EKSTRAKSI DNA METODA “ QIAGEN “

DNA berasal dari sampel darah, urutan pengerjaannya sebagai berikut:

1. Maasukkan Protease K kedalam tabung efendrof 2 ml sebanyak 20 µl
2. Tambahkan sampel darah sebanyak 200 µl
3. Tambahkan RNAase sebanyak 4 µl
4. Tambahkan buffer AL (produk Qiagen) sebanyak 200 µl, lalu diaduk
memakai vortek selama 15 detik dan selanjutnya diinkubasi dengan
temperatur 56 oC selama 20 menit.
5. Centrifuge dengan minicentrifus selama 30 detik dengan 8000 rpm
6. Tambahkan etanol sebanya 200 µl, lalu divortek selama 30 detik
7. Centrifuge dengan minicentrifus selama 30 detik dengan 8000 rpm
8. Pindahkan ke dalam tabung minispin colum semua volume ( tabung khusus
yang telah ada filter)
9. Cintrifus dengan minicentrifuge selama 1 menit dengan 8000 rpm
10. Pindahkan isi minispin colum, ambil bagian atasnya sedangkan bagian
bawahnya dibuang
11. Tambahkan buffer AW 1 ( produk Qiagen) sebanyak 500 µl
12. Centrifus dengan minicentrifuge selama 1 menit dengan rpm 8000
13. Pindahkan isi minispin colum, ambil bagian atasnya sedangkan bagian
bawahnya dibuang
14. Tambahkan buffer AW 2 sebanyak 500 µl
15. Centrifus dengan minicentrifuge selama 3 menit dengan rpm 14000
16. Ganti spincolum (bagian atas dibuang dan bagian bawah diambil)
17. Centrifus selama 1 menit dengan rpm 14000
18. Ambil semua volume yang ada pada spincolum ke dalam efendrof (1,5 ml)
19. Tambahkan buffer AE sebanyak 200 µl, biarkan pada suhu kamar selama 2
menit ( agar terjadi elution DNA)
20. Centrifus selama 1 menit dengan rpm 8000
21. Pisahkan ambil cairan yang ada di bagian bawah ( bagian atas yang ada
filter dibuang)
22. Filtrat dapat disimpan dalam waktu lama pada suhu – 20 oC
Cek templet DNA dengan elektroforesis untuk 4 sampel
• Ambil loading dye 4 µl (pewarna pengikat)
• Ambil sampel 4 µl , lalu campur
• Masukkan ke dalam sumur gel pada elektroforesis
• Hidupkan alat elektroforesis tegangan 50 volt dan tunggu selama 30
menit
• Pisahkan gel dari mesin, lalu tetesi dengan etidium bromida, lihat di
bawah lampu Ultra Violet
GEL AGAROSE 1 %

1. TIMBANG 1 GRAM AGAROSE

2. masukkan kedalam 100 ml 1 X TAE
3. panaskan dalam oven sampai homogen
4. tambahkan etidium bromid 0,01 µl
5. siapkan cetakan agarose dengan sisirnya
6. tuangkan dan tunggu sampai keras

GEL AKRILAMID

Sediaan untuk 25 ml
1. tambahkan air (DW) 15 ml
2. masukkan 5 x TBE sebanyak 5 ml
3. aduk sampai homogen (jernih)
4. tambahkan acrilamid 30 % sebanyak 5 ml
5. tambahkan APS sebanyak 150 µl
6. tambahkan Temed sebanyak 15 µl