ISSN 0006 2979, Biokimia (Moskow), 2020, Vol. 85, No. 9, pp. 1082 1092. © Pleiades Publishing, Ltd.

, 2020.
Teks Rusia © Penulis, 2020, diterbitkan di Biokhimiya, 2020, Vol. 85, No. 9, hlm. 1294 1304.

Ultrastruktur Hepatosit dari Tikus

Laboratorium yangMakanan Hewan
Laboratorium Kering Standar*
DiberiVB Vays1, IM Vangeli1, OA Averina 1, ML Lovat2, dan LE Bakeeva1,a**

1
Belozersky Institut Biologi Fisiko Kimia, Lomonosov Moscow State University, 119.991 Moskow,
Rusia 2Fakultas Biologi, Lomonosov Moscow State University, 119.234 Moskow, Rusia
e
mail: bakeeva@belozersky.msu.ru
Diterima 7 Juli 2020
Revisi 7 Juli 2020
Diterima 18 Juli 2020

Abstrak—Perubahan destruktif yang signifikan dalam ultrastruktur hepatosit dari tikus laboratorium yang disimpan di
vivarium yang berbeda di Moskow dan diberi makan dengan diet hewan laboratorium kering yang diperoleh dari
produsen dalam negeri berbeda yang tidak standar untuk produk awal ditunjukkan menggunakan elektron
mikroskopi. Lebih lanjut, gangguan pada ultrastruktur sel parenkim hati terjadi terlepas dari status hewan (SPF atau
konvensional), kondisi berbagai vivarium, serta pabrik pakan. Pada saat yang sama, studi tentang ultrastruktur
hepatosit hati dari tikus yang disimpan di fasilitas Laboratorium Charles River di Jerman dan diberi makan dengan
diet hewan laboratorium Altromin Spezialfutter (GmbH & Co., Jerman) yang diproduksi menggunakan kontrol kualitas
bahan tidak mengungkapkan perubahan destruktif dalam struktur ultra internal hepatosit. Namun, jika tikus ini
kemudian diberi makan dengan makanan yang diproduksi di pabrik lokal, perubahan struktur sel hati terjadi setelah 2
bulan. Dengan demikian, memberi makan dengan diet kering dari produsen domestik dengan komposisi yang tidak
ditentukan menyebabkan perubahan signifikan dalam ultrastruktur hepatosit pada hewan kontrol, yang
mencerminkan perkembangan beberapa proses patologis dalam tubuh.

DOI: 10.1134/S0006297920090084

Kata kunci: mitokondria, hepatosit, ultrastruktur, mencit, standar diet laboratorium

PENDAHULUAN
Hati adalah kelenjar terbesar dari sistem
pencernaan, yang melakukan berbagai macam fungsi
yang sangat penting. Jaringan hati adalah yang
pertama dipelajari secara luas dengan mikroskop
elektron. Kemajuan pesat dari metode ini
menghasilkan akumulasi sejumlah besar data tentang
struktur jaringan hati yang sangat halus. Ultrastruktur
hepatosit dipelajari secara rinci dalam beberapa karya
klasik pada tahun 1950 1960-an. Untuk pertama
kalinya ultrastruktur sel hati dijelaskan oleh Dalton et
al. [1] dan Fawcett et al. [2]. Namun, karya Bruni dan
Porter [3] yang
Singkatan: agEPR, agranular EPR; EPR, retikulum
endoplasma; grEPR, EPR granular; IVC, kandang
berventilasi individual; NAFLD, penyakit hati berlemak
nonalkohol; status SPF, hewan spesifik bebas patogen;
VEC, Kompleks Fasilitas Hewan dan Unit Penelitian
Vivarium, Institut Mitoengineering Universitas Negeri
Lomonosov Moskow.
* Artikel dipresentasikan oleh Pemimpin Redaksi
akademisi VP Skulachev.
** Kepada siapa korespondensi harus ditujukan.
fitur yang diperiksa dari ultrastruktur hepatosit
menggunakan teknik yang berbeda untuk fiksasi
jaringan hati telah dianggap klasik dan tetap menjadi
standar dunia hingga hari ini. Hati dikenali terdiri dari
stroma dan parenkim yang disajikan oleh sel epitel -
hepatosit. Sel parenkim hati mamalia memiliki bentuk
poligonal, mereka memiliki bentuk heksagonal tidak
beraturan dengan sudut yang tidak jelas pada
penampang. Membran sitoplasma hepatosit
membentuk banyak pertumbuhan – mikrovili, yang
meningkatkan luas permukaan sel yang aktif secara
fungsional. Pada Gambar 1 (a dan b) ultrastruktur
hepatosit normal disajikan. Hepatosit dicirikan oleh inti
bulat yang dikelilingi oleh dua selubung membran
dengan pori-pori inti mengganggu kontinuitasnya. Inti
memiliki nukleolus dan zona hetero dan eukromatin.
Sitoplasma mengandung sejumlah besar mitokondria
terpisah, banyak ribosom, butiran glikogen, dan tangki
retikulum endoplasma (EPR) yang didistribusikan ke
seluruh sitoplasma. Membran EPR selalu banyak
 mitokondria surround dalam sitoplasma hepato cyte juga kontak dengan membran dari
(jumlah mitokondria dalam sel lebih dari 1000) dan

1082
ULTRASTRUKTUR hepatosit DI MICE PADA DRY DIET 1083

Gambar 1. Ultrastruktur hepatosit diakui sebagai standar dunia (menurut Bruni dan Porter [3]). a) Ikhtisar: (Nu) adalah inti dengan
pori inti (Po). Dalam sitoplasma terlihat: kompleks grEPR (RER1–RER7), mitokondria (Mt), membran aparatus Golgi (Go1, Go2, Go3,
Go4), partikel glikogen (Gl), lisosom (Ly), inklusi lipid (L), badan mikro (Mi), saluran empedu (BC), dan sinusoid (S). Perbesaran
10.200×. b) Daerah sel parenkim hati tikus pada perbesaran yang lebih tinggi. Panah menunjukkan tangki grEPR. Pergilah, aparat
Golgi. Perbesaran 22.000× (menurut Bruni dan Porter [3]).
dan globulin plasma darah disintesis dalam tangki
grEPR; Aparatus Golgi bertanggung jawab untuk
penghentian sintesis [4].
aparatus Golgi [3]. EPR terdiri dari dua komponen: Diketahui bahwa setiap perubahan fungsi
granular dan smooth, atau agranular. Biasanya hepatosit, termasuk yang berhubungan dengan
komponen granular dari EPR jauh lebih berkembang perkembangan proses patologis dalam tubuh,
daripada komponen agranular. EPR granular (grEPR) mempengaruhi ultrastruktur hepatosit. Secara khusus,
terlihat seperti tumpukan (hingga 20) tangki yang rata, menurut data literatur, detoksifikasi bahan beracun
yang secara individual memiliki bentuk sedikit dikaitkan dengan pertumbuhan agEPR yang mengisi
melengkung dan terletak sejajar satu sama lain. Di seluruh sitoplasma [4 8]. Setelah penghapusan zat
hati tikus, grEPR tidak terganggu dengan EPR beracun, kelebihan jaringan agEPR dihancurkan oleh
agranular (agEPR). Membran agEPR terletak dekat autophagy [7]. Pada kolestasis ekstrahepatik [6]
dengan membran sitoplasma hepatosit. setelah pengenalan zat hepatotoksik dan karsinogenik
Salah satu fungsi yang paling penting dari seperti fenobarbital [4], ethionine [7], dan asam tanat
hepatosit – detoksifikasi bahan beracun – terkait [8] tingkat hipertrofi agEPR yang berbeda diamati.
dengan agEPR. Metabolisme karbohidrat juga Banyak dari senyawa yang disebutkan di atas
berhubungan dengan agEPR. Albumin, fibrinogen, menyebabkan perubahan destruktif pada hepatosit
 seperti peningkatan lumen tangki, hilangnya susunan mitokondria. Telah ditunjukkan bahwa hepatitis C,
membran grEPR yang saling paralel, pembengkakan virus yang menginfeksi

BIOCHEMISTRY (Moskow) Vol. 85 No. 9 2020

1084 VAYS dkk.
tion mempengaruhi hati, dapat berkembang tanpa
gejala selama bertahun-tahun sampai kerusakan hati BAHAN DAN METODE
menjadi kritis [9]. Virus hepatitis C menyebabkan
perubahan yang nyata pada ultrastruktur hepatosit Pekerjaan dilakukan pada tikus jantan dewasa
selama infeksi. Disosiasi sitoplasma berkembang yang diberi berbagai jenis diet. Hewan-hewan berikut
dalam sel yang mencakup perubahan distrofik digunakan:
hepatosit: pembengkakan sel dengan penghalusan – tikus hibrida F1 (C57Bl/6×CBA) status SPF (hewan
sitoplasma, pembengkakan mitokondria, hiperplasia bebas patogen spesifik), berusia 3 bulan (n = 5), yang
agEPR, hipertrofi aparatus Golgi, dan perubahan menerima pakan ternak laboratorium autoklaf “Chara”
destruktif nukleus. . (Assortiment Agro , Rusia) dan ditempatkan di
Fatty hepatosis (steatosis), atau penyakit hati kandang individu berventilasi (IVCs), 5 8 tikus per
berlemak nonalkohol (NAFLD), saat ini diakui sebagai kandang, di bawah kondisi Kompleks Fasilitas Hewan
salah satu penyakit hati yang paling luas di dunia. dan Unit Penelitian (VEC), Institut Mitoengineering
Lemak, terutama trigliserida, terdiri lebih dari 5% dari Universitas Negeri Lomonosov Moskow;
massa hati pasien. NAFLD berkembang menjadi – tikus hibrida F1 (C57Bl/6×CBA) status SPF,
fibrosis dan sirosis hati [11]. Diasumsikan bahwa berumur 1 bulan (n = 5), yang menerima pakan ternak
patogenesis NAFLD dapat dikaitkan dengan resistensi laboratorium yang diautoklaf “LBK 120_106104”
insulin [12, 13]; patologi ini dapat berkembang karena (Pabrik Combikorm Tosno, Rusia) dan ditempatkan di
nutrisi yang salah dengan dominasi lipid dan IVC, 5 8 ekor tikus per kandang dalam kondisi VEC;
karbohidrat. Dalam NAFLD ultrastruktur hepatosit – Tikus C57Bl/6 status SPF, umur 3 bulan (n = 3),
sangat terpengaruh: inklusi lipid, pembengkakan yang menerima pakan ternak laboratorium “Chara”
mitokondria, gangguan dalam struktur EPR diamati (Assortiment Agro) yang diautoklaf dan dipelihara di
[14 16]. Dalam kondisi eksperimental NAFLD diinduksi IVC, 5 8 ekor tikus per kandang, dalam kondisi
dengan memberi makan hewan laboratorium dengan vivarium Translational Laboratorium Kedokteran,
diet kering dengan komposisi yang dimodifikasi – Fakultas Kedokteran Dasar, Universitas Negeri
peningkatan kandungan kolesterol dan (atau) fruktosa Lomonosov Moskow;
[14 16]. – Tikus C57Bl/6, 1 bulan (n = 3), hewan konvensional,
Saat ini, di laboratorium vivarium domestik, yang disimpan di ruang tinggal perantara untuk hewan
hewan diberi makan dengan diet hewan laboratorium di Departemen Fisiologi Manusia dan Hewan,
standar kering yang diproduksi terutama oleh Fakultas Biologi, Universitas Negeri Lomonosov
produsen lokal Rusia, yang spesialisasi utamanya Moskow dan menerima laboratorium pakan ternak
adalah produksi pakan pertanian. Komposisi diet yang diproduksi oleh Laboratorkorm, Rusia;
diatur oleh Standar Negara GOST P 50258 92 yang – CD 1 mencit status SPF, usia 1 bulan (n = 5),
diperkenalkan pada tahun 1992 [17]. Pabrikan Rusia Laboratorium Charles River (Jerman), diakuisisi untuk
diharuskan untuk menyatakan hanya bahan bahan Rusia oleh OOO LBI; menerima makanan hewan
pakan, sedangkan standar internasional laboratorium dari Altromin Spezialfutter (GmbH & Co.,
mengharuskan untuk menyatakan jumlah protein, Jerman);
karbohidrat, lemak, elemen, dan vitamin dalam – CD 1 mencit status SPF, umur 3 bulan (n = 5).
komposisi, termasuk komposisi asam amino. Oleh Selama bulan pertama kehidupan mereka,
karena itu, diet hewan laboratorium yang diproduksi di hewan-hewan itu dipelihara di bawah kondisi
pabrik lokal dapat mengandung komponen yang tidak Laboratorium Sungai Charles dan menerima makanan
terkontrol seperti diamina yang tidak dipantau secara yang diproduksi oleh Altromin Spezialfutter; selama
teratur. Pada saat yang sama, tidak ada data dalam bulan kedua dan ketiga hidupnya mencit dipelihara di
literatur tentang studi yang memberikan informasi rinci IVC, 58 ekor per kandang, dalam kondisi VEC, dan
tentang jaringan hewan laboratorium kontrol yang menerima pakan ternak laboratorium “LBK
mengonsumsi makanan dari produsen lokal, seperti 120_106104” (Combikorm Plant of Tosno).
ultrastruktur hepatosit. Kami memeriksa ultrastruktur Makanan dan air diberikan ad libitum, hewan
hepatosit hewan laboratorium yang diberi pakan dipelihara dengan siklus gelap terang 12/12 jam, suhu
kering dari berbagai pabrikan Rusia yang disimpan dipertahankan pada 20 24°C. Serpihan kayu Brankas
dalam vivar dalam kondisi berbeda (terbuka atau BK 8/15 (JRS, Jerman) digunakan sebagai alas tidur.
IVC); kami juga membandingkan hasil kami dengan Semua bahan disterilkan sebelum digunakan di IVC.
ultrastruktur sel hati dari tikus, yang diberi makanan Spesimen untuk mikroskop elektron difiksasi
yang diproduksi oleh pabrikan Eropa. dengan larutan glutaraldehid 3% dalam buffer fosfat
 (pH 7,4) selama 2 jam pada 4°C dan kemudian
difiksasi dengan larutan 1% osmi um tetroksida dalam
buffer fosfat selama 1,5 jam; selanjutnya zat-zat
tersebut didehidrasi dalam larutan alkohol dengan
peningkatan konsentrasi: 50, 60, 70, 96, dan 100%.
Sampel dimasukkan ke dalam resin epoksi Epon 812.
Bagian ultra tipis serial dibuat dengan pisau berlian
menggunakan ultramikrotom Leica ULTRACUT UCT
(Leica, Jerman). Bagian ultra tipis dikontraskan
dengan menggunakan timbal sitrat sesuai dengan
prosedur yang disarankan oleh Reynolds [18].
Pemeriksaan sampel dilakukan dengan mikroskop
elektron JEM 1400 (Jeol, Jepang).

BIOKIMIA (Moskow) Vol. 85 No. 9 2020

ULTRASTRUKTUR HEPATOCYTES PADA MENcit PADA DIET KERING 1085
banyak mitokondria bulat atau memanjang yang
HASIL dikelilingi oleh membran grEPR terlihat. Kompleks
membran grEPR terletak secara acak dan
Gambar 2 menyajikan ikhtisar ultrastruktur terkonsentrasi di sekitar mitokondria.
hepatosit tikus 3 bulan (C57Bl/6×CBA) hibrida F1 Selain tikus, yang disimpan dalam kondisi VEC,
dengan status SPF. Tikus-tikus dari kelompok ini kami mempelajari ultrastruktur hepatosit dari tikus
disimpan dalam IVC di bawah kondisi VEC dan C57Bl/6 status SPF, yang disimpan di bawah kondisi
menerima diet "Chara" yang diautoklaf. Struktur umum vivarium laboratorium Kedokteran Terjemahan,
jaringan parenkim hati tidak terpengaruh. Tidak ada Fakultas Kedokteran Dasar, Negara Bagian
tanda-tanda pembengkakan, membran hepatosit Lomonosov Moskow. Universitas dan menerima diet
saling berdekatan, saluran empedu terlihat. Di dalam hewan laboratorium yang sama "Chara". Kita dapat
sel ada tetes lipid, tetapi jumlahnya tidak banyak. melihat pada Gambar 4 bahwa struktur umum jaringan
Namun, meskipun tidak ada tanda-tanda perubahan parenkim pada kelompok hewan ini juga tidak
struktur umum jaringan parenkim, parameter terpengaruh, batas hepatosit tetangga berbeda, sel
ultrastruktur dalam hepatosit pada dasarnya berbeda endotel kapiler terlihat. Namun, hewan ini juga
dari standar yang ditetapkan dalam karya klasik. memiliki area cahaya elektron yang bebas dari
Ruang bebas organel besar terlihat di dalam sel yang organel seluler di semua hepatosit. Serupa dengan
ditunjukkan pada Gambar 2, sementara semua kelompok hewan sebelumnya, semua organel
organel seluler terjepit di antara area cahaya elektron. intraseluler terjepit dalam untaian sitoplasma sempit
Hal ini dapat dilihat pada gambar yang ditunjukkan yang terletak di antara zona luas yang diisi dengan
pada Gambar. 3 diperoleh pada perbesaran yang materi amorf. Dengan demikian, ultrastruktur bagian
lebih besar bahwa daerah ini diisi dengan materi dalam hepatosit hati dari tikus dengan status SPF
amorf dan bukan hasil dari pembengkakan. Namun yang diberi pakan hewan laboratorium "Chara"
demikian, ultrastruktur bagian dalam organel ditandai
sitoplasma normal:
 Gambar 2. Ultrastruktur hepatosit tikus hibrida F1 berusia 3 bulan (C57Bl/6×CBA) Status SPF, yang disimpan di IVC di bawah
kondisi VEC dan menerima diet autoklaf "Chara". Pada gambar terdapat empat hepatosit (ditunjukkan dengan no. 14). Panah
menunjukkan tetesan lemak. Di dalam sel terlihat area yang luas terisi dengan materi amorf (A). Sebutan: inti; A; BD, saluran
empedu. Bilah skala: 10 m.

BIOKIMIA (Moskow) Vol. 85 No. 9 2020

1086 VAYS dkk.
 Gambar 3. Fragmen sel parenkim dari hati tikus hibrida F1 berusia 3 bulan (C57Bl/6×CBA) status SPF, yang disimpan di IVC di
bawah kondisi VEC dan menerima diet autoklaf "Chara". Mitokondria (M) memanjang atau bulat yang dikelilingi oleh membran grEPR
yang terletak secara acak terjepit di antara area cahaya elektron yang diisi dengan materi amorf (A). Panah menunjukkan tetesan
lemak. Sebutan: inti; A; M; grEPR. Bilah skala: 5 m.

Gambar 4. Tampilan umum hepatosit dari tikus C57Bl/6 berusia 3 bulan status SPF, yang disimpan di bawah kondisi vivarium
laboratorium Kedokteran Translasi, Fakultas Kedokteran Dasar, Universitas Negeri Lomonosov Moskow, dan menerima pakan hewan
laboratorium "Chara". Lima sel parenkim hati terlihat (ditunjukkan oleh no. 15) dan di antara mereka terdapat kapiler yang
mengandung eritrosit (E). Di semua hepatosit terdapat area cahaya elektron (A) yang bebas dari organel seluler. Panah menunjukkan
tetesan lemak. Sebutan: inti; A; E. Bilah skala: 10 m

BIOCHEMISTRY (Moskow) Vol. 85 No. 9 2020

ULTRASTRUKTUR HEPATOCYTES PADA MENcit PADA DIET KERING 1087
disimpan.
terganggu, terlepas dari tempat di mana tikus
 Dalam percobaan lebih lanjut kami menurunkan
usia tikus yang diteliti dan mengubah diet laboratorium
yang diberikan kepada hewan. Kami mengambil
spesimen hati dari tikus hibrida F1 berusia 1 bulan
(bukan 3 bulan) (C57Bl/6×CBA) status SPF, yang
disimpan di IVC dalam kondisi VEC dan menerima
pakan hewan laboratorium yang diautoklaf “LBK
120_106104”. Seperti pada kelompok hewan
sebelumnya, ultrastruktur umum hati tikus ini pada
perbesaran rendah juga tampaknya tidak terpengaruh.
Namun, pembesaran yang lebih besar
mengungkapkan bahwa hepatosit tikus, yang
menerima diet hewan laboratorium "LBK
120_106104", mirip dengan kelompok tikus
sebelumnya, sangat berbeda dari konsep klasik
struktur normal sel parenkim hati (Gbr. .5). Di dalam
hepatosit terdapat daerah bebas organel yang berisi
materi amorf cahaya elektron. Mitokondria yang bulat
dan memanjang dengan sedikit krista dikelilingi oleh
kompleks membran grEPR yang tersusun tidak
teratur.
Perubahan yang nyata diamati pada ultrastruktur
dalam hepatosit dari tikus C57Bl/6 konvensional
berusia 1 bulan, yang disimpan di ruang
tempat tinggal menengah untuk hewan di Departemen
Fisiologi Manusia dan Hewan, Fakultas Biologi,
Universitas Negeri Lomonosov Moskow. dan
menerima pakan ternak laboratorium yang diproduksi
oleh Laboratorkorm. Perubahan yang terdeteksi
bertepatan sepenuhnya dengan perubahan yang
dijelaskan di atas (Gbr. 6).
Untuk menguji hipotesis bahwa jenis pakan
ternak laboratorium mempengaruhi struktur hepatosit,
kami mempelajari spesimen hati yang berasal dari
mencit berumur 1 bulan dari stok CD 1 status SPF,
yang diperoleh langsung dari Laboratorium Charles
River. Hewan-hewan dari kelompok yang diteliti diberi
makan dengan pakan ternak laboratorium yang
diproduksi oleh Altromin Spezialfutter. Ultrastruktur
hepatosit dari tikus-tikus ini setuju dengan struktur
yang diterima secara umum dari sel-sel ini yang
divisualisasikan dengan mikroskop elektron. Gambar 7
menyajikan ultrastruktur hepatosit dari tikus kelompok
ini pada perbesaran rendah. Hepatosit dengan bentuk
heksagonal tidak beraturan, yang terisi secara merata
dengan konten sitoplasma dapat terlihat. Inti bulat
terletak di bagian tengah hepatosit dan sitoplasma sel
kaya dengan organel. Gambar 8 menyajikan
ultrastruktur hepatosit pada perbesaran yang lebih
besar. Beberapa oval atau bulat mito

Gambar. 5. Spesifik fitur dari ultrastruktur dalam hepatosit dari 1 bulan hybrid tua F1 tikus (C57BL / 6 × CBA) status SPF, yang
disimpan di bawah kondisi VEC dan menerima diautoklaf laboratorium diet hewani “LBK 120_106104”. Area bebas organel yang diisi
dengan cahaya elektron, konten amorf (A) terlihat. Mitokondria yang memanjang dan membulat dengan sedikit jumlah krista (M)
dikelilingi oleh kompleks membran grEPR, pada perifer sel terlihat membran agEPR. Sebutan: SM, saluran empedu; usiaEPR; inti;
grEPR; A; M. Bilah skala: 5 m.

BIOKIMIA (Moskow) Vol. 85 No. 9 2020

1088 VAYS dkk.

Gambar 6. Gambaran umum hepatosit dari tikus C57Bl/6 konvensional berusia 1 bulan, yang disimpan di ruang tinggal perantara
untuk hewan di Departemen Fisiologi Manusia dan Hewan, Fakultas Biologi, Universitas Negeri Lomonosov Moskow dan menerima
laboratorium pakan ternak oratorium yang diproduksi oleh Laboratorkorm. Tujuh sel hati parenkim terlihat (ditunjukkan oleh no. 17)
dan kapiler terletak di antara mereka. Area cahaya elektron (A) hadir di ruang dalam semua hepatosit. Sebutan: A. Bilah skala: 20 m.

Gambar 7. Ultrastruktur hepatosit dari hati tikus 1 bulan dari stok CD 1 status SPF, yang disimpan di bawah kondisi Laboratorium
Sungai Charles dan diberi makan dengan pakan ternak laboratorium yang diproduksi oleh Altromin Spezialfutter. Lima hepatosit
ditunjukkan dengan no. 1 5. Inti bulat terletak di bagian tengah hepatosit. Sebutan: inti; saluran empedu. Bilah skala: 20 m.

BIOKIMIA (Moskow) Vol. 85 No. 9 2020

ULTRASTRUKTUR HEPATOCYTES PADA MENcit PADA DIET KERING 1089
 Gambar 8. Ultrastruktur dalam hepatosit dari tikus CD 1 berumur 1 bulan memiliki status SPF, yang disimpan di bawah kondisi
Laboratorium Charles River dan diberi makan dengan pakan ternak laboratorium yang diproduksi oleh Altromin Spezialfutter.
Mitokondria oval atau bulat (M) didistribusikan secara merata di seluruh sitoplasma hepatosit. Tumpukan membran grEPR paralel
terlihat. Membran agEPR terletak di dekat membran plasma hepatosit. Sebutan: agEPR; grEPR; inti; SM, saluran empedu. Bilah
skala: 5 m.
Moskow dan diberi makan dengan diet hewan
laboratorium kering yang diproduksi oleh produsen
kondria didistribusikan secara merata di seluruh
dalam negeri, perubahan patologis yang nyata dari
sitoplasma hepatosit. grEPR dikembangkan dengan
ultrastruktur bagian dalam sel hepatosit adalah
baik: tumpukan membran paralel terlihat dengan
diamati. Perhatikan bahwa gangguan dalam
banyak butiran osmiofilik berdiameter 12 15 nm,
ultrastruktur sel hati diamati secara independen dari
ribosom, terletak di membran luar. Membran agEPR
status hewan (SPF atau konvensional), terlepas dari
terletak di dekat membran plasma hepatosit.
kondisi vivarium, dan juga secara independen pada
Setelah tiba dari Laboratorium Sungai Charles produsen makanan hewan (kami telah memperoleh
pada usia 1 bulan (status SPF) tikus yang tersisa dari
hasil yang sama juga untuk Wistar tikus). Namun,
kelompok ini disimpan selama 2 bulan di IVC dalam
studi ultra struktural hepatosit dari hati tikus, yang
kondisi VEC dan menerima pakan ternak laboratorium
disimpan di Laboratorium Charles River dan
"LBK 120_106104". Spesimen hati diambil dari hewan
menerima makanan hewan laboratorium yang
tersebut pada umur 3 bulan. Gambar 9 menunjukkan
diproduksi oleh Altromin Spezialfutter tidak
bahwa selama 2 bulan kelainan yang nyata
mengungkapkan perubahan patologis dalam
berkembang dalam ultrastruktur dalam hepatosit dari
ultrastruktur bagian dalam sel. Namun demikian,
hewan-hewan ini, yang berhubungan dengan
ketika tikus-tikus ini kemudian mulai menerima
perubahan destruktif yang terungkap pada hewan
makanan yang diproduksi di Rusia, gangguan pada
lain, yang menerima makanan yang diproduksi oleh
ultrastruktur sel hati berkembang selama dua bulan
produsen dalam negeri (Gbr. 26).
berikutnya.
Perlu dicatat bahwa gambar mikroskop elektron
yang umum saat ini di banyak studi terkait hati. Dan
PEMBAHASAN gambar kontrol hepatosit yang berasal dari hati hewan
sehat dalam beberapa karya menunjukkan perubahan
Dengan demikian, penelitian kami telah yang serupa dengan yang kami amati pada tikus.
menunjukkan bahwa pada semua kelompok tikus
Selain itu, foto hepatosit dengan tanda-tanda
laboratorium, yang dipelihara di vivarium yang
destruktif disajikan sebagai kontrol tidak hanya dalam
berbeda di
studi yang dilakukan di laboratorium ani
 BIOCHEMISTRY (Moskow) Vol. 85 No. 9 2020
1090 VAYS dkk.

Gambar 9. Ultrastruktur hepatosit dari hati CD 1 usia 1 bulan status SPF. Selama bulan pertama kehidupannya, tikus ini dipelihara
dalam kondisi Laboratorium Sungai Charles dan diberi pakan hewan laboratorium yang diproduksi oleh Altromin Spezialfutter dan
kemudian selama dua bulan dipelihara dalam kondisi VEC dan menerima pakan “LBK 120_106104”. Pada gambar enam hepatosit
ditunjukkan dengan nos. 1 6. Di semua hepatosit terdapat organel daerah cahaya elektron bebas yang diisi dengan materi amorf (A).
Sebutan: A; inti; batang skala 20 m.
menunjukkan bahwa kolesterol tinggi dan diet glukosa
tinggi [20] selama 15 minggu
mals, tetapi juga dalam studi hati manusia. Secara
menyebabkan gangguan diucapkan dalam
khusus, struktur ultra hepatosit dari pasien dengan
ultrastruktur hepatosit. Penulis menginterpretasikan
hepatitis C kronis diselidiki dalam pekerjaan [10] oleh
munculnya ruang bebas organel dalam sel sebagai
Falconet et al. Gambar kontrol hepatosit dari bahan
pembesaran (pembengkakan) retikulum endoplasma
biopsi orang sehat menunjukkan area bebas organel
dan “blebbing” dari membran sel. Namun, pada
besar yang diisi dengan materi amorf, grEPR dan
analisis ultrastruktur dalam hepatosit pada perbesaran
mitokondria terjepit dalam pita sitoplasma sempit.
tinggi (Gbr. 3), yang tidak digunakan dalam karya
Dalam karya Silva dkk. [19] perubahan dalam hati
Dallak et al., kami tidak melihat formasi membran di
dipelajari dalam perjalanan perkembangan steatosis
area bebas organel sel, serta pembengkakan organel
pada anak-anak. Anak-anak usia 1 sampai 14 tahun
sel.
dengan perkembangan fisik normal digunakan
Dalam karya Silva Veiga dkk. dengan tikus
sebagai kelompok kontrol. Namun, dalam hal ini
C57Bl/6, yang menerima selama 14 minggu diet tinggi
gambar mikroskop elektron kontrol yang disajikan dari
lemak (5000 kkal/kg) [16], serta dalam karya Abo El
hepatosit memiliki area bebas organel dalam sel dan
Khair et al. [15] dengan tikus Sprague Dawley yang
perubahan yang cukup besar dari isi sitoplasma. Jadi,
diberi diet tinggi lemak [21] gambar yang disajikan
bahkan pada manusia yang tidak menunjukkan
menunjukkan perubahan ultrastruktur hepatosit mirip
manifestasi patologi hati, perubahan destruktif serupa
dengan yang dijelaskan oleh kami. Namun, pada
terungkap di hati. Gangguan seperti itu kemungkinan
kelompok kontrol hewan yang digunakan dalam karya
besar terkait dengan nutrisi yang tidak tepat.
Silva Veiga et al. [16] dan Abo El Khair dkk. [15]
Gangguan ultrastruktur hepatosit yang sesuai
ultrastruktur sel parenkim hati merespon konsep klasik
dengan yang kami jelaskan dapat ditemukan dalam
[3]. Perlu dicatat bahwa selama pengembangan
literatur tentang investigasi efek diet tinggi lemak dan
steatosis lemak pada hewan, yang menerima diet
gula pada hewan. Jadi, dalam karya Dallak et al. [14]
tinggi lemak, penulis menggambarkan peningkatan
per dibentuk dengan tikus Sprague Dawley itu
ukuran hepatosit, kerusakan nukleus dan mitokondria
 yang nyata, munculnya banyak lemak
ULTRASTRUKTUR HEPATOCYTES PADA MENcit PADA DIET KERING 1091
droplet. Tak satu pun dari tanda-tanda ini diamati ada konflik kepentingan. Semua prinsip internasional,
dalam pekerjaan kami. Berdasarkan literatur yang nasional dan/atau institusional yang berlaku untuk
tersedia, kami berasumsi bahwa pada tikus kontrol perawatan dan penggunaan hewan telah diikuti.
yang dipelajari dalam pekerjaan kami dan diberi
makan dengan diet hewan laboratorium yang
diproduksi oleh produsen Rusia, hepatosis berlemak
tidak berkembang, tetapi ada perubahan patologis
terkait diet di hati. Salah satu jalur utama dalam 1. Dalton, AJ, Kahler, H., Striebich, MJ, dan Lloyd, B. (1950)
pengobatan hepatosis lemak pada manusia adalah
diet yang diusulkan oleh M. Pevzner no. 5, yang
mengandung 100 120 g/hari protein hewani, lemak
dalam jumlah terbatas, dan diperkaya dengan nutrisi
lipotropik (keju cottage, gandum, tepung terigu),
vitamin dan mikro [22]. Diet khusus ini secara luas
digunakan di seluruh dunia untuk memberi makan
hewan laboratorium seperti tikus dan tikus sebelum
pengenalan luas dari diet hewan laboratorium kering.
Dalam karya Shichali Belouic et al. gerbil diurnal
(Psammomys obesus) yang ditangkap di gurun semi
Aljazair liar diberi makan dengan makanan hewan
laboratorium standar [23]. Para penulis menunjukkan
bahwa dalam 9 bulan steatosis berkembang pada
hewan-hewan ini, yang disertai dengan perubahan
destruktif yang nyata dari ultrastruktur hepatosit. Hasil
dari penulis ini menimbulkan pertanyaan tentang
standar yang diterima secara umum untuk pakan
hewan laboratorium kering, karena beberapa standar
pakan hewan laboratorium tidak memenuhi kebutuhan
spesies hewan tertentu. Dengan demikian, kami telah
menunjukkan bahwa memberi makan hewan
laboratorium (tikus dan tikus) dengan pakan hewan
laboratorium kering yang banyak digunakan di Rusia
yang diproduksi oleh pabrikan domestik dikaitkan
dengan perkembangan perubahan destruktif yang
nyata pada sel hati.
Hasilnya menunjukkan perlunya mempelajari
secara rinci komposisi diet (dengan kontrol simultan
parameter sitologi, fisiologis, biokimia, dll. dari
jaringan hewan laboratorium, yang menerima diet ini)
untuk menentukan diet yang tepat yang diperlukan
untuk pemeliharaan yang memadai. hewan di
vivarium. Data ini sangat penting dalam studi
eksperimental karakteristik fungsional organel seluler
dalam hepatosit dari hewan laboratorium, karena
penataan ulang ultrastruktur diketahui mencerminkan
perubahan dalam proses metabolisme dalam sel,
jaringan, dan seluruh organisme.
Pendanaan. Pekerjaan ini didukung oleh
Russian Foundation for Basic Research (proyek no.
19 04 00578) dan dilakukan dengan dukungan
TSITIS, Rusia (proyek no. AAAA A19 119012490166
2).
BIOCHEMISTRY (Moskow) Vol. 85 No. 9 2020
Deklarasi etika. Para penulis menyatakan tidak
REFERENSI
Struktur halus sel hati, usus dan ginjal
tikus seperti yang diungkapkan oleh mikroskop
elektron, J. Natl. Cancer Inst., 11, 439 461.
2. Fawcett, DW (1955) Pengamatan sitologi dan mikroskop
elektron sel hati, J. Natl. Cancer Inst., 15, 1475 1503.
3. Bruni, C., and Porter, KR (1965) Struktur halus sel
parenkim hati tikus normal: I. Observasi umum, Am. J.
Pathol., 46, 691 755.
4. Jones, AL, and Fawcett, DW (1966) Hipertrofi retikulum
endoplasma agranular pada hati hamster yang diinduksi
oleh fenobarbital (dengan ulasan tentang fungsi organel
ini pada hati), J .histokimia. Cytochem., 14, 215 232.
5. Remmer, H., dan Merker, HJ (1965) Pengaruh obat
pada pembentukan retikulum endoplasma halus dan
enzim metabolisme obat, Ann. NY Acad. Sci., 123, 79
97.
6. Steiner, JW, Carruthers, JS, dan Kalifat, SR (1962)
Pengamatan pada struktur halus sel hati tikus pada
kolestasis ekstra hati, Z. Zellforsch. Mikrosk. Anat., 58,
141 159.
7. Wood, RL (1965) Struktur halus sel hati pada keracunan
ethionine kronis dan selama pemulihan, Am. J. Pathol.,
46, 307 330.
8. Arhelger, RB, Broom, JS, and Boler, RK (1965)
Ultrastructural hepatic alterations following tannic acid
administration to rabbits, Am. J. Pathol., 46, 409 434.
9. Wieczorek, A., St pień, PM, Zar bska Michaluk, D.,
Kryczka, W., Pabjan, P., and Król, T. (2017) Mega
mitochondria formation in hepatocytes of patient with
chronic hepatitis C – a case report, Clin. Eks. Hepatol.,
3, 169 175.
10. Falcón, V., Acosta Rivero, N., Chinea, G., Gavilondo, J.,
de la Rosa, MC, Menéndez, I., Dueńas Carrera, S.,
Vińa, A., Garc a, W., Gra, B., Noa, M., Reytor, E.,
Barceló, MT, Alvarez, F., and Morales Grillo, J. (2003)
Ultrastructural evidences of HCV infection in
hepatocytes of chronically HCV infected patients,
Biochem. Biofis. Res. Commun., 305, 1085 1090.
11. Zhang, XQ, Xu, CF, Yu, CH, Chen, WX, and Li, YM
(2014) Role of endoplasmic reticulum stress in the
pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease, World
J. Gastroenterol., 20, 1768 1776.
12. Cali, AM, Zern, TL, Taksali, SE, de Oliveira, AM, Dufour,
S., Otvos, JD, and Caprio, S. (2007) Intrahepatic fat
accumulation and alterations in lipoprotein composi tion
in obese adolescents: a perfect proatherogenic state,
Diabetes Care, 30, 3093 3098.
13. Fon Tacer, K., and Rozman, D. (2011) Nonalcoholic fatty
liver disease: focus on lipoprotein and lipid deregulation,
J. Lipids, 2011, 783976.
14. Dallak, MA, Bin Jaliah, I., Albawardi, A., Haidara, MA,
Sakr, HF, Eid, RA, Hassan, WN, and Al Ani, B. (2018)
 Swim exercise training ameliorates hepatocyte
ultrastructural alterations in rats fed on a high fat and
sugar diet, Ultrastruct. Pathol., 42, 155 161.
15. Abo El Khair, SM, Ghoneim, FM, Shabaan, DA, and
Elsamanoudy, AZ (2020) Molecular and ultrastructure
study of endoplasmic reticulum stress in hepatic
BIOCHEMISTRY (Moscow) Vol. 85 No. 9 2020
1092 VAYS et al.
hepatic endoplasmic reticulum stress by improving
hepatic energy metabolism in high fat diet fed mice, Mol.
Cell Endocrinol., 474, 227 237.
17. GOST R 50258 92 (1992) Combined Full Rationed
Feeds for Laboratory Animals, Technical Conditions,
Standard Izd. (in Russian).
18. Reynolds, ES (1963) The use of lead citrate at high pH
as an electron opaque stain in electron microscopy, J.
Cell Biol., 17, 208 212.
19. Silva, GH, Hessel, G., Coelho, KI, and Escanhoela, CA
(2011) Steatosis of indeterminate cause in a pediatric
group: is it a primary mitochondrial hepatopathy? Sao
Paulo Med. J., 129, 217 223.
20. Aragno, M., Tomasinelli, CE, Vercellinatto, I., Catalano,
MG, Collino, M., Fantozzi, R., Danni, O., and Boccuzzi,
G. (2009) SREBP 1c in nonalcoholic fatty liver
steatosis: role of hepatocyte nuclear factor 4α and
inflammatory mediators, Histochem. Cell Biol., 153, 49
62.
16. Silva Veiga, FM, Rachid, TL, de Oliveira, L., Graus
Nunes, F., Mandarim de Lacerda, CA, and Souza Mello,
V. (2018) GW0742 (PPAR beta agonist) attenuates
disease induced by Western type high fat diet plus
fructose in rats, Free Radic. Biol. Med., 47, 1067 1074.
21. Meli, R., MattaceRaso, G., Irace, C., Simeoli, R., Di
Pascale, A., Paciello, O., Pagano, TB, Calignano, A.,
Colonna, A., and Santamaria, R. (2013) High fat diet
induces liver steatosis and early dysregulation of iron
metabolism in rats, PLoS One, 8, e66570.
22. Pevzner, MI (1958) Principles of Dietotherapy
(Acharkyan, AI, and Marshak, MS, eds.) Medgiz,
Moscow (in Russian).
23. Sihali Beloui, O., Aroune, D., Benazouz, F., Hadji, A., El
Aoufi, S., and Marco, SA (2019) A hypercaloric diet
induces hepatic oxidative stress, infiltration of lympho
cytes, and mitochondrial reshuffle in Psammomys
obesus, a murine model of insulin resistance, CR Biol.,
342, 209 219, doi: 10.1016/j.crvi.2019.04.003.
BIOCHEMISTRY (Moscow) Vol. 85 No. 9 2020