ABSTRAK

Pendahuluan: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menilai aktivitas antimikroba saluran akar
sealer yang dimodifikasi dengan partikel rakitan silika obat antimikroba baru yang sangat tinggi
(DSPs) pada dentin saluran akar yang terinfeksi Enterococcus faecalis . Metode: DSP adalah
disintesis melalui coassembly silika dan octenidine dihydrochloride (OCT) surfaktan obat (35%
b/b OCT). DSP (1% berat dari total massa sealer) dicampur secara homogen dengan sealer resin
epoksi (AH Plus [AH]; Dentsply Sirona, Tulsa, OK) atau kalsium silikat–sealer berbasis
(EndoSequence BC Sealer [BC]; Brasseler, Savannah, GA). Untuk menilai aktivitas antimikroba
dari sealer yang mengandung DSP, sepertiga apikal gigi berakar tunggal diamati tercemar dan
terinfeksi E. faecalis selama 3 minggu dilanjutkan dengan aplikasi eksperimental (DSP-loaded)
sealer atau kontrol terkait hingga 28 hari. Analisis mikrobiologis dan pemindaian laser confocal
dan pemindaian mikroskop elektron digunakan untuk menentukan unit pembentuk koloni
(CFU)/mL, persentase bakteri hidup, dan bakteri intratubular dan penetrasi sealer. Analisis
varians faktorial dan uji post hoc Tukey digunakan untuk menilai efek antimikroba DSP pada
sealer yang berbeda.
Hasil: Semua kelompok eksperimen menunjukkan pengurangan signifikan dalam CFU di semua
titik waktu dibandingkan dengan kontrol positif ( P ≤.05). Penambahan DSP ke BC secara
signifikan mengurangi CFU (2,11 6 0,13, 2,22 6 0,19, dan 2,25 6 0,17 masing-masing pada 1, 7,
dan 28 hari) dibandingkan dengan sealer yang tidak dimodifikasi (3,21 6 0,11, 4,3 6 0,15, dan
4,2 6 0,2 pada 0, 7, dan 28 hari). DSP meningkatkan kinerja antimikroba AH hanya pada 1 hari
(4,21 6 0,17 vs 5,19 6 0,12, P ≤ .05). AH dan AH 1 DSP menunjukkan viabilitas bakteri yang
lebih tinggi dibandingkan dengan BC dan BC 1 DSP pada semua periode inkubasi ( P ≤.05). 
Kesimpulan: Memuat sealer endodontic dengan DSP memiliki efek yang bergantung pada
bahan pada sifat antimikroba dan dapat mengurangi kejadian infeksi sekunder.

Partikel silika mesopori memiliki sifat fisikokimia unik yang memungkinkannya berfungsi
sebagai
perancah enkapsulasi obat yang sangat baik yang mempertahankan integritas struktural saat
dilepaskan saat presentasi tingkat pelepasan obat diprediksi. Partikel coassembled silika obat
(DSPs) adalah silika mesopori baru seperti partikel yang disintesis melalui proses 1-pot melalui
coassembly silika dan octenidine dihydrochloride (OCT) (digunakan sebagai templat pori
surfaktan) untuk membentuk bola silika sekitar 500-diameter nm dengan pori-pori diskrit 1
hingga 2 nm yang diisi dengan OCT (pemuatan total 35% wt OCT). Stewart dkk  menemukan
bahwa pelepasan obat dari DSP secara signifikan bertahan lebih lama dari mesopori yang
disintesis secara konvensional silika menggunakan molekul templating pori pengorbanan yang
kemudian dimuat dengan OCT, dan pelepasannya obat dari perekat gigi yang mengandung DSP
terkandung dalam antarmuka restorasi-dentin, berpotensi bertahan selama masa restorasi. OCT
adalah agen antimikroba yang biokompatibel dan kuat tanpa resistensi antibakteri yang diketahui
dilaporkan hingga saat ini. Hal ini digunakan sebagai agen luka pembersihan, antiseptik topikal,
dan mulut bilas. Di dalam endodontik, OCT telah disarankan sebagai irigasi saluran akar
alternatif dan medikamen intracanal karena aktivitas antimikroba terhadap faecalis
Enterococcus dan patogen endodontik lainnya.
E. faecalis sering diisolasi dari gigi dengan infeksi endodontik persisten. Ia mampu bertahan
hidup di saluran akar sebagai organisme tunggal atau sebagai komponen utama flora, Selain itu
terhadap resistensi yang melekat pada antimikroba irigasi dan medikamen intracanal.
Biofilm saluran akar adalah yang dominan pola kolonisasi mikroba dan faktor penting untuk
periodontitis apikal. Teknik pembersihan dan pembentukan saat ini adalah tidak dapat
sepenuhnya menghilangkan bakteri biofilm dari bagian yang tidak diinstrumentasi dan
kompleksitas anatomi saluran akar. Persistensi bakteri pada saat obturasi mengurangi
kemungkinan penyembuhan pasca perawatan. Dengan demikian, saluran akar sealer dengan
persyaratan fisik, biologis, dan sifat antibakteri yang ditingkatkan adalah prasyarat penting untuk
mencegah infeksi ulang.

Substantivitas antimikroba saluran akar sealer bermanfaat untuk menghilangkan residu mikroba
dalam sistem saluran akar dan tubulus dentin. Meskipun demikian, saluran akar sealer memiliki
sifat antimikroba awal yang menghilang dengan cepat setelah pengaturan lengkap. Percobaan
sebelumnya untuk meningkatkan antimikroba sifat sealer dengan penambahan langsung dari
agen antimikroba menghasilkan efek jangka pendek pelepasan, disintegrasi sealer saluran akar,
dan munculnya resistensi bakteri. Efek antimikroba dari beberapa nanopartikel-sealer saluran
akar yang terintegrasi telah diselidiki sebelumnya. partikel nano menunjukkan efek antimikroba
yang unggul dibandingkan dengan rekan massal mereka karena luas permukaannya yang lebih
tinggi dan reaktivitas, akibatnya meningkatkan interaksi dengan sel mikroba.
Sealer resin berbasis epoksi telah digunakan secara luas di klinis dan laboratorium pengaturan
karena fisik mereka yang menguntungkan, antimikroba, dan sifat biologis. NS aktivitas
antimikroba sealer resin epoksi adalah disebabkan oleh adanya bisphenol A diglisidil eter dan
epoksida tidak terpolimerisasi dan amina. Namun, bahan berbasis epoksi kehilangan aktivitas
antimikroba mereka dengan waktu . Baru-baru ini, semen kalsium silikat bioaktif telah
diperkenalkan sebagai root alternative sealer saluran dengan sifat yang ditingkatkan; mereka
memiliki sifat antimikroba yang baik karena pelepasan kalsium hidroksida dan memiliki
kemampuan untuk membentuk hidroksiapatit selama pengaturan proses, menyegel dentin akar
dan sealer antarmuka. Penyelidikan sebelumnya menunjukkan sealer berbasis kalsium silikat
(bioceramic sealer) lebih rentan terhadap pelarutan dan lebih dipengaruhi oleh enzim saliva dan
darah dibandingkan dengan resin epoksi yang lebih stabil penyegel. Antimikroba bioceramic
sealer aktivitas turun dalam beberapa hari setelah pengaturan, sedangkan hasil klinis yang terkait
dengan sealer biokeramik berada dalam jangkauan dilaporkan dalam banyak penelitian
sebelumnya yang menggunakan jenis sealer lainnya.

Dalam penelitian kami sebelumnya, dimasukkannya 1% atau 2% berat DSP menjadi sealer resin
epoksi (AH Ditambah [AH]; Dentsply Sirona, Tulsa, OK) dan sealer berbasis kalsium silikat
(EndoSequence Penyegel SM [SM]; Brasseler, Savannah, GA) meningkatkan sifat antimikroba
BC dan mempertahankan alirannya dalam batas yang dapat diterima Batas ISO 6876:2012 (17
mm). Namun demikian, aktivitas antimikroba dari sealer hanya diuji secara in vitro tanpa
menggunakan dentin substrat . Dentin memiliki potensi untuk menghambat efek antimikroba
endodontic agen. Oleh karena itu, penting untuk menggunakan model gigi saat menguji yang
baru dikembangkan biomaterial untuk lebih mewakili klinis skenario.

Tujuan dari studi saat ini adalah untuk menilai aktivitas antimikroba sebelumnya saluran akar
yang disintesis dan dikarakterisasi sealer yang dimuat dengan DSP pada E. faecalis –
terinfeksi model gigi in vitro menggunakan analisis mikrobiologi komplementer, mikroskop
pemindaian laser confocal (CLSM), dan pemindaian mikroskop elektron (SEM).
BAHAN DAN METODE
Dua sealer endodontik digunakan dalam hal ini proyek: SM dan AH. DSP disintesis sesuai
dengan protokol yang diterbitkan sebelumnya menggunakan tetraetil ortosilikat sebagai silika
pendahulu (Millipore Sigma, Mississauga, ON, Kanada) dan OCT sebagai templat pori/ senyawa
antimikroba (TCI Amerika, Portland, ATAU); DSP (1% berat dari total massa sealer) dicampur
secara homogen menggunakan spatula di atas lempengan kaca. Ini konsentrasi ditemukan untuk
mempertahankan aliran sealer dalam batas yang dapat diterima (ISO 6876:2012) dan
menunjukkan antimikroba yang serupa aktivitas hingga 2% wt DSP-loaded sealer 24. NS studi
telah disetujui oleh University of Komite Etika Toronto (persetujuan no.38574).
Persiapan Sampel
Gigi berakar tunggal dikumpulkan dan dipelihara dalam saline pada 220 C digunakan dalam
penelitian ini. NS mahkota dibedah menggunakan alat berputar gergaji berlian (IsoMet Diamond
Wafering pisau; Buehler, Lake Bluff, IL) di bawah air pendinginan, panjang kerja ditentukan
menggunakan file #15-K (Dentsply Sirona), dan kanal diinstrumentasi dengan ProTaper Next
file (Dentsply Sirona) hingga ukuran file X4 (40/0.65 VT). Saluran akhirnya diairi dengan 5%
natrium hipoklorit diikuti oleh 17% EDTA. Didapatkan 3 mm apikal dari setiap akar
menggunakan gergaji berlian berputar di bawah air pendinginan. Sampel disterilkan dengan
autoklaf selama 20 menit pada 121 C in air deionisasi26. Spesimen dikeringkan dan dilapisi pada
permukaan luarnya dengan 2 lapisan dari cat kuku.

Inokulasi Bakteri
Kanal terinfeksi E. faecalis (American Jenis Koleksi Budaya 47077; ATCC, Manassas,
VA). Budaya semalam E. faecalis tumbuh dalam infus otak-jantung (BHI) di 37 C dan
disesuaikan dengan kerapatan optik pada a panjang gelombang 600 nm 0,1 digunakan untuk
menginfeksi kanal selama 3 minggu sambil mengganti media setiap 48 jam. Setiap sampel
adalah dimasukkan ke dalam tabung sentrifus yang berisi 1 mL BHI dan disentrifugasi pada
masing-masing media penggantian selama 10 menit. Setelah masa inkubasi, sampel dicuci
dengan 1 mL air suling untuk menghilangkan yang tidak terikat bakteri.
Sampel Obturasi
Sampel dibagi menjadi 5 kelompok ( n 5 4/ kelompok/titik waktu) sesuai dengan saluran akar
penyegel. Kanal diisi dengan gutta-percha dan AH (grup 1), AH 1 DSP (1% berat) (grup 2), BC
(grup 3), BC 1 DSP (1% berat) (grup 4), atau tidak terisi (kontrol positif, kelompok 5); spesimen
berinstrumen yang tidak terinfeksi digunakan sebagai kontrol negatif. Spesimen disimpan dalam
kondisi lembab pada suhu 37 C. Semua prosedur dilakukan dalam lemari biosafety. Setelah masa
inkubasi yang ditetapkan (1, 7, atau 28 hari), setiap gigi dibelah menjadi 2 bagian; setengahnya
digunakan untuk analisis mikrobiologi, dan setengah lainnya digunakan untuk mikroskopis
analisis. CLSM digunakan untuk menilai persentase bakteri hidup/mati, dan SEM digunakan
untuk menilai arsitektur permukaan dan sealer dan penetrasi bakteri dari tubulus dentin pada
perbesaran tinggi (500!).
Analisis Mikrobiologis
Kedalaman penuh bur bulat (ukuran ISO #4, diameter 5 1,4 mm) digunakan untuk mendapatkan
serutan dentin dari saluran akar. yang diperoleh bubuk dentin dikumpulkan di tabung reaksi
microcentrifuge berisi 1 mL BHI, divortex, diencerkan secara serial, dan disepuh. Koloni bakteri
yang masih hidup dihitung untuk setiap bahan dan ditransfer ke log 10 (unit pembentuk koloni
[CFU])/mL).
Analisis Mikroskopis: CLSM
Sampel diwarnai dengan Live/Dead Kit Viabilitas Bakteri BacLight (Invitrogen, Eugene, OR)
(eksitasi/emisi 495/515 nm), dan antarmuka dentin-sealer adalah dianalisis segera menggunakan
Zeiss LSM 880 Sistem resolusi super Airyscan (Carl Zeiss Oberkochen, Jerman) untuk
menentukan persentase sel hidup/mati untuk masing-masing perlakuan. Tiga wilayah yang
diminati adalah diperoleh dari setiap sampel (12 gambar per grup per total titik waktu). Z-
tumpukan (vertical penampang virtual) dipindai pada 0,65-ukuran langkah mm dan
direkonstruksi menjadi digital Model antarmuka 3 dimensi. NS persentase sel bakteri hidup/mati
adalah ditentukan menggunakan perangkat lunak ImageJ/Fiji (Institut Kesehatan Nasional,
Bethesda, MD)
GAMBAR 1 – ( A ) Jumlah sel bakteri yang hidup (log CFU/mL) pada dentin akar setelah 1, 7, dan 28 hari kontak dengan
kelompok kontrol (tanpa sealer) (C), BC, BC 1 DSP, AH, dan AH 1 DSP. Huruf kecil yang berbeda di masing-masing mewakili
perbedaan yang signifikan antara kelompok ( P , .05). ( B ) Persentase sel hidup pada dentin akar setelah 1, 7, dan
28 hari kontak dengan kelompok kontrol (C), BC, BC 1 DSP, AH, dan AH 1 DSP. Huruf yang berbeda di masing-masing mewakili
perbedaan yang signifikan antara kelompok ( P , .05).
Gambar dianalisis setelah dikurangi latar belakang dan menyesuaikan ambang batas
dan opsi partikel untuk ditampilkan dan dihitung sel bakteri saja.
Analisis Mikroskopis: SEM
Sampel representatif diproses untuk SEM. Sampel didehidrasi dengan perendaman dalam
peningkatan konsentrasi etanol (dari 25%–100%) diikuti oleh selanjutnya perendaman dalam
100% aseton, 50% aseton ditambah 50% hexamethyldisilazane, dan 100% hexamethyldisilazane
dan ditempatkan di desikator selama 24 jam untuk mendapatkan lengkap pengeringan; mereka
kemudian dilapisi emas (Sistem pelapisan SC515SEM; Polaron Equipment Ltd, Laughton, East
Sussex, Inggris) dan diperiksa menggunakan pemindaian electron mikroskop (FlexSEM 1000;
Hitachi High-Technologies Corporation, Tokyo, Jepang) ke menilai arsitektur permukaan dan
bakteri dan cakupan sealer dari tubulus dentin.
Analisis statistik
Semua eksperimen dan data dilakukan dan dikumpulkan dengan minimal n 5 3 tapi sering
dengan ukuran kelompok yang lebih besar seperti yang dijelaskan lebih awal. Analisis varians
satu arah dan Uji post hoc Tukey digunakan untuk perbandingan antar kelompok. Tingkat
signifikansi ditetapkan pada P , .05. Statistik analisis dilakukan dengan menggunakan SPSS 20.0
perangkat lunak (IBM Corp, Armonk, NY).
HASIL
Analisis Mikrobiologis
Kelompok kontrol positif menunjukkan rata-rata 6 simpangan baku 8,25 6 0,01, 8,23 6 0,12, dan
17,28 6 0,1 log CFU/mL pada 1, 7, dan 28 hari berturut-turut. Semua lainnya kelompok (BC, BC
1 DSP, AH, dan AH 1 DSP) menunjukkan pengurangan CFU yang signifikan sama sekali titik
waktu dibandingkan dengan control ( P , .05) ( Gbr. 1 A ). Penambahan DSP ke BC secara
signifikan mengurangi jumlah CFU (2,11 6 0,13, 2,22 6 0,19, dan 2,25 6 0,17 at 1, 7, dan 28 hari,
masing-masing) dibandingkan dengan sealer yang tidak dimodifikasi (3,21 6 0,11, 4,3 6 0,15,
dan 4,2 6 0,2 pada 1, 7, dan 28 hari, masing-masing), dan pengurangan ini adalah dipertahankan
selama periode 28 hari. AH 1 DSP menunjukkan peningkatan antimikroba kinerja versus AH
pada 1 hari (4,21 6 0,17 vs 5,19 6 0,12, P , .05); efeknya tidak diamati pada AH 1 DSP versus
AH pada 7 hari
(5,26 6 0,15 vs 5,29 6 0,1) dan 28 hari (5,29 6 0,06 vs 5,31 6 0,07) ( P . .05). Meskipun aktivitas
antibakteri untuk BC adalah lebih tinggi dibandingkan dengan AH, BC . yang tidak dimodifikasi
aktivitas antibakteri memburuk seiring waktu dibandingkan dengan baseline, sedangkan aktivitas
AH tetap stabil sepanjang masa inkubasi.
Analisis Mikroskopis: CLSM
Gambar 2 menunjukkan confocal yang representative gambar kontrol dan eksperimental
kelompok. Viabilitas bakteri adalah yang tertinggi untuk kelompok kontrol di semua titik
waktu. tidak seperti Hasil CFU, penambahan DSP ke BC menurunkan viabilitas bakteri
dibandingkan dengan