HEMATOLOGÍA

La sangre es una suspensión de eritrocitos, leucocitos y plaquetas en el plasma. Fuera del

sistema vascular la sangre coagula entre 5 y 8 minutos y si se le agrega algún anticoagulante
su estado de suspensión persiste.
Para las pruebas de laboratorio una muestra que puede ser de alguno de los tres tipos siguientes,
según la determinación que debamos efectuar:
Sangre total con anticoagulante.
Suero.
Plasma.
Suero y Plasma.
Centrifugando sangre coagulada se separa una masa celular "A" y un fluido sobrenadante "B":

El suero.
Centrifugando una sangre adicionada de un anticoagulante se obtendrán tres capas: una masa
celular, que queda en el fondo del tubo y una sobrenadante que es el plasma. Entre ambas capas
A y B, habrá una tercera capa C, más pequeña, de color grisáceo – rosado, llamada crema de
leucocitos, cuyo principal integrante, como su nombre lo dice, son los leucocitos, pero además
contiene plaquetas y eritrocitos nucleados. La zona inmediatamente inferior a la capa C (si los
hay) contiene reticulocitos y parásitos del paludismo.
Contiene Fibrinógeno
Reticulocitos C Crema de leucocitos,
Parásito del plaquetas y eritrocitos.
paludismo

Obtención de Muestra de Sangre.

Para efectuar análisis clínicos, las muestras de sangre pueden ser:

Sangre capilar o periférica.
Sangre venosa.
 Sangre arterial.
Un caso especial se da en los niños recién nacidos en los que se solicita muestra del cordón
umbilical.
 Sangre capilar o periférica.
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La sangre de flujo es llamada comúnmente capilar o periférica y es la que fluye después de

aplicar una punción superficial cutánea. No es aconsejable utilizar sangre capilar para la cuenta
de plaquetas por la rapidez con la que las mismas se adhieren y agregan en el lugar de punción y
se obtienen datos falsos de cuentas bajas de plaquetas; en cambio para preparar extendidos
en laminillas es mejor hacerlo con sangre capilar, ya que el anticoagulante puede provocar
alteraciones en los leucocitos.
Sangre venosa.
La muestra de este tipo se obtiene por punción de una de las tres venas del pliegue del codo: la
basílica, la cefálica o la mediana cubital (observar dibujo de la siguiente página) empleando
jeringas desechables, con agujas de tipo 21x32, 20x32 o similar, previa limpieza del área
elegida con torunda y alcohol; antes de puncionar coloque el torniquete aproximadamente de 8
cm de distancia arriba del pliegue del codo. Soltarlo tan pronto empiece a obtenerse la muestra.
La toma de muestra de niños pequeños es preferible en las venas yugulares externas o de las
manos.

Anticoagulantes.
 Mezcla de oxalatos.  Heparina.
 Citrato de sodio.  ACD.
 Oxalato de sodio.  CPD.
 EDTA.

Mezcla de Oxalatos. También llamada anticoagulante de Wintrobe. Contiene oxalato de

amonio, oxalato de potasio, formol y agua.
Para 5ml de sangre se utilizan 0.5ml de la mezcla de anticoagulante (desecado en estufa a 37ºC
o a temperatura ambiente antes de utilizarlo); esta solución anticoagulante actúa como tal
para fijación de calcio y debe usarse siempre desecado para no diluir la sangre.
Mezcla de oxalatos de sodio y potasio. Es otro anticoagulante conocido como "Mezcla de Paul –
Heller".
Citrato de sodio al 3.8% y oxalato de sodio al 1.4%. Se usa en relación de una parte de
anticoagulante por cada nueve partes de sangre, habitualmente se usan 0.25ml de la solución
para completar a 2.5ml de volumen total con la muestra de sangre.
Actúan en la misma forma que la solución anticoagulante de Wintrobe, es decir, por fijación
de calcio.

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Son los anticoagulantes de elección para tiempo de protrombina (TP) y tiempo de

tromboplastina parcial (TTP).

EDTA (ácido etilen-diamino-tetra-acético). Las sales de sodio y potasio en este ácido se

comportan como poderosos anticoagulantes y son anticoagulantes de elección para el trabajo
de rutina y Hematología (se utiliza al 10%).
 No afecta la morfología de las células hemáticas.
 No modifica la velocidad de sedimentación globular.
 Sus sinónimos son versenato y secuestreno.
Se le llama secuestreno ya que secuestra al calcio y lo separa de la cascada de la coagulación,
impidiendo que la sangre coagule. Se utilizan 0.05ml por cada 3ml de muestra de sangre. Dada
la pequeña cantidad de solución, no es necesario desecarla, ya que prácticamente no diluye la
sangre a analizar; en exceso afecta adversamente tanto a los eritrocitos como a los leucocitos,
causando su encogimiento y provocando cambios en su forma; por ello debe cuidarse de agregar
la cantidad correcta de sangre al anticoagulante. Se prefiere la sal tripotásica a la disódica, ya
que es más soluble (10 veces más) y ello hace efectiva la mezcla del anticoagulante con la
sangre.

Heparina (heparina sódica de 1,000 unidades). La fina capa de solución de heparina de 1,000
unidades:
 Se utiliza para las gasomerías.
 La heparina es un excelente anticoagulante.
 No altera el tamaño de los eritrocitos.
Actúa inhibiendo la actividad de la trombina sobre el fibrinógeno y es este mecanismo, el que la
hace diferente a los demás anticoagulantes mencionados.

ACD y CPD. Son los principales anticoagulantes utilizados en los bancos de sangre (en las
bolsas para la recolección de ésta).
El ACD contiene ácido cítrico, citratos y dextrosa. En este anticoagulante la sangre se mantiene
hasta 21 días.
El CPD contiene citratos, fosfatos y dextrosa. El radical es un amortiguados que favorece el pH
de la sangre normal (7.4) permanezca así durante más tiempo, por lo que este anticoagulante
hace que las bolsas duran 21 días + 7, siempre y cuando el plasma no presente una coloración

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rojiza (hemólisis) ni tome un color verdusco debido a la panaglutinibilidad o contaminación

bacteriana.

MANEJO Y CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA.

El tipo de análisis que haya de efectuarse influye sobre las recomendaciones que para cada
uso corresponde.
Algunas muestras se deben analizar de inmediato, un ejemplo de esto es la determinación
del pH y gases en la sangre; otras pueden ser mantenidas en refrigeración (previa
separación del suero o del plasma).
Las determinaciones de:
• Conteo de plaquetas.
• Conteo de leucocitos.
Determinación de la velocidad de sedimentación.

Deben de hacerse lo más pronto posible después de obtenida la muestra.

Durante este lapso las muestras deben tenerse refrigeradas entre 4 y 8ºC, y antes de ser
analizada deben dejarse 15 minutos en rotador (agitador mecánico para asegurar trabajar
con una muestra homogénea y que haya adquirido la temperatura ambiente).

Criterios de rechazo de una muestra.

• Identificación inadecuada.
• Volumen inadecuado.
• Uso de tubo inadecuado.
• Hemólisis.
• Transporte inadecuado.
Razones para solicitar una prueba de laboratorio.
• Para descubrir enfermedades subclínicas.
• Ratificar un diagnóstico sospechado clínicamente.
• Obtener información pronóstico de una enfermedad.
• Establecer un diagnóstico en una sospecha no bien definida.
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• Reconocer la respuesta terapéutica.

• Precisar factores de riesgo.

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA (HB)

Material:

• Tubos de ensayo de 13 x 100 ml • Gradillas

• Pipetas de 1ml • Gasa

• Pipetas de Salí • Celdas para espectrofotómetro

• Boquillas • Sangre capilar o venosa con

anticoagulante

Reactivos:

 EDTA al 10 % (.07 ml por .5 ml de sangre)

 Reactivo DE Drabkin:
 ferrocianuro de potasio
 cianuro de potasio
 bicarbonato de potasio
 Solución estándar de cianometahemoglobina.

Procedimiento:

1.- Colocar en un tubo de ensayo 5 5.- Dejar Reposar 10 min. Para la

ml de reactivo de Drabkin formación de
cianometahemoglobina
2.- Homogeneizar bien la sangre
6.- leer a 540 nanómetros en el
3.- Llenar en sangre hasta la espectrofotómetro contra un
marca de la pipeta de Sahli blanco de reactivo.

4.-Mezclar la sangre con el 7.- comparar con la curva

disolvente calibrada de estándare

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Valores de referencia:

Mujeres: 12.5 -16.5 gr/dl

Hombres: 13.5 -17.5gr/dl

Toma de sangre
reactivo de Drabkin

Sangre con el disolvente colocar en el

espectrofotómetro leer a 540 nanómetros

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DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO

Es sencillo y exacto y es importante para determinar los índices eritrocitarios

Material (macrohematocrito):

• Tubo de Wintrobe que tiene 11.5 cm de largo x 3 mm de luz (hueco). Para el micro se
usa el tubo capilar)

• Pipeta Pasteur larga o pipeta para llenado de hematocrito

• Centrífuga

• Sangre capilar (micro) o venosa (macro) con anticoagulante

• Reactivos

Procedimiento:

 Homogeneizar perfectamente la sangre haciendo girar el tubo

 Utilizando la pipeta Pasteur se llena de sangre el tubo de Wintrobe exactamente hasta
10, no deben quedar burbujas de aire en el tubo
 Centrífuga a 3600 rev x min. Durante 30 min.
 Leer en la línea de separación de la columna de glóbulos rojos sabiendo que cada raya
tiene 1%

Valores de referencia:

H= 41-52 %

M= 36-48 %

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CUENTA ERITROCITARIA

Fundamento teórico:

Los glóbulos rojos transportan oxígeno de los pulmones a las células de todo el cuerpo. Esto se
mide con tres análisis principales. El conteo de glóbulos rojos (RBC) es el número total de
glóbulos rojos. La hemoglobina (HGB) es una proteína en los glóbulos rojos que transporta el
oxígeno de los pulmones al resto del cuerpo. El hematocrito (HCT) mide el porcentaje del
volumen de sangre ocupado por los glóbulos rojos.

Un conteo de glóbulos rojos o RBC alto es común en personas que viven en altitudes elevadas.
Es la manera en que el cuerpo se adapta a la falta de oxígeno.

Niveles bajos de RBC, hemoglobina y hematocrito indican anemia. Cuando hay anemia, las
células no obtienen suficiente oxígeno para funcionar normalmente. Las personas con anemia se
sienten siempre cansadas y pueden estar pálidas. Vea la hoja 551 sobre fatiga y la 552 sobre
anemia.

El volumen corpuscular medio (MCV) mide el volumen promedio de todos los glóbulos
rojos. Un volumen corpuscular medio bajo significa que las células son más peque?as que lo
normal. Esto normalmente es causado por deficiencia de hierro o enfermedades crónicas. Un
volumen corpuscular medio alto puede ser causado por los medicamentos anti VIH. Esta no es
una condición peligrosa. Sin embargo, un volumen corpuscular medio alto puede indicar anemia
megaloblástica, en la cual los glóbulos rojos son grandes y pálidos. Esto es provocado por una

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deficiencia en ácido fólico. El análisis de distribución de los glóbulos rojos (RDW), mide la
distribución de tamaños de estos. El RDW puede ayudar a diagnosticar anemia o deficiencias
vitamínicas.

La hemoglobina corpuscular media (MCH) y la concentración de hemoglobina corpuscular

media (MCHC) mide la cantidad y la concentración de hemoglobina en una célula promedio. El
MCH se calcula dividiendo el total de hemoglobina por el número total de glóbulos rojos.

Consiste en diluir la sangre con el líquido de Hayem en una proporción exacta y luego examinar
al microscopio una pequeña cantidad de la muestra colocada en la cámara de Neubauer,
contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una
operación matemática se obtiene la cifra total.

Material:

• Tubos de ensayo de 13x100mm • microscopio

• pipetas de Thomas para glóbulos • gasa

rojos
• gradilla
• cámara de Neubauer
• sangre capilar o venosa con
• boquillas anticoagulante

La que más se utiliza es la de Neubauer que presenta un retículo con una superficie total de
9mm2 dividida en 9 cuadros de 1mm2 los cuatro cuadros grandes de los extremos son los que
usualmente se emplean para contar leucocitos. De los 9 cuadros centrales grandes el central es
el único dividido en 25 cuadros.

Reactivos:

• EDTA (sal di sódica) al 10%

• Líquido de Hayem:

 Cloruro de mercurio 0.5 g

 Cloruro de sodio 1.0g
 Sulfato de sodio 5.0g

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 Agua destilada 100ml

Procedimiento:

Las pipetas están constituidas por dos porciones capilares y un bulbo central. El tubo capilar
inferior está dividido en 10 partes iguales con marcos de0.5 y 1.0.

En el interior del bulbo existe una perlita de plástico (roja), para favorecer la mezcla de la
sangre con el líquido y en el capilar superior hay una marca 101.

1.- llenar con sangre bien mezclada la
pipeta de Thomas, hasta la marca 0.5.
2.- se limpia cuidadosamente con gasa la
parte externa de la pipeta.
3.- completar con líquido de Hayem hasta
la marca 101.
6.- desechar las primeras 4-5 gotas de la
pipeta y llenar la cámara por uno de los
bordes del cubre hematímetro.
7.- se deja que el líquidos penetre
lentamente entre la cuadrícula y el cubre
hematímetro hasta que la plataforma de
recuento este completamente cubierto.

4.- agitar durante 3 minutos para mezclar 8.- dejar reposar de 3.5 minutos sobre la
perfectamente. platina del microscopio.

5.- colocar el cubre hematímetro sobre la 9.- con objetivo de 40x se encuentra los
cámara. eritrocitos contenidos en 80 cuadros
pequeños; uno central y cuatro de los
extremo

Cálculos:

Si se considera que el retículo central tiene 400 cuadritos se realizará el siguiente cálculo.

N x 200 x 10 x 400 = N x 10,000

80

• N= número de eritrocitos contados

• 200= factor de dilución
• 10= corrección x altura de la cámara

Valores de referencia:

• Hombres 5.2 x 106 – 6.8 x 106 mm3

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• Mujeres 4.5 x 106 - 5.5 x 106 mm3

Toma de muestra de sangre

Pipetas de Thomas

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Reactivos Observación y
conteo de glóbulos rojos

RECUENTO DE RETICULOCITOS
Fundamento teórico
Los reticulocitos son glóbulos rojos inmaduros formados por ARN y
protoporfirina en el citoplasma.
Fundamento
Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teñir con el
azul de cresil brillante. Este colorante en combinación con una misma cantidad de sangre
anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura (baño maría) se produce la
coloración de estos eritrocitos jóve- nes visualizándose en los frotices sanguíneos por
microscopía.
El recuento reticulocitario sirve para medir el índice de eritropoyesis y evaluar la respuesta de la
médula ósea ante una anemia (hemoglobina baja), o para vigilar el tratamiento de la anemia.

El procedimiento consta de tomar un muestra de sangre y se tiñe para examinar y determinar el

porcentaje de reticulocitos sobre el número total de eritrocitos. Los valores normales se
encuentran entre el 0,5 y 1,5%.

Un recuento alto de reticulocitos podría indicar la respuesta a una hemorragia, a una hemólisis
(rápida destrucción de los eritrocitos), o la respuesta a la terapia con hierro en algunos casos de
anemia carencial por déficit de hierro (FE).

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El recuento bajo de reticulocitos en presencia de anemia podría indicar incapacidad de la

médula ósea para responder, debido a una deficiencia nutricional, a una anemia perniciosa, o a
una sustitución medular como por ejemplo una leucemia.

Materiales:

• Láminas portaobjetos. • Pipetas Pasteur con chupones.

• Tubos de ensayos de 12 x 75 mm. • Contador manual (no
• Embudo. imprescindible).
• Filtro de papel. • Solución saturada de azul de cresil
brillante (filtrada).

Procedimiento:

• En el tubo de ensayo colocar dos gotas de sangre total con anticoagulante.

• Inmediatamente adicionar con la ayuda de una pipeta Pasteur la
mismacantidad de colorante.
• Mezclar la solución.

Se coloca luego en baño maría por espacio de 10 a 15 minutos.

Se realizan frotices sanguíneos.
Se lee con objetivo de 100x.

Resultados:

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Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersión. Cuente

cuidadosamente:
♦ Cantidad total de glóbulos rojos.
♦ Número total de reticulocitos que haya entre ellos.
El recuento se ha venido haciendo clásicamente de forma manual
mediante la observación en el microscopio óptico. El resultado se da en
porcentaje sobre cada 100 hematíes. Es más útil calcular el número de
reticulocitos por litro, mediante la fórmula:
Reticulocitos/L = % reticulocitos x número hematíes/L 100
Valores de referencia
Valores de normales referencia:
0,5 - 2%

En el tubo de ensayo con sangre total anticoagulante azul de cresil

brillante Baño María

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Frotis sanguíneo Observación de

reticulocitos al microscopio

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