TEKNI

KPEWARNAAN

Pewar
nananMor
fol
ogi
k Pewar
naanDi
ff
erensi
al Pewar
naanst
rukt
ural

Pewar
naa Pewarnaa Pewarnaa Pewar
naan Pewar
naa Pewarnaankapsul
nnegati
f n nGram TahanAsam nSpor
a danfl
agell
a
seder
hana

1
 PEWARNAANNEGATI
F

Pewar
naanmor
fol
ogi
kmewar
naiselbakt
erii
tusendi
riat
auseki
tarsel
t
ersebutsehi
nggat
ampakgambar
anmi
kroskopi
kyangj
erni
hpadasel
.Dar
i
gambar
anj
erni
hter
sebutdapatdi
ket
ahui
ukur
ansel
,bent
ukdansusunanny
a.
Zatwar
nay
angmewar
naiselbakt
erimengandungmuat
anposi
ti
fdan
di
sebutzatwar
nadasar
.Zatwar
nadasarmewar
naiselbakt
eridi
kar
enakanzat
war
na t
ersebutmenempelpada muat
an negat
ifpada per
mukaan sel
.Yang
t
ermasukpewar
naandasary
ait
ukr
ist
alv
iol
et,
met
il
enbi
ru,
dansaf
rani
n.
Zatwar
nay
angmewar
naiseki
tarselbakt
erimengandungmuat
annegat
if
dan di
sebut zat war
na asam. Bagai
manapun, t
etap t
erl
i
hat gambar
an
mi
kroskopi
kjer
nih,kar
enat
erl
i
hatbat
asl
uarselbakt
eri
.Zatwar
naasam ant
ara
l
ain,
congor
ed,
nigr
osi
n,dant
int
aIndi
a
Zatwar
naasam t
unggaldi
gunakanunt
ukmewar
nail
atarbel
akangseki
tar
seldi
sebutpewr
naannegat
ive.Ter
dapatduakeunt
unganpewar
naannegat
ive,
y
ait
u(1)di
dapat
kanbent
ukdanukur
ansely
angl
ebi
hakur
atkar
enapr
osedur
pewar
naan t
idakmembut
uhkan pemanasan at
au pewar
naan padasel(
yang
dapat meny
ebabkan sel mengker
ut) dan (
2) memudahkan pengamat
an
mi
kroskopi
k pada selbakt
eriy
ang sul
i
tunt
uk di
war
nai
,seper
tispi
ri
ll
idan
spi
rochaet
a.
Padapr
akt
ikum kal
iini
,Andaakanmenggunakansat
uzatwar
naasam
unt
ukmengat
ahui
mor
fol
ogi
sel
padabeber
apakul
turbakt
eri
.

ALATDANBAHAN
Kul
turbakt
eri
(ber
umur24-
48j
am padamedi
acai
r)
Zatwar
na:
tint
aIndi
a
Mi
kroskopcahay
a
LampuBunsen
Gel
asobj
ek
Osebul
at
Mi
nyakemer
si,
Ker
tasl
ensa

2
CARAKERJA
1.Let
akkan1t
etest
int
aIndi
apadabagi
ant
epi
gel
asobj
eky
angber
sih
2.Secar
aasept
icambi
l1osekul
turcai
rKl
ebsi
ell
apneumoni
ae
3.Let
akkanpadat
etesant
int
aIndi
apadagel
asobj
ek,campurkul
turdengan
t
etesan.Sel
alumembakarosesebel
um dansesudahdi
gunakan
4.I
kut
ilangkahber
ikut
nyaseper
tipadagambar
.
5.Set
elah sel
uruh pr
osedur pewar
naan negat
ive sel
esai
,amat
i dengan
menggunakanmi
kroskopcahay
a.

3
LAPORANPRAKTI
KUM
1.Gambar
lahbent
ukdansusunanselber
dasar
kanpengamat
anAndapada
mi
kroskop

Kl
ebsi
ell
apneumoni
ae St
rept
ococcuspneumoni
ae
Bent
uksel
___
___
___
___
___
__ Bent
uksel
___
___
___
___
___
__
Susunansel
___
___
___
___
___
_ Susunansel
___
___
___
___
___
_

2.Jawabl
ahper
tany
aanber
ikuti
ni
a.Jel
askan mengapa t
int
aIndi
a,ni
grosi
n,dan congo r
ed t
idak
mewar
nai
sel
bakt
eri

b.Apakeunt
ungandar
ipewar
naannegat
if?

4
 KULTUR/
PERBENI
HANBAKTERI

PENDAHULUAN
Kulturbakteri( per tumbuhanbakt eripadamedi aper tumbuhan)sangatpent ing
pada pr oses isolasidan i dentifi
kasibakt er
i.Medi a kompl eks y ang mengandung
berbagai nutri
entorgani kdapatmenumbuhkanber bagai spesiesbakt eri
.
Padasaatkul turbakt eritunggaldi t
umbuhkanpadaber bagaibent ukmedi a( cair,
miri
ng,dal am,danpl ate) ,akanmemper li
hatkanber bagaibent ukpol aper tumbuhan
bakteriyangber si
fatkhasunt ukmasi ng-masingspesi es,danmer upakankar akteristi
k
kul
turunt uk bakterit er sebut .Kar akteri
sti
k kultursuat u or ganisme dan membant u
membant u dalam membedakanny a dengan or gani sme l ain.Meski pun bermanf aat ,
namun kar akteri
sti
kkul tursajat i
dakcukup di gunakandal am i dentif
ikasiber bagai
spesiesbakt eri
.Kar akt eristikkulturt er
sebuthar usdi kombi nasikandenganhasi lreaksi
pewar naandanpemer iksaanbi okimi a.
Padapr akti
kum kal iiniAndaakanmel ihatber bagaij enismedi aper benihan
bakteridanber bagai kar akt eri
sti
kkul turbakteri
.

Macam-macam Medi aPerbenihan

Ber
dasarkansifatmedi a:
a.Medi ahidup
Berupahewanper cobaan,umumny adi pakaidal am laborator
ium Vi rologiuntuk
membi akkan/ i
solasivir
usy angti
dakdapatdi biakpadamedi asintesis.
Cont oh: hewanper cobaan,tel
urberembr i
o, biakanjari
ngan.
b.Medi amat i/sint
esis
Umumny adi pakaidilaboratori
um Bakt er
iologi,untukmembi ak/ i
solasiberbagai
bakteri
.Medi asi nt
esisdibuatuntukmemenuhikebut uhanper tumbuhanbakt eri
,
berupasumberener gi
,carbon,nit
rogen,gar am- garam ( sul
fat
,f osfat,NaCl,K,C,
Mg,Fe,Ca,Cu) ,pH yangcocok,pot ensialoksi dasireduksiyangt epat,fact
or-
faktorper t
umbuhan( t
rypt
ophan, f
actorX, factorV) .

Kl
asif
ikasi
mediaper benihansecar aumum dibagiat
as:
a.Berdasarkankonsi stensinya
 Medi apadat( pl
at e,
tabungmiri
ng)
 Medi asemi soli
d
 Medi acair
b.Berdasarkantujuani solasi
 Medi adiferensial
Medi ay angmengandungbeber apafactoryangmemungkinkanbakt
eri
darisat u spesi es menghasilkan metabol
i
tat au kar
akt
eri
sti
k kul
tur
tertent
uy angdapatdi gunakanuntukmembedakandenganbakt eril
ain
yangt umbuhpadapl ateyangsama.

 Medi asel
ekti
f
Medi ayangmengandungsat uataulebi
hbahan( ant
ibiot
ic,asam,zat
tert
entu,dll)y ang dapat menghambat semua or gani
sme kecuali
organismeyangdi harapkantumbuh.,
 Medi asupport
if
Mengandung nut rienty ang dapatmenunjang per
tumbuhan sebagian
besarbakteri
.

5
  Mediaenr i
chment
Mengandung nut rientspesifi
ky ang dibutuhkan untuk pert
umbuhan
bakter
ipat ogent
ertentuyangmungkinadasendi riataudenganspesi
es
bakter
ilainnyapadaspeci men.Mediainidigunakanuntukmeningkat
kan
pert
umbuhanbakt eripat
hogentert
entudaricampur anorgani
smedengan
spesif
isi
tasnutri
enty angdimi
li
kiny
a.

Kar
akt
eri
stikkult
urbakter i:
1.Per tumbuhankol oni padaagarpl ate
Bentuk:sir
kular
, rhizoi
d,ir
egul er,fi
lament,
spindl
e
Tepi :
r ata,undular,lobar,rhi
zoi
d,fi
l
amen
El
ev asi
:rata,meni nggi,
cembung
Ukuran:ti
tik,
keci l
,sedang, besar
Tekstur :
hal us,kasar
Pigmentasi : ber pi
gmen( ungu, merah,
kuning)
,nonpi
gmen(
cream,
put i
h)
Kejerni
han : opaq, tr
anspar an

2.Pert
umbuhankol
onipadamedi
acair:
sedi
ment,
meli
ngkardiper
mukaan,
keruh,
jer
nih,
ber
gumpal

3.Per
tumbuhankoloni
padaagarmi
ri
ng
Fi
li
for
mis,
rhi
zoid,meny
ebar

Kar
akt
eri
sti
kkul
turpadamedi
apl
ate

6
 Kar
akt
ersi
ti
kkul
turpadamedi
ami
ri
ng

LAPORANPRAKTI KUM
1.Morf
ologi
/kar
akter
ist
ikkul
turbakt
eri

Namabakt
eri Namamedi
a Gambar
an Kar
akt
eri
sti
kkul
tur
makr
oskopi
k

2.Sebutkanbeber
apacont
ohmedi
asupor
ti
f,di
fer
ensi
al,sel
ekt
if
,danenr
ichmentser
ta
kegunaannya

7
 UJIBI
OKI
MIAUNTUKMENGI
DENTI
FIKASIBAKTERI

PENDAHULUAN
Meski
pun kul
turdan t
ekni
kpewar
naan bakt
eridapatmember
ikan i
nfor
masi
pent
ingdal
am pemer
iksaan,namunkeduat
ekni
kter
sebutt
idakcukupunt
uk
member
ikani
nfor
masiy
angl
engkapdal
am i
dent
if
ikasibakt
eri
.Hasi
lkul
turdan
pewar
naan har
us di
kombi
nasi
kan dengan hasi
l uj
i bi
oki
mia unt
uk
mengi
dent
if
ikasibakt
erisecar
atepat
.Uj
ibi
oki
mia ber
tuj
uan unt
uk mel
i
hat
kemampuanmet
abol
i
kisol
atbakt
eri
.Set
elahsej
uml
ahuj
ibi
oki
miadi
l
akukan,
kombi
nasihasi
l
nyaakanmemper
li
hat
kanpol
abi
oki
miaunt
uksuat
uisol
at,y
ang
menunj
ukkankekhasansat
udenganl
ainny
a.

Ter
dapatbany
akuj
ibi
oki
miadi
gunakandil
abor
ator
ium Mi
krobi
ologi
,yangser
ing
di
gunakanant
aral
ain:
1.Uj
iKat
alase
2.Uj
iKoagul
ase
3.Pr
oduksi
H2S
4.Pr
oduksi
Indol
5.Fer
ment
asi
lakt
osadangul
a-gul
alai
nny
a
6.Uj
imot
il
it
as
7.Uj
iMet
hylr
ed
8.Uj
iCi
tr
at

Padapr
akt
ikum i
ni,akandi
l
akukanuj
ikat
alasedankoagul
asedar
ihasi
lkul
tur
bakt
eri
.

ALATDANBAHAN
Api
bunsen
Osebul
at

8
Tabungr
eaksi
Pi
pet
Aquadesst
eri
l
Gel
asobj
ek
Reagen: Hi
drogenper
oksi
da(
H2O2)3%
Lat
exagl
uti
nasi
kit
s
Pl
asmadar
ah

CARAKERJA
1.Uj
ikat
alase
a.Met
ode1 :Gunakan pi
petPast
eurunt
ukmel
etakkan beber
apa
t
etesH2O23%padakul
turmi
ri
ngdit
abung.Per
hat
ikant
imbul
nya
gel
embung-
gel
embung,
ji
kadi
temukanmakahasi
l
nyaposi
ti
f.
b.Met
ode2:Campur
kansedi
ki
tkul
turbakt
eridenganbeber
apat
etes
aquades, kemudi
an t
ambahkan H2O2. Per
hat
ikan t
imbul
nya
gel
embung.
2.Uj
ikoagul
ase
Campur
kan1osekul
turkedal
am 0,
5mlpl
asmakel
i
ncipadat
abung
r
eaksi
.Inkubasipada suhu 35oC sel
ama 4 j
am.Per
hat
ikan apakah
t
erdapatpenggumpal
anpl
asma.

LAPORAN
1.Tul
i
slahhasipemer
iksaandar
iuj
ikat
alasedankoagul
aseser
tai
sil
ahkol
om-
kol
om di
bawahi
nidengant
epat
NO JENI
S TUJUAN PRI
NSI
P HASI
L I
NTERPRETASI
PEMERI
KSAAN PEMERI
KSAAN KERJA PEMERI
KSAAN HASI
L
1 UJIKATALASE

9
2 UJIKOAGULASE

2.Sebut
kanbeber
apaj
eni
spemer
iksaanbi
oki
mial
ainny
aunt
ukmengi
dent
if
ikasi
bakt
eri
.
NO JENI
S TUJUAN PRI
NSI
PKERJA I
NTERPRETASIHASI
L
PEMERI
KSAAN PEMERI
KSAAN

10
I
DENTI
FIKASIBAKTERICOCUS

11
TUGAS
HARII
1.Lakukanl
ahpewar
naanGr
am l
angsungdar
ispesi
men
2.Lakukanl
ahkul
turpadamedi
ayangt
elahdi
sedi
akan

HARII
I
1.I
dent
if
ikasi
kar
akt
eri
sti
kkul
ut
2.Lakukanl
ahpewar
naanGr
am padahasi
lkul
tur
3.Lakukanl
ahpemer
iksaanBi
oki
miay
angdi
per
lukan

LAPORAN
1.Tul
i
slahhasi
lpemer
iksaanl
abor
ator
ium dar
isampel
yangAndaper
iksa
NomorSampel :
Hasi
lpewar
naanGr
am l
angsungdar
i :
i
sol
at :
Kar
akt
eri
sti
kkul
tur
:
Hasi
lpewar
naanGr
am dar
ikul
tur :
Uj
ikat
alase :
Uj
ikoagul
ase :
Uj
iDNA-
ase :
Kesi
mpul
an :
Pemer
iksaanl
ainy
angdi
per
lukan

NomorSampel :
Hasi
lpewar
naanGr
am l
angsungdar
i :
i
sol
at :
Kar
akt
eri
sti
kkul
tur
:
Hasi
lpewar
naanGr
am dar
ikul
tur :
Uj
ikat
alase :
Uj
ikoagul
ase :
Uj
iDNA-
ase :
Kesi
mpul
an :

12
Pemer
iksaanl
ainy
angdi
per
lukan

PEMERI
KSAANSUSCEPTI
BILI
TASTERHADAPANTI
MIKROBI
AL

Pemer
iksaansuscept
ibi
l
itast
erhadapant
imi
krobi
aldi
l
akukanpadai
sol
atbakt
eri

dar
ispesi
men kl
i
nik unt
uk menget
ahuiant
imi
krobi
aly
ang ef
ekt
if unt
uk

di
gunakandal
am t
erapipadai
nfeksiy
angdi
sebabkanol
ehbakt
eri
.Didal
am

l
abor
ator
ium kl
i
nik,
ujisuscept
ibi
l
itasy
angbi
asadi
gunakanadal
ahmet
odedi
fusi

cakr
am at
au di
l
usi (
konsent
rasi hambat mi
nimal = mi
nimal i
nhi
bit
ory

concent
rat
ion/
MIC)
.Met
ode st
andary
ang di
gunakan dal
am pemer
iksaan i
ni

sel
aludi
per
bahar
ui ehCl
ol i
nicalandLabor
ator
ySt
andar
dInst
it
ute(
CLSI
).

A.PEMI
LIHAN BAHAN ANTI
MIKROBI
AL UNTUK PENGUJI
AN DAN

PELAPORAN

Saati
nit
erdapatseki
tar50ant
imi
krobi
aly
angdi
gunakandal
am t
erapii
nfeksi

bakt
eri
,dan bany
ak di
ant
arany
a memi
l
ikief
ikasikl
i
niky
ang sama.Set
iap

l
abor
ator
ium har
us menent
ukan bahan ant
imi
krobi
al y
ang t
epat unt
uk

pemer
iksaanr
uti
n t
erhadap ber
bagai or
gani
sme. Pet
ugas di l
abor
ator
ium

sebai
kny
ati
dak menent
ukan pemer
iksaan dan mel
apor
kan pr
otokolt
anpa

menget
ahui
obaty
angdi
resepkan.

Bi
asany
apet
ugasl
abor
ator
ium akanmemi
l
ihser
angkai
an 10sampai15bahan

ant
imi
krobi
al unt
uk pemer
iksaan r
uti
n t
erhadap Ent
erobact
eri
aceae,

Pseudomonasspp.
,bakt
eribasi
lgr
am negat
ifnonf
ast
idi
ous,st
afi
l
okokus,dan

ent
erokokus.Ter
kadangdi
gunakanr
angkai
anpemer
iksaany
angber
bedaunt
uk

13
pemer
iksaanpadai
sol
atur
in,kar
enadi
gunakanobatspesi
fi
kunt
ukt
erapipada

i
nfeksi
sal
urankemi
h.

Padapemer
iksaansuscept
ibi
l
itasant
imi
krobi
al,
ident
it
asi
sol
atbakt
eriser
ingkal
i

t
idakdi
ket
ahui
,sehi
nggabeber
apaobatdi
uji
kanpadasat
uisol
atdanmungki
n

t
idakt
epatunt
ukdi
l
apor
kanpadahasi
lpemer
iksaan.Beber
apaobatmungki
n

menunj
ukkan ker
ja y
ang bai
k t
erhadap spesi
es bakt
erit
ert
ent
u pada

pemer
iksaandil
abor
ator
ium,t
etapit
idakt
epatunt
ukpenggunaandal
am t
erapi

dikl
i
nik.Keput
usan l
apor
an akhi
rsehar
usny
adi
buatapabi
l
aident
it
asi
sol
at

di
ket
ahuidant
erdapatkesesuai
anant
arahasi
lpemer
iksaansuscept
ibi
l
itasdan

asal
spesi
men.

B.PENYI
APANI
NOKULUM DANPENGGUNAANSTANDARMCFARLAND

1.Peny
iapanI
nokul
um

Peny
iapani
nokul
um mer
upakansuat
utahappent
ingpadaset
iapuj
isensi
ti
vi
tas.

I
nokul
um di
siapkandenganmenambahsel
-seldar
iempatsampail
i
makol
oni

i
sol
aty
ang memi
l
ikimor
fol
ogikol
oniy
ang samakedal
am medi
acai
r,dan

kemudi
anmembi
arkanny
aunt
ukt
umbuhsampaif
asel
og.Di
gunakanempat

sampail
i
makol
onii
sol
atunt
ukmemi
nimal
kankemungki
nankol
oniy
angdi
uji

ber
asaldar
imut
any
angsuscept
ibel
.Inokul
um dapatj
ugadi
per
siapkansecar
a

l
angsungdenganmensuspensi
kankol
oniy
angt
elaht
umbuhsel
amasemal
am

padamedi
aagarkedal
am medi
acai
rat
ausal
i
ne.Met
odepeny
iapansuspensi

i
nokul
um secar
alangsung i
ni di
l
akukan pada bakt
eriy
ang t
idak dapat

di
per
kir
akanper
tumbuhanny
apadamedi
acai
r(mi
sal
nyabakt
erf
iast
idi
ous)

14
 2.St
andarKeker
uhanMcFar
land

Juml
ahbakt
eriy
angdi
uji
kanhar
usdi
standar
isasit
ergant
ungpadamet
odey
ang

di
gunakan.Suscept
ibelpal
su dapat t
erj
adiapabi
l
a bakt
eriy
ang di
uji
kan

j
uml
ahny
ater
lal
usedi
ki
t,danr
esi
stenpal
sudapatt
erj
adiapabi
l
abakt
eriy
ang

di
uji
kanj
uml
ahny
ater
lal
ubany
ak.Met
odey
angpal
i
ngser
ingdi
gunakanunt
uk

st
andar
isasii
nokul
um adal
ahst
andarkeker
uhanMcFar
land.St
andarkeker
uhan

McFar
land dapatdi
si
apkandenganmenambahkanv
olumet
ert
ent
u!% asam

sul
fatdan 1,
175% bar
ium kl
ori
da unt
ukmendapat
kan l
arut
an bar
ium sul
fat

dengandensi
tasopt
ikspesi
fi
k.Yangpal
i
ngumum di
gunakanadal
ahst
andar

McFar
land0,
5,y
angmengandung1% asam sul
fatdan0,
5mlbar
ium kl
ori
da

1,
175%.Lar
utani
nidi
l
etakkandal
am t
abungdi
tut
upr
apatdansi
mpandal
am

r
uangan gel
ap dengan suhu r
uang,unt
uk kemudi
an di
bandi
ngkan dengan

i
nokul
um y
angakandi
uji
kan.McFar
land0,
5memi
l
ikikeker
uhany
angsebandi
ng

dengansuspensi
bakt
eri
sej
uml
ahseki
t 5x108CFU/
a1, ml

3.St
andar
isasi
Inokul
um

Unt
ukmenst
andar
isasii
nokul
um,medi
acai
ryangber
isii
nokul
um at
aususpensi

l
angsung,di
vor
text
erl
ebi
hdahul
u,kemudi
ant
abungdi
l
etakkanber
sebel
ahan

dengant
abungst
andarMcFar
land0,
5,dandibel
akangkeduat
abungt
ersebut

di
l
etakkanker
tasput
ihdengangar
ishi
tam hor
izont
al,padapener
angancahay
a

y
angcukup.Keker
uhandi
bandi
ngkandenganmel
i
hatpadagar
ishi
tam mel
alui

suspensi
.Suspensidi
kat
akanmasi
hter
lal
uker
uhapabi
l
asul
i
tunt
ukmel
i
hat

15
gar
ishi
tam mel
aluisuspensionokul
um di
bandi
ngkanmel
aluist
andarMcFar
land

0,
5.Sehi
nggakemudi
andi
l
akukanpenegencer
andenganmenambahkanmedi
a

cai
rat
ausal
i
nest
eri
l
.Apabi
l
asuspensii
nokul
um t
erl
alut
erang,
makaor
gani
sme

di
tambahkanpadasuspensidandi
i
nkubasikembal
isampaikeker
uhanmencapai

st
andar McFar
land 0,
5.Set
elah t
erst
andar
isasi
,maka suspensii
nokul
um

sebai
kny
adi
gunakandal
am wakt
u15meni
t.Sebagaial
atal
ter
nat
if
,saati
ni

dapatdi
gunakanal
atnephel
omet
ri
kat
auspekt
rof
otomet
ri
kunt
ukmel
akukan

st
andar
isasi
suspensi
inokul
um.

C.METODEUJIDI
LUSI

Pr
insi
p

Met
odedi
l
usidi
gunakanunt
ukmenent
ukanMI
C at
aukonsent
rasiy
angl
ebi
h

r
endah dar
i bahan ant
imi
krobi
al y
ang di
per
lukan unt
uk menghambat

per
tumbuhan i
sol
at bakt
eri
. Ber
bagai konsent
rasi bahan ant
imi
krobi
al

di
tambahkan pada medi
a cai
rat
au medi
a agar
.Secar
a umum di
gunakan

konsent
rasidenganpengencer
anser
ialduakal
ili
pat(
dal
am sat
uanug/
ml)
,dan

konsent
rasii
nil
ah y
ang di
per
kir
akan t
epatunt
uk di
gunakan i
nvi
vo dengan

mengacupadadosi
sst
andarunt
ukobatant
imi
krobi
alt
ert
ent
u.Set
elahMI
C

di
tent
ukan, or
gani
sme kemudi
an dapat di
ket
ahui apakah memi
l
iki si
fat

suscept
ibel
,int
ermedi
at, at
au r
esi
sten t
erhadap masi
ng-
masi
ng bahan

ant
imi
krobi
al.

St
okLar
utanAnt
imi
krobi
al

16
St
okl
arut
anant
imi
krobi
aly
angdi
gunakandal
am penguj
i
anMI
Char
usdi
siapkan

dar
ist
andaracuan bahan bubukant
imi
krobi
al,bukan dar
iobaty
ang bi
asa

di
ber
ikan kepada pasi
en.St
ok l
arut
an ant
imi
krobi
alhar
us di
simpan dal
am

keadaanbeku.Temper
aturopt
i 60oCat
malpada- audibawahny
a,t
etapisuhu-

20oC j
uga dapat di
gunakan pada beber
apa bahan.Lar
utan ant
imi
krobi
al

sebai
kny
ati
dakdi
bekukanl
agi
set
elahdi
cai
rkan.

Uj
iMakr
odi
l
usi
(Br
othmacr
odi
l
uti
ont
est
s)

Pemer
iksaanMI
C met
odedi
l
usidi
l
akukandenganmenggunakant
abung,dan

t
erbagimenj
adiduaj
eni
syai
tumakr
odi
l br
usi( ot
hmacr
odi
l
uti
on)danmi
krodi
l
usi

br
( ot
hmi
crodi
l
uti
on)
.Secar
aumum di
siapkanser
ialpengencer
anduakal
ili
pat

y
ang masi
ng-
masi
ng ber
isi1 sampai2 mlbahanant
imi
krobi
al.Medi
ayang

di
rekomendasi
kanadal
ahmedi
acai
rMuel
l
erHi
nton.Suspensibakt
eriuj
iyang

t
elah t
erst
andardi
tambahkan kedal
am masi
ng-
masi
ng t
abung pengencer
an

unt
ukmendapat
kankonsent
rasiakhi
rbakt
eri5x105 CFU/
ml. Tabungkont
rol

per
tumbuhan(
yangber
isimedi
acai
rdani
nokul
um bakt
eri
)dant
abungkont
rol

t
anpaper
tumbuhan(
yang hany
aber
isimedi
acai
r)di
gunakanpadamasi
ng-

masi
ngpenguj
i
an.Set
elahi
nkubasisemal
am padasuhu35oC,di
tent
ukanMI
C

secar
avi
sualdenganmel
i
hatt
idakadany
akeker
uhan.Halt
ersebutdi
tent
ukan

sebagai
konsent
rasi
ter
endahy
angdapatmenghambatper
tumbuhan.

Met
ode makr
odi
l
usit
idak pr
akt
is di
gunakan sebagaimet
ode r
uti
n apabi
l
a

17
beber
apabahanant
imi
krobi
alhar
usdi
per
iksapadasat
uisol
at,at
aubeber
apa

i
sol
athar
usdi
uji
.

Uj
iMi
krodi
l
usi
(Br
othMi
crodi
l
uti
ont
est
s)

Uj
imi
krodi
l
usimer
upakanmi
niat
urdar
iuj
imakr
odi
l
usidi
manapemer
iksaanny
a

akukanpada mul
di
l ti
wel
lmi
crodi
l
uti
ont
ray
s.Suat
utr
aypl
ast
ikber
isi80-
100

sumur di
i
sidengan v
olume keci
l(bi
asany
a 0,
1 ml
) dengan konsent
rasi

pengencer
an ant
imi
krobi
al dua kal
ili
pat dal
am medi
a cai
r. Beber
apa

pengencer
andar
ibeber
apabahanant
imi
krobi
aldapatdi
l
akukandal
am sat
utr
ay

dan kemudi
an di
i
nokul
asi
kan dengan sat
uisol
atbakt
eri
.Suspensii
nokul
um

sudahdi
standar
isasi
kansebel
umny
a.Konsent
rasiakhi
rpadamasi
ng-
masi
ng

ah5x104 CFUper0,
sumuradal 5x105 CFU/
1ml( ml)
.set
elahi
nkubasisemal
am

padasuhu35oC,t
raydi
l
etakkanpadaper
alat
anunt
ukpembacaant
rayunt
uk

membant
upengamat
anv
isual

D.UJIDI
FFUSICAKRAM (
Discdi
ff
usi
ont
est
ing)

Pr
insi
p

Uj
idi
ff
usicakar
am at
auy
angser
ingdi
sebutsebagaiuj
iKi
rbyBauer
,sudah

di
gunakan secar
aluas pada l
abor
ator
ium kl
i
nik sej
ak t
ahun 1966,di
mana

met
odest
andar
isasiper
tamakal
idi
temukan.Suspensibakt
eriy
angt
erst
andar

0,
5 McFar
land di
gor
eskan pada per
mukaan pet
riagarMuel
l
erHi
nton,dan

cakr
am ker
tas y
ang ber
isi sat
u konsent
rasi dar
i masi
ng-
masi
ng bahan

ant
imi
krobi
aldi
l
etakkanpadaper
mukaany
angt
elahdi
i
nokul
asi
.Set
elahi
nkubasi

18
sat
umal
am,di
l
akukanpengukur
ant
erhadapdi
amet
erzonay
angdi
hasi
l
kandar
i

penghambat
anant
imi
krobi
alt
erhadapper
tumbuhanbakt
eri
.Kemudi
andi
l
akukan

i
nter
pret
asidar
iisol
at,apakahsuscept
ibel
,int
ermedi
at,at
aur
esi
stent
erhadap

suat
uant
imi
krobi
al.

Est
abl
i
shi
ngZone-
Diamet
erI
nter
pret
iveBr
eakpoi
nts

Uj
idi
ff
usicakr
am di
tent
ukan ol
eh f
ormasigr
adi
en konsent
rasiant
imi
krobi
al

sebagaibahan ant
imi
krobi
aly
ang ber
dif
usisecar
aradi
alke dal
am agar
.

Konsent
rasiant
imi
krobi
alsemaki
nber
kur
angapabi
l
ajar
akdar
icakr
am semaki
n

j
auh.Padat
it
ikt
ert
ent
u,j
uml
ahbahanant
imi
krobi
alpadal
okasispesi
fi
kdimedi
a

t
idakdapatmenghambatper
tumbuhanor
gani
sme,sehi
nggat
erbent
ukl
ahzona

hambat
an.

Zonahambat
anmengacupadaMI
C,dani
niadal
ahhubungany
angdi
gunakan

unt ukan br
uk menent eakpoi
ntunt
uk i
nter
pret
asipengukur
an zona t
ert
ent
u

sebagaii
ndi
kasibahwa suat
uisol
atadal
ah suscept
ibel
,int
ermedi
at,at
au

r
esi
sten.

Pr
osedurPemer
iksaan

a.Peny
impanancakr
am ker
tas

Sebagi
anbesarl
abor
ator
ium kl
i
nikmengi
kut
ipr
otokoldar
iCLSIunt
ukuj
idi
fusi

cakr
am,
danpadadokumenCLSIt
erdapatpr
osedurdet
ail
proseduroemer
iksaan.

Hany
acakr
am ker
tasy
angmendapatper
set
ujuanFDAy
angdapatdi
gunakan.

Cakr
am ker
tast
ersebuthar
usdi
simpansecar
atepatunt
ukmemast
ikanbahwa

19
obatmasi
hmemi
l
ikipot
ensiy
angsehar
usny
a.Unt
ukpeny
impanandal
am j
angka

wakt
ulama,cakr
am ker
tashar
usdi
si 20oCat
mpanpadasuhu- aul
ebi
hrendah

l
agit
etapit
idak pada non-
fr
osr
-f
ree-
fr
eezer
. Unt
uk peny
impanan sel
ama

di
l
akukanpal
i
ngl
ama1mi
nggu.Cakr
am ker
tashar
ussel
aludi
simpandal
am

kont
ainery
angt
ert
utupr
apatdenganpeny
erapuapai
r(dessi
cant
).Kont
ainer

sebai
kny
adi
biar
kanmenghangat sampait
emper
aturr
uang sebel
um di
buka

unt
ukmencegahkondensasi
padacakr
am ker
tas.

b.I
nokul
asi
danI
nkubasi

Suspensii
nokul
um y
angdi
siapkandapatmenggunakansuspensikol
oniy
ang

ber
adadal
am f
asel
ogat
auy
angl
angsungdi
standar
isasidengankeker
uhan

st
andarMcFar
land0.
5.Kapasl
i
dist
eri
ldi
cel
upkankedal
am suspensi
,di
tekan

dan di
put
arper
lahan padaper
mukaan si
sidal
am t
abung unt
ukmengur
angi

cai
ran ber
lebi
han,kemudi
an di
gor
eskan sepanj
ang per
mukaan cawan agar

Muel
l
er-
Hint
on.Bi
asany
adi
gunakancawandengandi
amet
er150mm,di
mana

dapatmemuat12ker
tascakr
am ant
imi
krobi
aly
angber
beda.Li
mabel
asmeni
t

set
elah i
nokul
asi
,cakr
am ant
imi
krobi
aldi
l
etakkan pada per
mukaan agar
.

Kemudi
ancakr
am di
tekanper
lahanunt
ukmemast
ikankont
akdenganmedi
a

agar
.Li
ma bel
askemudi
an,cawan pet
ridi
bal
i
kdan di
l
etakkan dii
nkubat
or

dengansuhu35oCsel
ama16-
18j
am.

c.I
nter
pret
asi
Hasi
l

Set
elahi
nkubasi
,di
l
akukanpengamat
anpadacawanpet
riunt
ukmemast
ikan

20
or
gani
sme dapatt
umbuh dengan memuaskan.Per
tumbuhan kol
onihar
us

mer
ata at
au hampi
rmer
ata,dan apabi
l
a di
dapat
kan kol
oniy
ang t
umbuh

i
ndi
vi
dualmakat
idakdapatdi
ter
ima.Apabi
l
adi
dapat
kanper
tumbuhankol
oni

bakt
erimemuaskan,kemudi
andi
l
akukanpengukur
andi
amet
ermasi
ng-
masi
ng

zonahambat
anmenggunakanpenggar
isat
aukal
i
per
.

Cawanpet
ridi
l
etakkanbeber
apai
nchidiat
assuat
uper
mukaany
angber
war
na

hi
tam dan t
idakmemant
ulkan cahay
a.Zonahambatdi
l
ihatdar
isi
sibagi
an

bel
akang cawan pet
ri
.Kol
oniy
ang t
ipi
s pada t
epizona dan kol
oniy
ang

ber
tebar
andi
abai
kan,danhany
adi
l
akukanpengukur
anpadazonay
angj
elas.

Di
gunakancahay
aunt
ukmeny
inar
icawanpet
ripadasaatpengukur
anzona

hambat
.

Set
elahdi
dapat
kanhasi
lpengukur
an,kemudi
andi
bandi
ngkandandi
dapat
kan

kesi
mpul
ansuscept
ibel
,i
nter
medi
at,
ataur
esi
sten.

21