DPPH

Prinsip kerja metode DPPH (2,2 dipenyl-1-picrylhidrazyl) adalah adanya atom

hidrogen dari senyawa antioksidan yang berikatan dengan elektron bebas pada
senyawa radikal sehingga menyebabkan perubahan dari radikal bebas
(diphenylpicrylhydrazyl) menjadi senyawa non-radikal
(diphenylpicrylhydrazine). Hal ini ditandai dengan perubahan warna dari ungu
menjadi kuning (senyawa radikal bebas te– reduksi oleh adanya antioksidan).
Pada penetapan aktivitas antioksidan dengan metode DPPH digunakan
parameter IC50 yaitu konsentrasi sampel yang dibutuhkan untuk menangkap
radikal DPPH sebanyak 50%.

FRAP
Benzie & Strain (1996) mengemukakan bahwa metode Ferric Reducing
Antioxidant Power (FRAP) adalah metode yang digunakan untuk menguji
antioksidan dalam tumbuh-tumbuhan. Kelebihan metode FRAP ini yaitu
metodenya murah, reagennya mudah disiapkan dan cukup sederhana dan
cepat. Metode ini dapat menentukan kandungan antioksidan total dari suatu
bahan berdasarkan kemampuan senyawa antioksidan untuk mereduksi ion
Fe3+ menjadi Fe2+ sehingga kekuatan antioksidan suatu senyawa dianalogikan
dengan kemampuan mereduksi dari senyawa tersebut (Halvorsen, et al.,
2002).

FIC
Ferrous Ion Chelating (FIC) merupakan metode yang digunakan untuk menguji
kemampuan suatu senyawa dalam mengkelat logam Fe. Metode ini mengukur
kemampuan antioksi dan suatu senyawa untuk bersaing dengan ferrozine
dalam mengkelat ionbesi (Elmastasetal., 2006).

IC50
Efektivitas suatu sampel untuk menangkal radikal bebas dari metode DPPH
dinamai dengan IC50. Pengertian dari IC50 adalah konsentrasi yang dapat
meredam 50% radikal bebas DPPH. Semakin kecil nilai IC50 maka semakin
besar aktivitas antioksidannya.
Studi perbandingan metode uji aktivitas antioksidan DPPH, FRAP, dan FIC telah
dilakukan terhadap asam askorbat (AA), asam galat (AG), dan kuersetin. Ketiga
metode uji antioksidan dibedakan berdasarkan pada jenis mekanisme
reaksinya, sedangkan sampel standar antioksidan dipilih berdasarkan struktur
polihidroksi atau polifenol yang umumnya mewakili dasar struktur antioksidan
bahan alam. Metode uji aktivitas antioksidan terhadap radikal DPPH ditemukan
paling efektif dan efisien diantara ketiga metode uji yang digunakan dengan
nilai IC50 berturut-turut 1,27; 2,44; dan 2,77 mg/L untuk AG, kuersetin dan AA.
Adapun metode FIC terbukti paling tidak efektif dan efisien karena
sensitivitasnya yang sangat rendah dan daya kelatnya lebih kecil dari 20%.
Korelasi antara metode uji untuk semua standar antioksidan terbukti sangat
tinggi (R>0,98), khususnya antara FRAP dan DPPH. Hal ini mengindikasikan
adanya keterkaitan sangat kuat antara daya hambat radikal bebas dengan
potensial reduksi senyawa polihidroksi (polifenol) terhadap ion besi. Secara
umum kedua metode ini sangat dimungkinkan bisa saling menggantikan satu
sama lain.