Aro dkk.

Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC (2019) 19:108

https://doi.org/10.1186/s12906-019-2520-x

ARTIKEL PENELITIAN Akses terbuka

Pecahan dan senyawa hasil isolasi dari

Oxyanthus speciosus subsp. stenocarpus
(Rubiaceae) menjanjikan
aktivitas antimikobakteri dan intraseluler
Abimbola O.Aro1, Jean P. Dzoyem1,2, Maurice D. Awouafack1,3, Mamoalosi A. Selepe4, Jacobus N. Eloff1* dan
Lyndy J. McGaw1

Abstrak
Latar Belakang: Tuberkulosis adalah penyakit mematikan yang disebabkan oleh Mycobacterium jenis. Penggunaan tanaman obat
adalah praktik global kuno untuk pengobatan dan pencegahan beragam penyakit termasuk tuberkulosis. Penelitian ini bertujuan
untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi senyawa antimikobakteri melalui fraksinasi terpandu bioassay dari ekstrak daun aseton.
Oxyanthus speciosus.
Metode: Sebuah metode mikrodilusi serial dua kali lipat digunakan untuk menentukan konsentrasi hambat minimum (MIC) terhadap
mikobakteri. Sitotoksisitas dan aktivitas penghambatan oksida nitrat dari senyawa yang diisolasi ditentukan untuk mengevaluasi
keamanan in vitro dan aktivitas anti-inflamasi potensial. Kemanjuran intraseluler dari ekstrak kasar terhadap
Mycobacterium-makrofag yang terinfeksi juga ditentukan.
Hasil: Dua senyawa diisolasi dan diidentifikasi sebagai lutein (1) dan asam rotundat (2). Ini memiliki aktivitas antimikobakteri yang
baik terhadap empat mikobakteri yang diuji dengan nilai MIC mulai dari 0,013 hingga 0,1mg/mL. Asam rotundat memiliki beberapa
sitotoksisitas terhadap sel hati manusia C3A. Lutein tidak sitotoksik pada konsentrasi tertinggi yang diuji (200μg/mL) dan
menghambat produksi oksida nitrat dalam makrofag RAW 264,7 sebesar 94% pada konsentrasi 25 μg/mL. Ekstrak kasar aseton (120μ
g/mL) dari O. speciosus memiliki aktivitas antimikobakteri intraseluler, mengurangi unit pembentuk koloni lebih dari 90%,
menunjukkan kemanjuran bakterisida dalam dosis dan cara yang bergantung pada waktu.

Kesimpulan: Studi ini memberikan bukti yang baik dari adanya sinergisme antara senyawa yang berbeda dalam ekstrak dan fraksi.
Ini juga merupakan laporan pertama dari aktivitas antimikobakteri dari lutein dan asam rotundat yang diisolasi dariOxyanthus
speciosus. Aktivitas yang menjanjikan dari ekstrak kasar O. speciosus baik in vitro maupun intraseluler dalam model makrofag in
vitro menunjukkan potensinya untuk dikembangkan sebagai obat herbal anti tuberkulosis (TB).

Kata kunci: Oxyanthus speciosus, Mycobacterium tuberculosis, Asam rotundat, Lutein, Intraseluler, penghambatan oksida nitrat

* Korespondensi: kobus.eloff@up.ac.za
1Departemen Ilmu Paraklinik, Fakultas Ilmu Kedokteran Hewan, Universitas

Pretoria, Tas Pribadi X04, Onderstepoort 0110, Afrika Selatan

Daftar lengkap informasi penulis tersedia di akhir artikel

© Penulis. 2019Akses terbuka Artikel ini didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Internasional Creative Commons Attribution 4.0
(http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media
apa pun, asalkan Anda memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli dan sumbernya, memberikan tautan ke lisensi Creative
Commons, dan menunjukkan jika ada perubahan. Pengabaian Dedikasi Domain Publik Creative Commons (http://
creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) berlaku untuk data yang disediakan dalam artikel ini, kecuali dinyatakan lain.
Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC (2019) 19:108
Latar Belakang
Tuberkulosis, yang disebabkan oleh organisme yang termasuk
dalam Mycobacterium tuberculosis kompleks, telah muncul
kembali sebagai penyakit utama yang memiliki kepentingan
global University of Pretoria [1]. Inovasi tuberkulin pada tahun
1890, vaksin Bacillus-Calmette Guerin (BCG) pada tahun 1908 dan
penemuan obat antimikobakteri pada tahun 1943 membawa
harapan besar untuk pemberantasan penyakit mematikan ini
hingga pandemi HIV/AIDS dan munculnya strain resisten (multi-
obat). , ekstensif-obat dan tahan obat total) umat manusia yang
porak-poranda [2]. Untuk memerangi kasus yang resistan
terhadap obat ini secara efektif, obat TB baru dengan cara kerja
baru sangat dibutuhkan. Setelah lama tidak aktif, telah terjadi
peningkatan jumlah obat antimikobakteri baru dengan
persetujuan baru-baru ini dari bedaquiline dan delamanid oleh
Food and Drug Administration (FDA) AS untuk pengobatan TB
yang resistan terhadap obat [3]. Namun, obat ini hanya
digunakan sebagai upaya terakhir karena toksisitas yang
dilaporkan [4]. Oleh karena itu, obat anti-TB baru, manjur dan
aman yang dapat mempersingkat durasi terapi, dengan efek
toksik yang lebih sedikit untuk meningkatkan kepatuhan pasien
sangat dibutuhkan. Obat-obatan yang mampu melawan strain
MDR, XDR dan TDR-TB, aktif melawan TB laten dan mampu
bekerja secara sinergis dengan obat anti-TB yang diberikan
bersama, sangat dibutuhkan. Saat ini jumlah kandidat obat dalam
tahap optimasi, pengembangan praklinis, uji klinis tahap II dan
tahap III semakin meningkat. Namun, rendahnya jumlah kandidat
obat pada tahap I mengkhawatirkan kemungkinan kegagalan
kandidat obat lanjutan [3]. Upaya Aliansi TB diarahkan pada
pengembangan obat anti-TB baru; penyaringan awal produk
alami untuk penemuan obat sangat penting untuk meningkatkan
jumlah calon obat dalam pipa [5]. Selanjutnya, pendekatan
interdisipliner diperlukan untuk penemuan molekul kimia baru
terhadap bentuk aktif dan laten TB.4].
Nitric oxide (NO) adalah radikal bebas yang terlibat dalam
banyak proses biologis dengan kemampuan untuk meningkatkan
aktivitas bakterisida dan tumorisidal dari makrofag yang
diaktifkan.6]. Produksi berlebihan spesies oksigen reaktif (ROS)
yang dihasilkan dapat menyebabkan peradangan dengan
meningkatkan pelepasan sitokin dan aktivasi enzim seperti
lipoxygenases (LOXs) dari sel-sel inflamasi. LOX telah dikaitkan
dengan beberapa penyakit inflamasi termasuk TB [7]. Peran yang
dimainkan oleh oksigen reaktif dan intermediet nitrogen selama
infeksi TB tidak sepenuhnya dipahami, meskipun diketahui bahwa
hidrogen peroksida yang dihasilkan oleh makrofag yang
diaktifkan oleh sitokin memiliki aktivitas mikobakterisida.8]. Oleh
karena itu, kelebihan produksi oksigen reaktif dan intermediet
nitrogen dapat menyebabkan peradangan.9]. Respon imun yang
efektif terhadapM.tuberkulosis memainkan peran penting dalam
menentukan pembentukan penyakit [10]. Namun, interaksi rumit
dariM.tuberkulosis dengan sistem kekebalan mengarah pada
pelepasan sejumlah besar sitokin oleh beragam jenis sel sebagai
respons terhadap infeksi [11]. Makrofag
Halaman 2 dari 11
adalah sel target untuk infeksi mikobakteri dan hanya
bertanggung jawab untuk pembunuhan intraseluler mikobakteri,
dan ini sebagian besar tergantung pada lingkungan sitokin.12].
Sudah diketahui bahwa produk alami berkontribusi
signifikan terhadap penemuan dan derivasi senyawa timbal
dan pengembangan obat-obatan yang diperkenalkan ke
pasar. Menariknya, 65% antibakteri yang disetujui untuk
digunakan antara tahun 1981 dan 2010 adalah produk alami
atau turunannya, termasuk obat TB yang saat ini digunakan,
misalnya rifampisin dan aminoglikosida.13]. Produk alami
yang ditemukan pada tumbuhan tingkat tinggi merupakan
sumber penting dari agen terapeutik dan farmakologis, dan
kelompok penelitian yang berbeda di seluruh dunia
menyaring tanaman yang berbeda untuk aktivitas biologisnya
[14, 15]. Program skrining bioprospeksi anti-TB yang besar
saat ini sedang berlangsung, dan ada minat baru pada
sumber alami untuk menemukan antimikobakteri baru [16].
Memilih tanaman yang telah menunjukkan aktivitas in vitro
yang sangat baik dan menundukkannya untuk studi efikasi
dan toksisitas in vivo lebih lanjut dapat mengarah pada
pengembangan obat yang efektif dan lebih aman terhadap
penyakit menular [17].
Famili Rubiaceae mengandung 611 genera tetapi hanya
48 genera yang telah dipelajari dan memiliki aktivitas
biologis yang baik terhadap strain bakteri patogen yang
berbeda.18]. Ada 61 genera dan 228 spesies asli atau
naturalisasi di Afrika bagian selatan [19]. Keluarga
Rubiaceae telah memainkan peran penting dalam
penemuan obat dengan menyediakan molekul yang
digunakan sebagai template untuk pengembangan obat [
19]. Anggota famili ini menghasilkan keragaman besar zat
seperti iridoid, alkaloid indol, antrakuinon, terpenoid
(diterpen dan triterpen), flavonoid dan turunan fenolik
lainnya.20]. Famili ini juga dicirikan oleh adanya produk
alam lain seperti iridoid (sekelompok monoterpenoid),
metilxantin (seperti teobromin dan teofilin) dan
antranoid.21]. McGaw dkk. [22] mendokumentasikan
aktivitas anti-TB dari hampir 180 spesies beberapa
tanaman obat di Afrika bagian selatan yang digunakan
untuk keluhan terkait TB; namun, hanya 4 spesies dari
famili Rubiaceae yang dilaporkan.
Sebuah studi sebelumnya melaporkan aktivitas ekstrak daun
aseton dari 537 spesies pohon Afrika Selatan terhadap delapan
mikroorganisme penting termasuk: Mycobacterium smegmatis
dengan tujuan menemukan ekstrak dengan aktivitas tinggi dan
memprediksi taksa mana yang memiliki prioritas tinggi untuk
penyelidikan lebih lanjut [23]. Enam spesies dari famili Rubiaceae
memiliki aktivitas yang menarik terhadapM. smegmatis dan
diselidiki secara lebih rinci terhadap patogen Mycobacterium
spesies juga. Ekstrak daun aseton dariOxyanthus speciosus
memiliki kemanjuran yang menjanjikan terhadap mikobakteri non-
patogen dan patogen.24]. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
mengidentifikasi senyawa antimikobakteri dengan fraksinasi
terpandu bioassay dari ekstrak daun kasar aseton.Oxyanthus
Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC
khusus. Sitotoksisitas fraksi dan senyawa yang diisolasi
serta aktivitas penghambatan oksida nitrat dari senyawa
yang diisolasi ditentukan sementara aktivitas intraseluler
dari ekstrak kasar dievaluasi.
Metode
bahan tanaman
Daun dari Oxyanthus speciosus dikumpulkan pada
Februari 2013 di Kebun Raya Lowveld, Nelspruit,
Mpumalanga, Afrika Selatan berdasarkan label pohon.
Bahan tanaman diidentifikasi oleh Magda Nel dan
spesimen voucher disimpan di Herbarium Schweickerdt
HGWJ Universitas Pretoria (PRU) dengan nomor voucher
PRU 120078. Daunnya dikeringkan di udara pada suhu
kamar, digiling menjadi bubuk halus di Macsalab mill
(model 2000 LAB Eriez) dan disimpan dalam wadah kaca
tertutup di tempat gelap sampai dibutuhkan.
Ekstraksi, fraksinasi dan isolasi
Daun kering dan bubuk dari O. spesies (170
g) diekstraksi dalam aseton (1 l) selama 24 jam (diulang tiga
kali) untuk menghasilkan ekstrak kasar (40 g) setelah
penyaringan dan penghilangan pelarut pada 40 °C
menggunakan rotavapor. Bagian dari ekstrak kasar (37 g)
menjadi sasaran elusi silika gel kolom kromatografi (CC)
dengan kombinasin-heksana (heks), etil asetat (EtOAc), dan
metanol (MeOH) dalam meningkatkan polaritas untuk
menghasilkan 64 fraksi masing-masing 500 mL. Berdasarkan
kesamaan kromatogram dari analisis kromatografi lapis tipis
(KLT), sampel yang terkumpul digabungkan
menjadi sebelas pecahan utama: F1 [hex/EtOAc (100:0 dan
90:10), 750 mg], F2 [hex/EtOAc (90:10 dan 80:20), 1,16 g], F3
[hex/EtOAc (80:20 dan 70:30), 550 mg], F4 [hex/ EtOAc
(70:30), 1,14 g], F5 [hex/EtOAc (70:30 dan 60:40), 610 mg], F
6 [hex/EtOAc (50:50), 120 mg], F7 [hex/EtOAc (40:60), 160
mg], F8 [hex/EtOAc (20:80 dan 0:100), 300 mg], F9 [EtOAc/
MeOH (80:20), 30mg], F10 [EtOAc/
Gambar 1 Bioautografi pecahan melawan M. smegmatis menunjukkan pita aktivitas antimikobakteri yang jelas dalam kromatogram yang dikembangkan
dalam kloroform/etil asetat/asam format (CEF)
(2019) 19:108 Halaman 3 dari 11
MeOH (50:50),10,49 g], dan F11 [EtOAc/MeOH (30:70, 0:100),
11,03 g]. Berdasarkan aktivitas yang dipandu bioassay,
fraksi F1 hingga F4 dan F9, hingga F11 tidak memiliki senyawa
antimikobakteri aktif sebanyak dan seaktif yang dipisahkan
oleh KLT dalam bioautografi (Gbr. 4b). 1) sebagai fraksi F5, F6
hingga F8, dan tidak diselidiki lebih lanjut. Fraksi F6 (80 mg)
dan F7 (120 mg) secara individual mengalami kromatografi
Sephadex LH-20 berulang untuk menghasilkan senyawa1
(6,4 mg). Fraksi F8 (270 mg) menjadi sasaran kromatografi
kolom silika gel lebih lanjut untuk pemurnian menggunakan
sistem pelarut isokratn-heksana:aseton (7:3) untuk
menghasilkan 48 sub-fraksi masing-masing 50 mL yang
digabungkan menjadi sub-fraksi utama berdasarkan profil
KLT mereka. Sub-fraksi F8 (12-13, 14-21, 22-37, dan 38-48)
senyawa yang dihasilkan 2 (bubuk putih, 50mg). Fraksi F5 (570
mg) menjadi sasaran kromatografi kolom gel silika lain untuk
pemurnian menggunakann-heksana: EtOAc dalam sistem
eluen polaritas gradien. Karena campuran konstituen yang
kompleks dan jumlah bahan yang kecil, tidak ada senyawa
yang diisolasi.
Prosedur percobaan umum
Itu 1H dan 13Spektrum C NMR direkam dengan spektrometer
Varian and Bruker (Avance III) pada 400MHz untuk 1H dan
100MHz untuk 13C. Pergeseran kimia () dikutip dalam bagian
per juta (ppm) relatif terhadap standar internal tet-
ramethylsilane (TMS) atau puncak pelarut sisa (aseton-d6:
δH 2.05 dan δC 29,84). Spektrum massa resolusi tinggi
direkam pada time-of-flight Waters Synapt high def-
inisi MS menggunakan ionisasi elektrospray dalam mode
positif atau negatif. Kromatografi kolom dilakukan pada MN
silika gel 60 (0,063-0.2mm/70-230) jala. Pelat berlapis
kromatografi lapis tipis (KLT) silika gel 60 F254 (Merck,
Jerman) digunakan untuk memantau fraksi dan bintik
dideteksi dengan sinar UV (254 dan 365 nm) dan kemudian
disemprot dengan semprotan asam vanillin-sulfat
Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC (2019) 19:108
reagen diikuti dengan pemanasan pada 110 ° C selama sekitar tiga menit
sampai pengembangan warna yang sesuai.
Senyawa 1: Bubuk jeruk, rumus molekul:
C40H56HAI2, ESIMS (+) m/z: 429 ([MC9H15O]+); 1H NMR
(100MHz, metanol-d4)δH: 1,08 (H3-16), 1,08 (H3-17),
1,74 (H3-18), 1,97 (H3-19), 1,97 (H3-20), 1,01 (H3-16),
0,86 (H3-17), 1,63 (H3-18), 1,92 (H3-19), dan 1,26 (H3-20).
13C NMR (400MHz, metanol-d4) δC: 65,9 (C-3), 65,0 (C-3),
54.9 (C-6), 48,4 (C-2), 42,5 (C-4), 44,6 (C-2), 28,7 (C16), 30,2
(C-17), 21,6 (C-18), 12,7 (C-19),
12,7 (C-20), 24,3 (C-16), 29.5 (C-17), 22.8 (C-18), 13.1 (C-19),
12.8 (C-20).
Senyawa 2: Bubuk putih yang terdiri dari campuran
triterpen tipe ursin yang berkaitan erat; ESIMS (+) m/
z: 511,3397 [M+Na] + untuk C30H48HAI5Na, Calcd 511.3399;
1H NMR (400MHz, aseton-d6)δH: 5,28 (1H, brt, 3,7
Hz, H-12), 3,56-3,62 (1H, m, H-3), 3,62 (1H, d, 10,5 Hz,
H-23a), 3,32 (1H, d, 10,5 Hz, H-23b), 2,55 (1H, brs, H-18),
0,76 (3H, s, H3-24), 0,79 (3H, s, H3-25), 0,95 (3H, d, 6,8 Hz,
H3-30), 0,97 (3H, s, H3-26), 1,20 (3H, s, H3-29), 1,35 (3H, s,
H3-27);
Analisis GC-MS ekstrak daun Oxyanthus speciosus
Bahan tanaman bubuk diekstraksi dengan aseton dan
dianalisis menggunakan GC-MS LECO Pegasus 4D GC-TOFMS
(LECO Africa (Pty) Ltd., Afrika Selatan). Data diperoleh pada
kolom GC Elite-1(100% Dimethyl poly siloxane) Rxi-5SilMS
30m× 0.25mm ID × 0.2μm ketebalan film (Restek, Bellefonte,
PA, USA). Deteksi spektroskopi oleh GC-MS melibatkan sistem
ionisasi elektron yang memanfaatkan elektron berenergi
tinggi (70 eV). Gas helium murni (Afrox, Afrika Selatan)
digunakan sebagai gas pembawa dengan laju aliran konstan
1mL/menit. Suhu oven ditahan selama 3 menit dengan
penundaan pelarut 5 menit yang diprogram pada 40 ° C dan
ditahan secara isotermal pada 300 ° C selama 5 menit.
Sebuah alikuot dari 1μL larutan aseton sampel disuntikkan
dalam mode spitless (waktu spitless 30s) dan rasio split 10:1
dengan suhu injektor pada 250 °C dan garis suhu transfer MS
ditetapkan pada 280 °C. Suhu sumber ion dipertahankan
pada 230 °C. Interval pemindaian 0,5 detik dan fragmen
akuisisi massa mulai dari 40 hingga 550Da dipertahankan
dengan kecepatan akuisisi data 10 spektrum/detik. Kuantitas
relatif senyawa yang ada dalam ekstrak dinyatakan sebagai
persentase berdasarkan luas puncak yang dihasilkan dalam
kromatogram. Identifikasi tentatif konstituen bioaktif
didasarkan pada perbandingan waktu retensi mereka dengan
sampel standar dan dengan mencocokkan pola fragmentasi
spektral terhadap spektrum massa perpustakaan komersial.
Uji aktivitas antimikobakteri
Kultur mikobakteri dan persiapan inokulum
Aktivitas antimikobakteri diuji terhadap empat spesies
mikobakteri termasuk tiga non-patogen, tumbuh cepat
Halaman 4 dari 11
strain: Mycobacterium smegmatis (ATCC 1441) diperoleh
dari American Type Culture Collection, Mycobacterium
aurum (NCTC 10437) diperoleh dari Koleksi Nasional Jenis
Budaya (Laboratorium Inggris), Mycobacterium fortitutum
(ATCC 6841) dan satu strain patogen pathogen
Mycobacterium tuberculosis strain lapangan (TB 8104) diperoleh
dari Bagian Bakteriologi, Dewan Penelitian Pertanian-
Onderstepoort Veterinary Institute, Afrika Selatan. Budaya
dipertahankan seperti yang dijelaskan sebelumnya [24].
Uji sitotoksisitas
Sitotoksisitas ekstrak tumbuhan mentah, fraksi dan
senyawa terisolasi diuji terhadap sel hati manusia C3A
(dibeli dari ATCC, CRL-10741) menggunakan 3-(4,5-
dimethylthiazol)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)
pengujian kadar logam [25] dengan sedikit modifikasi [26].
Produksi penghambatan oksida nitrat (NO)
Aktivitas penghambatan produksi NO dari Oxyanthus speciosus
ekstrak kasar dan senyawa terisolasi dievaluasi dalam garis sel
makrofag tikus yang diaktifkan LPS RAW 264.7 seperti yang
dijelaskan sebelumnya [27]. Secara singkat, persentase oksida
nitrat yang dilepaskan dari makrofag dinilai dengan menentukan
konsentrasi nitrit dalam supernatan kultur menggunakan reagen
Griess. Setelah inkubasi 24 jam, 100μL supernatan dari masing-
masing sumur pelat kultur sel dipindahkan ke pelat mikrotiter 96-
sumur dan ditambahkan reagen Griess dengan volume yang
sama. Pembaca pelat mikrotiter (perangkat molekul SpectaMax
190) digunakan untuk membaca absorbansi setelah 10 menit
pada 550 nm. Konsentrasi nitrit dihitung dari analisis regresi
menggunakan pengenceran serial natrium nitrit sebagai standar.
Validitas pengujian ditunjukkan dengan menggunakan sel yang
tidak diberi perlakuan sebagai kontrol negatif, sel yang
distimulasi LPS sebagai kontrol positif dan tambahan kelompok
sel sebagai kelompok kontrol reduksi dengan sel yang distimulasi
LPS, diinkubasi bersama dengan quercetin yang digunakan
sebagai penghambat NO.
Uji intraseluler dari ekstrak aseton mentah dari
Oxyanthus speciosus
Garis sel makrofag tikus RAW 264.7 (ATCC TIB-71)
digunakan untuk mempelajari aktivitas sampel terhadap
intraseluler M.kebetulan [28, 29]. Sel dikultur di Dulbecco's
Modified Eagle Medium (D-MEM) dilengkapi dengan 10%
FBS dan 1% glutamin, pada 37 °C dan 5%
BERSAMA2. Dua puluh mL media (D-MEM) dituang ke dalam
75 cm3 labu. Sel dipisahkan dari labu dengan menggunakan
pengikis sel, disentrifugasi pada 1000 rpm selama 5 menit,
disuspensikan dalam media 10mL dan dihitung, setelah itu suspensi
sel diunggulkan dalam pelat mikrotiter 96-sumur dengan kepadatan
105 sel/mL dan diinkubasi pada suhu 37 °C dan 5% CO2 selama 24 jam.
M. kebetulan tumbuh di Middlebrook 7H10 kaldu di-
dilarutkan dengan media kultur sel (tanpa antibiotik) hingga
konsentrasi akhir 105 CFU/mL dan ditambahkan ke masing-masing
Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC (2019) 19:108
baik untuk memberikan multiplisitas infeksi (MOI) dari 3 dan inkubasi
didiamkan selama 4 hingga 10 jam pada 37 °C dalam 5% CO2 sel untuk
mengambil bakteri. Bakteri ekstraseluler dihilangkan dengan mencuci
piring dengan PBS dan kemudian 100 μL media yang mengandung
obat ditambahkan ke masing-masing sumur diikuti dengan inkubasi di
bawah kondisi yang sama seperti di atas. Setelah 2, 4 dan 6 hari, sel-sel
dari kontrol dan sumur yang dirawat dilisiskan menggunakan 0,25%
natrium dodesil sulfat dan disonikasi pada 1,5W selama 15 detik.
Kemudian lima pengenceran (100-105) disiapkan dan 100 μL masing-
masing pengenceran disebarkan pada pelat agar Middlebrook 7H11
dan diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 7 sampai 10 hari sampai
koloni terlihat (4-6 hari) dan jumlah CFU/mL ditentukan. Ekstrak
tumbuhan dianggap bakterisida jika secara signifikan mengurangi unit
pembentuk koloni dalam sampel uji dibandingkan dengan kontrol.
Rifampisin diencerkan secara serial dari 4mg/mL (MIC= 50μg/mL)
dimasukkan sebagai senyawa bakterisida kontrol.
Analisis statistik
Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga dan nilai
dinyatakan sebagai mean ± standar deviasi. Perbedaan
antara nilai dinilai signifikansinya menggunakan analisis
varians menggunakan Microsoft excel dan hasilnya
dibandingkan menggunakan Fisher's least significant
difference (LSD) pada taraf signifikansi 5%.
Hasil
Penjelasan struktur dan GC-MS
Ekstrak kasar daun aseton dari O. speciosus menjadi
sasaran fraksinasi yang dipandu bioassay menggunakan
kromatografi kolom terbuka dan bioautografi untuk
menentukan jumlah senyawa antimikobakteri yang ada [
30] (Gbr. 1). Secara singkat, pelarut elusi dikeluarkan dari
kromatogram dalam aliran udara pada suhu kamar,
kromatogram disemprot dengan cairan kental.
M. smegmatis biakan, diinkubasi semalaman dan disemprot
dengan 0.2 mg/ml p-iodonitrototetrazolium violet untuk
menunjukkan nilai Rf senyawa yang menghambat
pertumbuhan mikobakteri. MIC masing-masing fraksi juga
ditentukan. Sebelas fraksi utama diperoleh. Dua senyawa
yang diketahui, lutein (1) [31-33] dan asam rotundat (2) [34],
diisolasi (Gbr. 2). Struktur senyawa ini diidentifikasi setelah
analisis data NMR mereka dan dibandingkan dengan yang
dilaporkan dalam literatur. Kehadiran lutein (1) dan asam
rotundic (2) dilaporkan dariOxyanthus speciosus untuk
pertama kalinya sejauh pengetahuan kami. Komposisi
konstituen ekstrak kasar ditetapkan dengan analisis GC-MS
(Tabel1). Senyawa yang ada dalam ekstrak asetonO. speciosus
dideteksi dengan kromatografi gas (GC) dan diidentifikasi
dengan spektrometri massa (MS). Analisis GC-MS
mengungkapkan 17 senyawa yang sementara diidentifikasi
dan dikonfirmasi dengan kecocokan perpustakaan dengan
kesamaan 70% ke atas berdasarkan area puncak, retensi
Halaman 5 dari 11
waktu dan rumus molekul. Sejauh pengetahuan kami,
belum ada penyelidikan kimia atau biologi yang dilakukan
pada spesies ini.
Aktivitas antimikobakteri
Aktivitas antimikobakteri dari fraksi dan senyawa dari
Oxyanthus speciosus ditentukan terhadap tiga non-
patogen dan satu patogen Mycobacterium spesies dan
hasilnya diberikan sebagai konsentrasi hambat minimum
(MIC) dalam mg/mL. Suatu ekstrak atau fraksi dapat
dikatakan mempunyai aktivitas signifikan jika nilai KHM
100 isμg/mL atau lebih rendah, sedang jika 100 <MIC
≤625 dan lemah jika MIC > 625 μg/mL [35]. Suatu senyawa
yang diisolasi dikatakan memiliki aktivitas antimikroba yang
signifikan jika nilai MIC adalah≤10 μg/mL, sedang jika 10 <
MIC ≤100 μg/mL dan lemah jika MIC > 100 μg/mL [36]. Fraksi
memiliki derajat aktivitas yang berbeda terhadap keempat
mikobakteri, mulai dari sangat baik hingga lemah dengan
nilai MIC antara 0,039mg/mL dan 2,5 mg/mL (Tabel2).
Pecahan 9 dan 10 memiliki nilai MIC terbaik sebesar
0,039 mg/mL sedangkan fraksi 2, 3, 4, 5, 8 dan 11 memiliki
aktivitas sedang dengan nilai KHM berkisar antara 0,156 mg/
mL sampai 0,625 mg/mL. Lutein dan asam rotundat memiliki
aktivitas sedang terhadap empat mikobakteri yang diuji
dengan nilai MIC berkisar antara 12,5 hingga 100μg/mL.
Aktivitas total (TA) fraksi dihitung dengan membagi
massa total (mg) fraksi dengan nilai MIC (mg/mL) [35].
Dengan membagi massa dalam mg dengan MIC dalam
mg/mL, satuan hasilnya adalah dalam mL (mg/mg/ml =
ml). Karena aktivitas total fraksi sangat tinggi, maka dibagi
1000 dan disajikan dalam L. Nilai yang diperoleh
menunjukkan volume di mana konstituen aktif yang ada
dalam fraksi dapat diencerkan dan tetap
menghambat pertumbuhan organisme yang diuji. F10 dan F11
memiliki aktivitas total tertinggi terhadap organ yang diuji.
isme sedangkan F6 dan F7 memiliki total aktivitas terendah (Tabel
1). Juga, perhitungan TA mendeteksi kerugian atau keuntungan dalam biologi
aktivitas pada setiap langkah fraksinasi, dengan proses
seperti foto-oksidasi atau interaksi sinergis antara fraksi atau
senyawa tanaman [35]. Ekstrak aseton mentah dariOxyanthus
speciosus memiliki nilai TA 383 dan 0,063 L terhadap
M.smegmatis, M.aurum dan M.tuberkulosis (8104) masing-
masing [24]. Aktivitas total juga dapat digunakan untuk
memilih spesies tanaman yang paling menjanjikan untuk
diselidiki.37]. Dalam kasus seperti itu, kuantitas dalam mg
yang diekstraksi (mg/mL) dibagi dengan MIC (mg/mL) yang
menghasilkan TA dalam mL/mg.Oxyanthus speciosus subsp.
Stenokarpus ekstrak dipilih berdasarkan TA. Aktivitas total
juga dapat menunjukkan jika aktivitas hilang atau
diperoleh selama proses fraksinasi [35]. TA fraksi berkisar
antara 0,09 hingga 269 L. Fraksi aseton memiliki aktivitas
total 1771,1 L sebelum difraksinasi lebih lanjut dengan
kromatografi kolom. Dua fraksi terakhir memiliki aktivitas
total tertinggi yang menunjukkan
Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC (2019) 19:108 Halaman 6 dari 11

Gambar 2. Struktur kimia lutein (1) dan asam rotundat (2) diisolasi dari O. speciosus

bahwa senyawa aktif relatif non-polar. Total aktivitas
pecahan terhadapM.smegmatis,
M.aurum, M.tuberculosis (8104) dan M. kebetulan adalah
11.7, 13.5, 7.1. dan 49,0 L masing-masing (Tabel2).
Aktivitas sitotoksik dan penghambatan produksi NO
Pecahan F9 dan F10 memiliki beberapa tingkat toksisitas terhadap
sel hati manusia C3A sementara fraksi lain memiliki relatif
sitotoksisitas moderat terhadap garis sel ini. Lutein tidak
sitotoksik bahkan pada konsentrasi tertinggi yang diuji (200μg/
mL) sedangkan asam rotundat relatif sitotoksik terhadap
garis sel yang diuji dengan LC50 nilai 33 μg/mL. Lutein juga memiliki
toksisitas rendah terhadap makrofag RAW 264,7, mendukung
ing hasil yang ditemukan oleh Rafi dan Shafaie [38]. Semakin tinggi
indeks selektivitas maka semakin tinggi pula potensi keamanan
ekstrak atau senyawa tersebut bila digunakan secara in vivo. Nilai
indeks selektivitas (SI) yang diperoleh dalam penelitian ini untuk fraksi
berkisar antara 0,02 hingga 3,27 dengan fraksi F8 memiliki nilai
tertinggi terhadap M. smegmatis (Meja 3). Sebagian besar pecahan
tampaknya lebih beracun bagi sel manusia daripada ke

Tabel 1 Senyawa bioaktif terdeteksi dalam ekstrak kasar aseton Oxyanthus speciosus
S/T Senyawa RT (menit) Formula molekul MW % Area Puncak

1 2-Methylthiophene 12.03 C5H6S 98 0,03

2 2-Metil-penten-3-yne 1.33 C6H8 80 1.63

3 4-(Metilensiklopropil)-butiraldehida atau 4-(2-Metilensiklopropil) butanal 11.89 C8H12HAI 124 7.99

4 Methylcyclooctane 11.81 C9H18 126 0.34

5 HAI-desilhidroksilamina 7.26 C10H23TIDAK 173 3.92

6 4H-1,3,2-Dioksaborin, 6-etenil-2-etil-4-metil-4-(2-metilpropil)Fenil 4- 21.57 C12H21BO2 208 0,10

7 metoksibenzoat 19.62 C14H12HAI3 228 0,00007

8 3-Octadecyne 12.24 C18H34 250 0,87

9 2-Methylheptadecane 15.58 C18H38 254 1.94

10 Nonadecane 11.88 C19H40 268 7.99

11 Neofitadiena 24,67 C20H38 278 0,44

12 fitol 14,75 C20H40HAI 296 0.73

13 1-Iodo-2-methylundecane 13.81 C12H25saya 296 5.09

14 1,2-Benzenedicarboxylic acid, butyl 2-ethylhexyl ester 18.13 C20H30HAI4 334 0,05

15 Asam ftalat, heptil pentil ester 13.32 C20H30HAI4 334 0,02

16 Heptakosa 17.21 C27H56 380 0,87

17 2-(Cholest-5-en-3-yloxy) etil asetat 22.93 C31H52HAI3 472 0,92

RT waktu retensi, MW Berat molekul
Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC (2019) 19:108 Halaman 7 dari 11

Meja 2 Konsentrasi hambat minimal (MIC dalam mg/mL) dan aktivitas total (TA) dalam L ekstrak, fraksi dan senyawa hasil isolasi
Oxyanthus speciosus. (TA dalam L dihitung dengan membagi massa fraksi dalam mg (MF) dengan MIC dalam mg/mL dan membagi jawabannya dengan
1000)
sampel Menghasilkan MF Mikroorganisme
(%) (mg)
M. smegmatis M. aurum M.tuberkulosis M. kebetulan Rata-rata Rata-rata
MIC TA inL
MIC TA MIC TA MIC TA MIC TA
Ekstrak 2.99Sebuah 26.340 0,08Sebuah 329.3 0,06Sebuah 439.0 0.17Sebuah 154.9 0,078 337.7 0,097 315.2

F1 2.02 750 1.25 0.6 2.5 0,3 2.5 0,3 2.5 0,3 2.19 0,3

F2 3.15 1160 0.31 3.7 0,625 1.8 0,625 1.9 0.31 3.7 1.02 2.8

F3 1.48 550 0,15 3.7 0.31 1.8 0.31 1.8 0.31 1.8 0.27 2.2

F4 3.08 1140 0,15 7.6 0.31 3.7 0.31 3.7 0,156 7.3 0.27 5.6

F5 1.64 610 0,15 4.1 0.31 1.9 2.5 0.2 0,625 0.9 0,78 1.8

F6 0.32 120 1.25 0,09 2.5 0,048 0,625 0.2 1.25 0.1 1.25 0.1

F7 0,43 160 1.25 0.1 0,625 0,3 1.25 0.1 1.25 0.1 1.09 0.2

F8 0,81 300 0,15 2 0,625 0,5 2.5 0.1 1.25 0.2 1.13 0,7

F9 0,08 30 0,039 0.8 0.31 0,09 0.31 0,09 0,625 0,05 0,48 0,3
F10 28.35 10.490 0,039 269 0,156 67.2 0.31 33.8 0,625 16.8 0,28 96.7

F11 29.81 11.030 0,15 73.5 0,156 71 0.31 35.6 0,625 17.6 0.31 33

Rif dan dan 12.5 dan 1.56 dan 100 dan dan dan 38.02 dan

Lut dan 6.4 0,05 tidak 0,013 tidak 0,025 tidak 0,025 tidak 0,028 tidak

RA dan 50 0.1 tidak 0.1 tidak 0.1 tidak 0.1 tidak 0.1 tidak

Ms M. smegmatis, Ma M. aurum, Mt M. tuberculosis, Lut Mf M. fortitutum, F1-F11 pecahan, dan tidak ditentukan, tidak tidak tersedia, RA asam rotundat, Rif Rifampisin,
Lutein
SebuahMIC sebelumnya diterbitkan oleh Aro et al. [24]

Nilai yang dicetak tebal menunjukkan MIC dan TA pecahan dengan aktivitas yang baik

mikroba. Asam rotundat memiliki indeks selektivitas yang buruk secara signifikan menurunkan jumlah mikobakteri
0.33. Indeks selektivitas (SI) lutein berkisar antara 4 hingga > intraseluler pada 0,5X, 1X, 2X dan 4X nilai MIC 120 μg/
16, menunjukkan bahwa aktivitas sitotoksik lebih tinggi pada ml. Piring dicuci dengan PBS sebelum melisiskan sel untuk
mikobakteri daripada sel eukariotik. Caamal-Fuentes dkk. [39] menghindari hasil positif palsu.M. kebetulan secara efektif
menyatakan bahwa indeks terapi obat harus 10 atau lebih difagositosis setelah masa inkubasi 4 jam. Salah satu karakteristik
tinggi. Dua senyawa yang teridentifikasi diisolasi dari ekstrak unik dariMycobacterium spesies adalah kemampuan untuk
kasarOxyanthus speciosus, lutein dan asam rotundic, tumbuh baik di lingkungan intra dan ekstraseluler, oleh karena itu
tergantung dosis menghambat produksi NO pada agen antimikobakteri yang ideal harus aktif di kedua tempat
konsentrasi 3,12, 6,25, 12,5 dan 25 μg/mL (Tabel 4). Lutein tersebut.41]. Pada hari ke 6 pasca infeksi, aktivitas
menyebabkan persentase penghambatan tertinggi (94,99%) antimikobakteri intraseluler dari ekstrak kasar aseton
pada konsentrasi 25μg/mL dan viabilitas sel sebesar 91,59%. O. speciosus pada 1X hingga 4X MIC lebih unggul dari rifampisin,
Oleh karena itu, aktivitas penghambatan NO diekspresikan menunjukkan lebih dari 90% pengurangan unit pembentuk
oleh lutein bukan karena toksin metabolik umum. koloni. Aktivitas bakterisida yang diamati bergantung pada dosis
dan waktu. Efek penghambatan sedang diamati untuk ekstrakO.
Uji intraseluler speciosus pada 0,5X MIC menghambat pertumbuhan bakteri
Aktivitas antimikobakteri intraseluler dari O. speciosus intraseluler kurang dari 50% selama 6 hari paparan obat (Gbr. 2). 3
ekstrak dan obat anti-TB rifampisin terhadap a) dibandingkan dengan rifampisin (Gbr. 3b) pada konsentrasi
M. kebetulan dinilai menggunakan makrofag RAW 264,7. yang sama, menghambat lebih dari 50% pertumbuhan
Makrofag tikus terinfeksi denganM. kebetulan dengan mikobakteri intraseluler.
multiplisitas infeksi (MOI) dari lima mikobakteri per sel.
Infeksi makrofag pada MOI rendah menyebabkan Diskusi
pematangan fagosom sehingga mengakibatkan Penemuan senyawa timbal potensial dan kemajuannya
penghambatanM.tuberkulosis pertumbuhan makrofag [40 menuju pengembangan obat melibatkan ekstraksi ekstrak
]. Ekstrak aseton dariO. speciosus tidak sitotoksik kasar dari sumber, melakukan fraksinasi yang dipandu
terhadap makrofag RAW 264,7 bahkan pada konsentrasi bioassay dan yang paling penting proses pemurnian
uji tertinggi (1mg/mL) [27]. Ekstrak untuk menghasilkan senyawa bioaktif tunggal.
Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC (2019) 19:108 Halaman 8 dari 11

Tabel 3 LC50 (terhadap sel hati C3A) dan nilai indeks (SI) ekstrak kasar berdasarkan uji fraksinasi. Kerugian ini
selektivitas ekstrak, fraksi dan senyawa Oxyanthus bervariasi dari 86% (M.kebetulan), 66% (M.aurum)
khusus hingga 50% untuk M.tuberkulosis. Kehilangan tersebut dapat
sampel LC50 SI dijelaskan dengan inaktivasi senyawa selama proses isolasi
(μg/
MS ibu gunung Mf atau sebagai alternatif dengan hilangnya sinergisme antara
ml)
senyawa yang dipisahkan selama isolasi. Oleh karena itu, aksi
Ekstrak 383Sebuah 1.24Sebuah 2.46Sebuah 2.25Sebuah 4.91
gabungan dari dua atau lebih zat dapat menghasilkan efek
F1 40 0,03 0,02 0,02 0,02
biologis yang lebih tinggi daripada yang tunggal's. Oleh
F2 34 0.11 0,05 0,05 0.11 karena itu, studi yang lebih menyeluruh diperlukan untuk
F3 60 0.38 0.19 0.19 0.19 menemukan zat mana yang harus dicampur untuk mencapai
F4 190 1.22 0,61 0,61 1.22 aktivitas antimikobakteri yang diinginkan karena metode
pengenceran serial dua kali lipat tidak memberikan hasil yang
F5 200 1.28 0,65 0,08 0.32
akurat dalam menggandakan atau mengurangi separuh dari
F6 70 0,06 0,03 0.11 dan
TA yang mungkin tidak signifikan. Kerugian yang ditemukan
F7 156 0.12 0,25 0.12 0.12
di sini jauh lebih besar daripada yang dapat dijelaskan oleh
F8 510 3.27 0.82 0,20 0,41 pengukuran yang tidak akurat. Sangat menarik bahwa ada
F9 40 1.03 0.13 0.13 0,06 juga perbedaan besar dalam kerugian antara patogen yang
F10 50 1.28 0.32 0.16 0,08 berbeda. Hasil yang diperoleh dari penelitian ini serupa
dengan penelitian yang dilakukan oleh Ntutela et al.,[43] di
F11 80 0,51 0,51 0,26 0.13
mana hilangnya aktivitas antimikobakteri setelah fraksinasi
Rif > 200 dan dan dan dan
dan efek sinergisme antar fraksi dicatat.
Lut > 200 >4 > 16 >8 >8
Dua senyawa 2-(2-hidroksi)-etanol--D-glucopyranoside dan
RA 33 0.33 0.33 0.33 0.33 glikosida sianogenik, halocalin, diisolasi dari Oxyanthus
Dox 3.32 dan dan dan dan speciosus subsp. gerrardii dan Oxyanthus speciosus subsp.
RA asam rotundat, Rif Rifampisin, Lut Lutein, Dox Doksorubisin, Ibu M.smegmatis, khusus masing-masing [44]. Dua senyawa telah dilaporkan
Ma M. aurum, Mt M. tuberculosis, Mf M. fortuitum, F1-F11 pecahan, dan diisolasi dariPsikotria capensis (Rubiaceae) dan telah
tidak ditentukan
Sebuahditerbitkan sebelumnya oleh Aro et al. [24] diidentifikasi sebagai -sitosterol dan turunan karotenoid,
Nilai yang dicetak tebal menunjukkan pecahan dengan indeks selektivitas tertinggi lutein [45]. Karotenoid tanaman adalah pigmen larut lemak
alami yang memberikan warna cerah pada tanaman dan
[42]. Ekstrak produk alami mentah adalah campuran kompleks memiliki sifat farmakologis seperti aktivitas antioksidan kuat;
dari mungkin ratusan senyawa berbeda yang bekerja bersama mereka juga digunakan untuk menghilangkan beberapa
secara sinergis ketika ekstrak diberikan secara keseluruhan. penyakit kronis seperti penyakit kardiovaskular, osteoporosis
KecualiM. smegmatis (yang mengalami peningkatan sebesar 11%) dan kanker [46]. Beberapa karotenoid seperti-karoten, lutein,
terdapat kerugian yang cukup besar pada total aktivitas dan likopen juga dapat menawarkan perlindungan terhadap
gabungan fraksi dibandingkan dengan beberapa respons inflamasi.47]. Lutein

Tabel 4 Kegiatan penghambatan senyawa pada produksi NO di makrofag RAW 264,7 yang diaktifkan LPS
sampel Konsentrasi (μg/mL) TIDAK ADA produksi % TIDAK % sel
(μM) inhibisi kelangsungan hidup

Lutein 25 0,14 ± 0,02 94,99 91.59

12.5 0,44 ± 0,15 83,85 92.59

6.25 1,37 ± 0,07 49.46 86,84

3.12 1,98 ± 0,08 27.17 74.20

Asam rotundat 25 0,48 ± 0,18 82.39 87.48

12.5 1,19 ± 0,16 56.24 86.11

6.25 2.01 ± 0.16 26.20 78.51

3.12 2,39 ± 0,09 12.16 73,73

kuersetin 25 0,35 ± 0,10 99.35 57.60

12.5 0,30 ± 0,05 106.61 79.23

6.25 0,69 ± 0,08 110.49 105.03

3.12 2,50 ± 0,48 94.50 101.23

Nilai dinyatakan sebagai mean ± SD

Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC
(Sebuah)
Gambar 3 RAW 264,7 sel yang terinfeksi Mycobacterium fortitutum dengan MOI 1:5 (sel: basil) diekspos ke beberapa konsentrasi ekstrak dan rifampisin (0,5X, 1X, 2X
dan 4X MIC, 0 = kontrol yang tidak diberi perlakuan) dalam rangkap tiga. Setelah 2, 4 dan 6 hari pasca infeksi, sel-sel dilisiskan dan dilapisi pada 7H10
agar untuk menentukan CFU/mL. Plot merinci aktivitas bakterisida antibiotik dari O. spesies (Sebuah) dan rifampisin (b) digunakan sebagai referensi positif
kontrol ekstrak. Nilai mewakili mean ± SD
telah diisolasi dari Tagetes erecta dan tanaman ini antara lain
digunakan untuk pengobatan batuk dan disentri [48].
Beberapa triterpen yang diisolasi dari famili Rubiaceae antara
lain asam oleanolat, asam ursolat, lupeol, asam betulinat,
asam rotundat, asam barbinervat, dan asam luculiaoat (A).20].
Asam rotundat diisolasi dari buahIlex rotunda [34]. Triterpen
tipe ursene ini juga diisolasi dari daunGuettanda pohliana
milik subfamili Cinchonoideae dari keluarga Rubiaceae [49].
Laporan sebelumnya telah menyarankan bahwa lutein
mampu meningkatkan respon inflamasi in vitro dan in vivo
dengan menekan NF-ĸaktivasi B [50, 51]. Oleh karena itu,
dapat dikatakan bahwa lutein berperan penting dalam
memodulasi proses inflamasi dengan mengatur potensial
redoks seluler.52]. Hasil yang diperoleh dari penelitian ini
menunjukkan bahwa aktivitas antimikobakteri yang
ditunjukkan oleh lutein dapat terjadi dengan menghambat
produksi mediator inflamasi in vivo yang bertanggung jawab
atas patogenesis penyakit inflamasi kronis seperti TB.
Kemampuan ekstrak untuk menghambat replikasi
mikobakteri intraseluler mengungkapkan hasil yang patut
dicatat. Nilai MIC yang rendah dan aktivitas bakterisida
tergantung dosis yang diamati pada makrofag menunjukkan
penetrasi intraseluler yang efektif dari ekstrak kasarO.
khusus. Meskipun aktivitas penghambatan yang diamati ini
pada mikobakteri intraseluler,
berada pada konsentrasi yang lebih tinggi (≥ 2X MIC), LC50
ekstrak kasar pada sel inang masih lebih tinggi
(393 μg/mL) dari nilai ini. Oleh karena itu, sel inang tidak
akan terlalu terpengaruh pada konsentrasi yang efektif
melawan mikobakteri intraseluler. Hasil yang diperoleh
dari penelitian ini serupa dengan penelitian yang
dilakukan oleh Gupta et al.,[53] dimana ekstrak kasar
aseton dari Alpinia galanga mampu menghambat
(2019) 19:108 Halaman 9 dari 11
(b)
replikasi dari Mycoterium tuberculosis secara intraseluler.
Potensi pembunuhan intraseluler dari ekstrak asetonO.
speciosus untuk menggunakan cara kerjanya sangat
menarik.
Kesimpulan
Dapat disimpulkan bahwa lutein merupakan salah satu senyawa
aktif yang bertanggung jawab terhadap aktivitas antimikobakteri
dalam ekstrak kasar ekstrak buah buahan. Oxyanthus speciosus.
Selain aktivitas antimikobakteri in vitro yang menjanjikan dan
sitotoksisitas rendah terhadap sel manusia C3A, lutein juga
memiliki aktivitas antiinflamasi yang baik. Aktivitas yang
menjanjikan dari ekstrak kasarO. speciosus baik secara in vitro
maupun intraseluler dalam makrofag menunjukkan potensinya
untuk digunakan sebagai obat herbal anti TB. Namun, penelitian
lebih lanjut diperlukan untuk menyelidiki mekanisme kerjanya,
bioavailabilitas dan efek in vivo. Studi ini juga berkontribusi pada
validasi penggunaan mikobakteri non-patogen sebagai model
untuk studi intraseluler.
Singkatan
BCG: Bacillus-Calmette Guerin; CC: Kromatografi kolom silika gel; FDA:
Administrasi Makanan dan Obat-obatan; heks : N-heksana; LOX:
Lipoksigenase; MDR: Resistensi Obat Ganda; MIC: Konsentrasi Penghambatan
Minimum; TIDAK: Nitrat Oksida; PRU: Universitas Pretoria; RO: Spesies
Oksigen Reaktif; TA: Total Aktivitas TA- Jumlah Kegiatan; TDR: Benar-benar
Tahan Obat; XDR: Sangat Tahan Obat
Ucapan Terima Kasih
Kurator Kebun Raya Lowveld mengizinkan pengumpulan bahan
tanaman. Magda Nel dan Elsa van Wyk membantu persiapan voucher
herbarium.
Kurator Herbarium Schweickert HGW di Universitas Pretoria mengkonfirmasi
identitas spesies tumbuhan dan menyimpan spesimen voucher.
Pendanaan
Pekerjaan ini didukung oleh Dewan Penelitian Medis Afrika Selatan (dana
SIR untuk LJM) dan Yayasan Riset Nasional (NRF), Afrika Selatan.
Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC (2019) 19:108
Pendanaan diberikan oleh National Research Foundation kepada LJ McGaw
dan JN Eloff (Hibah No 81010).
Ketersediaan data dan bahan
Data tersedia dari penulis senior.
Penulis' kontribusi
AA melakukan sebagian besar kerja praktek sebagai bagian dari tesis PhD
diawasi oleh LJM dan JNE, JPD, MDA dan MAS dibantu dengan isolasi dan
karakterisasi senyawa aktif. LJM mengawasi seluruh proyek dan JNE mengedit
versi final dan menyerahkannya untuk dipublikasikan. Semua penulis membaca
dan menyetujui naskah akhir.
Persetujuan etika dan persetujuan untuk berpartisipasi
Tidak ada persetujuan etika yang diperlukan karena tidak ada eksperimen pada manusia
atau hewan yang dilakukan.
Persetujuan untuk publikasi
Tak dapat diterapkan.
Kepentingan bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan yang bersaing.
Penerbit's Catatan
Springer Nature tetap netral sehubungan dengan klaim yurisdiksi dalam
peta yang diterbitkan dan afiliasi institusional.
Detail penulis
1Departemen Ilmu Paraklinik, Fakultas Ilmu Kedokteran Hewan, Universitas
Pretoria, Tas Pribadi X04, Onderstepoort 0110, Afrika Selatan. 2Departemen
Biokimia, Fakultas Sains, Universitas Dschang, PO Box 67, Dschang,
Kamerun. 3Laboratorium Kimia Hasil Alam, Departemen Kimia, Fakultas
Sains, Universitas Dschang, P.OBox 67, Dschang, Kamerun. 4Departemen
Kimia, Universitas Pretoria, Pretoria, Afrika Selatan.
Diterima: 14 Juli 2018 Diterima: 9 Mei 2019
Referensi
1. LoBue PA, Enarson DA, Thoen CO. Tuberkulosis pada manusia dan hewan:
gambaran umum. Dis paru paru int J. 2010;14(9):1075-8.
2. Fogel N. Tuberkulosis: penyakit tanpa batas. Tuberkulosis. 2015;
(95)5:527-531.
3. Nguta JM, Appiah-Opong R, Nyarko AK, Yeboah-Manu D, Addo GA. Tanaman obat
yang digunakan untuk mengobati TB di Ghana. Mikobakteriol Int J. 2015;4(2):116-
4. 23. Chahine EB, Karaoui LR, Mansour H. Bedaquiline: diarylquinoline baru untuk
tuberkulosis yang resistan terhadap berbagai obat. Ann Farmakoter. 2014;48:107-
5. 15. Guzman JD, Evangelopoulos D, Gupta A, Prieto JM, Gibbons S, Bhakta S.
Antimikobakteri dari akar Lovage (Ligusticum officinale Koch). Phytother Res.
2013;27:993-8.
6. Adebayo S, Dzoyem JP, Shai LJ, Eloff JN. Aktivitas anti-inflamasi dan antioksidan dari 25
spesies tanaman yang digunakan secara tradisional untuk mengobati rasa sakit di
Afrika bagian selatan. BMC Complement Altern Med. 2015;15(1):1-10.
7. Dobrian AD, Lieb DC, Cole BK, Taylor-Fishwick DA, Chakrabarti SK, Nadler JL.
Peran fungsional dan patologis dari 12- dan 15-lipoxygenases. Prog Lipid
Res. 2011;50:115-31.
8. Labuschagné A, Lall N, Mphahlele MJ. Evaluasi arilkuinolin yang terkait secara
struktural dan 2-Aril-4-metoksikuinolin untuk aktivitas Antimikobakteri yang
potensial. Agen Antimikroba J Int Arab. 2013;3(2):1-12. Bogdan C, Rollinghoff M,
9. Diefenbach A. Peran oksida nitrat dalam imunitas bawaan. Immunol Rev.
2000;173:17-26.
10. Kleinnijenhuis J, Oosting M, Joosten LAB, Netea MG, van Crevel R.
Pengenalan kekebalan bawaan Mycobacterium tuberculosis. Clin Dev
Immunol. 2011:1-12. https://doi.org/10.1155/2011/405310.
11. Etna MP, Giacomini E, Severa M, Coccia EM. Sitokin pro dan anti-inflamasi
pada tuberkulosis: pedang bermata dua dalam patogenesis TB. Semin
Imunol. 2014;26(6)::543-51.
12. Reljic R, Stylianou E, Balu S, Ma JK. Interaksi sitokin yang menentukan hasil
infeksi mikobakteri pada makrofag. Sitokin. 2010;51(1):42-6.
Halaman 10 dari 11
13. DJ Newman, Cragg GM. Produk alam sebagai sumber obat baru selama 30 tahun dari
tahun 1981 sampai 2010. J Nat Prod. 2012;75:311-35.
14. Dzoyem JP, Eloff JN. Aktivitas anti-inflamasi, antikolinesterase dan antioksidan dari ekstrak
daun dua belas tanaman yang digunakan secara tradisional untuk mengurangi rasa sakit
dan peradangan di Afrika Selatan. J. Etnofarmaka. 2015;160:194-201.
15. Kuete V, Efferth T. Tanaman obat Kamerun: farmakologi dan
produk alami turunan. Farmakol depan. 2010;1(10)::1-19.
16. Ashforth EJ, Fu C, Liu X, dkk. Bioprospeksi untuk antituberkulosis mengarah
dari metabolit mikroba. Nat Prod Rep. 2010;27:1709-19.
17. Adamu M, Naidoo V, Eloff JN. Beberapa spesies tanaman Afrika selatan yang digunakan untuk
mengobati infeksi cacing dalam pengobatan etnoveteriner memiliki aktivitas antijamur
yang sangat baik. BMC Complement Altern Med. 2012;12:213.
18. Choudhury KT, Choudhury MD, Baruah M. Aktivitas antibakteri dari beberapa
tanaman yang termasuk dalam famili Rubiaceae: ulasan. Ilmu Pengetahuan
Dunia J Pharm. 2012;1:1179-94.
19. Ngwenya NM. Skrining biologis dan fitokimia senyawa utama dalam
Cephalanthus natalensis, Tesis diajukan untuk master's dalam sains:
Universitas Johannesburg; 2008.
20. Martins D, Nunez CV. Metabolit sekunder dari spesies Rubiaceae.
Molekul. 2015;20(7):13422-95.
21. Gurib-Fakeem AB. Tanaman obat dan aromatik dari Kepulauan Samudra
Hindia. Boca Raton: CRC Press; 2004. hal. 331-2.
22. McGaw LJ, Lall N, Meyer JJM, Eloff JN. Potensi tanaman Afrika selatan
melawanMycobacterium infeksi. J. Etnofarmaka. 2008a;119:482-500.
23. Pauw E, Eloff JN. Ordo pohon manakah di Afrika bagian selatan yang memiliki
aktivitas antimikroba dan selektivitas tertinggi terhadap bakteri dan jamur patogen
hewan? BMC Compl dan Altern Med. 2014;14:317.https://doi.org/10.
1186/1472-6882-14-317.
24. Aro AO, Dzoyem JP, Hlokwe TM, Madoroba E, Eloff JN, McGaw LJ. Beberapa ekstrak
daun pohon Rubiaceae Afrika selatan memiliki aktivitas antimikobakteri terhadap
patogen dan non-patogenMycobacterium jenis. Phytother Res. 2015;29:1004-10.
25. Mosmann T. Uji kolorimetri cepat untuk pertumbuhan dan kelangsungan hidup seluler:
aplikasi untuk proliferasi dan sitotoksisitas. J Metode Imunol. 1983;65:55-63.
26. McGaw LJ, Steenkamp V, Eloff JN. Evaluasi dariatrixia teh semak untuk
sitotoksisitas, aktivitas antioksidan, kandungan kafein dan
keberadaan alkaloid pirolizidin. J. Etnofarmaka. 2007;110:16-22.
27. Aro AO, Dzoyem JP, Eloff JN, McGaw LJ. Ekstrak enam spesies Rubiaceae yang
dikombinasikan dengan rifampisin memiliki khasiat yang baikin vitro aktivitas
antimikobakteri sinergis dan aktivitas anti-inflamasi dan antioksidan yang baik.
BMC Complement Altern Med. 2016;16(1):385-91. https://doi. org/10.1186/
s12906-016-1355-y.
28. Rastogi N, Labrousse V, Goh KS. In Vitro aktivitas empat belas agen antimikroba
terhadap obat yang rentan dan resisten terhadap isolat klinis
Mycobacterium tuberculosis dan aktivitas intraseluler komparatif melawan galur
H37Rv virulen dalam makrofag manusia. Mikrobiol Curr. 1996;33:67-175.
29. Lall N, Meyer JJM, Wang Y, Bapela NB, van Rensburg CEJ, Fourie B,
Franzblau SG. Karakterisasi aktivitas intraseluler konstituen
Antitubercular dari akarEuclea natalensis. Farmasi Biol. 2005;43:353-7.
30. Masoko J, Eloff JN. Keanekaragaman senyawa antijamur enam spesies
Terminalia Afrika Selatan (Combretaceae) ditentukan secara bioautografi.
Afr J Bioteknologi. 2005;4(12):1425-31.
31. Molnar J, Gyemant N, Tanaka M, Hohmann J, Bergmann-Leitner E, Molnar P,
Deli J, Didiziapetris R, Ferreira M. Penghambatan resistensi multidrug sel
Kanker oleh Diterpen alami, triterpen dan karotenoid. Curr Pharm Des.
2006;12(3):287-311.
32. Khachik F, Goli MB, Beecher GR, Holden J, Lusby WR, Tenorio MD, Barrera MR. J
Pertanian Makanan Kimia. 1992;40(3):390-8.
33. Lumut GP. Spektrum karbon-13 NMR dari karotenoid. Appl Chem murni. 1976;47:97-102.
34. Nakatani M, Miyazaki Y, Iwashita T, Naoki H, Hase T. Triterpen dari buah
Ilex rotunda. Fitokimia. 1989;28(5):1479-82.
35. Eloff JN. Kuantifikasi bioaktivitas ekstrak tumbuhan selama penyaringan
dan fraksinasi terpandu bioassay. Fitomedika. 2004;11:370-1.
36. Kuete V. Potensi tanaman Kamerun dan produk alami turunannya
terhadap infeksi mikroba; sebuah ulasan. Planta Med. 2010;76:1479-91.
37. Eloff JN. Sebuah proposal untuk mengekspresikan aktivitas antibakteri ekstrak tumbuhan
- langkah kecil pertama dalam menerapkan pengetahuan ilmiah untuk perawatan kesehatan
primer pedesaan di Afrika Selatan. S Afr J Sci. 2000;96:116-8.
38. Rafi MM, Shafaie Y. Diet lutein memodulasi gen nitric oxide synthase (iNOS) yang
dapat diinduksi dan ekspresi protein dalam sel makrofag tikus (RAW 264.
7). Mol Nutr Food Res. 2007;51:333-40.
Aro dkk. Pengobatan Pelengkap dan Alternatif BMC (2019) 19:108 Halaman 11 dari 11

39. Caamal-Fuentes E, Torres-Tapia L, Simá-Polanco P, Peraza- Sánchez SR, MooPuc R. Penyaringan

tanaman yang digunakan dalam pengobatan tradisional Maya untuk mengobati gejala mirip
kanker. J. Etnofarmaka. 2011;135:719-24.
40. Welin A, Lerm M. Di dalam atau di luar fagosom? Kontroversi lokalisasi
intraseluler Mycobacterium tuberculosis. Tuberkulosis. 2012;92:113-20.

41. Pauli GF, Kasus RJ, Inui T, Wang Y, Cho S, Fischer NH, Franzblau SG. Perspektif
baru tentang produk alami dalam penelitian obat TB. Ilmu Kehidupan.
2005;78:485-94.
42. Nguta JM, Appiah-Opong R, Nyarko AK, Yeboah-Manu D, Addo GA. Ulasan:
perspektif saat ini dalam penemuan obat melawan tuberkulosis dari produk
alami. Mikobakteriol Int J. 2015;4(16)::5-183.
43. Ntutela S, Smith P, Matika L, Mukinda J, Arendse H, Allie N, Estes DM,
Mabusela W, Folb P, Steyn L, Johnson Q, Folk WR, Syced J, Jacobs M.
Khasiat Artemisia afra fitoterapi pada tuberkulosis eksperimental.
Tuberkulosis. 2009;89(1):33-40.
44. Nahrstedt A, Rockenbach J, Wray V. Fenilpropanoid glikosida, glukosida
furanon dan asam geniposidat dari anggota rubiaceae.
Fitokimia. 1994;39:375-8.
45. Carvalho JT, Perazzo FF, Machado L, Bereau D. Aktivitas biologis dan
pengembangan bioteknologi produk alami. Biomed Res Int. 2013;
2013:971745 4 halaman.
46. Salminen A, Lehtonen M, Suuronen T, Kaarniranta K, Huuskonen J. Terpenoid:
penghambat alami pensinyalan NF-kappaB dengan potensi antiinflamasi dan
antikanker. Ilmu Kehidupan Sel Mol. 2008;65:2979-99.
47. Wen C, Chen H, Yang N. Mengembangkan Phytocompounds dari tanaman obat
sebagai Imunomodulator. Adv Bot Res. 2012;62:197-272.
48. Chengaiah BR, Kumar KM, Alagusundaram M, Chetty CM. Pentingnya obat pewarna
alami- sebuah TINJAUAN. Int J PharmTech Res. 2010;2(1):144-54.
49. Testa G, Oliveira PRN, Silva CC, Schuquel ITA, Santin SM, Kato L, Oliveira CMA,
Arruda LLM, Bersani-Amado CA. Constituintes químicos das folhas e avaliação da
atividade anti-inflamatória de extratos das raízes dan folhas de Guettarda
pohliana Müll. Arg.(Rubiaceae). Quim Nova. 2012;35:527-9.
50. Lee MH, Lee JM, Jun SH, Lee SH, Kim NW, Lee JH, dkk. Efek antiinflamasi
ekstrak Pyrolae herba melalui penghambatan ekspresi inducible nitric
oxide synthase (iNOS) dan produksi NO. J. Etnofarmaka. 2007;112:49-
54.
51. Ryu JH, Ahn H, Kim JY, Kim YK. Aktivitas penghambatan ekstrak tumbuhan pada
sintesis oksida nitrat di makrofag yang diaktifkan LPS. Phytother Res. 2003;17:485-9.
52. Kim HK, Cheon BS, Kim YH, Kim SY, Kim HP. Efek flavonoid alami dalam
produksi oksida nitrat di garis sel makrofag RAW264.7 dan hubungan
struktur-aktivitasnya. Biokimia Farmakol. 1999;58:759-65.
53. Gupta P, Bhatter P, D'souza D, Tolani M, Daswani P, Tetali P, Birdi T. Mengevaluasi anti
Mycobacterium tuberculosis aktivitas dari Alpinia galanga (L.) Will. axenically di
bawah mengurangi kondisi oksigen dan dalam tes intraseluler. BMC Complement
Altern Med. 2014;14:84-91 http://www. biomedcentral.com/1472-6882/14/84.