SIFAT FARMAKOLOGIS CENTELLA ASIATICA HYDROGEL

DALAM MEMPERCEPAT LUKA PENYEMBUHAN PADA KELINCI

Latar Belakang: Berbagai ekstrak pegagan (Apiaceae) dan konstituen aktifnya, asiaticoside,
telah dilaporkan memiliki sifat penyembuhan luka ketika dinilai menggunakan berbagai
model in vivo dan in vitro. dalam sebuah upaya untuk mengembangkan formulasi dengan
efek penyembuhan luka yang dipercepat, penelitian ini dilakukan untuk menguji kemanjuran
in vivo formulasi hidrogel kaya asiaticoside pada kelinci.
Metode: Fraksi kaya Asiaticoside dibuat dari bagian udara C. asiatica dan kemudian
dimasukkan ke dalam polivinil alkohol/polietilen glikol (PVA/PEG) hidrogel. Hidrogel
menjadi sasaran penyelidikan penyembuhan luka menggunakan model sayatan in vivo.
Hasil: Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa: i) formulasi hidrogel tidak menimbulkan
tanda-tanda iritasi pada kulit kelinci dan; ii) meningkatkan penyembuhan luka 15% lebih
cepat daripada krim komersial dan > 40% lebih cepat dari luka yang tidak dirawat. Proses
penyembuhan kulit terlihat pada semua luka yang ditandai dengan terbentuknya epitel yang
tebal lapisan, keratin, dan pembentukan moderat jaringan granulasi, fibroblas dan kolagen
tanpa nekrosis fibrinoid terdeteksi.
Kesimpulan: Hidrogel kaya asiaticoside yang dikembangkan menggunakan metode freeze-
thaw efektif dalam mempercepat penyembuhan luka pada kelinci.

PENGANTAR
Saat ini diperkirakan sekitar enam juta orang di seluruh dunia menderita luka kronis.
Proses penyembuhan luka adalah prosedur biologis tertentu yang meregenerasi jaringan, ini
melibatkan rangkaian peristiwa yang kompleks yang dibagi menjadi tiga utama yang unik,
namun tumpang tindih, fase termasuk peradangan, proliferasi dan pematangan [1-5].
Selanjutnya, mekanisme penyembuhan luka mencakup interaksi yang kompleks antara
berbagai jenis sel, komponen matriks ekstraseluler dan mediator sitokin [2, 4, 5]. Meskipun
mekanisme penyembuhan luka alami untuk memulihkan yang rusak jaringan dimulai ketika
luka diperkenalkan, namun pembalut yang sesuai untuk luka harus digunakan. Untuk
meningkatkan proses penyembuhan, balutannya harus mampu melakukan intervensi pada
fase penyembuhan luka yang tepat atau menyediakan lingkungan yang tepat bagi luka untuk
menyembuhkan [1, 6]. Secara umum, pembalut luka yang baik dan efektif harus memiliki
kemampuan untuk mempertahankan luka lembab lingkungan, melindungi luka dari infeksi
sekunder, menyembuhkan luka lebih cepat, mengurangi nekrosis dasar luka dan tidak akan
menimbulkan trauma sekunder pada regenerasi jaringan setelah pembalut dilepas dari luka
sembuh. Selain itu pembalut luka harus menjadi biokompatibel dengan jaringan serta darah,
bukan antigenik, tidak beracun dan dengan elastisitas yang sesuai [1, 4, 6,7]. Sehubungan
dengan persyaratan ini, bahan pembalut luka yang biokompatibel, karena sesuai dengan
efektivitasnya persyaratan pembalut luka dengan memberikan mudah untuk menangani
pembalut tanpa iritasi dan tidak menempel properti, karenanya mempertahankan atau
meningkatkan kenyamanan [1, 6, 8]. Dalam studi sebelumnya oleh saat ini penulis, film
hidrogel PVA / PEG dikembangkan menggunakan teknik freeze-thaw [9]. Tradisional obat
herbal telah menjadi fokus ilmiah peneliti karena fakta bahwa obat-obatan tradisional dapat
menawarkan metode pengobatan yang aman dan murah pada luka dan luka bakar [10-13].
Ekstrak Centella asiatica menunjukkan aktivitasnya dalam regenerasi jaringan [14],
migrasi sel [15] dan proses perbaikan luka dengan mempromosikan proliferasi fibroblas dan
sintesis kolagen [16]. Potensi penyembuhan luka ekstrak C. asiatica, atau 'pegaga nyonya'
seperti yang dikenal orang Melayu, memiliki dibenarkan baik secara eksperimental maupun
klinis evaluasi [17-21], dengan sebagian besar studi ini melaporkan bahwa asiaticoside
sebagai konstituen aktif utama menghasilkan efek tersebut. C. asiatica juga memiliki
beberapa konstituen fitokimia yang menarik seperti flavonoid, seskuiterpen, sterol tumbuhan,
pentasiklik triterpenoid, turunan eugenol dan caffeoylquinic asam [22].
Aktivitas penyembuhan luka asiaticoside telah dilaporkan menggunakan model in
vivo dan in vitro [23-27]. NS penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan PVA/
Formulasi pengiriman obat hidrogel PEG menggunakan teknik beku-cair dengan
penyembuhan luka yang ditingkatkan kemampuan.

METODE
Bahan:
Semua bahan kimia dan reagen yang diperlukan yang digunakan dalam penelitian adalah
kelas reagen analitik. Asiatikosida standar dan poli(vinil alkohol) (PVA) (Mw 195.000)
(Mowiol® 56–98) dibeli dari Sigma-Aldrich (AS), dan Polyethylene glycol 400 (PEG 400)
dari Merck (Jerman). Silika gel 60 (70–230 mesh), metanol dan heksana dibeli dari Merck
(Jerman), diklorometana (DCM) dan etil asetat dari Fisher Scientific (Inggris), etanol dari
R&M Chemicals (UK). Untuk penelitian pada hewan, krim MADECASSOL® adalah dibeli
dari Bayar (Turki), Ketamin hidroklorida (100 mg/mL) dan xylazine hidroklorida (100
mg/mL) keduanya dibeli dari Ilium (Australia) dan normal larutan garam dibeli dari Opticare
(Malaysia).
Koleksi tanaman, ekstraksi dan fraksinasi
Tanaman (C. asiatica) dibeli dari Lorong Kenanga, Kampung Pandan Dua, Kuantan, Pahang,
Malaysia, pada 19 April 2014. Tanaman itu diidentifikasi oleh Dr. Shamsul Khamis (ahli
taksonomi) dari Institute of Bioscience, University Putra Malaysia, Selangor, Malaysia.
Tanaman itu diberi nomor spesimen voucher (PIIUM 0205) dan telah disetorkan di
Herbarium, Kulliyyah Farmasi, IIUM Kuantan, Malaysia, untuk referensi di masa
mendatang. Ekstraksi dan persiapan yang kaya akan asiaticoside fraksi dilakukan sesuai
dengan metode yang dijelaskan oleh Aziz dkk. [15]. Bagian udara dari C. Asiatica (Gbr. 1)
dikumpulkan dan dikeringkan pada suhu 35 sampai 40oC selama tiga hari. Tanaman yang
sudah kering dihaluskan. Sekitar 100 g C. asiatica yang dihaluskan dimaserasi dalam 300 mL
etanol 95% (rasio 1:3 b/v) untuk a jangka waktu tiga hari. Maserasi diulang tiga kali. Ekstrak
diperoleh setelah penyaringan melalui Whatman Kertas saring No1 dan dipekatkan dengan
mesin putar Büchi penguap. Kemudian ekstrak mengalami Prosedur Kromatografi Cair
Vakum (VLC). NS fasa pelarut yang digunakan terdiri dari 1. 100% heksana; 2. heksana-
diklorometana (DCM) (50:50); 3. 100% DCM; 4. DCM-etil asetat (50:50); 5. etil asetat; 6.
100% etil asetat-metanol (50,50) dan 7. 100% metanol (fraksi kaya CAEMF-asiaticoside).
Kromatografi lapis tipis dilakukan analisis pecahan.
Formulasi hidrogel
Hidrogel C. asiatica PVA/PEG dibuat oleh metode beku-cair oleh Ahmed et al.,. Pertama,
PVA (8%) dilarutkan dalam air deionisasi selama 1 jam di atas hotplate dan diaduk
menggunakan magnetic stirrer. Kemudian, PEG (5%) ditambahkan dan larutan diautoklaf
pada suhu 121°C selama 15 menit. Selanjutnya, fraksi kaya asiatikosida (fraksi CAEMF/
(dari pecahan 7) (24 mg pecahan) dilarutkan dalam hidrogel PVA / PEG yang diformulasikan
di atas dan menjalani lima siklus pembekuan-pencairan berturut-turut
Perawatan hewan
Studi hewan pada kelinci dimulai setelah persetujuan etika diperoleh dari Perawatan Hewan
Institusional dan Komite Penggunaan, Universitas Islam Internasional Malaysia (IACUC,
IIIUM) (Referensi persetujuan etika nomor: IIUM/IACUC Approval/2016/(9)(54)). Baru
Kelinci albino putih selandia (6 jantan) dengan berat 1,8–2,1 kg berat badan dibeli dari
perusahaan swasta (Chenur Supplier Pvt. Ltd.) di Kuantan, Pahang, Malaysia. Kelinci yang
digunakan dalam penelitian ini ditangani di sesuai dengan standar yang diterima [28]. Kelinci
disimpan di divisi rumah hewan di Level 5, Kulliyyah Farmasi, IIUM untuk masa
aklimatisasi dari sekitar 2 minggu. Setiap hewan ditempatkan dalam satu individu kandang
aluminium selama penelitian. Kelinci adalah disimpan di ruang penahanan pada suhu kamar
19 ± 4 °C, 44 hingga 55% kelembaban relatif dan 12 jam terang/gelap. Kelinci diberi pakan
pelet komersial dan segar diet sayuran dan juga memiliki akses ke air.
Iritasi kulit akut
Pengujian iritasi kulit akut dari sampel hidrogel dilakukan menurut Pedoman OECD 404
[29].
Aktivitas penyembuhan luka in vivo (luka sayatan)
Luka-luka itu dibagi menjadi empat kelompok dalam enam kelinci sebagai berikut:
Kelompok 1: diobati dengan hidrogel kaya asiaticoside, Kelompok 2: diobati dengan krim
Madecassol (Bayer) (kontrol positif), Kelompok 3: diperlakukan dengan hidrogel kosong,
Kelompok 4 tanpa perlakuan (kontrol negatif). Perawatan dengan pembalut di atas (Grup 1
hingga 4) pada luka ditempatkan secara acak di belakang kelinci untuk menghindari bias
pada posisi luka. Sebelum memulai sayatan prosedur luka, bulu hewan di punggung daerah
dada dicukur dan 70% etanol digunakan sebagai antiseptik untuk daerah yang dicukur [28].
Kemudian, sayatan operasi dimulai dengan membius secara umum kelinci melalui injeksi
subkutan Ketamine: Xylazine (0,4: 0,1 mL, 40: 10 mg/kg). Sayatan sepanjang 1 cm dibuat
menggunakan pisau bedah yang tajam [30]. Hari pertamadihitung sebagai hari luka (hari 0).
Luka-lukanya diperlakukan sekali sehari sampai eksperimen selesai hari. Di akhir percobaan
(Hari ke-12), semua kelinci di-eutanasia dengan dosis pentobarbital yang mematikan
(200mg/kg).
Analisis statistik
Data dianalisis menggunakan SPSS (IBM® SPSS® Statistics versi 20, SPSS Inc., Chicago,
IL, AS). Satu arah analisis varians (ANOVA satu arah) digunakan untuk membandingkan
hasil dan nilai p kurang dari 0,05 adalah dianggap signifikan secara statistik. Eksperimen
diulang tiga kali dan datanya dinyatakan sebagai mean ± standar deviasi (SD).

HASIL
Tes iritasi kulit akut
Tes iritasi kulit dari formulasi hidrogel C. Asiatica dilakukan pada tiga ekor kelinci.
Penghitungan Indeks Iritasi Kulit Primer dan Gradingnya Potensi Iritasi dilakukan untuk
menunjukkan iritasi kulit akut dari sampel yang diuji. Berdasarkan pada perhitungan,
hidrogel kaya asiaticoside tidak menyebabkan iritasi pada kulit kelinci (indeks adalah 0).
Oleh karena itu, formulasi hidrogel tampaknya biokompatibel, aman dan cocok untuk
digunakan sebagai pembalut luka.
Penyembuhan luka sayatan
Khasiat penyembuhan luka dari hidrogel kaya asiticoside diperkirakan dengan menerapkan
hidrogel ke insisi yang dibuat luka pada kelinci (Gbr. 2). Secara kualitatif, semua luka
menunjukkan pengurangan ukuran luka yang menunjukkan bahwa kontraksi mereda dan
epitelisasi terjadi sebagai percobaan selesai pada Hari 12. Hasil yang diperoleh pada
perawatan pasca Hari 1 menunjukkan sedikit peradangan dan bengkak di sekitar area luka.
Pada hari ke 3 pasca perawatan, pengurangan ukuran luka diamati di semua hewan rata-rata
dengan hidrogel kaya asiaticoside menunjukkan pengurangan yang jauh lebih tinggi di area
luka dibandingkan ke kelompok lain. Juga diamati bahwa pembengkakan di sekitar area luka
berkurang dibandingkan ke Hari 0 dan Hari 1 di semua hewan. Seperti yang diharapkan luka
yang diobati dengan hidrogel yang mengandung obat tidak menunjukkan tanda-tanda
pembentukan bekas luka kering, bukan luka lembab dan ini mungkin satu-satunya alasan
mengapa luka yang dirawat dengan hidrogel menunjukkan pengurangan luka yang lebih baik
dibandingkan dengan formulasi yang dipasarkan (Madecassol krim), hidrogel blanko dan
kontrol negatif (tanpa perlakuan). Pada akhir hari ke-5 pasca pengobatan asiticoside luka
yang dirawat dengan hidrogel kaya menunjukkan total luka lebih dekat dan pembentukan
epidermis tipis. Formasi ini epidermis hanya ditemukan pada luka yang dirawat dengan
hidrogel. Hal ini dapat dikaitkan dengan sifat hidrogel untuk menjaga lingkungan lembab di
daerah luka. Pada akhir hari ke 9 pasca perawatan hampir semua luka sembuh dan lapisan
epidermis menunjukkan penebalan. Pada hari ke 12 pasca perawatan, semua kelompok yang
dirawat menunjukkan kontraksi luka yang serupa area di mana semua luka diamati untuk
sembuh sepenuhnya(Gbr. 2).
Periode epitelisasi
Periode epitelisasi menunjukkan waktu yang dibutuhkan untuk membentuk epitel lengkap di
atas permukaan gundul. Dia dinyatakan sebagai hari yang diperlukan untuk eschar (sisa
jaringan mati) untuk jatuh tanpa luka mentah yang tersisa. Jika periode epitelisasi cepat,
maka proses regenerasi akan cepat. Demikian juga, jika periode epitelisasi lambat, a bekas
luka akan terbentuk selama berminggu-minggu, bahkan berbulan-bulan. Tabel 1 mewakili
periode epitelisasi untuk semua kelompok. Periode epitelisasi tercepat diamati pada
asiaticoside- kelompok hidrogel kaya, diikuti oleh kontrol positif kelompok, kelompok
hidrogel kosong dan kelompok kontrol. Secara statistik, ternyata ada perbedaan yang
signifikan (p <0,05) dalam epitelisasi di antara orang kaya asiaticoside hidrogel dan
kelompok lainnya. Tabel 2 mengilustrasikan pvalues dari kelompok perlakuan yang berbeda.

DISKUSI
Kontraksi luka meningkat dengan cepat pada: hari untuk masing-masing kelompok 3
dan 4. Kontraksi luka kelompok 2 (kontrol positif; krim Madecassol) dan Kelompok 1
(hidrogel kaya asiaticoside) diamati pada hari enam. Pengurangan luka diobati dengan
asiaticoside-rich hidrogel (Grup 1) kira-kira 40% lebih tinggi dibandingkan untuk luka yang
tidak diobati (Grup 4). Data untuk periode epitelisasi mungkin memiliki beberapa
keterbatasan karena pengukuran ukuran luka dicatat berdasarkan hari, dan bukan dengan
melihat peristiwa pengurangan yang sebenarnya, dan, oleh karena itu, dapat menjelaskan
kondisi luka dengan lebih baik. Epitelisasi periode menunjukkan pembentukan lengkap epitel
di atas a . permukaan gundul, periode epitelisasi yang lebih cepat membantu regenerasi
proses penyembuhan dan sebaliknya. Asiaticosiderich hidrogel menginduksi periode
epitelisasi yang lebih cepat dibandingkan dengan masing-masing positif (Madecassol) dan
kelompok kontrol negatif (kendaraan).
Centella asiatica mengandung campuran tiga prinsipbahan yaitu asiaticoside, asam
asiatic dan madecassic asam telah diformulasikan dalam hidrogel untuk perawatan luka [31].
Dalam penelitian tersebut, ekstrak yang dititrasi hidrogel yang mengandung C. asiatica
dilaporkan menyembuhkan luka pada hari ke 9 pasca perawatan. Dibandingkan, penelitian ini
menggunakan hidrogel kaya asiaticoside yang diperoleh dari ekstrak metanol C. asiatica dan
hasilnya menunjukkan kemampuan hidrogel untuk mengerahkan penyembuhan luka lengkap
di sekitar lima hari (pada akhir Hari 5). Selain itu, jenis hidrogel yang digunakan oleh Hong
et al. [31] (Nadeoksikolat (Na-DOC hidrogel) berbeda dari yang digunakan dalam penelitian
ini (polivinil alkohol/ polietilen glikol (PVA/PEG) hidrogel). PVA/ Formulasi dan
optimalisasi hidrogel PEG telah digunakan oleh penulis lain [9].
Aktivitas penyembuhan luka Asiaticoside mungkin terkait dengan modulasi beberapa
mekanisme aksi. Shukla dkk. [32] telah melaporkan kemampuan asiaticoside untuk
meningkatkan stimulasi tingkat antioksidan pada tahap awal proses penyembuhan yang
mungkin penting faktor penyumbang dalam sifat penyembuhan ini zat. Di sisi lain, Kimura et
al. [26] melaporkan pada kemampuan asiaticoside untuk mempromosikan angiogenesis
selama perbaikan luka kulit dengan merangsang produksi faktor pertumbuhan endotel
vaskular (VEGF) sebagai hasil dari peningkatan ekspresi chemoattractant monosit protein-1
(MCP-1) dan interleukin-1β (IL-1β) di masing-masing keratinosit dan makrofag yang
diinduksi secara komunal oleh asiaticoside plus MCP-1. Lu dkk. [33] melaporkan
kemampuan asiaticoside untuk mempromosikan fibroblast proliferasi dan sintesis matriks
ekstraseluler (ECM), yang diketahui memainkan peran penting dalam luka penyembuhan.

KESIMPULAN
Hidrogel kaya Asiaticoside yang diformulasikan dalam penelitian ini adalah ditemukan
sebagai formulasi yang aman dan biokompatibel dengan sifat fisikokimia yang baik, yang
cocok untuk aplikasi penyembuhan luka topikal.

REVIEW JURNAL DENGAN METODE PICO :

 Problem, Population, Purpose :
Jurnal : Sifat Farmakologis Centella Asiatica Hydrogel Dalam Mempercepat Luka
Penyembuhan Pada Kelinci
- Problem:
Proses penyembuhan luka adalah prosedur biologis tertentu yang meregenerasi
jaringan, ini melibatkan rangkaian peristiwa yang kompleks yang dibagi menjadi
tiga fase utama, yaitu fase peradangan, proliferasi dan pematangan. Untuk
meningkatkan proses penyembuhan, balutan luka harus mampu melakukan
intervensi pada fase penyembuhan luka yang tepat atau menyediakan lingkungan
yang tepat bagi luka untuk disembuhkan.
Secara umum, pembalut luka yang baik dan efektif harus memiliki
kemampuan untuk mempertahankan luka lembab lingkungan, melindungi luka
dari infeksi sekunder, menyembuhkan luka lebih cepat, mengurangi nekrosis dasar
luka dan tidak akan menimbulkan trauma sekunder pada regenerasi jaringan
setelah pembalut dilepas dari luka sembuh. Sehubungan dengan persyaratan ini,
bahan pembalut luka yang biokompatibel, karena sesuai dengan efektivitasnya
persyaratan pembalut luka dengan memberikan mudah untuk menangani pembalut
tanpa iritasi dan tidak menempel properti, karenanya mempertahankan atau
meningkatkan kenyamanan.
Berbagai ekstrak pegagan (Apiaceae) dan konstituen aktifnya, asiaticoside,
telah diketahui memiliki sifat penyembuhan luka ketika dinilai menggunakan
berbagai model in vivo dan in vitro. dalam sebuah upaya untuk mengembangkan
formulasi dengan efek penyembuhan luka yang dipercepat, penelitian ini
dilakukan untuk menguji kemanjuran in vivo formulasi hidrogel kaya asiaticoside
dengan media kelinci.
- Population :
Kelinci albino putih selandia (6 jantan) dengan berat 1,8–2,1 kg.
- Purpose :
Penelitian ini dilakukan untuk menguji kemanjuran in vivo formulasi hidrogel
kaya asiaticoside pada kelinci

 Intervensi
Penelitian ini bersifat eksperimen laboratorium untuk mengetahui formulasi
hidrogel kaya asiaticoside yang aman dan cocok untuk aplikasi penyembuhan luka
topikal. Penelitian dilakukan dengan media 6 kelinci yang telah diberi luka sayatan
sepanjang 1 cm dengan menggunakan pisau bedah yang tajam, dan dibagi menjadi
 empat kelompok uji pengobatan. Kelompok 1: diobati dengan hidrogel kaya
asiaticoside, Kelompok 2: diobati dengan krim Madecassol (Bayer) (kontrol positif),
Kelompok 3: diperlakukan dengan hidrogel kosong, Kelompok 4 tanpa perlakuan
(kontrol negatif).
Berdasarkan pada perhitungan, hidrogel kaya asiaticoside tidak menyebabkan
iritasi pada kulit kelinci. Oleh karena itu, formulasi hidrogel tampaknya
biokompatibel, aman dan cocok untuk digunakan sebagai pembalut luka. Secara
kualitatif, semua luka menunjukkan pengurangan ukuran luka yang menunjukkan
bahwa kontraksi mereda dan epitelisasi terjadi menandakan bahwa percobaan selesai
pada hari ke 12.
Hasil yang diperoleh pada perawatan pasca Hari 1 menunjukkan sedikit
peradangan dan bengkak di sekitar area luka. Pada hari ke 3 pasca perawatan,
pengurangan ukuran luka diamati di semua hewan rata-rata dengan hidrogel kaya
asiaticoside menunjukkan pengurangan yang jauh lebih tinggi di area luka
dibandingkan ke kelompok lain. Di akhir percobaan (Hari ke-12), semua kelinci di-
eutanasia dengan dosis pentobarbital yang mematikan (200mg/kg).
 Comparison
Dalam penelitian ini diketahui bahwa centella asiatica mengandung campuran tiga
prinsip bahan yaitu asiaticoside, asam asiatic dan madecassic asam telah
diformulasikan dalam hidrogel untuk perawatan luka. Ekstrak yang dititrasi hidrogel
yang mengandung C. asiatica dilaporkan menyembuhkan luka pada hari ke 9 pasca
perawatan. Dibandingkan, dengan penelitian yang menggunakan hidrogel kaya
asiaticoside yang diperoleh dari ekstrak metanol C. Asiatica. Dan hasilnya
menunjukkan kemampuan hidrogel untuk mengerahkan penyembuhan luka lengkap di
sekitar lima hari (pada akhir Hari 5). Selain itu, jenis hidrogel yang digunakan oleh
Hong et al. (Nadeoksikolat (Na-DOC hidrogel) berbeda dari yang digunakan dalam
penelitian ini (polivinil alkohol/ polietilen glikol (PVA/PEG) hidrogel). PVA/
Formulasi dan optimalisasi hidrogel PEG telah digunakan oleh penulis lain.

 Outcame
Hasil yang diperoleh dari penelitian ini menunjukkan bahwa formulasi hidrogel tidak
menimbulkan tanda-tanda iritasi pada kulit kelinci dan meningkatkan penyembuhan
luka 15% lebih cepat daripada krim komersial dan > 40% lebih cepat dari luka yang
tidak dirawat. Proses penyembuhan kulit terlihat pada semua luka yang ditandai
dengan terbentuknya epitel yang tebal lapisan, keratin, dan pembentukan moderat
jaringan granulasi, fibroblas dan kolagen tanpa nekrosis fibrinoid terdeteksi.

Sumber :
https://bmccomplementmedtherapies.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12906-
019-2625-2