antimalarial prophylaxis during the study period.

Consent for publication
Not applicable.
Competing interests The authors declare that they have
no competing interests.
Author details 1 Department of Pathobiology and Medical Diagnostics,
Faculty of Medicine and Health Sciences, Universiti Malaysia Sabah, Kota
Kinabalu, Sabah, Malaysia. 2 Department of Parasitology, Faculty of
3
Medicine, University of Malaya, Kuala Lumpur, Malaysia. Faculty of
References 1. Gaveau DLA, Sheil D, Husnayaen A, Salim MA,
Arjasakusuma S, Ancrenaz
M, et al. Rapid conversions and avoided deforestation: examining four
decades of industrial plantation expansion in Borneo. Sci Rep.
2016;6:32017. 2. Yasuoka J, Levins R. Impact of deforestation and
agricultural develop-
ment on anopheline ecology and malaria epidemiology. Am J Trop Med
Hyg. 2007;76:450–60. 3. Gaveau DLA, Sloan S, Molidena E, Yaen H,
Sheil D, Abram NK, et al. Four
decades of forest persistence, clearance and logging on Borneo.
Silakan SATU. 2014;9:e101654. 4. Imai N, White MT, Ghani AC,
Drakeley CJ. Transmission and control of
 Plasmodium knowlesi: a mathematical modelling study. PLoS Negl Trop family clusters and wide age distributions. Malar J. 2012;11:401. 20.
Dis. 2014;8:e2978. 5. Gunggut H, Saufi K, Zaaba Z, Liu MSM. Where Barber BE, William T, Grigg MJ, Menon J, Auburn S, Marfurt J, et al. A
have all the forests prospective comparative study of knowlesi, falciparum, and vivax malaria
gone Deforestation in land below the wind. Procedia Soc Behav Sci. in Sabah, Malaysia: high proportion with severe disease from Plasmodium
2014;153:363–9. 6. Millar SB, Cox-Singh J. Human infections with knowlesi and Plasmodium vivax but no mortality with early referral and
Plasmodium knowlesi— artesunate therapy. Clin Infect Dis. 2013;56:383–97. 21. Goh XT, Lim YA,
zoonotic malaria. Clin Microbiol Infect. 2015;21:640–8. 7. World Vythilingam I, Chew CH, Lee PC, Ngui R, et al. Increased
Health Organization Malaria Policy Advisory Committee. Outcomes detection of Plasmodium knowlesi in Sandakan division, Sabah as
from the evidence review group on Plasmodium knowlesi. 2017. http:// revealed by PlasmoNexTM. Malar J. 2013;12:264. 22. Jiram AI, Hisam S,
www.who.int/malar ia/mpac/mpac-mar20 17-plasm odium -knowl esi- Reuben H, Husin SZ, Roslan A, Ismail WRW. Sub- microscopic evidence
prese ntati on. Accessed 7 Apr 2018. 8. Fornace KM, Abidin TR, of the simian malaria parasite, Plasmodium knowlesi, in an orang asli
Alexander N, Brock P, Grigg MJ, Murphy A, community. SE Asian J Trop Med Public Health. 2016;47:591–9. 23. Lee
et al. Association between landscape factors and spatial patterns of WC, Chin PW, Lau YL, Chin LC, Fong MY, Yap CJ, et al. Hyperparasitae-
Plasmodium knowlesi infections in Sabah, Malaysia. Emerg Infect Dis. mic human Plasmodium knowlesi infection with atypical morphology in
2016;22:201–8. 9. Morgan K, Somboon P, Walton C. Understanding peninsular Malaysia. Malar J. 2013;12:88. 24. Yusof R, Lau YL, Mahmud
Anopheles diversity in R, Fong MY, Jelip J, Ngian HU, et al. High pro-
Southeast Asia. Rijeka: InTech; 2013. p. 327–55. 10. Sinka ME, portion of knowlesi malaria in recent malaria cases in Malaysia. Malar J.
Bangs MJ, Manguin S, Chareonviriyaphap T, Patil AP, Temperley WH, et 2014;13:168. 25. Figtree M, Lee R, Bain L, Kennedy T, Mackertich S,
al. The dominant Anopheles vectors of human malaria in the Asia- Pacific Urban M, et al. Plas- modium knowlesi in human, Indonesian Borneo.
region: occurrence data, distribution maps and bionomic précis. Parasit Emerging. Infect Dis. 2010;16:672–4. 26. Setiadi W, Sudoyo H,
Vectors. 2011;4:89. 11. Bortel WV, Harbach RE, Trung HD, Roelants P, Trimarsanto H, Sihite BA, Saragih RJ, Juliawaty R, et al.
Backeljau T, Coosemans M. A zoonotic human infection with simian malaria, Plasmodium knowlesi, in
Confirmation of Anopheles varuna in Vietnam, previously misidentified and central Kalimantan. Indonesia. Malar J. 2016;15:218. 27. Lubis IND,
mistargeted as the malaria vector Anopheles minimus. Am J Trop Med Wijaya H, Lubis M, Lubis CP, Divis PCS, Beshir KB, et al. Contribu-
Hyg. 2001;65:729–32. 12. Saeung A. Anopheles (Diptera: Culicidae) tion of Plasmodium knowlesi to multispecies human malaria infections in
species complex in Thailand: North Sumatera, Indonesia. J Infect Dis. 2017;215:1148–55. 28.
identification, distribution, bionomics and malaria-vector importance. Int J Ramaswami A, Pisharam JK, Aung H, Ghazala K, Maboud K, Chong VH,
Parasitol Res. 2012;4:75–82. 13. Vythilingam I, Tan CH, Asmad M, Chan et al. Co-incidental Plasmodium knowlesi and mucormycosis infections
ST, Lee KS, Singh B. Natural presenting with acute kidney injury and lower gastrointestinal bleeding.
transmission of Plasmodium knowlesi to humans by Anopheles latens in Am J Case Rep. 2013;14:103–5. 29. Jongwutiwes S, Putaporntip C,
Sarawak, Malaysia. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2006;100:1087–8. 14. Iwasaki T, Sata T, Kanbara H. Naturally
Wong ML, Chua TH, Leong CS, Khaw LT, Fornace K, Wan-Sulaiman acquired Plasmodium knowlesi malaria in human, Thailand. Emerg Infect
WY, Dis. 2004;10:2211–3. 30. Jongwutiwes S, Buppan P, Kosuvin R,
et al. Seasonal and spatial dynamics of the primary vector of Seethamchai S, Pattanawong U,
Plasmodium Sirichaisinthop J, et al. Plasmodium knowlesi malaria in humans and
knowlesi within a major transmission focus in Sabah, Malaysia. PLoS macaques, Thailand. Emerg Infect Dis. 2011;17:1799–806. 31. Marchand
Negl Trop Dis. 2015;9:e0004135. 15. Vythilingam I, Wong ML, Wan- RP, Culleton R, Maeno Y, Quang NT, Nakazawa S. Co-infections
Yussof WS. Current status of Plasmodium of Plasmodium knowlesi, P. falciparum, and P. vivax among humans
knowlesi vectors: a public health concern? Parasitology. and Anopheles dirus mosquitoes, Southern Vietnam. Emerg Infect Dis.
2018;145:32–40. 16. Jeslyn WPS, Huat TC, Vernon L, Irene LMZ, Sung 2011;17:1232–8. 32. Van den Eede P, Van HN, Overmeir CV,
LK, Jarrod LP, et al. Molec- Vythilingam I, Duc TN, Hung LX,
ular epidemiological investigation of Plasmodium knowlesi in humans and et al. Human Plasmodium knowlesi infections in young children in central
macaques in Singapore. Vector Borne Zoonotic Dis. 2011;11:131–5. 17. Vietnam. Malar J. 2009;8:249. 33. Ng OT, Ooi EE, Lee CC, Lee PJ, Ng
Singh B, Sung LK, Matusop A, Radhakrishnan A, Shamsul SSG, Cox- LC, Wong PS, et al. Naturally acquired
Singh
human Plasmodium knowlesi infection, Singapore. Emerg Infect Dis.
J, et al. A large focus of naturally acquired Plasmodium knowlesi infections 2008;14:814–6. 34. Luchavez J, Espino F, Curameng P, Espina R, Bell D,
in human beings. Lanset. 2004;363:1017–24. 18. Lee KS, Cox-Singh J, Chiodini P, et al. Human
Singh B. Morphological features and differential
infections with Plasmodium knowlesi, the Philippines. Emerg Infect Dis.
counts of Plasmodium knowlesi parasites in naturally acquired human 2008;14:811–3. 35. Jiang N, Chang Q, Sun X, Lu H, Yin J, Zhang Z, et
infections. Malar J. 2009;8:73. 19. Barber BE, William T, Dhararah P, al. Co-infections with
Anderios F, Grigg M, Yeo TW, et al. Epide-
Plasmodium knowlesi and other malaria parasites, Myanmar. Emerg
miology of Plasmodium knowlesi malaria in north-east Sabah, Malaysia: Infect Dis. 2010;16:1476–8.
Page Chua et al. Parasites Vectors (2019) 12:364 13 of 13 36. Khim N, Siv S, Kim S, Mueller T, Fleischmann E, Singh B, et al. Plasmodium
knowlesi infection in humans, Cambodia, 2007–2010. Emerg Infect Dis. 2011;17:1900–2. 37. Iwagami M, Nakatsu M, Khattignavong P,
Soundala P, Lorphachan L, Keo-
malaphet S, et al. First case of human infection with Plasmodium knowlesi in Laos. PLoS Negl Trop Dis. 2018;12:e0006244. 38. Hii JLK, Kan
S, Vun YS, Chin KF, Tambakau S, Chan MKC, et al. Transmission
dynamics and estimates of malaria vectorial capacity for Anopheles bala- bacensis and An. flavirostris (Diptera: Culicidae) on Banggi island,
Sabah, Malaysia. Ann Trop Med Parasitol. 1988;82:91–101. 39. Sabah State Department of Health. 2016 Annual Report of Unit for
Control of Vector Borne Diseases (RKPBV), Division of Public Health, Sabah, Malaysia; 2016 (Jabatan Kesihatan Negeri Sabah. Laporan
Tahunan RKPBV 2016. Unit Rancangan Kawalan Penyakit Bawaan Vektor, Bahagian Kesihatan Awam, JKNS; 2016). 40. Fornace KM,
Herman LS, Abidin TR, Chua TH, Daim S, Lorenzo PJ, et al.
Exposure and infection to Plasmodium knowlesi in case study communi- ties in northern Sabah, Malaysia and Palawan, The Philippines.
PLoS Negl Trop Dis. 2018;12:e0006432. 41. Cagampang-Ramos A, Darsie Jr RF. Illustrated keys to the Anopheles
mosquitoes of the Philippine Islands. Malaria Eradication Training Center, Technical Report 70-1, USAF Fifth Epidemiological Flight. Manila:
PACAF; 1970. 42. Rattanarithikul R, Harrison B, Harbach RE, Panthusiri P, Coleman RE. Illus-
trated keys to the mosquitoes of Thailand IV. Anopheles. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 2006;37(2):1–128. 43. Reid JA.
Anopheline mosquitoes of Malaya and Borneo. Kuala Lumpur:
Government of Malaysia; 1968. 44. Sallum MAM, Peyton EL, Harrison BA, Wilkerson RC. Revision of the
Leucosphyrus group of Anopheles (Cellia) (Diptera, Culicidae). Rev Bras Entomol. 2005;49:1–152. 45. Shannon CE, Weaver W. The
mathematical theory of communication.
Urbana: University of Illinois Press; 1963. 46. Phillips A, Simon C. Simple, efficient, and nondestructive DNA extraction
protocols for arthropods. Ann Entomol Soc Am. 1995;88:281–3. 47. Singh B, Bobogare A, Cox-Singh J, Snounou G, Abdullah MS, Rahman
HA. A genus- and species-specific nested polymerase chain reaction malaria detection assay for epidemiologic studies. Am J Trop Med Hyg.
1999;60:687–92. 48. Hawkes F, Manin BO, Ng SH, Torr SJ, Drakeley C, Chua TH, Ferguson HM.
Evaluation of electric nets as means to sample mosquito vectors host seeking on humans and primates. Parasit Vectors. 2017;10:338. 49.
Rohani A, Chan ST, Abdullah AG, Tanrang H, Lee HL. Species com-
position of mosquito fauna in Ranau, Sabah, Malaysia. Trop Biomed. 2008;25:232–6. 50. Vythilingam I, Chan ST, Shanmugratnam C,
Tanrang H, Chooi KH. The
impact of development and malaria control activities on its vectors in the Kinabatangan area of Sabah, East Malaysia. Acta Trop.
2005;96:24–30. 51. Hii JLK, Vun YS. A study of dispersal, survival and adult population
estimates of the malaria vector, Anopheles balabacensis Baisas (Diptera: Culicidae) in Sabah, Malaysia. Trop Biomed. 1985;2:121–31. 52.
McArthur. The control of Anopheles leucospyrus. Malaria conference for
the Western Pacific and Southeast Asia Regions, Taipei, 15–27 November 1954. 53. Bryan JE, Shearman PL, Asner GP, Knapp DE, Aoro
G, Lokes B. Extreme dif-
ferences in forest degradation in Borneo: comparing practices in Sarawak, Sabah, and Brunei. Silakan SATU. 2013;8:e69679. 54. Jiram AI,
Vythilingam I, NoorAzian YM, Yusof YM, Azahari AH, Fong MY.
Entomologic investigation of Plasmodium knowlesi vectors in Kuala Lipis, Pahang, Malaysia. Malar J. 2012;11:213. 55. Rosenberg R, Andre
RG, Somchit L. Highly efficient dry season transmis- sion of malaria in Thailand. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1990;84:22–8. 56. Dewald JR,
Fuller DO, Müller GC, Beier JC. A novel method for mapping
village-scale outdoor resting microhabitats of the primary African malaria vector, Anopheles gambiae. Malar J. 2016;15:489.
57. Stark DJ, Fornace KM, Brock PM, Abidin TR, Gilhooly L, Jalius C, et al.
Long-tailed macaque response to deforestation in a Plasmodium knowlesi-endemic area. EcoHealth. 2019. https ://doi.org/10.1007/s1039 3-
019-01403 -9. 58. Akter R, Vythilingam I, Khaw LT, Qvist R, Lim YAL, Sitam FT, et al. Simian
malaria in wild macaques: first report from Hulu Selangor district, Selan- gor, Malaysia. Malar J. 2015;14:386. 59. Lee K, Divis PCS, Zakaria
SK, Matusop A, Julin RA, Conway DJ, et al. Plas-
modium knowlesi: reservoir hosts and tracking the emergence in humans and macaques. PLoS Pathog. 2011;7:e1002015. 60. Vythilingam I,
NoorAzian YM, Huat TC, Jiram AI, Yusri YM, Azahari AH, et al.
Plasmodium knowlesi in humans, macaques and mosquitoes in peninsu- lar Malaysia. Parasit Vectors. 2008;1:26. 61. Grigg MJ, Cox J,
William T, Jelip J, Fornace KM, Brock PM, et al. Individual-
level factors associated with the risk of acquiring human Plasmodium knowlesi malaria in Malaysia: a case-control study. Lancet Planet
Health. 2017;1:e97–104. 62. Verdonschot PFM, Besse-Lototskaya AA. Flight distance of mosquitoes (Culicidae): a metadata analysis to
support the management of barrier zones around rewetted and newly constructed wetlands. Limnologica. 2014;45:69–79. 63. Brant HL,
Ewers RM, Vythilingam I, Drakeley C, Benedick S. Vertical stratifi-
cation of adult mosquitoes (Diptera: Culicidae) within a tropical rainforest in Sabah, Malaysia. Malar J. 2016;15:370. 64. Manin BO, Ferguson
HM, Vythilingam I, Fornace K, William T, Torr SJ,
et al. Investigating the contribution of peri-domestic transmission to risk of zoonotic malaria infection in humans. PLoS Negl Trop Dis.
2016;10:e0005064. 65. Basseri H, Raeisi A, Khakha MJ, Pakarai A, Abdolghafar H. Seasonal
abundance and host-feeding patterns of anopheline vectors in malaria endemic area of Iran. J Parasitol Res. 2010. https ://doi.
org/10.1155/2010/67129 1. 66. Freire MG, Schweigmann NJ, Svagelj WS, Loetti MV, Jensen O, Burroni NE. Relationship between
environmental conditions and host-seeking activ- ity of Ochlerotatus albifasciatus (Diptera: Culicidae) in an agroecosystem and in an urban
area in Chubut, central Patagonia, Argentina. J Nat Hist. 2016;50:1369–80. 67. Stone C, Chitnis N, Gross K. Environmental influences on
mosquito
foraging and integrated vector management can delay the evolution of behavioral resistance. Evol Appl. 2015. https
://doi.org/10.1111/eva.12354 . 68. William T, Jelip J, Menon MY, Anderios F, Mohammad R, Mohammad
TAAM, et al. Changing epidemiology of malaria in Sabah, Malaysia: increasing incidence of Plasmodium knowlesi. Malar J. 2014;13:390. 69.
Nakazawa S, Marchand RP, Quang NT, Culleton R, Manh ND, Maeno Y.
Anopheles dirus co-infection with human and monkey malaria parasites in Vietnam. Int J Parasitol. 2009;39:1533–7. 70. Coatney GR, Chin
W, Contacos PG, King HK. Plasmodium inui, a quartan- type malaria parasite of old world monkeys transmissible to man. J Parasitol.
1966;52:660–3. 71. Imwong M, Madmanee W, Suwannasin K, Kunasol C, Peto TJ, Tripura R, et al. Asymptomatic natural human infections
with the simian malaria parasites Plasmodium cynomolgi and Plasmodium knowlesi. J Infect Dis. 2018. https ://doi.org/10.1093/infdi s/jiy51 9.
72. Ta TH, Hisam S, Lanza M, Jiram AI, Ismail N, Rubio JM. First case of
naturally acquired human infection with Plasmodium cynomolgi. Malar J. 2014;13:68.
Publisher's Note Springer Nature remains neutral with regard to jurisdictional claims in pub- lished maps and institutional affiliations.