Xeroderma Pigmentosum:

Perbaikan DNA yang Rusak dalam Manusia

Matahari bersinar terang pada hari pertengahan musim panas - hari yang sempurna bagi
kebanyakan orang anak-anak untuk menghabiskan waktu di pantai. Semua teman Nathan
berpakaian dalam celana pendek atau pakaian renang. Ketika Nathan bersiap untuk bergabung
dengan teman-temannya, ia mengenakan celana panjang penuh dan kemeja lengan panjang.
Kemudian dia kenakan topi lebar dan oleskan tabir surya yang tebal ke tangan dan wajahnya.
Sedangkan teman-temannya menikmati bermain di bawah sinar matahari, Nathan hidup dalam
ketakutan yang konstan akan efek sinar matahari. Nathan lahir dengan dis order xeroderma
pigmentosum yang diwarisi, suatu sifat resesif autosom yang memengaruhi sekitar satu dari 250.000
anak-anak. Sel-sel kulit Nathan sangat sensitif terhadap ultraviolet radiasi - sinar berenergi tinggi dari
sinar matahari. Penyebab sinar ultraviolet perubahan kimia dalam DNA di sel kulit Nathan,
mengubah itu menyebabkan tidak hanya bintik-bintik intens tetapi juga kanker kulit. Teman-teman
Nathan tidak banyak berpikir untuk bermain di bawah sinar matahari; terbakar sinar matahari adalah
satu-satunya perhatian utama mereka. Sel kulit mereka mengandung enzim itu koreksi perubahan
DNA yang dihasilkan dari paparan ultraviolet cahaya. Namun, sel-sel kulit Nathan kekurangan salah
satu enzim diperlukan untuk memperbaiki perubahan yang disebabkan oleh sinar ultraviolet dalam
struktur DNA. Xeroderma pigmentosum hasil dari homozigot Kita tahu dari bab-bab sebelumnya
bahwa pewarisan didasarkan pada gen yang ditularkan dari orang tua kepada keturunan selama
reproduksi dan bahwa gen menyimpan informasi genetik yang disandikan dalam urutan pasangan
nukleotida dalam DNA atau nukleotida dalam RNA. Kami telah memeriksa bagaimana informasi
genetik ini diduplikasi secara akurat selama replikasi semikonservatif DNA. Replikasi yang akurat ini
terbukti bergantung sebagian kegiatan proofreading dibangun ke dalam DNA polimerase yang
mengkatalisasi DNA perpaduan. Dengan demikian, mekanisme telah berkembang untuk
memfasilitasi transmisi yang setia informasi genetik dari sel ke sel dan akhirnya dari generasi ke
generasi. Namun demikian, kesalahan dalam materi genetik memang terjadi. Perubahan yang
diwariskan seperti itu dalam materi genetik disebut mutasi. Istilah mutasi mengacu pada (1)
perubahan materi genetik dan (2) proses dimana perubahan terjadi. Organisme yang menunjukkan
fenotipe baru akibat mutasi disebut mutant. Digunakan dalam arti historis yang luas, mutasi
mengacu pada perubahan genotipe sel atau organisme yang tiba-tiba dan diwariskan. Namun,
perubahan pada genotipe, dan dengan demikian pada fenotipe, dari suatu organisme itu hasil dari
peristiwa rekombinasi yang menghasilkan kombinasi baru dari genetik yang sudah ada sebelumnya
variasi harus dibedakan dengan hati-hati dari perubahan yang disebabkan oleh mutasi baru. Kedua
Peristiwa terkadang memunculkan fenotipe baru pada frekuensi yang sangat rendah. Mutasi
perubahan dalam genotipe suatu organisme termasuk perubahan dalam jumlah kromosom dan
struktur (Bab 6), serta perubahan dalam struktur gen individu. Mutasi yang melibatkan perubahan
pada situs spesifik dalam gen disebut mutasi titik. Mereka termasuk substitusi dari satu pasangan
basa untuk pasangan yang lain atau penyisipan atau penghapusan satu pasangan atau beberapa
pasangan nukleotida di lokasi spesifik dalam gen. Saat ini, istilah mutasi terkadang digunakan dalam
arti sempit untuk merujuk hanya pada perubahan struktur gen individu. Dalam bab ini, kami
mengeksplorasi proses mutasi sebagaimana didefinisikan dalam arti sempit. Mutasi adalah sumber
utama dari semua variasi genetik; itu menyediakan bahan baku untuk evolusi. Mekanisme
rekombinasi mengatur ulang variabilitas genetik menjadi baru kombinasi, dan seleksi alami atau
buatan mempertahankan kombinasi terbaik disesuaikan dengan kondisi lingkungan yang ada atau
diinginkan oleh tanaman atau hewan peternak. Tanpa mutasi, semua gen akan ada hanya dalam
satu bentuk. Alleles tidak mau ada, dan analisis genetik klasik tidak mungkin dilakukan. Paling
penting, populasi organisme tidak akan dapat berevolusi dan beradaptasi dengan perubahan
lingkungan. Beberapa tingkat mutasi sangat penting untuk memberikan keragaman genetik baru dan
memungkinkan organisme untuk beradaptasi dengan lingkungan baru. Pada saat bersamaan, jika
terjadi mutasi terlalu sering, mereka akan mengganggu transfer informasi genetik yang setia
generasi ke generasi. Apalagi sebagian besar mutasi dengan fenotip mudah terdeteksi efeknya
merusak organisme di mana mereka terjadi. Seperti yang kita harapkan, laju mutasi dipengaruhi oleh
faktor genetik, dan mekanisme telah mengembangkannya mengatur tingkat mutasi yang terjadi
dalam berbagai kondisi lingkungan.

Hal 333

Ketika mutasi baru — seperti yang menghasilkan domba berkaki pendek Wright— terjadi, apakah
itu disebabkan oleh beberapa agen di lingkungan atau apakah itu hasil dari bawaanproses dalam
organisme hidup? Mutasi spontan adalah yang terjadi tanpa penyebab yang diketahui. Mereka
mungkin benar-benar spontan, yang dihasilkan dari tingkat rendah yang melekat kesalahan
metabolisme, atau mereka mungkin sebenarnya disebabkan oleh agen yang tidak dikenal hadir di
lingkungan Hidup. Mutasi yang diinduksi, sebagaimana telah dibahas, adalah yang dihasilkan dari
paparan organisme ke agen fisik dan kimia yang menyebabkan perubahan DNA (atau RNA dalam
beberapa virus). Agen semacam itu disebut mutagen; mereka termasuk iradiasi pengion, sinar
ultraviolet, dan berbagai macam bahan kimia, seperti yang dibahas di bagian sebelumnya. Secara
operasional, tidak mungkin untuk membuktikan bahwa mutasi tertentu terjadi secara spontan
atau diinduksi oleh agen mutagenik. Ahli genetika harus membatasi hal tersebut perbedaan ke
tingkat populasi. Jika tingkat mutasi meningkat seratus kali lipatpengobatan populasi dengan
mutagen, rata-rata 99 dari setiap 100 mutasi hadir dalam populasi akan diinduksi oleh mutagen.
Peneliti bisa dengan demikian membuat perbandingan yang valid antara mutasi spontan dan
induksi secara statistik dengan membandingkan populasi yang terpapar agen mutagenik dengan
populasi kontrol itu belum terpapar mutagen. Mutasi spontan jarang terjadi, walaupun frekuensi
yang diamati bervariasi dari gen ke gen dan dari organisme ke organisme. Pengukuran spontan
frekuensi mutasi untuk berbagai gen fag dan bakteri berkisar antara 10 8 hingga 10 10 mutasi yang
terdeteksi per pasangan nukleotida per generasi. Untuk eukariota, perkiraan tingkat mutasi
berkisar antara 10 7 hingga 10 9 mutasi yang dapat terdeteksi per nukleotida pasangan per
generasi (hanya mempertimbangkan gen-gen yang datanya luas tersedia). Dalam membandingkan
tingkat mutasi per nukleotida dengan tingkat mutasi per gen, pengkodean panjang gen rata-rata
biasanya diasumsikan 1000 pasang nukleotida. Dengan demikian, tingkat mutasi per gen
bervariasi dari sekitar 10 4 hingga 10 7 per generasi. Pengobatan dengan agen mutagenik dapat
meningkatkan frekuensi mutasi atas perintah besarnya. Frekuensi mutasi per gen pada bakteri
dan virus dapat ditingkatkan hingga lebih dari 1 persen dengan pengobatan dengan mutagen
kimia yang kuat. Yaitu, lebih dari 1 persen dari gen organisme yang dirawat akan mengandung
mutasi, atau, dinyatakan berbeda, lebih 1 persen fag atau bakteri dalam populasi akan mengalami
mutasi pada gen yang diberikan. Tikus di banyak kota tidak lagi terpengaruh oleh antikoagulan
yang secara tradisional telah digunakan sebagai racun tikus. Banyak populasi kecoa tidak sensitif
terhadap chlordane, racun yang digunakan untuk mengendalikan mereka pada 1950-an. Populasi
lalat sering menunjukkan tingkat resistensi yang tinggi terhadap banyak insektisida. Semakin
banyak mikroorganisme patogen menjadi resisten terhadap antibiotik yang dikembangkan untuk
mengendalikan mereka. Pengenalan ini pestisida dan antibiotik oleh manusia menghasilkan
lingkungan baru untuk organisme ini. Terjadi mutasi yang menghasilkan resistensi terhadap
pestisida dan antibiotik ini; yang sensitif organisme terbunuh; dan mutan berlipat ganda untuk
menghasilkan populasi tahan baru. Banyak kasus evolusi melalui mutasi dan seleksi alam yang
terdokumentasi dengan baik. Contoh-contoh ini menimbulkan pertanyaan mendasar tentang sifat
mutasi. Apakah mutasi a murni peristiwa acak di mana tekanan lingkungan hanya
mempertahankan yang sudah ada sebelumnya mutasi? Atau mutasi diarahkan oleh tekanan
lingkungan? Misalnya, jika Anda potong ekor tikus selama beberapa generasi, akhirnya Anda akan
menghasilkan keturunan tikus berekor? Meskipun keyakinan Jean Lamarck dan Trofim Lysenko,
yang percaya dalam pewarisan "sifat yang didapat" - sifat yang dikenakan pada organisme oleh
lingkungan faktor — jawabannya adalah tidak; tikus akan terus dilahirkan dengan ekor. Hari ini,
sulit untuk memahami bagaimana Lysenko bisa menjual kepercayaannya Lamarckisme — warisan
sifat yang diperoleh — untuk mereka yang berkuasa di Soviet Persatuan dari 1937 hingga 1964.
Namun, menyangkal Lamarckisme bukanlah hal yang mudah tugas, terutama dalam kasus
mikroorganisme, di mana bahkan kultur kecil sering mengandun miliaran organisme. Sebagai
contoh, mari kita perhatikan populasi bakteri seperti E. coli yang tumbuh di lingkungan bebas
streptomisin. Ketika terkena streptomisin, sebagian besar bakteri akan dibunuh oleh antibiotik.
Namun, jika populasinya cukup besar, itu akan segera terjadi menimbulkan kultur resisten
streptomisin di mana semua sel resisten terhadap antibiotika. Apakah streptomisin cukup memilih
mutan langka yang terjadi secara acak itu yang sudah ada sebelumnya dalam populasi, atau
apakah semua sel memiliki kemungkinan berkembang yang rendah resistensi dalam menanggapi
kehadiran streptomisin? Bagaimana mungkin ahli genetika membedakan antara dua kemungkinan
ini? Resistensi terhadap streptomisin hanya bisa terjadi terdeteksi dengan mengobati biakan
dengan antibiotik. Bagaimana, kemudian, seorang ahli genetika dapat menentukan apakah bakteri
resisten hadir sebelum paparan streptomisin, atau sedang disebabkan oleh adanya antibiotik?
Pada tahun 1952, Joshua dan Esther Lederberg mengembangkan teknik baru yang pentingdisebut
replika plating. Teknik ini memungkinkan mereka untuk menunjukkan kehadiranmutan yang
resisten antibiotik dalam biakan bakteri sebelum paparan antibiotik(? Gambar 13.15). Lederberg
pertama-tama mengencerkan biakan bakteri, menyebarkan bakteripada permukaan media agar
nutrisi semipadat di cawan petri, dan diinkubasipiring sampai setiap bakteri telah menghasilkan
koloni yang terlihat di permukaanagar-agar. Mereka selanjutnya membalikkan setiap lempeng dan
menekannya ke atas beludru steril yang diletakkan di atas abalok kayu. Beberapa sel dari masing-
masing koloni menempel di beludru. Mereka kemudian dengan lembutmenekan sepiring steril
agar nutrisi yang mengandung streptomisin ke atas beludru.Mereka mengulangi prosedur
pelapisan replika ini dengan banyak piring, masing-masing berisisekitar 200 koloni bakteri. Setelah
mereka diinkubasi pelat selektif (yang mengandungstreptomisin) dalam semalam, koloni resisten
streptomisin langka telah terbentuk.Lederbergs kemudian menguji koloni-koloni di lempeng-
lempeng non-selektif(yang tidak mengandung streptomisin) karena kemampuannya untuk
tumbuh pada medium yang mengandungstreptomisin. Hasil mereka pasti. Koloni yang tumbuh
pada selektifpelat replika hampir selalu berisi sel-sel yang tahan streptomisin, sedangkan
koloniyang gagal tumbuh pada media selektif jarang mengandung sel-sel resisten(Gambar
13.15).Jika mutasi yang membuat bakteri resisten terhadap streptomisin terjadi pada awaltahap
dalam pertumbuhan koloni, sel resisten akan membelah dan menghasilkan dua, kemudianempat,
lalu delapan, dan akhirnya sejumlah besar bakteri resisten. Jadi, jika mutasi adalah proses yang
terjadi secara acak, nonadaptif, banyak koloni yang terbentuk pada lempeng nonselektif akan
mengandung lebih dari satu bakteri dan bakteri yang kebal antibiotik menimbulkan budaya
resisten ketika diuji untuk pertumbuhan pada media selektif. Namun,jika mutasi bersifat adaptif
dan mutasi terhadap resistensi streptomisin hanya terjadi setelahnyapaparan antibiotik, maka
koloni di lempeng nonselektif yang memunculkan untuk koloni tahan pada pelat selektif setelah
replika plating tidak akan ada lagi kemungkinan mengandung sel-sel yang resisten streptomisin
daripada koloni lain pada nonselektifpiring Jadi, dengan menggunakan teknik replika-pelapisan
mereka, Lederbergs menunjukkan keberadaan mutan yang tahan streptomisin dalam populasi
bakteri sebelum mereka paparan antibiotik. Hasilnya, bersama dengan banyak eksperimen
lainnya, telah menunjukkan bahwa tekanan lingkungan tidak mengarahkan atau menyebabkan
perubahan genetik Lysenko percaya; itu hanya memilih mutasi yang sudah ada sebelumnya langka
yang menghasilkan fenotipe lebih baik beradaptasi dengan lingkungan baru