MAKALAH

TEKNOLOGI TRANFER EMBRIO DAN STEM SEL

“The Addition Of Human iPS Cell-Derived Neural Progenitors

Changes The Contraction Of Human iPS Cell-Derived Cardiac
Spheroids”

Disusun oleh : Kelompok 3

1. Dodi Sulistiawan Wibowo (1611201003)
2. Putri Cahya Umami (1611201006)
3. Heni Setianah (1611201011)
4. Miftah Khaerati Bethan (1611201015)

PROGRAM STUDI S1-BIOTEKNOLOGI

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ‘AISYIYAH
YOGYAKARTA
2019
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan atas ke hadirat Tuhan YME yang telah
memberikan kemampuan kepada kami sehingga dapat menyelesaikan makalah
Teknologi Tranfer Embrio dan Stem Sel ini dengan tepat waktu.
Makalah “The Addition Of Human iPS Cell-Derived Neural Progenitors
Changes The Contraction Of Human iPS Cell-Derived Cardiac Spheroids” ini ditulis
untuk memenuhi salah satu tugas kelompok mata kuliah Teknologi Tranfer Embrio
dan Stem Sel. Kami mengucapkan terima kasih kepada seluruh pihak yang telah
membantu kelancaran dalam pembuatan makalah ini. Dalam proses penyusunannya
tak lepas dari bantuan, arahan dan masukan dari berbagai pihak. Untuk itu saya
ucapkan banyak terima kasih atas segala partisipasinya dalam menyelesaikan
makalah ini
Meski demikian, kami menyadari masih banyak sekali kekurangan dan
kekeliruan di dalam penulisan makalah ini, baik dari segi tanda baca, tata bahasa
maupun isi. Sehingga kami secara terbuka menerima segala kritik dan saran positif
dari pembaca. Demikian apa yang dapat kami sampaikan. Semoga makalah ini dapat
bermanfaat untuk masyarakat umumnya, dan untuk penulis sendiri khususnya.

Yogyakarta, 10 November 2019

Penulis

ii
 DAFTAR ISI

Halaman
COVER ........................................................................................................... i
KATA PENGANTAR.................................................................................... ii
DAFTAR ISI................................................................................................... iii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang........................................................................................ 1
B. Rumusan Masalah................................................................................... 2
C. Tujuan...................................................................................................... 2
BAB III. MATERI DAN METODE
A. Protokol................................................................................................... 3
B. Rekaman Gerak Dan Analisis................................................................. 4
C. Immunoflouresens................................................................................... 5
D. Analisis Statistik...................................................................................... 5
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Formasi spheroid dan hitung denyut....................................................... 6
B. Penilaian Fungsi Kontraktil..................................................................... 6
C. Sel-Sel Saraf Pada Spheroid Jantung...................................................... 8
BAB V. PENUTUP
A. Kesimpulan............................................................................................. 12
DAFTAR PUSTAKA...................................................................................... 13

iii
 BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Penyakit kardiovaskular merupakan salah satu penyebab utama kematian
diseluruh dunia meskipun terdapat kemajuan yang signifikan salam modalitas
terapeutik. Banyak pasien dengan gagal jantung yang parah tidak dapat menjalani
transplantasi jantung karena terbatasnya jumlah organ donor dan keterbatasan sosial
ekonomi. Terapi regenerasi jantung adalah salah satu alternatif yang potensial untuk
mengobati penyakit jantung stadium akhir. Kardiomiosit yang berasal dari turunan
sel induk memiliki nilai terapi yang besar untuk kasus gagal jantung, seperti untuk
mengobati penyakit jantung iskemik. Secara khusus, induced pluripotent stem sel
(iPS) diharapkan menjadi sumber sel yang berguna untuk transplantasi autogenous
(Mukae et al., 2018).
Berkenaan dengan dilakukannya injeksi sel jantung secara langsung ke
miokardium tetapi hasilnya tetap gagal, meskipun sejumlah percobaan pada hewan
telah diakukan dan menunjukkan beberapa perbaikan setelah dilakukan sesuai
prosedur, aplikasi dibatasi oleh tingkat retensi yang sangat rendah, pasokan nutrisi
yang buruk dari jaringan, dan kurangnya matriks penahan yang tepat. Penggunaan
perancah tiga dimensi telah diusulkan sebagai pendekatan alternatif dalam terapi
regeneratif jantung, tetapi perancah biasanya dibuat dari bahan asing, yang dapat
menjadi sumber peradangan atau infeksi (Mukae et al., 2018).
Pada penelitian sebelumnya telah mengembangkan teknologi bio-fabrikasi free-
scaffold menggunakan spheroids sebagai unit untuk membangun struktur tiga
dimensi (3D). Pembentukan spheroid adalah berdasarkan sifat agregasi sel. Pada
penelitian sebelumnya telah berhasil membuat struktur tubular 3D yang terbuat dari
spheroid dengan fibroblas dan sel endotel menggunakan sistem berbasis "Bio-3D
printer" sebagai alternatif untuk membangun small-caliber vascular prostheses.
Kami juga telah menunjukkan bahwa spheroid yang sebagian besar terbuat dari
kardiomiosit dapat bergabung bersama dan berdenyut secara serempak. Struktur
jantung tiga dimensi diharapkan akan ditransplantasikan dan meningkatkan fungsi
jantung pada model gagal jantung di masa depan (Mukae et al., 2018).
Banyak lembar sel free-scaffold telah dikembangkan dengan tujuan hanya
meningkatkan fungsi jantung setelah transplantasi hewan cangkok, karena efek

1
parakrin. Namun, tujuan kami adalah untuk meningkatkan kontraksi jantung secara
langsung dengan mentransplantasikan patch jantung yang berdenyut sendiri. Karena
itu, spheroid di tambalan ini membutuhkan kemampuan kontraktil yang kuat. Untuk
meningkatkan fungsi dan efektivitas struktur, kita harus memasukkan komponen sel
tambahan yang belum ditentukan selain human iPS cell-derived cardiomyocytes
(hiPS-CMs) (Mukae et al., 2018).
Dalam penelitian ini, peneliti fokus pada penerapan neuron pada terapi
regenerasi jantung. Studi terbaru menunjukkan bahwa saraf mengatur proliferasi
kardiomiosit dan regenerasi jantung pada ikan zebra dan hati tikus. Dalam model
eksperimental infark miokard, sel-sel nestin-positif berdiferensiasi menjadi
kardiomiosit dan sel-sel yang diturunkan dari neural crest, termasuk neuron, glia,
dan sel otot polos. Subpopulasi sel nestin dapat secara langsung berkontribusi pada
regenerasi miokard. Kami di sini melaporkan pengaruh iPS-derived neural
progenitors (hiPS-NPs) pada fungsi kontraktil spheroid jantung (Mukae et al.,
2018).

B. Rumusan masalah
Berdasarkan latar belakang diatas, didapaatkan beberapa rumusan masalah
sebagai berikut :
1. Bagaimana mekanisme terapi regenerasi jantung dengan penerapan neuron
menggunakan human iPS cell-derived cardiomyocytes (hiPS-CMs)?
2. Bagaimana cara meningkatkan kontraksi jantung secara langsung dengan
mentransplantasikan patch jantung yang berdenyut sendiri?
3. Bagaimana pengaruh iPS-derived neural progenitors (hiPS-NPs) pada fungsi
kontraktil spheroid jantung?

C. Tujuan
Berdasarkan rumusan masalah diatas, maka tujuan yang akan dicapai yaitu :
1. Untuk mengetahui mekanisme terapi regenerasi jantung dengan penerapan
neuron menggunakan human iPS cell-derived cardiomyocytes (hiPS-
CMs).
2. Untuk mengetahui cara meningkatkan kontraksi jantung secara langsung
dengan mentransplantasikan patch jantung yang berdenyut sendiri.

2
 3. Untuk mengetahui pengaruh iPS-derived neural progenitors (hiPS-NPs)
pada fungsi kontraktil spheroid jantung

BAB II
MATERI DAN METODE

A. Protokol
ReproCardio2 dan ReproNeuro sebagai sumber sel dicairkan seperti yang
ditunjukkan dan digunakan sebagai hiPS-CM dan hiPS-NP, masing-masing,
untuk membangun spheroid. Semua spheroids dibuat di atas 96-well ultra-low
attachment plate dengan bentuk spindel dengan mencampur kardiomiosit dan
progenitor saraf, dengan laju pencampuran yang mengandung sel progenitor
neural 0%, 10%, 20%, 30%, atau 40%, dan jumlah sel total ditetapkan pada 2500
sel seperti yang digambarkan pada Gambar. 1. Enam belas spheroid dibuat dan
dianalisis untuk setiap kelompok, dengan pengecualian kelompok kardiomiosit
murni (karena pembentukan spheroid yang tidak memadai). Wadah 96 sumuran
ditempatkan dalam inkubator di bawah 5% CO2 pada 37°C (Mukae et al., 2018).

Gambar 1. Protokol. Sebanyak 2.500 kardiomiosit dengan atau tanpa sel

progenitor saraf dicampur dalam masing-masing 96-well ultra-low attachment
plate. Dalam semua sel sumur teragregasi menjadi spheroid, kecuali untuk
sumur yang tidak mengandung sel progenitor saraf. Spheroid ini menjalani
pengukuran tingkat pemukulan, pemendekan fraksional dan pewarnaan
imunofluoresen. CM, kardiomiosit; NP, sel progenitor saraf.

Media kultur dibuat dengan mencampur media untuk sel kardiomiosit dan
saraf pada rasio 1: 1. Media yang digunakan untuk kardiomiosit dibuat
menggunakan IMDM dengan 0,4% albumin manusia, 1% Penicillin

3
Streptomycin Amphotericin B Suspension (× 100), 2 mM Lglutamine, 0,5 mM L-
carnitine, dan 0,001% 2-mercaptoethanol. Media kultur untuk media saraf
dibuat menggunakan DMEM / Ham's F12 (Wako), larutan dengan pengganti
Serum knockout 5%, Penicillin Streptomycin Amphotericin B Suspension (×
100), 1% 10 mM NEAA, 0,001% 2, mercaptoethanol, 0,1 μM Asam Retinoat,
0,7 mg / ml Asam Askorbat, dan suplemen N-2; media telah dimodifikasi
dengan merujuk laporan sebelumnya dan disegarkan setiap hari (Mukae et al.,
2018).

B. Rekaman gerak dan analisis

Gambar spheroid diperoleh di bawah mikroskop (BZ-X710), pada empat hari
setelah pencampuran sel pada 96-well attachment plate yang sangat rendah.
Gerakan spheroids divisualisasikan di bawah mikroskop (BZX710), yang
disimpan pada suhu 37°C, dalam mode pencitraan fase kontras dan direkam
selama 30 detik sebagai file video. Analisis off-line dilakukan untuk mengukur
laju pemukulan, pemendekan fraksi, dan kecepatan pemendekan dari dua titik
yang paling berkontraksi, sebagaimana disebutkan pada Gambar. 3,
menggunakan program perangkat lunak (BZ H3A, BZ-H3M) seperti yang
dijelaskan sebelumnya, serta tingkat kontraksi (Mukae et al., 2018).

Tingkat kontraksi masing-masing kelompok spheroid diikuti empat

minggu. Panjang maksimum dan minimum antara dua titik dan kecepatan
kontraksi semua spheroid diukur pada hari ke 7 setelah pembentukan

4
 spheroid dengan menelusuri dua titik perifer yang paling kontraktil (Gbr. 3).
Pemendekan pecahan dihitung dari perbedaan antara titik-titik dibagi dengan
panjang maksimum (Mukae et al., 2018).

C. Immunoflouresens
Sampel disiapkan pada hari ke-14 setelah mencampurkan sel-sel pada 96-
well ultra-low attachment plate. Mereka difiksasi dalam larutan buffered fosfat
paraformaldehid 4% selama 16 jam pada 4°C, diblokir dalam CarboFree
Solution Blocking (VECTOR LABOLATORIES INC., California, AS) selama 15
menit dan permeabilisasi oleh 0,2% TritonX-100 10 menit pada suhu kamar
(20°C).
Pewarnaan antibodi primer dan sekunder dilakukan seperti yang dijelaskan di
bawah ini. Antibodi T anti-troponin tikus (1:100), Antibodi tikus monoklonal
nestin anti-manusia tikus (1:100), Antibodi tikus antineuron spesifik beta-
tubulinmonoklonal Antibodi IgG2A tikus beta-1 (100:100), Mouse anti-160 kD
neurofilamen medium antibodi monoklonal rantai (1:100), dan antibodi
poliklonal anti-sinapsin1 Kelinci (1:100) diaplikasikan sebagai antibodi primer
selama 16 jam pada 4°C. Dan IgG AntiMouse Kambing (H + L), Alexa Fluor®
488 (1:100) dan IgG Kambing Anti-Kelinci (H + L), Alexa Fluor® 594 (1:100)
digunakan sebagai antibodi sekunder selama 60 menit pada 20°C. Penggandaan
ganda asam nukleat DAPI akhirnya dilakukan selama 10 menit pada 20°C
(Mukae et al., 2018).
Sinyal imunofluoresensi diamati di bawah mikroskop pemindaian laser
confocal (ZEISS LSM880 Confocal Microscope) menggunakan perendaman oli
20 x atau x 63 untuk hiPS-NP yang dicampur dengan spheroid jantung.

D. Analisis statistik
Analisis varian One way digunakan untuk perbandingan di antara empat
kelompok kecuali dinyatakan sebaliknya, dengan nilai yang dihitung
menggunakan program perangkat lunak JMP12.2. Perbandingan rata-rata ad hoc
dilakukan, dan nilai-p disesuaikan untuk beberapa pengujian menggunakan uji
Tukey-Kramer. Nilai P<0,05 dianggap mengindikasikan signifikansi statistik.

5
 BAB III
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Formasi spheroid dan hitung denyut

Kelompok kardiomiosit 100%, di mana beberapa sel penduduk ditinggalkan di
sumur, menunjukkan agregasi yang tidak memadai. Sebaliknya, para spheroid dari
kelompok lain teragregasi sepenuhnya. Spheroid kardiomiosit murni dapat
menghitung laju pemukulan, tetapi tidak ada analisis fungsional lebih lanjut yang
dapat dilakukan (Mukae et al., 2018). Tingkat pemukulan diukur pada semua
kelompok dan hasilnya ditunjukkan pada Gambar. 2.

Gambar 2. Tingkat Pemukulan. Grafik ini membandingkan tingkat

pemukulan untuk setiap kelompok rasio neural progenitor (NP) pada hari ke 7
setelah sel-sel dicampur. CM, kardiomiosit; NP, progenitor-saraf.

B. Penilaian fungsi kontraktil

Pemendekan pecahan menunjukkan perbedaan yang signifikan di antara 4
kelompok pada Hari 7 (p = 0,0101, Gambar 4a). Kecepatan kontraksi maksimum
tidak berbeda secara signifikan (p=0,0599, Gambar 4b). Pemendekan fraksional dan

6
kecepatan kontraktil maksimum berbeda secara signifikan berbeda antara 30% dan
40% kelompok hiPS-NP (p <0,05) (Mukae et al., 2018).

Gambar 4. Pemendekan fraksional (panel kiri) dan kecepatan kontraktil

maksimum (panel kanan) dari masing-masing spheroid. Analisis varian satu arah
menunjukkan perbedaan signifikan dalam pemendekan fraksional dan kecepatan
kontraktil di antara kelompok (p=0,01). Analisis ad hoc menunjukkan perbedaan
yang signifikan dalam pemendekan fraksional dan kecepatan kontraktil maksimum
antara CM/NP 70/30 dan 60/40. CM, kardiomiosit; NP, nenek moyang-saraf. *: p
<0,05, tes Tukey-Kramer.
Takeuchi et al. (2013) menemukan bahwa penambahan neuron
simpatis dapat memodulasi laju denyut hiPS-CMs, tetapi mereka tidak
menggambarkan fungsi kontraktil hiPS-CMs, yang merupakan batasan kultur
2D dalam satu warna. Beberapa penelitian telah menggunakan a3D system
untuk kultur sel. Kraus et al. (2015) menemukan bahwa sistem kultur
menggunakan sistem matriks kolagen 3D memfasilitasi pertumbuhan sel
saraf dibandingkan dengan sistem kultur monolayer 2D. Lu et al. (2012)
menunjukkan peningkatan pertumbuhan dan perbedaan ketika spheroids 3D
digunakan dibandingkan dengan sistem monolayer 2D. Sejauh pengetahuan
kami, tidak ada penelitian yang menggunakan sistem kultur 3D untuk
berkoordinasi kultur hiPS-CMs dan hiPS-NPs. Temuan peneliti dalam studi
imunofluoresensi mengkonfirmasi keberadaan sel dengan β3-tubulin, yang
menunjukkan bahwa hiPS-NP berbeda dengan sel-sel saraf yang mengandung
struktur tubulin dalam spheroid (Mukae et al., 2018).

Mekanisme yang mendasari fungsi superior spheroids pada 30%

hiPS-NP belum terbukti. Pemendekan fraksi spheroid tanpa sel-sel progenitor
saraf belum dapat diukur, karena properti agregasi kardiomiosit tidak cukup

7
 untuk membentuk struktur spheroid. Pada percobaan sebelumnya telah
dilakukan kardiomiosit dari jantung neonatal tikus dicampur dengan
fibroblast manusia. Percobaan menunjukkan bahwa ketika fraksi jumlah
fibroblas meningkat, pemendekan fraksi spheroid akan terjadi penurunan.
Berdasarkan penggabungan hasil percobaan saat ini dan sebelumnya
dianggap bahwa menambahkan sel saraf tidak memiliki efek negatif pada
fungsi kontraktil sel jantung sampai rasio CM/NP mencapai 70/30 (30%).
Produksi neuron simpatis atau pensinyalan β-adrenergik dari ReproNeuro
belum terbukti. Neuron simpatis dilaporkan memodulasi laju denyut
kardiomiosit yang diturunkan oleh sel pluripoten secara in vitro, dan
pensinyalan β-adrenergik dapat mengatur kelangsungan hidup sel, kematian,
atau proliferasi kardiomiosit (Mukae et al., 2018).

C. Sel-Sel Saraf Pada Spheroid Jantung

Sebuah studi imunofluoresensi dilakukan untuk spheroids terbentuk pada

pencampuran 70% hiPS-CM dan 30% hiPS-NP (Gbr. 5). Spheroids yang dicampur
dengan hiPS-NP diwarnai untuk nestin (penanda progenitor saraf), synapsin1
(penanda neuro-sinaptik), β3-tubulin (penanda sitoskeleton neuron), dan rantai
medium neurofilamen (penanda spesifik serat saraf) (Gambar 5a'b'c'd '). Pada hari ke-
14, beberapa tubulin β3 dan organisasi neurofilamen medium rantai-positif
digambarkan dalam bentuk zig-zag (Gambar 5c'd ') dan beberapa titik positif
sinapsin1 terdeteksi dengan jelas sebagai kumpulan poin (Gambar 5abcd, a 'b'c'd') di
bawah mikroskop confocal. Organisasi-organisasi ini mirip dengan sel-sel saraf dan
menunjukkan pola zig-zag, menghubungkan satu sama lain dan mengelilingi
spheroid. Hasil ini menunjukkan adanya β3-tubulin, rantai medium neurofilamen, dan
sel-sel neuron positif-synapsin1 dalam spheroid jantung dengan menambahkan hiPS-
NP 14 hari setelah pencampuran sel (Mukae et al., 2018).

8
 Gambar 5. Pewarnaan imunofluoresen untuk spheroids terbuat dari HiPS-
CM 70% dan HiPS-NP 30% di bawah mikroskop confocal (Carl Zeiss, LSM
880, panel kiri dengan lensa x20, panel kanan dengan lensa x63) (Mukae et
al., 2018).

Dalam penelitian ini menunjukkan bahwa dengan penambahan HiPS-NP

diinduksi untuk pembentukan sel saraf pada spheroid jantung dan
mepengaruhi fungsi kontraktil dan durasi detak jantung. Tidak ada efek
negatif pada fungsi kontraktil sampai rasio hiPS-NP di spheroids mencapai
30% (Mukae et al., 2018).

Sel-sel positif untuk rantai medium β3-tubulin atau neuro fi lament,

penanda neuron spesifik, terdeteksi dalam spheroid. Sel-sel ini memperluas
"cabang" dari kluster dan di hubungkan dengan β3 tubulinorneuro filament
medium rantai-positive cell lainnya. "Cabang-cabang" ini merupakan indikasi

9
neurit, secara morfologis menunjukkan adanya neuron di dalam spheroid
untuk membentuk jaringan neuro-bundle. Morfologi neuron ini meniru sistem
saraf (Jeong et al., 2015 cit Mukae et al., 2018). Pada Gambar. 5, sel-sel
positif-synapsin1 tersebar di dalam spheroid dan dekat dengan sel-sel
medium rantai-positif β3-tubulin- atau neuro filament. Sepengetahuan dari
penelitian ini, bahwa laporan pertama mengenai spheroid yang mengandung
campuran hiPS-CMs dan hiPS-NPs. Untuk memperjelas distribusi dan
komponen sel-sel saraf ini secara rinci, penelitian di masa depan harus
dilakukan adanya pemeriksaan dengan pewarnaan tambahan penanda spesifik
neuron. Selanjutnya, periode pengamatan harus cukup lama untuk
menumbuhkan serat neuron yang cukup (Mukae et al., 2018).

Beberapa laporan menggambarkan terkait pemendekan fisik struktur

jantung 3D scaffold-free. Stevens et al. (2009) dalam Mukae et al.,
(2018)Melaporkan bahwa fungsi patch kardiomiosit sel embrionik manusia
(hES). Mereka membangun tambalan dengan menggabungkan kardiomiosit
yang diturunkan oleh HES pada pengocok orbital yang berputar tanpa
membentuk spheroid dan menguji aktivitas kontraktil dengan stimulasi listrik.
Pemendekan fraksional yang diamati dalam penelitian ini adalah sekitar 2%
-3%, yang dekat dengan nilai yang dilaporkan sebelumnya (1% -2%) ketika
dua titik dipantau pada patch jantung dua dimensi (2D) menggunakan
program perangkat lunak dengan stimulasi listrik yang sering (Mukae et al.,
2018).

Dalam laporan peneliti ini sebelumnya, pemendekan fraksi spheroid

dengan kardiomiosit tikus neonatal adalah 1,5% -2,5% pada rasio
kardiomiosit 70% -100% (Noguchi et al., 2016), yang juga dekat dengan hasil
saat ini. Oleh karena itu peneliti ini menganggap bahwa hasil nilai
pemendekan fraksional yang didapat sebanding dengan laporan sebelumnya.
Peneliti ini tidak menggunakan Ca2 + sebagai gambaran untuk evaluasi
fungsional spheroid jantung karena dua alasan. Pertama, gambaran terkait
penambahan Ca2 + bersifat sitotoksik dan melemahkan properti detak
spheroid. Menambahkan penambah ini dapat mengacaukan atau membesar-
besarkan hasilnya. Kedua, meskipun visualisasi Ca2 + akan menjadi luar
biasa untuk menunjukkan mode dan pola penyebaran eksitasi, itu tidak

10
berguna untuk mengukur fungsi kontraktil. Harus dilakukan kuantifikasi
intensitas fluoresensi, tetapi intensitas itu sendiri bukan indeks standar yang
baik untuk kuantisasi fungsi kontraktil. Untuk alasan ini peneliti ini tidak
melakukan pembelajaran gambaran mengenai penambahan Ca2 + (Mukae et
al., 2018).

Keberadaan neuroectodermal marker cell stem nestin telah dilaporkan

dalam sel endotel pembuluh darah yang baru terbentuk di daerah infark.
Nestin juga telah terdeteksi pada fibrosis ventrikel setelah iskemia miokard.
Progenitor saraf, yang merupakan sel positif-nestin, menghasilkan beberapa
faktor pertumbuhan, seperti neuregulin1, yang secara langsung dapat
menginduksi sintesis DNA miosit, dan faktor pertumbuhan saraf, yang secara
tidak langsung meningkatkan perbaikan jantung. Di identifikasi secara
nasionalnestin/GATA4- immunoreactivecell di hati manusia dewasa. Temuan
mereka menunjukkan bahwa sel-sel ini dapat mewakili progenitor penduduk
yang terlibat dalam remodeling jantung dan / atau regenerasi (Mukae et al.,
2018).

Dalam fase perkembangan jaringan pembuluh darah otak, progenitor saraf

telah ditemukan untuk memfasilitasi ingresi pembuluh darah dari luar tabung
saraf, melalui faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) dan pensinyalan
Wnt kanonik. Sinyal-sinyal ini dapat menyebabkan perkembangan pembuluh
mikro baru di dalam spheroids ketika struktur fabrikasi ditanamkan secara in
vivo. Dalam penelitian kami, kami menunjukkan adanya sel-sel nestin-positif
dalam spheroid jantung (Gambar 5b dan b). Meskipun kami tidak dapat
mengidentifikasi faktor pasti yang bertanggung jawab untuk hasil yang
menguntungkan, pertumbuhan tersebut di atas faktor mungkin telah
membantu meningkatkan fungsi spheroids dalam penelitian kami (Mukae et
al., 2018).

Dukungan kontraktil mekanis oleh sel-sel saraf atau interaksi dengan

katekolamin pada sel-sel saraf, serta faktor-faktor pertumbuhan saraf yang
disebutkan sebelumnya mungkin telah berkontribusi pada fungsi superior
spheroid dengan hiPSNP. Untuk menentukan mekanisme yang mendasari
kontribusi sel-sel saraf pada fungsi spheroid jantung, regulasi reseptor β1-

11
 adrenergik harus dinilai atau uji kuantitatif katekolamin harus dilakukan.
Namun, keduanya berada di luar lingkup penelitian. Penelitian lebih lanjut
diperlukan untuk mengklarifikasi interaksi antara hiPS-CMs dan hiPS-NPs
dalam pengaturan pembentukan spheroid. Studi ini menunjukkan kegunaan
potensial dari progenitor saraf dalam pembentukan spheroid jantung. Namun,
untuk membangun struktur jantung 3D yang dapat ditransplantasikan dengan
kontraksi yang lebih kuat, spheroid jantung mungkin memerlukan fibroblast
dermal yang mirip dengan manusia normal, yang menghasilkan matriks
ekstra-seluler yang berlimpah, atau sel endotel vena umbilikal manusia, yang
menghasilkan pembuluh mikro di dalam spheroid (Mukae et al., 2018).

Oleh karena itu, dalam penelitian berikutnya, akan di sesuaikan

konstituen spheroid dan menyelidiki interaksi antara hiPS-NPs dan sel-sel
lain di dalam spheroids jantung, yang akan membantu kami membuat
spheroid yang lebih fungsional. Analisis histologis, penyelidikan kecepatan
konduksi pada analisis fisio-elektrik, dan perbedaan dalam respon obat
spheroid jantung yang dicampur dengan progenitor saraf harus dieksplorasi
dalam penelitian selanjutnya juga.

BAB IV
PENUTUP

A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasan pada makalah di atas, kesimpulan yang
dihasilkan yaitu adanya Penambahan progenitor saraf turunan sel iPS manusia
memberikan sel-sel saraf dan memengaruhi fungsi kontraktil spheroid jantung
turunan sel iPS manusia. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menjelaskan
mekanisme yang mendasari mode tindakan saraf progenitor.

12
 DAFTAR PUSTAKA

Mukae, Y., Manabu, I., Ryo, N., Kojiro, F., Ken-ichi, a., Jun-ichi, O., Shuji, T.,
Koichi, N., Koichi, N., and Shigeki, M. 2018. The addition of human iPS cell-
derived neural progenitors changes the contraction of human iPS cell-derived
cardiac spheroids. Elsevier: Tissue and cell.(53):61-17.
Takeuchi, A., Shimba, K., Takayama, Y., Kotani, K., Lee, J.K., Noshiro, M., Jimbo,
Y., 2013. Microfabricated device for co-culture of sympathetic neuron and iPS-
derived cardiomyocytes. Conf. Proc. IEEE Eng. Med. Biol. Soc. 3817–3820.
Lu, H., Searle, K., Liu, Y., Parker, T., 2012. The effect of dimensionality on growth
and differentiation of neural progenitors from different regions of fetal rat brain
in vitro: 3-dimensional spheroid versus 2-dimensional monolayer culture. Cells
Tissues Organs 196 (1), 48–55.
Kraus, D., Boyle, V., Leibig, N., Stark, G.B., Penna, V., 2015. The Neuro-spheroid-
A novel 3D in vitro model for peripheral nerve regeneration. J. Neurosci.
Methods 246, 97–105.

13