In ovo injeksi prebiotik dan sinbiotik mempengaruhi potensi pencernaan pankreas pada

ayam yang sedang tumbuh

Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh 2 prebiotik dan 2 sinbiotik terhadap
daya cerna pankreas pada ayam umur 1, 3, 7, 14, 21, dan 34 hari. Prebiotik (inulin dan Bi2
tos) dan sinbiotik (inulin + Lactococcus lactis subsp. lactis dan Bi2tos + Lactococcus lactis
subsp. cremoris) disuntikkan secara in ovo ke dalam sel udara pada perkembangan embrio
hari ke-12. Aplikasi mereka meningkatkan aktivitas amilase, lipase, dan tripsin di pankreas.
Perubahan yang paling menonjol diamati pada akhir periode pemeliharaan yang diselidiki (h
34). Efek stimulatif terkuat pada amilase ditunjukkan oleh kedua sinbiotik, pada lipase
sinbiotik Bi2 tos + Lactococcus lactis subsp. cremoris, dan pada tripsin semua prebiotik dan
sinbiotik yang digunakan. Secara bersamaan, baik massa absolut maupun relatif pankreas
dibandingkan dengan kelompok kontrol tidak berubah. Selain itu, senyawa yang disuntikkan
secara in ovo tidak menyebabkan penurunan kondisi hati ayam pasca penetasan,
sebagaimana ditentukan oleh pengukuran aktivitas enzim penanda dalam darah (alanine
aminotransferase dan aspartate aminotransferase). Perlakuan dengan prebiotik dan sinbiotik
tidak mengubah rasio konversi pakan tetapi Bi2tos (galacto-oligosaccharide) dan inulin
(fructan) + Lactococcus lactis subsp. lactis secara signifikan meningkatkan BW akhir.

Kata kunci
prebioticsynbioticin ovobroiler ayampankreas aktivitas enzimatik

PENGANTAR
Sejak tahun 2006, ketika Uni Eropa melarang penggunaan antibiotik pemacu pertumbuhan
dalam nutrisi unggas, banyak alternatif telah diselidiki untuk menggantikan antimikroba
tanpa kehilangan produktivitas atau pengaruh negatif terhadap kesehatan.

Salah satu cara yang mungkin untuk mengatasi masalah ini adalah dengan mengontrol
mikrobiota saluran pencernaan. Ada dua jenis aditif pakan yang menarik. Metode pertama
adalah pengenalan langsung bakteri hidup ke dalam saluran pencernaan, yang kedua
adalah penciptaan kondisi untuk pengembangan bakteri menguntungkan. Prebiotik telah
digunakan untuk meningkatkan kinerja ayam melalui dampak langsung pada mikroflora
hewan inang dan dengan cara ini efek penguatan penghalang mukosa usus terhadap agen
merusak (Fioramonti et al., 2003). Prebiotik (kebanyakan fruktan, misalnya inulin dan
fructooligosaccharides, tetapi juga oligosakarida keluarga raffinose dan
galactooligosaccharides) secara selektif merangsang pertumbuhan mikrobiota usus yang
bermanfaat, terutama bifidobacteria dan lactobacteria (Roberfroid, 2001; Villaluenga et al.,
2004; Baffoni et al., 2012). ).

Bakteri menguntungkan menghuni usus ayam segera setelah menetas.

Bakteri menguntungkan menghuni usus ayam segera setelah menetas.
Beneficial bacteria inhabit the chicken intestines soon after hatching.
Di alam liar, proses ini terjadi melalui kontak dengan feses induk (Kabir et al., 2004). Dalam
penetasan buatan, penyelesaian bakteri menguntungkan usus tertunda, bahkan jika proses
ini diinduksi oleh aditif pakan. Oleh karena itu, pemberian langsung zat yang diberikan ke
dalam telur telah digunakan dan hasilnya menjanjikan (Villaluenga et al., 2004; Pilarski et al.,
2005; Maiorano et al., 2012; Sławinska et al., 2014). Dibandingkan dengan diet inklusi
prebiotik, injeksi in ovo meningkatkan populasi mikroflora yang menguntungkan pada hari
menetas, dan menyebabkan tingkat Biffidobacteria yang tinggi dan stabil selama periode
pertumbuhan ayam broiler (Villaluenga et al., 2004). Juga, zat yang disuntikkan dalam dosis
yang sangat rendah lebih efektif dibandingkan dengan pemberian antibiotik dalam makanan
(Bednarczyk et al., 2011).

Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa pilihan terbaik untuk mempotensiasi efek ini
adalah dengan menggabungkan prebiotik dan probiotik (Sławińska et al., 2014). Campuran
tersebut dapat memiliki efek menguntungkan baik dengan meningkatkan kelangsungan
hidup dan implantasi suplemen makanan mikroba hidup dan dengan mempengaruhi
mikroflora yang sudah ada di saluran pencernaan (Gibson dan Roberfroid, 1995). Efek
sinergis dari prebiotik dan probiotik dapat berguna dalam meningkatkan kesehatan usus,
yang pada gilirannya dapat meningkatkan pemanfaatan pakan, dan dengan demikian
mempengaruhi pertumbuhan.

Meningkatkan status kesehatan usus juga dapat tercermin dalam metabolisme umum.
Suplementasi fruktan dari diet untuk ayam pedaging menghasilkan penurunan deposisi
lemak tubuh (Ammerman et al., 1989) dan konsentrasi kolesterol serum (Velasco et al.,
2010). Suplemen makanan inulin memiliki efek menguntungkan pada lipid serum darah
dengan menurunkan konsentrasi trigliserida dan meningkatkan kapasitas minyak bunga
matahari untuk meningkatkan asam lemak tak jenuh ganda rasio asam jenuh lemak
intramuskular pada ayam pedaging (Velasco et al., 2010). Meskipun sulit untuk menentukan
mekanisme yang menghubungkan mikrobiota saluran pencernaan dengan perubahan
metabolisme yang disebutkan di atas, harus diasumsikan bahwa ada crosstalk antara
mikrobioma usus dan metabolisme sistemik. Pra-, pro-, dan sinbiotik pada tikus mengurangi
lipogenesis di hati dan ginjal, glikogen hati dan glutamin, dan askorbat adrenal yang
membuktikan bahwa banyak proses metabolisme berada di bawah kendali homeostatik
simbiosis (Martin et al., 2009).

Salah satu faktor terpenting yang menentukan efisiensi makanan adalah aktivitas enzim
pankreas. Xu dkk. (2003) mengamati bahwa diet untuk ayam pedaging yang dilengkapi
dengan fructooligosaccharide mengubah aktivitas protease, lipase, dan amilase dalam
digesta usus kecil. Mereka menyarankan bahwa peningkatan aktivitas enzim terkait dengan
pengiriman bagian tambahan enzim oleh bakteri usus. Namun, kemungkinan tidak dapat
dikesampingkan bahwa perubahan yang diamati juga merupakan hasil dari peningkatan
aktivitas pankreas eksokrin. Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengkaji
bagaimana aplikasi in ovo 2 prebiotik dan prebiotik bersama-sama dengan probiotik
(sinbiotik) dapat menanamkan potensi enzimatik pankreas selama masa penggemukan.
Selain itu, kami melakukan penelitian jika perubahan aktivitas enzim dapat mempengaruhi
kinerja produksi ayam pedaging.

BAHAN DAN METODE

Studi ini mendapat persetujuan dari Komisi Etik Lokal Polandia (No. 22/2012 dan
21.06.2012) dan dilakukan sesuai dengan rekomendasi kesejahteraan hewan dari Arahan
Uni Eropa 125 86/609/EEC.

Perawatan di ovo
Telur ayam Ross 308 (ca 60 g), dikumpulkan dari kawanan breeder berumur 32 minggu
yang sama, diinkubasi di hatchery komersial (Drobex, Solec Kujawski, Polandia) dalam
inkubator Petersime. Pada hari ke-12, telur yang tidak subur dan yang embrionya mati
dibuang. Telur-telur yang mengandung embrio hidup secara acak dibagi menjadi 5 kelompok
(1.800 telur/kelompok), dan diperlakukan secara in ovo dengan larutan pre- dan sinbiotik.
Prosedur injeksi in ovo dilakukan dengan menggunakan sistem otomatis khusus
(Bednarczyk et al., 2011). Kelompok kontrol (Grup C) disuntik dengan salin fisiologis.
Kelompok prebiotik (Kelompok PI dan PB) disuntik dengan larutan inulin (1,76 mg)
(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) dan Bi2 tos (0,528 mg) (Clasado Ltd),
transgalacto-oligosakarida nondigestive. Kelompok sinbiotik (Kelompok SI dan SB)
masing-masing disuntik dengan 1,76 mg inulin atau 0,528 mg Bi2 tos, diperkaya dengan
bakteri probiotik yang berbeda. Kelompok SI menerima 1.000 cfu L. lactis ssp. lactis IBB
SL1 dan kelompok SB menerima 1.000 cfu L. lactis ssp. cremoris IBB SC1. Sinbiotik ini
dipilih berdasarkan percobaan sebelumnya (Bednarczyk et al., 2013; Slawinska et al., 2015).
Hewan
Setelah menetas, 3.250 ayam jantan (BW awal ca 42,0 g) dipilih untuk pemeliharaan dan
penyelidikan fisiologis di peternakan studi Universitas Warmia dan Mazury di Olsztyn
(Polandia). Kondisi pemeliharaan termasuk formulasi pakan dan periode pemberian pakan
konsisten dengan rekomendasi manajemen broiler Ross. Ayam ditempatkan di kandang
(3,75 m2) di serasah, dengan kepadatan awal (pada h 1) adalah 17,33 ekor per 1 m2.
Penelitian dilakukan sebanyak 10 kali pengulangan dalam kelompok. Hewan diberi makan,
ad libitum, pakan komersial standar yang diperoleh dari Agrocentrum (Kałęczyn, Polandia):
starter (hari 1 hingga 14), grower (hari 15 hingga 30), dan finisher (hari 31 hingga 34).
Komposisi ransum secara rinci ditunjukkan pada Tabel 1. Selama masa pemeliharaan, BB
semua ayam (d 14 dan 34) diperiksa dan asupan pakan dipantau.

Tabel 1. Komposisi dan analisis perhitungan diet (gram/kilogram as-fed basis).

Pemula Penanam Finisher

1 hingga 14 hari 15 hingga 30 hari 31 hingga 34 hari
Bahan
Gandum 267.3 291.9 306.6 30
Jagung 300.0 300.0 300.0
Tepung kedelai 325.0 282.0 253.3
Rapeseed 50,0 60,0 70,0
Minyak kedelai 21,0 13,3 18,0
Lemak babi – 20,0 25,0
Garam 3.0 3.0 2.8
Batu kapur 10,9 9,5 8,5
Monokalsium fosfat 11,5 9,4 6,3
DL-Metionin 99 2.5 1.8 1.3
L-Lisin 78 3.2 3.2 2.7
L-Treonin 0,6 0,9 0,5
Vitamin-mineral premix1 5.0 5.0 5.0
Tingkat nutrisi yang dihitung2
AME, kkal/kg 2.980 3.100 3.200
CP 220.0 205.0 195.0
Lemak mentah 60,9 77,0 90,4
Lisin 13,5 12,5 11,5
Metionin + sistein 9.5 8.5 7.8
Kalsium 9.0 8.0 7.0
Tersedia P 4.0 3.5 2.8
Na 1.4 1.4 1.3

1. Disediakan berikut per kilogram diet: vitamin A 12.500 IU, vitamin D3 4.500 IU, vitamin E
45 mg, vitamin K3 3 mg, vitamin B1 3 mg, vitamin B2 6 mg, vitamin B6 4 mg, asam
pantotenat 14 mg, asam nikotinat 50 mg, asam folat 1,75 mg, kolin 1,6 g, vitamin B12 0,02
mg, biotin 0,2 mg, Fe 50 mg, Mn 120 mg, Zn 100 mg, Cu 15 mg, I 1,2 mg, Se 0,3 mg, fitase
500 FTU, diclazuril 1 mg (hanya dalam diet pemula dan penumbuh).

2. Estimasi berdasarkan tabel analisis bahan pakan Polandia (Smulikowska dan Rutkowski,
2005).

Pengambilan Sampel Jaringan untuk Pengukuran Fisiologis

Burung dipilih secara acak untuk pemeriksaan fisiologis. Pada hari ke-1, 3, 7, 14, 21, dan
34, 10 ekor ayam jantan disembelih dengan cara dislokasi serviks, darah ditampung dalam
vial, dan serum darah diperoleh dengan cara sentrifugasi. Segera setelah pengambilan
darah, seluruh pankreas dari setiap burung dipotong dan dibekukan dalam nitrogen cair.
Pankreas dan serum darah disimpan pada suhu -80 ° C sampai diuji.
Analisis Enzim Pankreas
Pankreas beku ditimbang dan selanjutnya dihomogenkan sebentar dalam es dalam volume
yang sesuai dari Tris Buffered Saline (TBS) untuk mencapai homogenat 20%. Homogenat
yang diperoleh selanjutnya disentrifugasi (10.000 × g selama 30 menit pada suhu 4 ° C).
Untuk pemeriksaan lipase, supernatan diencerkan 100 kali menggunakan TBS dan aktivitas
lipase diukur dengan kit uji kolorimetri aktivitas lipase (BioVision, Milpitas, Amerika Serikat).
Untuk penyelidikan amilase, supernatan diencerkan 1.000 kali dengan buffer yang dipasok
secara komersial dan aktivitas amilase diukur dengan kit uji kolorimetri aktivitas amilase
(BioVision, Milpitas, Amerika Serikat). Aktivitas tripsin diukur menggunakan kit uji kolorimetri
aktivitas tripsin (BioVision, Milpitas, Amerika Serikat). Supernatan diencerkan 100 kali
menggunakan TBS dan diinkubasi (30 menit pada 37°C) dengan 1% enterokinase
(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); diencerkan dalam 0,1 M Tris-HCl dengan 0,1 M CaCl2, pH
7,2) untuk mengubah tripsinogen.

Suhu inkubasi seperti yang dijelaskan dalam manual; 25 °C untuk amilase dan tripsin, dan
37 °C untuk lipase. Hasil aktivitas enzim dihitung sebagai jumlah gliserol (lipase), nitrofenol
(amilase), dan p-nitroanilin (tripsin) yang dilepaskan dari substrat dan dinyatakan per
menit/seluruh pankreas.

Analisis Enzim Serum Darah

Aktivitas alanine aminotransferase (ALT) dan aspartate aminotransferase (AST) diukur
menggunakan kit Pointe Scientific komersial (Canton, Amerika Serikat) dan dinyatakan
dalam IU.

Analisis statistik
Semua data dianalisis menggunakan ANOVA satu arah (SPSS Inc., 2010). Rata-rata
dibandingkan dengan menggunakan uji jarak berganda Duncan. Data disajikan sebagai
mean ± SEM, dan nilai P <0,05 dianggap signifikan secara statistik.

HASIL
Selama periode dari penetasan hingga dewasa, kami telah melihat peningkatan aktivitas
total enzim intrapankreas (aktivitas dihitung per pankreas) yang terlibat dalam pencernaan
makanan. Perawatan in ovo dengan zat bioaktif yang diterapkan juga meningkatkan aktivitas
total hidrolase yang disimpan dalam pankreas.

Pengaruh prebiotik dan sinbiotik terhadap aktivitas amilase total (Gambar 1) terlihat jelas
pada hari ke 1, 7, 14, 21, dan 34. Efek positif inulin (PI) hanya terlihat dalam satu hari (21),
sedangkan Bi2 tos (PB) meningkatkan aktivitas total pada d 1 dan antara d 7 dan 21. Secara
bersamaan, perubahan yang disebabkan oleh kedua sinbiotik yang digunakan (SI dan SB)
berlangsung lebih lama, hingga kehidupan ke-34. Pengecualian adalah hari ketiga di mana
tidak ada penyimpangan antar kelompok.

Unduh: Unduh gambar ukuran penuh

Gambar 1. Pengaruh prebiotik dan sinbiotik terhadap aktivitas total amilase pankreas. C,
Kontrol; PI, Prebiotik 1 (inulin); PB, Prebiotik 2 (Bi2 tos); SI, Synbiotic 1 (inulin + Lactococcus
lactis ssp. lactis), SB−Synbiotic 2 (Bi2 tos + Lactococcus lactis ssp. cremoris). Nilai yang
disajikan adalah mean dan SEM untuk n = 10; perbedaan yang signifikan secara statistik
antara rata-rata ditandai untuk P <0,05 (huruf kecil yang berbeda) dan P <0,01 (huruf besar
yang berbeda).

Dalam kasus lipase (Gambar 2), perubahan signifikan secara statistik dimulai dari d 3. Pada
hari itu pengaruh pengobatan in ovo dengan PB dan kedua sinbiotik dapat dilihat. Setelah
hari ketiga, pengaruh yang signifikan secara statistik dari kedua prebiotik hanya terlihat pada
hari ke-34 kehidupan. Perubahan yang disebabkan oleh prebiotik, bagaimanapun, agak
ringan dan bahkan perbedaan penting secara statistik antara nilai rata-rata di bawah 11%.
Sebagai perbandingan, efek pengobatan in ovo dengan sinbiotik sangat ditekankan. Pada
hari ke 3 dan 7 setelah menetas efek dari kedua sinbiotik terlihat. Setelah itu, pada d 21 dan
34 pencetakan dengan SB jelas mendominasi.

Unduh: Unduh gambar ukuran penuh

Gambar 2. Pengaruh Prebiotik dan Sinbiotik Terhadap Aktivitas Total Lipase Pankreas. C,
Kontrol; PI, Prebiotik 1 (inulin); PB, Prebiotik 2 (Bi2 tos); SI, Synbiotic 1 (inulin + Lactococcus
lactis ssp. lactis); SB, Synbiotic 2 (Bi2 tos + Lactococcus lactis ssp. cremoris). Nilai yang
disajikan adalah mean dan SEM untuk n = 10; perbedaan yang signifikan secara statistik
antara rata-rata yang ditandai untuk P <0,05 (huruf kecil yang berbeda) dan P <0,01 (huruf
besar yang berbeda).

Juga, aktivitas tripsin total, mirip dengan amilase dan lipase, diubah oleh prebiotik dan
sinbiotik (Gambar 3) hampir selama seluruh waktu setelah penetasan. Ketinggian terutama
terlihat pada akhir periode pemeliharaan (h 34). Kelompok yang menerima senyawa bioaktif
menunjukkan nilai pada tingkat yang lebih tinggi daripada kelompok kontrol: PI hampir 90%,
PB di atas 100%, SI di atas 120%, dan SB di atas

Gambar 3. Pengaruh prebiotik dan sinbiotik terhadap aktivitas total tripsin pankreas. C,
Kontrol; PI, Prebiotik 1 (inulin); PB, Prebiotik 2 (Bi2 tos); SI, Synbiotic 1 (inulin + Lactococcus
lactis ssp. lactis); SB, Synbiotic 2 (Bi2 tos + Lactococcus lactis ssp. cremoris). Nilai yang
disajikan adalah sarana dan SEM n= 10; untuk signifikan secara statistik antara rata-rata
ditandai untuk P <0,05 (huruf kecil yang berbeda) dan P <0,01 (huruf besar yang berbeda).
Peningkatan potensi pencernaan pankreas yang diamati setelah pengobatan pra dan
sinbiotik bukanlah efek dari peningkatan berat kelenjar ini. Selama seluruh periode yang
diselidiki, zat bioaktif secara signifikan tidak mengubah berat absolut maupun relatif
pankreas (Tabel 2). Sementara menyebabkan peningkatan aktivitas enzim pankreas, tidak
ada pra dan sinbiotik yang mengubah rasio konversi pakan (FCR) atau menurunkan BW
ayam. Selama fase pertama penelitian (h 14) tidak ada perbedaan statistik yang terlihat
untuk BB (Kelompok kontrol−0,473 ± 0,009 g; kelompok PI−0,464 ± 0,012 g; kelompok
PB−0,478 ± 0,007 g; kelompok SI−0,475 ± 0,011g ; kelompok SB−0,472 ± 0,011 g). Namun,
2 aditif bioaktif yang digunakan secara in ovo (PB dan SI) secara signifikan meningkatkan
bobot akhir (d 34; Tabel 2). Secara bersamaan, beberapa aditif, terutama PB dan SI
menyebabkan sedikit peningkatan (secara statistik tidak signifikan) dari asupan pakan
harian rata-rata per burung (d 1 hingga 34; Kelompok kontrol, 91,08 ± 2,32 g; Kelompok PI,
89,71 ± 2,02 g; PB kelompok, 93,07 ± 2,36 g; kelompok SI, 93,22 ± 2,81g; kelompok SB,
92,043 ± 3,80 g).Tabel 2. Bobot absolut (AW, mg), bobot relatif (RW, mg/100 g BB) pankreas
ayam1, BB akhir (g)2, dan rasio konversi pakan (FCR, kg/kg).2,3

Kelompok/item1 d3 d7 d14 d21 d34 dBW2FCR2C, Control2.064 ± 0.213a1.569 ±

0.033AW56.1 ± 4.0319.7 ± 12.4538.3 ± 31.01.397.3 ± 93.92.952.3 ± 206.5a,b4.637.2 ±
315.07. 7 ± 10.2392.1 ± 27.5406.3 ± 23.5406.4 ± 26.8329.6 ± 16.2185.7 ± 11.1PI, Prebiotik
1 (inulin)2.061 ± 0.229a1.554 ± 0.038AW57.2 ± 6.4318.2 ± 16.2497.6 ± 43.01,460.7 ±
86.22.581.2 ± 111.6a4.451,3 ± 257.1RW137,6 ± 14,4416,3 ± 19.8391,3 ± 34,7443,9 ±
30,4304,1 ± 6,9176,2 ± 13,2PB, Prebiotik 2 (Bi2 tos)2.140 ± 0,232 b1.557 ± 0.038AW57.2 ±
5.0312.7 ± 18.3572.5 ± 48.51,378.7±66.13,144.8 ± 174.0b4.273.0 ± 170.2RW142.2 ±
11.3436,4 ± 31.8434,4 ± 41.0389.3 ± 20.5339.4 ± 16.5167.4 ± 9.4SI, Synbiotic 1 (inulin
+ Lactococcus lactis ssp. lactis)2.120 ± 0.240b1.566 ± 0.048AW54.6 ± 5.3284.2 ± 22.3557.7
± 34.21.319.8 ± 105.82.618.7 ± 150.3a4, 390.4 ± 233.9RW141.9 ± 13.4379.2 ± 30.6401.9 ±
20.9401.3 ± 21.9286.9 ± 26.6195,8 ± 9.3SB, Synbiotic 2 (Bi2 tos + Lactococcus
lactis ssp. cremoris)2.093 ± 0.248a,b1.561 ± 0,031AW55.7 ± 4.0288.4 ± 10.6542.8 ±
39.01,337.3 ± 82.22.653.7 ± 110.4a4.184,3 ± 127.3RW136,2 ± 10.7325.3 ± 31.5418.7 ±
26.3403,1 ± 23.0289.6 ± 10.6176,4 ± 11.0
1

Nilai adalah sarana dan SEM; n = 10.

BW diukur pada d 34, FCR diukur d hari 1 sampai 34. Nilai adalah mean dan SEM untuk
442 (C), 434 (PI), 436 (PB), 439 (SI), dan 435 (SB) hewan.
3

Garam dan senyawa terlarut dalam garam disuntikkan secara in ovo pada inkubasi hari
ke-12.

a, b

Perbedaan yang signifikan secara statistik (secara vertikal) ditandai untuk P <0,05.

Secara umum, tidak ada perubahan signifikan yang terlihat pada aktivitas ALT atau AST
serum darah, yang dapat dianggap sebagai indikator gangguan fungsi hati (Tabel 3).
Beberapa peningkatan yang signifikan secara statistik dibandingkan dengan kontrol hanya
terlihat pada d 1 (AST: kelompok SI) dan pada d 3 (AST: kelompok SB). Lebih sering,
penurunan aktivitas yang signifikan secara statistik ditunjukkan: d 7 (Grup ALT: PB, SI, dan
SB), d 21 (Grup ALT: SI dan SB), dan d 34 (Grup ALT: PB, SI dan SB; AST: kelompok SI dan
SB).

Tabel 3. Aktivitas serum alanin (ALT) dan aspartat aminotransferase (AST) pada ayam
broiler (IU/L).1

ALTCPIPBSISBd 14.00 ± 0.303.93 ± 0.654.55 ± 0.793.89 ± 0.413.45 ± 0.48d 39.84 ±

1.3212.11 ± 0.9913.33 ± 0.9312.57 ± 1.3513.87 ± 1.45d 78.91 ± 0.42B,b8.46 ± 0.49b,d5.15
± 0.71A,a,e6.74 ± 0.75a,d4.69 ± 0.68A,b,cd 142.53 ± 0.562.56 ± 0.331.64 ± 0.312.76 ±
0.412.92 ± 0.51d 214.58 ± 0.46B3.74 ± 0.504.18 ± 0.412.85 ± 0.14A3.01 ± 0.53Ad 342.65 ±
0.42b1.79 ± 0.49a,b1.55 ± 0.40a1.35 ± 0.31a1.72 ± 0.30aASTCPIPBSISBd 129.72 ± 2.87
a27.63 ± 1.30a32.75 ± 1.91a,b37.81 ± 2.60b33.00 ± 1.44a,bd 326.19 ± 1.95a29.57 ±
1.69a,b29.88 ± 0.75a,b27.87 ± 1.59a,b32 .55 ± 2.02bd 737.99 ± 1.4835.38 ± 1.0539.60 ±
1.5537.66 ± 1.5939.80 ± 3.52d 1429.66 ± 1.6233.08 ± 1.3527.40 ± 1.2129.55 ± 1.3530.50 ±
0.98d 2137.19 ± 1.89a, b35.60 ± 2.22a33.68 ± 1.93a33.33 ± 1.84a42.70 ± 3.25bd 3442.37 ±
2.44b39.69 ± 3.33a,b46.98 ± 4.82b35.85 ± 1.55a35.23 ± 1.11a

Garam dan senyawa terlarut dalam garam disuntikkan secara in ovo pada inkubasi hari
ke-12. C, Kontrol; PI, Prebiotik 1 (inulin); PB, Prebiotik 2 (Bi2 tos); SI, Synbiotic 1 (inulin
+ Lactococcus lactis ssp. lactis); SB, Synbiotic 2 (Bi2 tos + Lactococcus
lactis ssp. cremoris). Nilai yang disajikan adalah mean dan SEM untuk n = 10.

A, B

Perbedaan yang signifikan secara statistik (secara horizontal) ditandai untuk P < 0,01.

a-e

Perbedaan yang signifikan secara statistik (secara horizontal) ditandai untuk P <0,05.

DISKUSI
Sudah diterima secara luas bahwa simbiosis antara bakteri usus dan hewan memiliki efek
positif pada pemeliharaan homeostasis. Data modern menunjukkan setidaknya beberapa
area yang dapat dipengaruhi oleh gangguan mikroflora usus; misalnya fungsi hati, jaringan
lemak, ginjal, dan pankreas (Martin et al., 2009). Oleh karena itu, sangat penting untuk
menciptakan lingkungan yang tepat bagi mikroorganisme dalam usus dengan suplementasi
prebiotik atau menyediakan bakteri menguntungkan itu sendiri sebagai probiotik. Di satu sisi,
ada sedikit penelitian tentang zat bioaktif yang diberikan lebih awal selama embriogenesis,
tetapi percobaan sebelumnya mendokumentasikan bahwa inokulasi in ovo memberikan efek
menguntungkan pada pengembangan mikrobioma usus yang sesuai (Villaluenga et al.,
2004; Pilarski et al., 2005; Sławińska et al., 2014). Mekanisme kerja zat bioaktif yang
disuntikkan secara in ovo sangat kompleks (Sławinska et al., 2014), tetapi para peneliti
masih memperkirakan efek positifnya terhadap pertumbuhan organisme dan BB. Sinbiotik
yang digunakan dalam makalah ini dipilih dari beberapa kombinasi pra dan probiotik dengan
uji in vitro, diikuti dengan validasi dengan model hewan (Bednarczyk et al., 2013; Slawinska
et al., 2015).

Hasil yang disajikan dalam penelitian ini menunjukkan bahwa beberapa PB dan SI yang
disuntikkan secara in ovo meningkatkan BW akhir ayam yang diperiksa (Tabel 2),
sedangkan yang lain (PI dan SB) tidak efektif. Dapat diduga bahwa peningkatan berat badan
yang diamati setelah PB dan SI merupakan efek kumulatif dari perbedaan FCR (penurunan)
dan rata-rata konsumsi pakan harian (kenaikan) yang kecil, secara statistik tidak signifikan.
Secara bersamaan, dijelaskan dalam makalah peningkatan aktivitas enzim pankreas
mungkin merupakan faktor positif yang mempengaruhi konsumsi pakan, FCR, dan BW akhir.
Investigasi sebelumnya dengan prebiotik dan probiotik yang diberikan secara in ovo tidak
memberikan hasil konklusif yang menunjukkan tindakan peningkatan pertumbuhan.
Sławińska dkk. (2014), menunjukkan efek imunomodulator, tidak menyatakan pengaruh
sinbiotik (terdiri dari oligosakarida famili rafinosa prebiotik dan probiotik Lactobacillus lactis
atau Lactobacillus acidophilus plus Streptococcus faecium) terhadap bobot badan ayam.
Sebelumnya, Maiorano dkk. (2012) tidak melaporkan pengaruh oligosakarida keluarga
raffinose (RFO) dan sinbiotik (RFO plus Lactococcus lactis ssp. lactis SL1, RFO plus
Lactococcus lactis ssp. cremoris IBB SC1, laktosa plus Lactobacillus acidophilus dan
Streptococcus faecium) pada BW akhir. Selain itu, percobaan lapangan yang dilakukan pada
total 222.400 ayam Cobb 500, Ross 708, dan Hubbard tidak secara tegas membuktikan
tingkat pertumbuhan yang lebih baik setelah RFO disuntikkan secara ovo (Bednarczyk et al.,
2011).

Hasil yang diperoleh dengan menggunakan teknologi in ovo dapat dibandingkan dengan
penelitian di mana zat bioaktif ditambahkan langsung ke pakan. Seringkali, jenis eksperimen
terakhir tidak memberikan hasil yang meyakinkan tetapi menunjukkan efek yang kontradiktif.
Beberapa penelitian membuktikan bahwa ayam pedaging yang diberi diet dengan
fructooligosaccharides menunjukkan peningkatan tubuh yang lebih baik dibandingkan
dengan hewan kontrol (Ammerman et al., 1989; Xu et al., 2003; Rebole et al., 2010).
Namun, berbeda dengan penelitian ini, dalam beberapa percobaan lain suplementasi diet
dengan inulin atau fructooligosaccharides terbukti tidak efektif (Waldroup et al., 1993; Biggs
et al., 2007; Williams et al., 2008). Ada sedikit informasi mengenai efek
galactooligosaccharides pada penambahan berat badan pada ayam. Jung dkk. (2008)
menunjukkan efek menguntungkan mereka sebagai aditif makanan pada stimulasi selektif
mikroflora tinja ayam pedaging; namun, tidak ada perbedaan signifikan dalam BB, asupan
pakan, atau FCR yang terlihat.

The efficacy of prebiotics as growth promoters may also be influenced by other factors not
directly related to their contents in the feed. We believe that the method of bioactive
substance administration could also be important. The colonization of the gastrointestinal
tract by beneficial microflora should occur as soon as possible after hatching. Inoculations of
one day old chicken with prebiotics or probiotics have been shown to promote beneficial
microbial population and to reduce Salmonella and Campylobacter (Nisbet, 1998; Fukata et
al., 1999). However, the in ovo injection technology we applied in our study allows us to
influence the microbiological status before hatching. The results concerning the BW of
broilers presented in our study confirm the efficacy of this method of administration.

Pemanfaatan bahan pakan yang efisien membutuhkan adanya enzim yang sesuai dalam
saluran pencernaan. Enzim dengan aktivitas tertinggi dalam pencernaan pati, protein dan
trigliserida disintesis di pankreas dan disimpan dalam butiran zymogen. Aktivitas enzim
pankreas mungkin mencerminkan potensi kemampuan pencernaan. Kadhim dkk. (2011)
membandingkan aktivitas amilase, tripsin, dan kimotripsin pada 2 breed ayam yaitu ayam
hutan merah dan ayam broiler komersial. Mereka mengamati bahwa pada ayam pedaging
yang tumbuh lebih cepat, aktivitas enzim secara signifikan lebih tinggi baik di pankreas
maupun di usus. Dalam penelitian kami, semua aktivitas enzim pankreas meningkat pada
ayam pedaging setelah injeksi in ovo (Gambar 1-3). Adapun amilase dan tripsin,
peningkatan aktivitas enzim diamati pada hari pertama kehidupan, yang mungkin
mengindikasikan stimulasi perkembangan pankreas selama inkubasi telur. Namun,
peningkatan aktivitas enzim yang paling signifikan diamati pada hari ke 34 setelah menetas.
Mengingat hasil ini, salah satu alasan untuk BW ayam yang lebih tinggi dari kelompok PB
dan SI mungkin adalah pencernaan bahan pakan yang lebih baik; namun, pengurangan
FCR tidak signifikan secara statistik. Perlu ditekankan bahwa peningkatan aktivitas total
enzim pankreas tidak terkait dengan peningkatan berat absolut dan relatif pankreas (Tabel
2). Ini mungkin menunjukkan bahwa aditif yang digunakan tidak menyebabkan hiperplasia
atau hipertrofi pankreas dan sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Awad et al.
(2009), yang menunjukkan bahwa berat pankreas bahkan lebih rendah setelah diberi makan
dengan penambahan sinbiotik (Biomin IMBO) dan sedikit dikurangi dengan probiotik
(Lactobacillus sp.). Juga, Abdel-Raheem dan Abd-Allah (2011) melaporkan bahwa prebiotik
mannan oligosakarida dan probiotik Saccharomyces cerevisiae yang diberikan secara
terpisah mengurangi massa pankreas, meskipun digunakan bersama sebagai sinbiotik,
mereka meningkatkan berat organ ini. Efek terakhir tidak terjadi dalam penelitian kami ketika
metode pemberian lain dan jenis sinbiotik lain digunakan. Secara umum, sedikit yang
diketahui tentang pengaruh pra-, pro-, dan sinbiotik pada fungsi pankreas eksokrin dan
aktivitas enzim pankreas. Sejauh ini, belum ada penelitian serupa yang mempertimbangkan
pengaruh pra dan probiotik yang diberikan secara in ovo terhadap aktivitas enzim pankreas;
karenanya, penelitian kami memiliki karakter inovatif. Mekanisme dimana sinbiotik dapat
mempengaruhi aktivitas enzim tidak ditetapkan. Namun, penelitian kami mendukung konsep
bahwa proses metabolisme utama berada di bawah kendali homeostatik simbiosis (Martin et
al., 2009).

KESIMPULAN
Sebagai kesimpulan, penelitian ini menunjukkan efek menguntungkan dari prebiotik dan
sinbiotik yang diinokulasi secara in ovo. Bi2 tos dan inulin diberikan bersama Lactococcus
lactis ssp. saat disuntik in ovo pada hari ke-12 perkembangan embrio ayam meningkat BB
pada akhir masa pemeliharaan. Secara bersamaan, senyawa yang diselidiki secara
signifikan meningkatkan aktivitas total enzim pankreas; amilase, lipase, dan tripsin. Ini
mungkin menjelaskan efek positif dari aditif pada BW. Secara umum, semua campuran yang
disuntikkan meningkatkan aktivitas enzim pada titik waktu yang berbeda, tetapi yang paling
kuat untuk stimulasi aktivitas amilase dan tripsin adalah sinbiotik dan untuk lipase sinbiotik
Bi2 tos plus bakteri. Peningkatan aktivitas enzim yang disimpan dalam pankreas tampaknya
tidak terkait dengan gangguan negatif pada pankreas seperti hiperplasia atau hipertrofi
karena berat organ yang tidak meningkat. Juga, aktivitas 2 penanda enzimatik yang
diselidiki (ALT dan AST) tidak berubah, yang membuktikan bahwa status kesehatan hati
tidak terganggu.

Ucapan Terima Kasih

Studi ini dibiayai oleh Grant No. UMO-2011/01/B/NZ9/00642 377 dari National Science
Center di Cracow (Polandia), dan sebagian oleh proyek “THRIVE RITE–Natural Compounds
to Enhance Productivity, Quality, and Health dalam Sistem Pertanian Intensif,” sebuah
kolaborasi penelitian yang didanai Uni Eropa, Proyek FP7 No. 315198.
Kami ingin mengucapkan terima kasih kepada Goerge Tzortis (Clasado Ltd., Malta) yang
telah memberikan kami prebiotik Bi2 tos komersial, dan Jacek Bardowski dan Joanna
Żylińska (Institute of Biochemistry and Biophysics, Polish Academy of Sciences di Warsawa)
untuk strain bakteri.