A.

Prosedur Kerja Alat HPLC

Prinsip kerja HPLC adalah pemisahan komponen analit

berdasarkan kepolarannya, setiap campuran yang keluar akan
terdeteksi dengan detektor dan direkam dalam bentuk kromatogram.
Dimana jumlah peak menyatakan jumlah komponen, sedangkan luas
peak menyatakan konsentrasi komponen dalam campuran

HPLC merupakan jenis dari kromatografi kolom dan bekerja

dengan prinsip yang sama. Prinsip utama dari kromatografi kolom
adalah adanya adsorbsi (penempelan permukaan) dari solut (cairan
sampel) ke dalam larutan melalui fase diam yang menyebabkan
adanya pemisahan solut dengan larutan. Tingkat adsorbsi
tergantung pada afinitas dari fase diam dan fase gerak. Fase diam
terdiri dari adsorben seperti silika.

HPLC berfungsi sama dengan prinsip kromatografi diatas.

Campuran sampel atau analit yang terlarut dalam cairan larutan
dipompa. Ini akan menjadi fase geraknya, jadi analit masuk ke dalam
fase gerak. Larutan fase gerak ini karena dipompa maka bergerak
melewati fase diam dengan tekanan yang tinggi. Fase diam terdiri
dari kolom atau disebut juga kolom HPLC. Ketika sampel dilewatkan
pada kolom maka akan berinteraksi dengan dua fase tersebut (fase
diam dan fase gerak).

Prinsip kerja HPLC adalah pemisahan komponen analit

berdasarkan kepolarannya, setiap campuran yang keluar akan
terdeteksi dengan detektor dan direkam dalam bentuk kromatogram.
Dimana jumlah peak menyatakan jumlah komponen, sedangkan luas
peak menyatakan konsentrasi komponen dalam campuran.
 Contoh Kromatogram HPLC
Interkasi analait pada fase diam dan fase gerak menyebabkan
pemisahan. Pemisahan ini didorong oleh kekuatan interaksi dan
kepolaran. Bila analit lebih polar dia akan menempel ke fase yang
lebih polar, bila fase diam lebih polar maka analit akan banyak
menempel di dase diam. Akhirnya akan menciptakan pemisahan-
pemisahan fase. Deteksi menggunakan detektor (UV-VIS) akan
mengenali pemisahan analit ini setelah melewati kolom HPLC. SIgnal
akan dikonversi dan direkam oleh komputer dan ditunjukkan menjadi
kromatogram.
 Daftar Puastaka :

https://www.knauer.net/Application/application_notes/VSP0019_HPLC%20Basics%20-
%20principles%20and%20parameters_final%20-web-.pd