Jurnal Kromatografi B 1060 (2017) 291–299

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Jurnal Kromatografi B
beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/jchromb

Penentuan simultan cis-permethrin dan trans-permethrin pada tikus MENANDAI plasma dan
jaringan otak menggunakan kromatografi gas-spektrometri massa ionisasi kimia negatif
Shirin Hooshfar, Darren R. Gullick, Michael R. Linzey, Tanzir Mortuza,
Mona Hamdy Abdel Rahman, Clinton A. Rogers, James V. Bruckner, Catherine A. White, Michael
G.Bartlett
Departemen Ilmu Farmasi dan Biomedis, Sekolah Tinggi Farmasi, Universitas Georgia, Athena, GA 30602-2352, Amerika Serikat

ARTICLEINFO ABSTRAK

Kata kunci: A metode sensitif untuk penentuan simultan cis-permethrin (cis-PERM) dan trans-permethrin (trans-PERM) dalam volume
cis-permethrin kecil (100 μL) plasma tikus dan homogenat otak dikembangkan, menggunakan cairan-ekstraksi cairan untuk preparasi sampel
trans-permetrin dan kromatografi gas-spektrometri massa ionisasi kimia negatif (GCeNCI-MS) untuk deteksi. Kuantitas tingkat jejak
Plasma insektisida dalam volume kecil sampel biologis penting untuk mendukung penelitian toksikokinetik pada hewan kecil. Saat ini
Otak
tidak ada metode tervalidasi dalam literatur untuk menentukan cis-PERM dan trans-PERM dalam volume serendah 100 μL
Spektrometri massa ionisasi kimia
plasma tikus atau homogenasi otak. Metode memberikan rentang linier 0,2-150,0 ng / mL untuk analit di kedua matriks.
Presisi intra-dan antar-batch (sebagai% deviasi standar relatif, RSD) dan akurasi (sebagai kesalahan relatif, RE) dari metode
ini lebih baik dari 20% pada batas kuantitasi dan lebih baik dari 15% di seluruh rentang linier yang tersisa. Metode divalidasi
diterapkan dalam studi toksikokinetik pada tikus dewasa dengan dosis oral 10 mg / kg (cis-PERM) dan 100 mg / kg (trans-
PERM) dalam minyak jagung. cis-PERM dan trans- PERM dipantau dalam plasma tikus dan sampel jaringan otak selama 6
jam setelah pemberian dosis, dan kedua analit terdeteksi di semua sampel plasma dan otak.

1. Perkenalan kerentanan mamalia terhadap kebanyakan piretoid adalah minimal, racun

Piretroid adalah salah satu kelas paling penting dari sektisida sintetik dan
banyak digunakan di bidang pertanian, pengawetan kayu, perawatan kutu,
kedokteran hewan, pengendalian nyamuk, dan banyak bidang lainnya. [1-4].
Dalam banyak kasus, piretroid telah menggantikan kelas-kelas insektisida
lain, seperti organoklorin, organofosfat dan karba-mates, karenafficacy dan
toksisitas mamalia yang relatif lebih rendah [5-7]. Namun demikian, ada
kekhawatiran serius tentang potensi risiko paparan piretroid dengan
peningkatan produksi, aplikasi, dan masuknya ke dalam ekosistem dan rantai
makanan.[8-11].
Protein saluran natrium dan klorida dengan gerbang tegangan, yang
ditemukan di membran sel saraf, dikenal sebagai situs target piretroid yang
paling penting. Gangguan fungsi saraf saluran ini menyebabkan kelumpuhan
dan kematian serangga[12-15]. Saluran so-dium dan klorida dengan gerbang
tegangan juga merupakan lokasi target penting untuk pyre-throid pada
mamalia, tetapi tidak seperti serangga, piretroid dengan cepat detoks-ifidiedit
oleh metabolisme yang dimediasi oleh karboksyesterase / dan sitokrom P-450
menjadi metabolit yang tidak beracun [2,6,15-17]. Meski akut
sarafnya effEfek dari eksposur di bawah ambang batas memerlukan studi
toksikokinetik yang komprehensif [10,18,19]. Oleh karena itu, penting untuk
memiliki metode bioanalitik yang akurat dan tepat untuk mengukur
konsentrasi rendah piretroid dalam plasma dan organ targetnya, otak.
Permethrin (PERM) [3-phenoxybenzyl (1RS, 3RS; 1RS, 3SR) -cis, trans-
3- (2,2-dichlorovinyl) -2,2-dimethylcyclopropanecarboxylate] adalah salah
satu piretroid yang paling umum digunakan dan mewakili sekitar 25 % dari
penjualan insektisida global [20-22]. Piretroid ini banyak digunakan sebagai
insektisida untuk perawatan dalam ruangan. Karena volatilitasnya yang
rendah dan daya serap yang tinggi terhadap material dan permukaan seperti
furnitur, dinding, dan karpet, ada kemungkinan terpapar PERM dengan
tingkat rendah dalam kehidupan sehari-hari[20].
PERM dapat diserap ke dalam tubuh manusia melalui jalur inhalasi, oral
dan dermal dan dapat mengganggu sistem saraf dan hormonal. Karena sifat
lipofiliknya, ia juga dapat terakumulasi di otak dan jaringan
adiposa[21,23,24]. Lebih lanjut, ada peningkatan bukti racun lainnya effEfek
PERM pada manusia, termasuk toksisitas jantung, genotoksisitas,
fetotoksisitas, dan hepatotoksisitas [25].

Penulis yang sesuai.

Alamat email: mgbart@uga.edu (MG Bartlett).

http://dx.doi.org/10.1016/j.jchromb.2017.06.019
Diterima 31 Maret 2017; Diterima dalam bentuk revisi 24 Mei 2017; Diterima 11 Juni 2017
Tersedia secara online 13 Juni 2017
1570-0232 / © 2017 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.
S. Hooshfar dkk.
PERM umumnya dipasarkan sebagai campuran dari dua isomer (cis /
trans dalam rasio 40:60, 80:20 atau 25:75), yangfftingkat metabolisme dan
aktivitas yang salah [17,23,24]. Oleh karena itu, penting untuk menilai
kontribusi individu dari dua isomer saat mengukur PERM. Struktur kimia cis-
PERM dan trans- PERM ditunjukkan padaGambar 1.
Dalam studi ini kami menjelaskan metode bioanalitik sederhana dan
sensitif untuk penentuan simultan cis-PERM dan trans-PERM dari volume
rendah (100 μL) plasma dan otak menghomogenkan sampel dari tikus. Sejauh
pengetahuan kami, hanya satu metode yang telah dilaporkan untuk
pengukuran simultan dari dua isomer, dalam 0,5-1 mL plasma dan 1 g
jaringan [17]. Metode yang dilaporkan di sini masing-masing 250 / dan 166
kali lipat lebih sensitif dalam plasma dan otak. Selain itu volume sampel awal
kami adalah 5-10 kali lipat lebih rendah dari metode yang dilaporkan oleh
Lestremau et al., Untuk plasma. Untuk otak, metode mereka menggunakan 1
g jaringan sedangkan metode kami hanya membutuhkan 30 mg. Tingkat
kepekaan ini diperlukan untuk percobaan toksikokinetik dosis rendah. Selain
itu, penggunaan sampel biologis volume rendah dengan metode ini penting
untuk mendukung eksperimen toksikokinetik pada hewan kecil. Metode
bioanalitik divalidasi sesuai dengan pedoman US Food and Drug
Administration (FDA) untuk menentukan keakuratan dan presisi variasi antar
dan intra-batch, spesifikfikota, linieritas, batas quantifikation (LOQ),
pemulihan, dan stabilitas [26].
292
Jurnal Kromatografi B 1060 (2017) 291–299
Gambar 1. Struktur kimia cis-permethrin, trans-perme-thrin
(MW = 391,288 g / mol, LogP = 6,50), dan transflu-thrin (MW =
371,153 g / mol, LogP = 5, IS).
2. Bahan dan metode
2.1. Bahan kimia dan reagen
cis-permethrin (cis-PERM), trans-permethrin (trans-PERM) dan
transfluthrin (standar internal) disediakan oleh Bayer CropScience AG
(Manheim, Jerman). Struktur kimia analit ini ditunjukkan padaGambar 1.
®
Asetonitril (ACN), diisopropil eter dan Spin-X mesin sentrifugal fiFilter
diperoleh dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Semua pelarut adalah LC-Nilai
MS, dan semua standar adalah nilai analitik. Toluene (kelas HPLC) dibeli dari
Fisher Chemical Co. (Pittsburgh, PA). Tabung sentrifugasi mikro lilitan
®
diperoleh dari Eppendorf (Hauppauge, NY). Plasma tikus Sprague Dawley
jantan (dengan natrium EDTA) dan homogenat otak (rasio saline normal
jaringan: 1/2) dibeli dari Bioreclamation IVT (Westbury, NY).
2.2. Instrumentasi dan GC-Kondisi MS
Sistem kromatografi gas Agilent 6890N yang dilengkapi dengan detektor
selektif massa kuadrupol 5973 dengan sumber bahan kimia negatif (NCI)
(Santa Clara, CA) dioperasikan untuk GC-Analisis MS. Perangkat lunak
ChemStation yang ditingkatkan oleh Agilent (Santa Clara, CA) digunakan
untuk kontrol instrumen dan pemrosesan data. Pemisahan kromatografi
®
dicapai dengan menggunakan Zebron Kolom ZB5-MS GC (fenil
S. Hooshfar dkk.
dimethylpolysiloxane, 30 m × 0,25 mm × 0,25 μm, Phenomenex, Torrance,
CA) beroperasi dengan konstanta 1 mL / menit flow helium (Airgas Athens,
GA).
Saluran masuk GC ditahan pada 280 ° C dalam mode tak terpecah
berdenyut, dengan tekanan 35 psi yang berdenyut selama 0,5 menit setelah
injeksi 1 μSampel L. Program suhu dimulai pada 150 ° C, diikuti oleh gradien
15 ° C / menit hingga 205 ° C, gradien 5 ° C / menit hingga 220 ° C, dan
kemudian diikuti oleh gradien 15 ° C / menit hingga 300 ° C, dan ditahan
selama 1 menit, menghasilkan waktu operasi metode 15 menit. Jalur transfer
diadakan pada suhu 325 ° C. Gas metana (Airgas Athens, GA) digunakan
dalam sumber ion untuk menghasilkan elektron termal yang dibutuhkan untuk
ionisasi kimia negatif. Sumber ion dan quadrupole ditahan pada suhu 150 ° C.
Pemantauan Ion Terpilih (SIM) m / z pada 207 dan 209 digunakan untuk
isomer permetrin dan transfluthrin (IS). Waktu tinggal MS adalah 50 ms
untuk setiap ion. Ion fragmen yang diukur ditunjukkan padaGambar 2.
2.3. Solusi dan standar
Solusi stok primer individu cis- PERM, trans- PERM dan transfluthrin
(IS) dibuat dengan melarutkan jumlah yang tepat dari senyawa dalam ACN
untuk mendapatkan fikonsentrasi akhir 1,0 mg / mL. Larutan stok sekunder
yang mengandung cis- PERM dan trans- PERM dibuat dengan mengencerkan
stok primer sampai konsentrasi 10.μg / mL. Konsentrasi larutan stok IS
sekunder adalah 1μg / mL.
Larutan kerja standar yang mengandung cis- PERM dan trans- PERM
diperoleh dengan pengenceran serial ke konsentrasi 2.0, 4.0, 10.0, 20.0, 40.0,
100.0, 200.0, 400.0, 1000.0 dan 2000.0 ng / mL. Solusi kerja kendali mutu
(QC) disiapkan pada konsentrasi 5,0, 750,0, dan 1500,0 ng / mL. Solusi kerja
IS disiapkan pada 10,0 ng / mL. Semua pengenceran dibuat dengan ACN.
Solusi stok disimpan di-20 ° C saat tidak digunakan dan diganti setiap 6
bulan. Solusi kerja baru disiapkan untuk setiap hari analisis atau validasi.
Penting untuk dicatat bahwa ada versi permetrin berlabel isotop stabil
yang tersedia secara komersial yang dapat digunakan sebagai standar internal.
Ini berisi baikfiada deuterium atau enam karbon tiga belas label di dalam
cincin fenoksi. Dalam pengujian ini, kami memantau ion fragmen yang
dihasilkan selama proses NCI yang hanya mengandung bagian di-
chlorovinylcyclopropane dari molekul yang menghalangi penggunaan standar
internal berlabel isotop yang tersedia secara komersial untuk aplikasi ini.
2.4. Sampel berduri
10 μL solusi kerja standar atau QC dibubuhi menjadi 100 μL plasma atau
homogenasi otak untuk menghasilkan sampel standar atau QC yang sesuai.
ItufiKonsentrasi akhir dari standar kalibrasi adalah 0.2, 0.4, 1.0, 2.0, 4.0, 10.0,
20.0, 40.0, 100.0 dan 200.0 ng / mL dalam plasma atau homogenat otak.
Sampel QC adalah 0,5, 75,0 dan 150,0 ng / mL.
Homogenat otak dibuat dengan menggunakan garam fisiologis (0,89%,
293
S. Hooshfar dkk.
Jurnal Kromatografi B 1060 (2017) 291–299
Gambar 2. Ion fragmen untuk pemantauan ion yang dipilih cis-
per-methrin, trans-permethrin dan transfluthrin.
w / v NaCl) dengan perbandingan 1 bagian jaringan dengan 2 bagian saline.
2.5. Persiapan sampel
Untuk setiap 100 μL plasma tikus atau homogenasi otak, 10 μLarutan
kerja L IS (10,0 ng / mL transflutrin) dan 1,2 mL diisopropil eter
ditambahkan. Selain itu, 10μL natrium fluoride (0,64 M) ditambahkan ke
setiap sampel untuk menghambat non-specific aktivitas esterase. Campuran
diaduk selama 10 menit, kemudian disentrifugasi pada 21.130g pada 10 ° C
selama 10 menit 1,0 mL supernatan organik dipindahkan dan diuapkan hingga
kering sempurna dalam konsentrator vakum (Thermo, Cambridge, MA) pada
60 ° C selama 10 menit. Sampel dilarutkan dengan ACN (100μL) dan
campuran pusaran (5 menit). Sampel kemudian disentrifugasi pada 21.130g
dan 10 ° C selama 10 menit.
Untuk sampel plasma, 90 μL supernatan dipindahkan ke botol sampel
(pra-fitted dengan gelas 200 μL masukkan) dan diuapkan sampai kering (80 °
C selama 25 menit). Rekonstitusi terakhir dilakukan di dalam botol dengan
toluena (6μL) sebelum analisis.
®
Untuk homogenat otak, sampel dipindahkan ke Spin-X mesin sentrifugal
fifilter (ukuran pori: 0.22 μm) dan disentrifugasi pada 3381 × g selama 30
®
detik. Spin-X fifilter dibuang, dan filtrate (sekitar 80 μL) dipindahkan ke
botol sampel (pra-fitted dengan gelas 200 μL masukkan) dan diuapkan sampai
kering (80 ° C selama 25 menit). Rekonstitusi terakhir dilakukan di dalam
botol dengan toluena (6μL) sebelum analisis.
2.6. Validasi metode
Metode bioanalitik divalidasi sesuai dengan pedoman FDA saat ini
termasuk selektivitas, linieritas, presisi dan akurasi intra dan terdepan,
pemulihan dan stabilitas. [26]. Selektivitas (n = 6) diuji dengan
membandingkan kromatogram analit dalam plasma kosong, atau dalam
homogenat otak kosong, dengan analit dalam matriks yang sama pada batas
bawah kuantitasi (LLOQ, 0,2 ng / mL).
Linearitas diuji dengan menggunakan standar berduri untuk plasma dan
homogenat otak, pada rentang dari 0,2-200,0 ng / mL. Kurva kalibrasi dibuat
dari rasio luas puncak antara analit dan IS, menggunakan regresi linier
berbobot 1 / x. Presisi dan akurasi intra-day (n = 5) dan inter-day (n = 15)
dinilai dengan menganalisis sampel QC pada 0,2 (LLOQ), 0,5, 75,0 dan 150
ng / mL.
Pemulihan relatif (RR) dan pemulihan absolut (AR) untuk plasma dan
homogenat otak dihitung dari area puncak sampel berduri, sampel berduri
pasca-persiapan dan larutan standar pada 0,5, 75,0 dan 150,0 ng / mL (n = 5).
Stabilitas autosampler, stabilitas bench-top, dan stabilitas pembekuan /
pencairan dalam plasma dan homogenat otak diuji pada QC rendah (0,5 ng /
mL) dan QC tinggi (150 ng / mL) dari metode (n = 3).
2.7. Studi hewan dan sampel nyata
Tikus Sprague-Dawley jantan (Charles River Laboratories, Raleigh, NC)
(n = 9) digunakan untuk studi toksikokinetik cis-PERM dan trans-PERM.
Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan Universitas Georgia menyetujui
protokol untuk penelitian ini. Setiap tikus ditempatkan di kandang dengan
siklus 12 jam terang / 12 jam gelap pada suhu kamar (22 ° C) dan kelembaban
relatif (55 ± 5%) dengan akses bebas ke air dan makanan.
Tikus tidak diberi makan selama 12 jam sebelum pemberian dosis oral
tetapi dikurangi air ad libitum. Dosis oral 10 mg / kg (cis-PERM) dan 100 mg
/ kg (trans-PERM) disediakan dalam minyak jagung. Sampel darah dan otak
diambil setelah serial sacrifice tikus di specific titik waktu (2, 4, dan 6 jam)
dan disimpan di atas es sampai diproses. Sampel darah dipindahkan ke tabung
berlapis antikoagulan dan segera dicen-trifug pada 11.200 g selama 10 menit
dan plasma dipisahkan. Sampel otak dihomogenisasi dengan cara yang sama
seperti otak kosong (rasio saline normal jaringan: 1/2). Semua sampel segera
diekstraksi menggunakan prosedur di atas, dan dianalisis.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Pengembangan persiapan sampel
Pengembangan metode dalam penelitian ini dimulai dengan metode yang
dilaporkan sebelumnya oleh Gullick et al. untuk quantifikation deltametrin
(DLM) dalam volume rendah plasma dan homogenat otak [9]. Dalam metode
tersebut, DLM diekstraksi dengan presipitasi protein (PP) menggunakan
campuran aset-onitril / asam fosfat (1%, v / v) dan cis-PERM digunakan
sebagai standar internal.
Asam anorganik yang tidak mudah menguap seperti asam fosfat, asam
klorida, asam sulfat dan asam nitrat dapat merusak fase diam GC. Senyawa-
senyawa ini dapat terakumulasi di bagian depan kolom dan menyebabkan
terjadinya pendarahan kolom yang berlebihan secara prematur, tailing puncak
dan mengurangi resolusi.[27-29]. Meskipun dalam metode yang dijelaskan
jumlah asam fosfat dalam larutan ekstraksi sangat rendah, risiko potensial
kerusakan fase diam selama analisis batch besar sampel harus
dipertimbangkan.
Selain itu, karena sifat sederhana dari metode preparasi sampel yang
digunakan oleh Gullick et al. itufiSampel akhir masih mengandung residu
plasma dan otak dalam jumlah tinggi, yang membutuhkan pemeliharaan
saluran masuk GC yang sering termasuk pembersihan, penggantian septa,
lapisan tanpa pemisahan, dan segel diperlukan setelah setiap proses analitis
(kurang dari 90 sampel) (Lihat Gambar Tambahan 1). Sumber ion juga harus
lebih sering dibersihkan. Jelaslah bahwa perawatan yang tinggi ini
membutuhkan banyak tenaga, mahal dan memakan waktu.
Dalam satu-satunya metode yang dilaporkan untuk quanti simultanfikation
cis-PERM dan trans- PERM dalam plasma dan organ, PP serupa oleh
campuran me-thanol / asam klorida (asam anorganik non-volatil) digunakan
untuk pembersihan sampel. Namun, jumlah sampel biologis yang diperlukan
untuk preparasi sampel masing-masing 10 / dan 33 kali lipat lebih besar untuk
plasma dan otak, daripada yang digunakan di sini.[17].
Sebagai fiLangkah pertama, kami memutuskan untuk mengganti asam
fosfat dengan asam format, asam organik kuat yang mudah menguap.
Meskipun demikian, perawatan injektor dan sumber ion yang sering tetap
diperlukan dengan modi inified PP metode.
Kemudian kami mencoba untuk meningkatkan metode PP kami dengan
menggunakan tabung Penghapusan Fosfolipid Phree (Phree™, Phenomenex,
Torrance, CA). Berdasarkan informasi yang diberikan oleh Phenomenex,
pelarut organik dapat disimpan di atasfiFilter membran dalam tabung Phree.
Oleh karena itu, dimungkinkan untuk menambahkan plasma dan pelarut
organik langsung ke kartrid dan membiarkan PP terjadi di dalam tabung ini.
Setelah pengendapan lengkap, sampel bisafitersaring. Juga, sorben Phree yang
digunakan di dalamfiFilter dapat menghilangkan fosfolipid secara selektif,
menghasilkan protein dan sampel bebas fosfolipid.
Bahkan setelah menggunakan Phree™untuk membersihkan sampel
plasma, sampel tersebut masih mengandung sebagian besar zat tidak mudah
menguap yang mengurangi kinerja metode. Selain itu,fiFilter sering diblokir
saat digunakan dengan sampel otak. Ini membuat metode tersebut sulit untuk
direproduksi. Untuk menghilangkan masalah tersebut, kami memutuskan
untuk melakukan PP di luar
294
Jurnal Kromatografi B 1060 (2017) 291–299
Phree™ dan hanya setelah pemisahan fasa organik fimenyaringnya dengan
melewati Phree™kartrid untuk mengurangi jumlah lipid yang tidak mudah
menguap sebanyak mungkin. Namun, strategi ini tidak berhasil'tidak ada
artinyafitidak bisafferensi dalam kualitas sampel.
Kami melakukan proses pembersihan sampel ekstensif dengan
menambahkan langkah ekstraksi lainnya. Dengan prosedur ini, setelah PP
(menjadi Phree™), pemisahan dan pengeringan fase organik, pelet dilarutkan
dalam 100 μL ACN selama 5 menit. Kemudian sampel disentrifugasi dan
dipindahkan kefiBotol sampel akhir, dikeringkan (60 ° C, 25 menit) dan
dilarutkan dalam toluena (6 μL) sebelum analisis.
Untuk sampel otak untuk menghindari latar belakang kromatografi tinggi
dan pergeseran waktu retensi, kami memutuskan untuk fiFilter ACN
®
menggunakan Spin-X mesin sentrifugal fifilter, sebelum filangkah
pengeringan akhir. Dengan cara ini, kami fiakhirnya berhasil menurunkan
jumlah lipid dan signifimeningkatkan kondisi chroma-tographic kami dengan
®
cepat. Tapi menggunakan Phree™ tabung dan Spin-X mesin sentrifugal
fiFilter pada saat yang sama membuat metode kami menjadi mahal.
Piretroid adalah senyawa yang sangat lipofilik, menjadikannya target
yang baik untuk cairan-ekstraksi cair (LLE). Karena percobaan kami yang
gagal menggunakan Phree™kartrid, dan untuk membuat metode kami lebih
terjangkau, kami memutuskan untuk mencoba LLE dengan diisopropil eter.
Bahkan dengan satu langkah ekstraksi, sampelnya jauh lebih bersih daripada
modi kamified PP metode (Gambar Tambahan 2).
Untuk menghindari seringnya masuknya GC dan pemeliharaan sumber
ion dengan mengurangi senyawa pengganggu sebanyak mungkin, dan juga
untuk membuat metode ini lebih sensitif, kami memutuskan untuk
menambahkan langkah ex-traksi yang dijelaskan dengan 100 μL dari ACN ke
metode LLE kami.
Dibandingkan dengan metode yang dilaporkan oleh Lestremau et al., Ini
final modifiPembersihan LLE membuat metode kami masing-masing 250 dan
166 kali lipat lebih sensitif untuk plasma dan otak [17]. Selanjutnya dengan
persiapan sampel yang sukses, kamifiakhirnya dapat menghindari semua
prosedur pemeliharaan yang sering untuk inlet GC dan sumber ion. Dalam
sampel otak karena tingginya jumlah lipid, kamifiACN yang disaring sebelum
dikeringkan di fibotol terakhir. Meski menggunakan Spin-X mesin
®
sentrifugal fiFilter dapat menambah biaya tambahan untuk metode kami,
masih lebih afflebih terjangkau daripada menggunakan kolom Spin-X dan
Phree. LLE juga dicoba dengan metil tert-butil eter sebagai pelarut ekstraksi,
tetapi diisopropil eter memungkinkan LLOQ sebesar 2-3 kali lebih rendah
(0,2 ng / mL).
3.2. Selektivitas
Kromatogram representatif yang diperoleh dari bahan biologis kosong
dan standar LLOQ berduri (0,2 ng / mL untuk plasma dan homogenat otak)
ditunjukkan di Gambar 3.
Tidak ada gangguan dari zat endogen atau komponen lain dalam matriks
yang diamati pada waktu retensi cis-PERM dan trans-PERM dalam sampel
kosong. Ada senyawa endogen kecil yang terelusi pada waktu retensi
transfluthrin di plasma dan otak. Itu bisa diamati diGambar 3. Luas kompleks
ini kurang dari 5% dari luas puncak transfluthrin dan diamati konsisten di
semua blank yang telah kami analisis menggunakan metode ini.
3.3. Linearitas dan sensitivitas
Kurva kalibrasi dibuat dari rasio luas puncak antara ana-lytes dan IS,
dengan regresi linier tertimbang 1 / x. Tabel 1 menunjukkan kurva kalibrasi
untuk setiap hari validasi. Kurva menunjukkan respon linier yang baik (R >
2
0,995) selama rentang 0,2-200,0 ng / g untuk plasma dan otak homogen.
Sensitivitas metode ini defined oleh LLOQ, yang dianggap sebagai
konsentrasi terendah yang dapat diukur dengan rasio signal-to-noise (S / N)
10 dalam presisi dan akurasi 20%. LLOQ untuk cis-PERM dan trans- PERM
adalah 0,2 ng / mL baik dalam plasma maupun homogenat otak (Gambar 3).
S. Hooshfar dkk. Jurnal Kromatografi B 1060 (2017) 291–299

Gambar 3. Total Ion Chromatograms dari (A) plasma blank, (B) batas bawah kuantitasi (0,2 ng / mL) dalam plasma, (C) brain blank dan (D) batas bawah kuantitasi (0,2 ng / mL) di otak homogenat.

295
S. Hooshfar dkk. Jurnal Kromatografi B 1060 (2017) 291–299

Tabel 1
Kurva kalibrasi untuk cis-permethrin dan trans-permethrin dalam plasma dan homogenat otak (n = 3).

Analit Matriks Lereng Mencegat R2

cis-permethrin Plasma 0,02187 ± 0,00663 0,00714 ± 0,00733 0,99901 ± 0,00050

Otak homogen 0,02516 ± 0,00329 0,00333 ± 0,00151 0,99500 ± 0,00346
trans-permetrin Plasma 0,01183 ± 0,00518 0,00344 ± 0,00654 0,99917 ± 0,00032
Otak homogen 0,01635 ± 0,00149 0,00361 ± 0,00143 0,99600 ± 0,00361

Meja 2
Presisi intra dan antar batch (% RSD) dan akurasi (% RE) cis-permethrin dan trans-permethrin diekstraksi dari plasma tikus dan homogenat otak.

Kesepakatan nominal (ng /

Matriks Analit mL) Intra-day Antar hari

Konsentrasi terukur. ± SD (ng / mL) RSD (%) RE (%) Konsentrasi terukur. ± SD (ng / mL) RSD (%) RE (%)

Plasma cis-permethrin 0.2 (LLOQ) 0.16 ± 0,01 5.59 19.83 0.16 ± 0,03 16.61 18.01
0,5 (QC rendah) 0,57 ± 0,04 6.50 -13.43 0,56 ± 0,07 12.25 -11.48
75 (QC menengah) 76.41 ± 4.36 5.70 1.88 71.77 ± 4.39 6.12 4.31
150 (QC tinggi) 145,48 ± 9,73 6.69 3.01 143,71 ± 10,61 7.38 4.19
trans-permetrin 0.2 (LLOQ) 0.20 ± 0,03 14.98 0,04 0.20 ± 0,03 17.31 -0,02
0,5 (QC rendah) 0,55 ± 0,08 14.18 10.61 0,57 ± 0,08 13.82 -14.22
75 (QC menengah) 77.24 ± 4.99 6.46 2.99 73,50 ± 5,29 7.20 1.99
150 (QC tinggi) 151.42 ± 9.47 6.26 0.95 148,79 ± 10,70 7.19 0.80
Otak homogen cis-permethrin 0.2 (LLOQ) 0.17 ± 0,02 10.97 -16.71 0.20 ± 0,04 17.44 -2.68
0,5 (QC rendah) 0.48 ± 0,04 8.31 -4.86 0,57 ± 0,08 14.73 -14.68
75 (QC menengah) 73.65 ± 4.06 5.52 -1.80 78.13 ± 5.17 6.62 -4.17
150 (QC tinggi) 144,59 ± 5,57 3.85 -3.61 150.36 ± 7.66 5.09 -0.24
trans-permetrin 0.2 (LLOQ) 0.17 ± 0,03 14.74 -13.11 0.17 ± 0,02 14.82 14.66
0,5 (QC rendah) 0.48 ± 0,04 8.94 -3.33 0,55 ± 0,08 14.49 -10.20
75 (QC menengah) 71.29 ± 4.33 6.07 3.81 74,86 ± 8,85 11.82 0.18
150 (QC tinggi) 145,51 ± 5,54 3.81 -2.99 154.04 ± 10.42 6.76 -2.70

3.4. Presisi dan akurasi rasio area puncak antara sampel berduri dan rata-rata larutan standar pada
konsentrasi yang sama. RR diwakili oleh rasio area puncak antara sampel
Akurasi dihitung dengan membandingkan konsentrasi sampel berduri berduri dan rata-rata sampel berduri pasca-persiapan yang sesuai.
untuk setiap konsentrasi nominal ((konsentrasi nominal -konsentrasi terukur / Tabel 3 acara AR dan RR untuk cis- PERM dan trans- PERM di keduanya
konsentrasi nominal) × 100). Presisi dilaporkan sebagai persentase deviasi matriks pada 3 konsentrasi. Anehnya untuk kedua analit, AR yang lebih
standar relatif (% RSD) di antara konsentrasi yang diukur. rendah diamati dibandingkan dengan RR, dalam plasma dan homogenat otak.
Presisi dan akurasi dihitung untuk sampel LLOQ dan QC analit di kedua Tampaknya cis-PERM dan trans- PERM memiliki sinyal yang lebih kuat
matriks, seperti yang ditunjukkan pada Meja 2, yang memenuhi persyaratan dalam sampel berduri pasca-persiapan daripada dalam standar rapi pada
FDA kurang dari 20% untuk LLOQ dan kurang dari 15% untuk sampel QC. konsentrasi yang sama. Hal ini dapat dijelaskan oleh sifat lipofilik dari pyre-
throid dan affinity ke permukaan plastik dan polimer [1,2,5,9]. Tampaknya
dalam sampel berduri pasca-persiapan, residu plasma atau otak dapat
menempel ke dinding tabung dan menciptakan penghalang, sehingga
3.5. Pemulihan
menghambat penyerapan analit ke permukaan ini. Dalam situasi ini, analit
akan lebih tersedia dalam solusi untukfianalisis akhir. Sebaliknya, beberapa
AR dan RR diuji untuk analit pada tiga konsentrasi QC (n = 5) di kedua
bagian cis-PERM dan trans- PERM dalam sampel rapi akan dilampirkan ke
matriks, seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3. Standar rapi untuk setiap
permukaan polimer dari wadah dan menyebabkan sinyal yang lebih lemah.
konsentrasi dibuat dengan mengencerkan cis-PERM dan larutan kerja trans-
PERM dengan toluena. Sampel berduri pasca persiapan dibuat dengan larutan
Teori ini dapat didukung lebih lanjut dengan pengamatan AR yang lebih
standar spiking ke dalam matriks kosong yang diproses dengan preparasi
tinggi di QC rendah dalam penelitian ini dan pekerjaan sebelumnya oleh
sampel yang sama. AR diwakili oleh
Gullick et al. [9]. Jelasnya keterikatan pada permukaan polimer dapat
berdampak lebih tinggi pada standar rapi dengan konsentrasi yang lebih
Tabel 3
Pemulihan absolut (% AR, n = 5) dan pemulihan relatif (% RR, n = 5) dari metode ini. rendah. Karena fenomena ini, rasio area puncak antara sampel berduri dan
standar rapi untuk QC rendah akan lebih tinggi daripada yang lain. Pola ini
Analit Matriks Conc. (ng / mL) AR (%) RR (%) belum diamati untuk RR yang bisa menipufirm the effEfek samping matriks
yang menghambat perlekatan analit ke permukaan.
cis-permethrin Plasma 0,5 82.70 ± 3.65 66.18 ± 2.92
75 56.72 ± 3.51 58.93 ± 3.65
150 41.60 ± 3.57 62.98 ± 5.40 3.6. Stabilitas
Otak 0,5 29.17 ± 3.73 34.40 ± 4.40
75 20.73 ± 2.49 28.37 ± 3.41
Sampel stabil di autosampler pada suhu kamar selama 24 jam di kedua
150 20.74 ± 4.11 30.95 ± 6.13
trans-permetrin Plasma 0,5 70.72 ± 6.34 51.58 ± 4.62 matriks. Untuk memvalidasi stabilitas autosampler, disiapkan dua set sampel
75 50.86 ± 3.05 51.80 ± 3.11 plasma dan homogenat otak (n = 3) pada 0,5 ng / mL dan 150,0 ng / mL.
150 37.59 ± 3.63 56.21 ± 5.43 ItufiSet pertama segera dianalisis dan digunakan sebagai kontrol waktu nol,
Otak 0,5 23.21 ± 4.80 23.44 ± 4.85 dan set kedua ditempatkan pada autosampler selama 24 jam dan kemudian
75 20.49 ± 3.19 26.34 ± 4.10
dianalisis (Tabel 4).
150 19.58 ± 3.79 27.96 ± 5.42
Dua set QC rendah dan QC tinggi (n = 3) disiapkan

296
S. Hooshfar dkk. Stabilitas autosampler (n = 3, mean ± SD) dari cis-permethrin dan trans-permethrin selama 24
jam.

Tabel 4
 Jurnal Kromatografi B 1060 (2017) 291–299

Analit Matriks Conc. (ng / mL) Stabilitas autosampler (%)

Namun, ketidakstabilan permetrin karena aktivitas esterase dalam sampel
cis-permethrin Plasma 0,5 92.96 ± 6.12
bio-logis telah dilaporkan. Menurut Leng et al., Penambahan asam format
150.0 107.21 ± 6.73
Otak 0,5 100.07 ± 9.11 (1%, v / v) pada sampel biologis dapat menghambat aktivitas esterase dan
150.0 97.84 ± 7,00 meningkatkan stabilitas permetrin.[31].
trans-permetrin Plasma 0,5 93.33 ± 13.46 Dalam satu-satunya metode yang tersedia untuk quanti simultanfikation
150.0 94.76 ± 6.91 cis-PERM dan trans- PERM, asam format (1%, v / v) ditambahkan ke sampel
Otak 0,5 104.54 ± 7.16
nyata untuk mengurangi ketidakstabilan analit dalam plasma, darah
150.0 99.30 ± 7,50
danfforgan yang salah. Namun dalam studi ini detail dari bench top atau
stabilitas freeze-thaw tidak dilaporkan[17,23].
evaluasi stabilitas atas bangku sampel. Satu set segera diekstraksi dan Kami mencoba menggunakan asam format 1% (v / v), bukan natrium
dianalisis, dan set kedua dibiarkan pada suhu kamar sebelum ekstraksi. fllarutan jenuh uoride untuk meningkatkan bench top dan stabilitas metode
Meskipun natriumfluoride telah ditambahkan ke plasma dan sampel otak freeze-thaw. Namun, menggunakan asam format saja atau dikombinasikan
untuk menghambat metabolisme ana-lytes oleh esterase, stabilitas bench top dengan natriumfluoride, tidak meningkatkan stabilitas senyawa ini dalam
tidak't lulus untuk durasi lebih dari 30 menit. Menurut Sethi at al. cis-PERM plasma atau otak pada kedua uji stabilitas. Lebih lanjut, asam format
dan trans- PERM memiliki ikatan protein yang tinggi, dan persentase mempengaruhi sensitivitas metode dan meningkatkan LLOQ menjadi 2 ng /
pengikatan pada protein plasma semakin meningkat selamafipertama 2 jam mL (dari 0,2 ng ml) untuk plasma dan homogenat otak. Karena itu, untuk
dan mencapai lebih dari 80%. Properti ini bisa menjadi alasan ketidakstabilan quantifikation sampel nyata, natrium fluoride dan IS harus ditambahkan
bench top senyawa ini. Itu hanya setelah menambahkan IS dan segera setelah pengambilan sampel ke plasma atau homogenat otak, dan
natriumfluoride ke sampel dan menyimpannya di atas es yang melewati penting untuk menghindari siklus pencairan pembekuan berulang.
stabilitas atas bangku selama 1 jam. Hasilnya ditunjukkan dalamTabel 5.

Untuk evaluasi stabilitas Freeze-thaw, satu set QC tinggi dan QC rendah

(n = 3) dianalisis tanpa pembekuan sebagai kontrol waktu nol. Tiga set
lainnya dibekukan-20 ° C, dicairkan pada hari berikutnya, dan satu setnya
dianalisis. Ini diulangi untuk dua siklus pembekuan-pencairan lagi selama 2
hari tambahan, dan tanggapan dibandingkan sehubungan dengan sampel awal
yang tidak dibekukan.
Meskipun natrium fluoride ditambahkan ke semua sampel, seperti
stabilitas di atas meja bahkan satu siklus freeze-thaw tidak't lulus. Akhirnya
dengan menambahkan IS ke semua sampel sebelum membekukan dan
menyimpannya-80 ° C, cis- PERM melewati tiga siklus freeze-thaw tetapi
Trans- PERM hanya melewati satu siklus. Hasilnya ditunjukkan dalamTabel
5. Seperti disebutkan sebelumnya, cis-PERM dan trans- PERM menunjukkan
ikatan protein yang tinggi. Mungkin konformasi protein diubah selama siklus
pembekuan-pencairan dan affmempengaruhi persentase pengikatan protein
untuk analit. Hasil ini menunjukkan bahwa sampel otak atau plasma yang
mengandung cis-PERM dan trans-PERM tidak sesuai untuk beberapa siklus
pembekuan-pencairan.
Permetrin telah dilaporkan oleh Cherstniakova et al. untuk menjadi stabil-
80 ° C selama enam bulan dan juga stabil selama tiga siklus freeze-thaw [30].
Mereka tidak bisa't memisahkan kedua isomer dan ada kemungkinan bahwa
cis-PERM (isomer yang lebih stabil) mengkompensasi ketidakstabilan trans-
PERM.
3.7. Aplikasi
Untuk mendemonstrasikan penerapan metode ini dalam situasi biologis
praktis, metode analisis berhasil diterapkan pada quanti.fikation analit dalam
sampel plasma dan otak selama studi toksikokinetik kecil.
Konsentrasi / waktu profijumlah analit yang diekstraksi dari plasma dan
otak tikus setelah pemberian dosis oral (cis- PERM: 10 mg / kg, trans-PERM:
100 mg / kg) tikus (n = 9) selama periode waktu 6 jam disajikan di Gambar 4.
Kromatogram perwakilan dari analisis plasma nyata dan sampel jaringan otak
ditampilkan diGambar 5. Konsentrasi cis-PERM dan trans- PERM berada
dalam kisaran linier di sampel otak. Hanya dalam dua sampel mereka sedikit
lebih tinggi dari batas atas kuantitatif (ULOQ, 200.0 ng / mL) dalam plasma.
Kedua sampel ini diencerkan dengan plasma kosong dan dianalisis kembali.
Konsentrasi maksimum dalam plasma diamati pada 2 dan 4 jam untuk
trans- PERM dan cis-PERM. Untuk kedua senyawa di otak, konsentrasi
maksimum diamati pada 6 jam setelah pemberian. Dengan asumsi 1 g otak
setara dengan 1 mL plasma, rasio otak-ke-plasma untuk cis-PERM dan trans-
PERM dihitung dan ditampilkan diTabel 6. Rasio otak-ke-plasma meningkat
dari 0,13 menjadi 1,70 untuk cis-PERM dan 0,13-3.19 untuk trans- PERM.
Pola yang meningkat ini menunjukkan bahwa kedua analit dapat menembus
darah-penghalang otak
(BBB) dan memiliki signifidistribusi dan akumulasi tidak bisa di otak
jaringan.
Namun, karena jumlah titik data yang dikumpulkan rendah, ini

Tabel 5
Stabilitas bench-top (n = 3) dan stabilitas freeze-thaw (n = 3) cis-permethrin dan trans-permethrin dalam plasma dan homogenat otak.

Analit Matriks Stabilitas (%) Conc. (ng / mL) Konsentrasi terukur. ± SD (ng / mL) RSD (%) RE (%)

cis-permethrin Plasma Stabilitas atas bangku 0,5 0.46 ± 0,03 6.52 8.00
Membekukan-stabilitas cair 150.0 159.80 ± 13.30 8.33 -6.53
0,5 0.45 ± 0,09 19.64 9.33
150.0 155.09 ± 10.09 6.50 -3.40
Otak homogen Stabilitas atas bangku 0,5 0.49 ± 0,05 9.29 1.50
Membekukan-stabilitas cair 150.0 147.16 ± 8.71 5.92 1.89
0,5 0.44 ± 0,05 12.42 12.89
150.0 160,78 ± 21.09 13.12 -7.19
trans-permetrin Plasma Stabilitas atas bangku 0,5 0.41 ± 0,07 16.37 17.50
Membekukan-stabilitas cair 150.0 150.88 ± 21.43 14.20 -7.61
0,5 0.40 ± 0,06 14.10 19.33
150.0 139.91 ± 14.20 10.15 6.73
Otak homogen Stabilitas atas bangku 0,5 0,56 ± 0,09 15.99 -12.50
150.0 151.68 ± 7.47 4.93 -1.12
Membekukan-stabilitas cair 0,5 0,55 ± 0,11 19.76 -10.80
150.0 160,63 ± 17.61 10.96 4.87

297
S. Hooshfar dkk. Jurnal Kromatografi B 1060 (2017) 291–299

Gambar 4. Penerapan metode bioanalitik: perjalanan waktu, A: cis-permethrin, B: trans-permethrin, diekstrak dari plasma dan otak tikus (n = 9) (± SD).

rasio harus diperlakukan dengan hati-hati dan studi toksikokinetik lebih lanjut
dengan lebih banyak hewan akan diperlukan untuk membuat fikesimpulan
akhir.
4. Kesimpulan
GC baru yang andal dan sensitifeMetode NCI-MS telah berhasil
dikembangkan dan diterapkan pada penentuan simultan cis-PERM dan trans-
PERM dalam sampel plasma dan otak.
Metode bioanalitik menunjukkan akurasi dan presisi yang baik pada
rentang linier dari 0,2-200 ng / mL dalam plasma dan otak tikus
homogenat. Metode LLOQ adalah 0,2 ng / mL, yang masing-masing 250 /
dan 166 kali lipat lebih sensitif dalam plasma dan otak, dibandingkan dengan
metode yang diterbitkan sebelumnya.
Karena volume sampel rendah (100 μL plasma tikus atau homogenat
otak), metode ini dapat dengan mudah diterapkan pada studi toksikokinetik
yang memerlukan banyak sampel pada hewan kecil. Juga waktu berjalan 15
menit dan waktu siklus 18 menit memberikan hasil yang dibutuhkan untuk
mendukung sebagian besar eksperimen toksikokinetik. Metode ini telah
berhasil diterapkan pada studi toksikokinetik kecil cis-PERM dan trans-
PERM dalam plasma dan homogenat otak setelah pemberian oral pada tikus.

Gambar 5. Kromatogram Ion Total cis-permethrin dan trans-permethrin (A) diekstrak dari sampel plasma (waktu: 6 jam), (B) diekstraksi dari sampel homogenat otak (waktu: 6 jam).

298
S. Hooshfar dkk. Jurnal Kromatografi B 1060 (2017) 291–299

Tabel 6
Konsentrasi plasma dan otak cis-permethrin dan trans-permethrin dalam sampel biologis yang diperoleh dari tikus jantan (n = 9).

Waktu (h) cis-permethrin trans-permetrin

Konsentrasi plasma. (ng / Konsentrasi otak. (ng / Konsentrasi plasma. (ng /

mL) g) Rasio otak-ke-plasma mL) Konsentrasi otak. (ng / g) Rasio otak-ke-plasma

2 198.04 ± 22.05 34.81 ± 6.88 0.13 263.71 ± 27.73 24.92 ± 6,58 0.13
4 222.44 ± 56.35 65.82 ± 26.69 0.47 191.46 ± 94.87 103.58 ± 26.39 0.34
6 115.35 ± 9.09 81,99 ± 22.31 1.70 25.72 ± 7.26 196.25 ± 24.29 3.19

Ucapan Terima Kasih Y. Fan, J. Lei, W. Li, H. Gu, Permethrin memodulasi kurir sinaptik mini kolinergiksewa
dengan memblokir sebagian saluran kalsium, Toxicol. Lett. 201 (2011) 258-263.

Para penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada Council for
Advancement of Pyrethroid Human Risk Assessment (CAPHRA) untuk fi-
secara finansial mendukung pekerjaan ini.
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan yang terkait dengan artikel ini dapat ditemukan, dalam
versi online, di http://dx.doi.org/10.1016/j.jchromb.2017.06.019.
Referensi
[1] DR Gullick, KB Mott, MG Bartlett, Metode kromatografi untuk bioanalisis pestisida
piretroid, Biomed. Kromatogr. 30 (2016) 772-789.
[2] DR Gullick, JV Bruckner, CA White, Ch. Chen, BS Cummings, MG Bartlett, Kuantitas
deltametrin dalam hati tikus dan homogenat otot menggunakan metode dispersif Ekstraksi fase
padat dengan GC-NCI-MS, J. AOAC Int. 99 (2016) 813-820.
[3] C. Nasuti, M. Carloni, D. Fedeli, R. Gabbianelli, A. Di Stefano, CL Serafina, I. Silva,
V. Domingues, R. Ciccocioppo, Effefek paparan permetrin kehidupan awal pada spasial
memori kerja dan tingkat monoamine di diffarea otak yang belum tua tikus, Toksikologi 303
(2013) 162-168.
[4] SS Albaseer, R. Nageswara Rao, YV Swamy, K. Mukkanti, Gambaran umum sampel
persiapan dan ekstraksi piretroid sintetis dari air, sedimen dan tanah,
J. Kromatogr. A 1217 (2010) 5537-5554.
[5] PK Sethi, S. Muralidhara, JV Bruckner, CA White, Pengukuran plasma protein dan
pengikatan lipoprotein dari piretroid, J. Pharmacol. Toksikol. Metode 70 (2014) 106-111.
[6] N. Grosman, F. Diel, Dalamflpengaruh piretroid dan piperonil butoksida pada Ca2 +
-Aktivitas ATPase sinaptosom otak tikus dan membran leukosit, Int. Immunopharmacol. 5
(2005) 263-270.
[7] NT Halstead, DJ Civitello, JR Rohr, Toksisitas komparatif dari organofosfat dan
insektisida piretroid untuk makroartropoda akuatik, Chemosphere 135 (2015) 265-271.
[16] T. Schettgen, P. Dewes, T. Kraus, Metode A untuk quanti simultan fikation dari
delapan metabolit piretroid sintetis dalam urin dari populasi umum menggunakan spektrometri
massa tandem kromatografi gas, Anal. Bioanal. Chem. 408 (2016) 5467-5478.
[17] F. Lestremau, ME Willemin, C. Chatellier, S. Desmots, C. Brochot, Penentuan
dari cis-permethrin, trans-permethrin dan metabolit terkait dalam darah tikus dan organ oleh
spektrometri massa perangkap ion kromatografi gas, Anal. Bioanal. Chem. 406 (2014) 3477-
3487.
[18] AF Godinho, SL Stanzani, FC Ferreira, TC Braga, MC Silva, JL Chaguri, CA
Dias-Junior, paparan kronis Permethrin mengubah koordinasi motorik pada tikus: effdll.
suplementasi kalsium dan amlodipine, Environ. Toksikol. Pharmacol. 37 (2014) 878-884.
[19] G. Leng, W. Gries, Penentuan piretroid dalam plasma darah dan Piretroid /
Metabolit piretrin dalam urin dengan kromatografi gas-spektrometri massa dan tinggi-Resolusi
GC-MS, dalam: JL Martínez Vidal, AG Frenich (Eds.), Pesticide Protocols, Humana Press,
Totowa NJ, 2006, hlm.17-33.
[20] M. Carloni, C. Nasuti, D. Fedeli, M. Montani, A. Amici, MSD Vadhana,
R. Gabbianelli, Dampak paparan permetrin kehidupan awal pada perkembangan
neurodegeneration di masa dewasa, Exp. Gerontol. 47 (2012) 60-66.
[21] D. Fedeli, M. Montani, L. Bordoni, R. Galeazzi, C. Nasuti, L. Correia-Sa, Wakil
Presiden Domingues, M. Jayant, V. Brahmachari, L. Massaccesi, E. Laudadio,
R. Gabbianelli, In vivo dan studi in silico untuk mengidentifikasi mekanisme yang terkait
dengannya Modulasi Nurr1 setelah kehidupan awal paparan permetrin pada tikus, Neuroscience
340 (2017) 411-423.
[22] C. Nasuti, M. Carloni, D. Fedeli, A. Di Stefano, L. Marinelli, LS Cerasa, C. Meda,
A. Maggi, R. Gabbianelli, Effdll dari 17β-estradiol pada striatal dopaminergic trans-misi
yang diinduksi oleh permethrin pada tikus anak usia dini, Chemosphere 112 (2014) 496-502.
[23] SAYA. Willemin, S. Desmots, R. Le Grand, F. Lestremau, FA Zeman, E. Leclerc,
C. Moesch, C. Brochot, PBPK pemodelan isomer cis dan trans-permethrin dan metabolit
urin utama mereka pada tikus, Toxicol Appl Pharm 294 (2016) 65-77.
[24] MK Morgan, LS Sheldon, CW Croghan, PA Jones, JC Chuang, NK Wilson, An
studi observasi terhadap 127 anak prasekolah di rumah dan pusat penitipan anak di Ohio: jalur
lingkungan menuju paparan cis dan trans-permethrin, Environ. Res. 104 (2007) 266-274.

[8] M. Ratelle, J. Cote, M. Bouchard, Toksikokinetik dari biomarker permetrin mantanpose

[25] X. Wang, M.-A. Martínez, M. Dai, D. Chen, I. Ares, A. Romero, V. Castellano,

pada relawan yang terpapar secara oral, Toxicol. Lett. 232 (2015) 369-375. M. Martínez, JL Rodríguez, M.-R. Martínez-Larrañaga, A. Anadón, Z. Yuan, Stres
[9] D.Gullick, A. Popovici, HC Young, JV Bruckner, BS Cummings, P. Li, MG Bartlett, oksidatif yang diinduksi permethrin serta toksisitas dan metabolisme. Review, Mengepung. Res.
149 (2016) 86-104.
Penentuan deltametrin dalam plasma tikus dan otak menggunakan gas kromatografi-
spektrometri massa ionisasi kimia negatif, J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. [26] Guidance for Industry, Bioanalytical Method Validation, US Department of
960 (2014) 158-165. Health dan Pusat Pengawasan Obat dan Makanan Layanan Kemanusiaan dan Pusat Penelitian
[10] C. Nasuti, ML Falcioni, IE Nwankwo, F. Cantalamessa, R. Gabbianelli, Effdll (CDER) untuk Kedokteran Hewan (CVM), (2001).
[27] D.Rood, Penyebab dan Pencegahan Kerusakan Kolom, Panduan Pemecahan Masalah dan
permetrin plus antioksidan pada aktivitas lokomotor dan striatum pada tikus remaja,
Perawatan untuk Kromatograf Gas, Edisi Keempat, 210-232.
Toksikologi 251 (2008) 45-50.
[11] Y. Abreu-Villaça, ED Levin, Perkembangan neurotoksisitas dari generasi
[28] Penyebab Utama Penurunan Kinerja Kolom, Apa Penyebab Utama Degradasi
Kinerja Kolom Kapiler GC? Agilent Technologies, Inc., AS, 2007 (Dicetak di Amerika Serikat
penerustions insektisida, Lingkungan. Int. 99 (2017) 55-77.
7 Agustus).
[12] DM Soderlund, JM Clark, LP Sheets, LS Mullin, VJ Piccirillo, D. Sargent, JT
[29] Panduan Pemecahan Masalah dan Referensi Kromatografi Gas, CHROMacademy,
Stevens, ML Weiner, Mekanisme neurotoksisitas piretroid: implikasi untuk penilaian risiko
2005.
kumulatif, Toksikologi 171 (2002) 3-59.
[13] DM Soderlund, Mekanisme molekuler neurotoksisitas insektisida piretroid:
[30] SA Cherstniakova, GE Garcia, J. Strong, D. Bi, J. Weitz, MJ Roy, LR Cantilena,
Penentuan cepat N, N-dietil-m-toluamide dan permethrin dalam plasma manusia dengan
kemajuan baru-baru ini, Arch. Toksikol. 86 (2012) 165-181.
kromatografi gas-spektrometri massa dan piridostigmin bromida dengan tinggi-kinerja
[14] Z. Cao, TJ Shafer, TF Murray, Mekanisme yang Diinduksi insektisida piretroid kromatografi cair, J. Anal. Toksikol. 30 (2006) 21-26.
stimulasi kalsium masukflux dalam neuron neokortikal, J. Pharmacol. Exp. Ada. 336 (2011) [31] G. Leng, K.-H. Kühn, H. Idel, Pemantauan biologis piretroid dalam darah dan
197-205.
metabolit piretroid dalam urin: aplikasi dan batasan, Sci Total 1 Environ 199 (1997) 173-181.
[15] Y. Yan, Y. Yang, J. You, G. Yang, Y. Xu, N. Huang, X. Wang, D. Ran, X. Yuan,
Y. Jin,
299