Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

2302

Jurnal Perlindungan Pangan, Vol. 67, No. 10, 2004, Halaman 2302–2305
hak cipta Q, Asosiasi Internasional untuk Perlindungan Pangan

Catatan Penelitian

Pengembangan Tes PCR Untuk Membedakan antara

Stafilokokus aureus dan Stafilokokus intermedius
FLORENCE BARON,1* MARIE-FRANÇOISE COCHET,1 JEAN-LOUIS PELLERIN,2 NOURI BEN ZAKOUR,1
ANNE LEBON,1 ANNE NAVARRO,2 ISABELLE BANGGA,3 YVES LE LOIR,1 DAN MICHEL GAUTIE1

Diunduh dari http://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/67/10/2302/1676056/0362-028x-67_10_2302.pdf oleh pengguna Indonesia pada 15 November 2021

1Laboratoire de Microbiologie, UMR 1055, Ecole Nationale Supérieure Agronomique, Institut Nasional de la Recherche Agronomique, CS84215,

35042 Rennes, Prancis; 2Unité de microbiologie, Département de pathologie générale, Ecole Nationale Vétérinaire, La Chantrerie, BP 40706, 44307
Nantes cedex 3, Prancis; dan3Genesystems, 1 rue du Courtil, pusat Cicea, Bâtiment 4, 35170 Bruz, Prancis

MS 03-598: Diterima 31 Desember 2003/Diterima 10 April 2004

ABSTRAK

Kehadiran dari Stafilokokus intermedius dalam makanan masih belum jelas karena analisis laboratorium rutin tidak membedakan
antara S. intermedius dan stafilokokus aureus, penyebab utama keracunan makanan. Kedua spesies memiliki banyak karakteristik fenotipik,
termasuk produksi koagulase dan termonuklease. Pada kedua spesies, beberapa strain dapat menghasilkan enterotoksin dan oleh karena
itu dapat menjadi penyebab wabah keracunan makanan. Meskipun Sistem Staph ID32 (bioMérieux, SA, Marcy l'Etoile, Prancis), berdasarkan
karakterisasi fenotipik miniatur, memberikan hasil yang memuaskan untuk membedakan antara dua spesies ini, beberapa metode berbasis
PCR molekul cepat telah dikembangkan untuk mengidentifikasiS. aureus secara khusus, tetapi mereka tidak mengidentifikasi S. intermedius.
Di sini, kami mengembangkan metode PCR multipleks yang cepat, akurat, dan diskriminatif yang menargetkan sekuens spesifik spesies
dalam inti gen, yang mengkode thermonuclease dalam dua spesies. Tes ini mencakup kontrol positif internal yang menargetkan wilayah gen
16S ribosomal RNA (rDNA) yang sangat terkonservasi. Sebanyak 116 strain digunakan untuk memvalidasi pengujian kami. Tes tidak
memberikan sinyal pada yang berikut:Stafilokokus jenis: S. epidermidis, S. chromogenes, S. hyicus, S. warneri, S. xylosus, S. lentus, dan S.
sciuri. Itu memungkinkan diskriminasi yang berhasil 100% antara S. aureus (44 strain diuji) dan S. intermedius (57 strain) diisolasi dari asal
yang berbeda.

Stafilokokus aureus merupakan patogen oportunistik yang
menyebabkan berbagai infeksi mulai dari abses hingga septikemia.
Beberapa strain dariS. aureus mampu menghasilkan enterotoksin
stafilokokus dan karena itu terlibat dalam wabah keracunan
makanan (17). S. aureusadalah salah satu dari tiga mikroorganisme
utama yang bertanggung jawab atas penyakit bawaan makanan di
Prancis (9) dan di negara lain.
Stafilokokus intermedius berhubungan erat dengan
S.aureus. Kedua spesies koagulase dan thermonuclease positif.
Beberapa strain dariS. intermedius juga mampu menghasilkan
enterotoksin stafilokokus (3). S. intermediusdiakui pada
dasarnya sebagai komponen umum dari flora kulit, mulut, atau
hidung anjing sehat dan juga telah ditemukan di berbagai
spesies hewan lainnya (10). S. intermediusjarang ditemukan
pada manusia, bahkan di antara individu yang sering terpapar
hewan. Namun, itu bertanggung jawab atas infeksi yang terkait
dengan luka gigitan anjing(21, 25). S. intermediustelah terlibat
dalam keracunan makanan yang melibatkan produk yang
dicampur mentega, yang mengakibatkan 265 kasus infeksi di
Amerika Serikat bagian barat (13). Jasper dkk.
(12) dan Langlois dkk. (16) mempelajari spesies stafilokokus yang diisolasi
dari susu sapi dan tidak menemukan S. intermedius.Namun, frekuensi
sebenarnya dari S. intermedius dalam makanan kembali
* Penulis untuk korespondensi. Telp: 33 2 23 48 56 94; Faks: 33 2 23 48 55 78;
Email: baron@agrorennes.educagri.fr.
listrik tidak jelas karena dapat dikacaukan dengan S. aureus dalam
analisis laboratorium rutin (27).
Dalam praktek laboratorium rutin, produksi asam dari
manitol dalam kondisi anaerobik, aseton, dan hialuronidase,
protein A, dan B-aktivitas galaktosidase direkomendasikan
untuk membedakan S. aureus dan S. intermedius (22, 23).
Penggunaan sistem ID32 Staph (bioMérieux, SA, Marcy
l'Etoile, Prancis), kit yang tersedia secara komersial,
memberikan hasil yang memuaskan tetapi didasarkan pada
karakterisasi fenotipik mini yang interpretasinya mungkin
rumit. Karakterisasi fenotipik memiliki keterbatasan yang
sebagian disebabkan oleh ekspresi karakter yang bervariasi
dan ambiguitas dalam interpretasi reaksi titik akhir.
Baru-baru ini, metode molekuler seperti analisis
polimorfisme situs pembatasan gen rRNA (1), Urutan gen
RNA ribosom (rDNA) 16S (19), PCR spacer intergenik 16S–23S
rDNA (20), dan hibridisasi DNA (8, 15) digunakan untuk
mengidentifikasi spesies stafilokokus. Metode ini berfokus
pada pengembangan tes untuk studi filogenetik atau untuk
pengenalan spesifik dariS.aureus. Selain itu, mereka
memakan waktu. Di sisi lain, dua metode berdasarkan tes
PCR dikembangkan: satu metode untuk mengidentifikasiS.
aureus berdasarkan amplifikasi fragmen 270-bp di inti, gen
yang mengkode produksi thermonuclease
(5), dan metode lain untuk mengidentifikasi S.
intermedius khusus berdasarkan amplifikasi fragmen
901-bp pada gen RNA ribosom 16S (rDNA) (28). keduanya
J. Food Prot., Vol. 67, No. 10 PERBEDAAN ANTARA S. AUREUS DAN S. INTERMEDIUS 2303

TABEL 1. Spesies dan strain stafilokokus diuji dengan PCR Desain primer. Penjajaran urutan untuk analisis komparatif
diperoleh dengan menggunakan Multalin 5.4.1 (7). Nomor aksesi
Spesies bakteri
GenBank dari inti urutannya adalah N315, 15926905; Mu50,
(jumlah isolat) Sumber (jumlah isolat)
21204379; dan MW2, 15924314 untukS. aureus dan 47146
S. aureus (44) Strain referensi ATCC 27735, ATCC (6) untuk S. intermedius. Nomor aksesi GenBank dari urutan DNA
20231, ATCC 12600 ribosom 16S (lengkap atau sebagian) adalah N315, SArRNA01;
Susu sapi (28) Mu50, SAVRRNA01; MW2, MWrRNA01; FU16A2, 1199935; Kitami,
Kulit ayam (8) 1199936; OA1, 1199938; dan ATCC 12600T, 1199939 untukS. aureus
kulit kalkun (4) dan ATCC 29663T, 1199951; CE5, 6635425; CE79, 6635426; dan CE80,
Anjing (1) 6635427 untukS. intermedius.Primer dirancang dengan perangkat
S. intermedius (57) Strain referensi ATCC 49052, ATCC lunak Primer3 (24). Setiap primer diuji dengan yang lain untuk
29663, CIP 81,60, CIP 81,77 memastikan bahwa setiap primer dari himpunan tidak mengandung
Anjing (pioderma, telinga, mata, urin, abses, wilayah interkomplementer dengan primer dari pasangan yang

Diunduh dari http://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/67/10/2302/1676056/0362-028x-67_10_2302.pdf oleh pengguna Indonesia pada 15 November 2021

konjungtivitis, kulit) (52)
Kucing (telinga) (1)
S. chromogenes (4) susu sapi (3)
Anjing (1)
S. epidermidis (3) susu sapi (1)
keju (1)
Manusia (1)
S. hyicus (3) susu sapi (3)
S. lentus (2) Ayam (2)
S. xylosus (1) Ayam (1)
S.Warneri (1) Ayam (1)
S. sciuri (1) Ayam (1)
metode bergantung pada deteksi fragmen PCR spesifik pada gel
agarosa (hasil positif). Tidak adanya fragmen spesifik ini dianggap
oleh penulis sebagai tidak adanya mikroorganisme yang
ditargetkan. Kedua tes ini memberikan hasil yang memuaskan
untuk identifikasiS. aureus atau S. intermedius,masing-masing,
tetapi Wakita et al. (28) menyebutkan beberapa masalah
kekhususan dengan metode mereka untuk S. intermedius strain
yang diisolasi dari ayam. Tak satu pun dari metode ini membedakan
antaraS. aureus dan S. intermedius dalam prosedur satu langkah.
Oleh karena itu, diperlukan suatu metode yang dapat
mencapai diferensiasi yang cepat antara kedua spesies tersebut.
Dalam penelitian ini, kami mengevaluasi metode PCR multipleks
yang dirancang untuk memperkuat sekuens spesifik spesies dalam
inti gen untuk membedakan S. aureusdari S. intermedius.
Amplifikasi PCR dari fragmen RNA ribosom 16S yang disimpan
dalam beberapa spesies stafilokokus digunakan sebagai kontrol
positif dari jalur PCR yang diinginkan.
BAHAN DAN METODE
Strain dan kondisi kultur. Strain yang digunakan dalam
penelitian ini dijelaskan pada Tabel 1. Semua strain diidentifikasi
oleh sistem Staph ID32 sesuai dengan instruksi pabrik. Untuk
setiap spesies, galur yang dipilih berhubungan dengan berbagai
profil ID32.
Bakteri diisolasi pada agar Baird Parker (Merck, Fontenay sous Bois,
France) dan pada agar Columbia dengan 5% (vol/vol) darah domba pada
suhu 378C (Laboratorium AES, Combourg, Prancis) sebelum identifikasi
fenotipe. Semua strain disimpan beku dalam stok gliserol (25%) pada
suhu2208C.
prosedur isolasi DNA. Sel stafilokokal diperbanyak selama 16
jam pada suhu 378C dan dikocok dengan kecepatan 150 rpm pada
tryptic soy agar (AES Laboratories). DNA diekstraksi dari sel
stafilokokus menurut metode yang dijelaskan sebelumnya oleh Ben
Zakour et al.(4).
berbeda. Semua primer disintesis oleh Eurogentec (Seraing, Belgia).
amplifikasi PCR. PCR dilakukan dalam 25-Ml volume reaksi.
Setiap campuran reaksi mengandung sekitar 50 ng cetakan DNA,
0,05 hingga 0,2MM masing-masing primer, 1,5 unit TaqDNA
polimerase (MBI Fermentas, Cergy Pontoise, Prancis), dan 200 MM
deoxyribonucleoside triphosphate (MBI Fermentas) dalam buffer
PCR (2,5 Ml dari 103 Buffer PCR, MBI Fermentas). Untuk setiap run,
seluruh campuran PCR tanpa template DNA digunakan sebagai
kontrol negatif. Reaksi amplifikasi dilakukan dalam Bio-Rad iCycler
(versi 1.280, Bio-Rad, Marnes la Coquette, Prancis) sebagai berikut: 4
menit pada 958C dan 30 siklus 30 detik pada 958C, 30 detik pada 55
8C, dan 30 detik pada 728C. Program selesai dengan langkah
ekstensi 7 menit tambahan pada 728C.
Setelah amplifikasi, 10 Ml campuran reaksi dianalisis dengan
elektroforesis pada gel agarosa 1,2% dalam buffer Tris-Borate-EDTA
(89 mM Tris, 89 mM asam borat, 2 mM EDTA) pada 80 V selama 45
menit dan diwarnai dengan etidium bromida. Ada atau tidak adanya
dan ukuran produk PCR diperiksa. Percobaan PCR dilakukan
setidaknya dua kali untuk masing-masing dari 116 strain.
Pengurutan. Produk yang diperkuat diurutkan dengan ABI
Prism BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (PE-
Applied Biosystems, Courtaboeuf, Prancis), seperti yang
direkomendasikan oleh produsen, dan dianalisis dengan ABI Prism
310 (PE-Applied Biosystems) dan perangkat lunak BioEdit (Ibis
Terapi, Carlsbad, California) (11).
HASIL DAN DISKUSI
Urutan genom lengkap dari tiga S. aureus strain
sekarang tersedia (http://wit.integratedgenomics.com/
GOLD/) (2, 14), dan empat lainnya sedang dalam proses
penetapan. Kekayaan data ini memungkinkan penyelarasan
gen tertentu yang berasal dari beberapa galur untuk
memeriksa konservasi atau divergensi urutan. Tidak seperti
S.aureus,hanya 40 urutan yang saat ini tersedia untuk S.
intermedius,. Kami memilihinti urutan gen untuk
membedakan S. aureus dari S. intermedius karena produksi
thermonuclease hadir dalam strain kedua spesies. Selain itu,
beberapa penulis berpikir gen ini adalah kandidat yang baik
untukS. aureus identifikasi: urutannya sangat lestari dan
memiliki urutan spesifik spesies (1, 5, 18). NS inti gen dari
S. aureus (SAinti) telah digunakan untuk merancang primer untuk
tes PCR sederhana yang bertujuan untuk mengidentifikasi S. aureus
regangan (3). Tes PCR ini secara eksklusif S. aureus– spesifik dan
tidak cocok dengan spesies stafilokokus lain yang diuji sebagai
kontrol. Tujuan kami di sini adalah untuk memanfaatkan SA yang
tersediainti dan S. intermedius nucgen (SIinti) urutan untuk
merancang satu set primer yang bisa
2304 BARON ET AL.
MEJA 2. Primer yang digunakan dalam PCR
Nama Urutan 59 ke 39
NUCSEQ1 ACAGGCGTTTTTAATCCTTGC
NUCSEQ2 TCCTTTTGGGCTTGTTCAAT
Sinuc1 CAATGGAGATGGCCCTTTTA
Sinuc2 AGCGTACACGTTCATCTTG
SAnuc1 TGCTATGATTGTGGTAGCCATC
Sanuc2 TCTCTAGCAAGTCCCTTTTCCA
16S1 GGACGGGTGAGTAACACGTGG
16S2 TCCCGTAGGAGTCTGGACCGT
digunakan untuk identifikasi spesies spesifik S. aureus dan
S. intermedius pada percobaan PCR tunggal. Karena hanya satu
SIinti urutan tersedia di GenBank, kami memperkuat fragmen
internal SIinti dengan PCR dengan menggunakan DNA
kromosom dari lima S. intermedius strain (dua strain referensi
dan tiga strain diisolasi dari anjing) sebagai template. Primer
yang digunakan untuk PCR ini dirancang dari SI . yang
diterbitkaninti urutan (6). NUCSEQ1 dan NUC-SEQ2 (Tabel 2)
berhasil digunakan untuk memperkuat fragmen 455-bp di SIinti
(sesuai dengan 89% dari intigen) untuk lima strain. Fragmen
PCR yang dihasilkan digunakan sebagai template untuk reaksi
sekuensing pada kedua untai dengan NUCSEQ1 dan NUCSEQ2
sebagai primer urutan. Lima SI partial parsial baruinti urutan
yang diperoleh disejajarkan dengan tiga SAinti urutan tersedia
di GenBank untuk memilih dua wilayah internal di SIinti dan SA
inti, masing-masing, karena perbedaan urutan mereka. Di
diterbitkanS. aureus urutan genom lengkap (N315 dan Mu50 (
15) dan MW2 (2)), dua gen diberi keterangan dan diberi nama ''
inti'' Satu sesuai dengan jenis produksi termonuklease '' foggie ''
yang dicirikan dengan baik (24); yang lain sesuai dengan
produksi thermonuclease, juga. Kami memilih yang terakhir
untuk mendesain SAintiprimer spesifik karena urutannya sesuai
dengan SIinti tersedia urutan
SI disejajarkaninti dan SAinti urutan menyajikan homologi
66%, tetapi kami mengeksploitasi zona divergensi untuk
merancang dua pasangan primer (Tabel 2): satu khusus untuk
S. intermedius (SInuc1, SInuc2) dan satu khusus untuk S. aureus
(SAnuc1, SAnuc2).
Untuk mendapatkan kontrol positif pada jalur PCR yang
diinginkan, gen RNA ribosom 16S yang sangat terkonservasi
GAMBAR 1. Elektroforesis gel agarosa
dari produk PCR.
J. Food Prot., Vol. 67, No. 10
Ukuran dari
Meleleh diperkuat
suhu pecahan
(8C) (bp)
59.23
59.55 455
59.89
54,76 125
59,99
60.36 420
64.90
Diunduh dari http://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/67/10/2302/1676056/0362-028x-67_10_2302.pdf oleh pengguna Indonesia pada 15 November 2021
65.37 252
urutan tujuh S. aureus dan empat S. intermedius
disejajarkan dan urutan umum dipilih. Sepasang primer
kemudian dirancang (16S1, 16S2) yang dianil ke gen RNA
ribosom 16S dari kedua spesies. PCR multipleks
mengharuskan primer berbagi suhu leleh yang sama
(Tm), tanpa kemungkinan hibridisasi silang. Setelah itu,
analisis produk PCR dengan elektroforesis gel
membutuhkan ukuran fragmen amplifikasi yang jelas
berbeda. Nama, urutan primer, suhu leleh, dan ukuran
fragmen diberikan pada Tabel 2.
Tes PCR tripleks kami memungkinkan diskriminasi yang
berhasil 100% antara S. aureus (44 strain diuji) dan S.
intermedius (57 strain) dari asal yang berbeda dan dengan
profil ID32 yang berbeda. Produk PCR muncul sebagai pita DNA
tunggal dengan ukuran 420 dan 125 bp untukS. aureus dan
S. intermedius, masing-masing. Untuk dua spesies, kami juga
mengamati pita 252-bp yang sesuai dengan kontrol positif 16S.
Ketiga fragmen mudah dipisahkan pada elektroforesis gel
agarosa 1,5% (Gbr. 1). Tidak ada amplifikasi (kecuali untuk
kontrol positif 16S) yang terjadi untuk spesies stafilokokus lain
yang diuji. Di antara spesies ini, hanyaS. hyicus adalah
thermonuclease positif, tetapi semua spesies telah dilaporkan
dalam literatur sebagai penghasil enterotoksin potensial
(26).
Tes PCR tripleks yang dijelaskan di sini memungkinkan
diskriminasi yang cepat, akurat, dapat direproduksi, dan
nonsubjektif antara S. aureus dan S. intermedius. Tes PCR kami
didasarkan pada sekuens spesifik spesies dari gen thermonuclease
dan mencakup kontrol positif internal yang menargetkan wilayah
16S rDNA yang sangat terkonservasi sebagai pemeriksaan pada
jalur PCR yang diinginkan. Tes ini dapat digunakan dengan mudah
J. Food Prot., Vol. 67, No. 10 PERBEDAAN ANTARA S. AUREUS DAN S. INTERMEDIUS
dalam prosedur laboratorium rutin untuk studi epidemiologi dan untuk
mengevaluasi frekuensi sebenarnya dari S. intermedius melawan
S. aureus dalam makanan.
UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kami untuk Jane Hall untuk koreksi bahasa Inggris kami dan
Olivier Chesneau untuk diskusi yang membantu di awal pekerjaan ini.
REFERENSI
1. Aubert, S., A. Morvan, JL Guesdon, dan N. el Solh. 1992.
Kegunaan sistem staph ID32 dan metode berdasarkan analisis
polimorfisme situs restriksi gen rRNA untuk identifikasi spesies
dan subspesies isolat klinis stafilokokus.J.klin. Mikrobiol.
30:2346–2352.
2. Baba, T., F. Takeuchi, M. Kuroda, H. Yuzawa, K. Aoki, A. Oguchi,
Y. Nagai, N. Iwama, K. Asano, T. Naimi, H. Kuroda, L. Cui, K. Yamamoto,
dan K. Hiramatsu. 2002. Genom dan determinan virulensi dari MRSA
yang didapat komunitas dengan virulensi tinggi.Lanset 359: 1819–1827.
3. Becker, P., W. Hufnagle, G. Peters, dan M. Herrmann. 2001. Deteksi
ekspresi gen diferensial dalam pembentukan biofilm versus
populasi planktonikStafilokokus aureus menggunakan analisis
perbedaan representasi mikro. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.
67:2958– 2965.
4. Ben Zakour, N., M. Gautier, R. Andonov, D. Lavenier, MF Cochet,
P. Veber, A. Sorokin, dan Y. Le Loir. 2004. GenoFrag: perangkat lunak untuk
merancang primer yang dioptimalkan untuk pemindaian seluruh genom
dengan amplifikasi PCR jarak jauh.Asam Nukleat Res. 32:1–8.
5. Brakstad, OG, K. Aasbakk, dan JA Maeland. 1992. Deteksi
Stafilokokus aureus dengan amplifikasi reaksi berantai
polimerase dari inti gen. J.klin. Mikrobiol.30:1654-1660.
6. Chesneau, O., dan N. el Solh. 1992. Urutan nukleotida aintigen yang
mengkode termonuklease dari Staphylococcus intermedius. Asam
Nukleat Res.20:5232.
7. Corpet, F. 1988. Multiple sequence alignment dengan hirarkis
clustering. Asam Nukleat Res. 16:10881–10890.
8. De Buyser, ML, A. Morvan, S. Aubert, F. Dilasser, dan N. el Solh.
1992. Evaluasi probe gen RNA ribosom untuk identifikasi
spesies dan subspesies dalam genusStafilokokus. J. Gen.
Mikrobiol.138:889–899.
9. Haeghebaert, S., F. Le Querrec, V. Vaillant, E. Delarocque Astagneau,
dan P. Bouvet. 2001. Les toxi-infections alimentaires kolektifs en
France en 1998.Banteng. Epidemi. Ibr.15:36–39.
10. Hajek, V. 1976. stafilokokus intermedius, spesies baru yang diisolasi
dari hewan. Int. J. Sistem. Bakteri.26:401–408.
11. Hall, TA 1999. BioEdit: editor penyelarasan urutan biologis dan program
analisis yang mudah digunakan untuk Windows 95/98/NT. Gejala Asam
Nukleat Ser.41:95–98.
12. Jasper, DE, F. Infante, dan JD Dellinger. 1985. Hubungan antara
hasil uji koagulase, toksin stafilokokus, dan termonuklease
pada stafilokokus dari susu sapi.J.klin. Mikrobiol.21: 582–584.
13. Khambaty, FM, RW Bennett, dan DB Shah. 1994. Aplikasi
2305
elektroforesis gel bidang berdenyut dengan karakterisasi
epidemiologis Stafilokokus intermedius terlibat dalam wabah
terkait makanan. Epidemi. Menulari.113:75–81.
14. Kuroda, M., T. Ohta, I. Uchiyama, T. Baba, H. Yuzawa, I. Kobayashi, L.
Cui, A. Oguchi, K. Aoki, Y. Nagai, J. Lian, T. Ito , M. Kanamori, H.
Matsumaru, A. Maruyama, H. Murakami, A. Hosoyama,
Y. Mizutani-Ui, NK Takahashi, T. Sawano, R. Inoue, C. Kaito, K.
Sekimizu, H. Hirakawa, S. Kuhara, S. Goto, J. Yabuzaki, MN
Kanehisa, A. Yamashita, K. Oshima, K. Furuya, C. Yoshino, T.
Shiba, M. Hattori, N. Ogasawara, H. Hayashi, dan K. Hiramatsu.
2001. Sekuensing seluruh genom resisten methicillin
Stafilokokus aureus. Lanset357:1225–1240.
15. Kwok, AY, SC Su, RP Reynolds, SJ Bay, Y. Av.-Gay, NJ Dovichi, dan
AW Chow. 1999. Identifikasi spesies dan hubungan filogenetik
Diunduh dari http://meridian.allenpress.com/jfp/article-pdf/67/10/2302/1676056/0362-028x-67_10_2302.pdf oleh pengguna Indonesia pada 15 November 2021
berdasarkan sekuens gen HSP60 parsial dalam genus
Stafilokokus. Int. J. Sistem. Bakteri.49:1181-1192.
16. Langlois, BE, RJ Harmon, dan K. Akers. 1983. Identifikasi
Stafilokokus spesies asal sapi dengan sistem API Staph-Ident.
J.klin. Mikrobiol.18:1212–1219.
17. Le Loir, Y., F. Baron, dan M. Gautier. 2003.Stafilokokus aureusdan
keracunan makanan. gen. mol. Res.2:63–76.
18. Liebl, W., F. Rosenstein, F. Götz, dan KH Schleifer. 1987. Penggunaan
gen nuklease stafilokokus sebagai probe DNA untukStafilokokus
aureus. Mikrobiol FEMS. Lett.44:179–184.
19. Mahoudeau, I., X. Delabranche, G. Prevost, H. Monteil, dan Y.
Piemont. 1997. Frekuensi isolasiStafilokokus intermediusdari
manusia. J.klin. Mikrobiol.35:2153–2154.
20. Mendoza, M., H. Meugnier, M. Bes, J. Etienne, dan J. Freney. 1998.
IdentifikasiStafilokokus spesies dengan analisis PCR spacer
intergenik 16S-23S rDNA. Int. J. Sistem. Bakteri.48:1049–1055.
21. Raus, J., dan DN Cinta. 1990. Perbandingan aktivitas
stafilokoagulase dariStafilokokus aureus dan Stafilokokus
intermedius pada Chromozym-TH. J.klin. Mikrobiol.28:207–210.
22. Roberson, JR, LK Fox, DD Hancock, dan TT Besser. 1992. Evaluasi
metode untuk diferensiasi stafilokokus koagulase-positif.J.klin.
Mikrobiol.30:3217–3219.
23. Rozen, S., dan H. Skaletsky. 2000. Primer3 di WWW untuk pengguna
umum dan programmer biologi.Metode Mol. Biol.132:365– 386.
24. Shortle, D. 1983. Analisis sistem genetik nuklease stafilokokus.
gen 22:181–189.
25. Talan, DA, D. Staatz, A. Staatz, dan GD Overturf. 1989. Frekuensi
Stafilokokus intermedius sebagai flora nasofaring manusia.
J.klin. Mikrobiol.27:2393.
26. Valle, J., E. Gomez-Lucia, S. Piriz, J. Goyache, JA Orden, dan S. Vadillo.
1990. Produksi enterotoksin oleh stafilokokus diisolasi dari kambing
sehat.aplikasi Mengepung. Mikrobiol.56:1323–1326.
27. Vandenesch, F., M. Celard, D. Arpin, M. Bes, T. Greenland, dan J.
Etienne. 1995. Bakteremia terkait kateter terkait dengan
koagulase-positifStaphylococcus intermedius. J.klin. Mikrobiol.
33: 2508–2510.
28. Wakita, Y., J. Kawano, A. Shimizu, V. Hajek, E. Tomisaka, R.
Yasuda, dan E. Matsuo. 2002. Pengembangan uji PCR untuk
identifikasiStafilokokus intermedius berdasarkan urutan 16S
rDNA. J. Dokter hewan. Med. Sci.64:603–605.