1
Pengaruh Waktu dan pH Inkubasi Terhadap Aktivitas
Enzim Keratinase dari Isolat Bacillus SLII-I
Adam dan Maya Shovitri
Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember
(ITS)
Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
E-mail : maya@bio.its.ac.id
Abstrak— Genus Bacillus merupakan bakteri penghasil
enzim keratinase yang mampu memutus ikatan disulfida
pada protein keratin menjadi protein terlarut. Keratin
adalah protein yang menyusun struktur kulit, rambut,
bulu, kuku, tanduk, dan struktur luar vertebrata lainnya
yang bersifat tidak larut. Tujuan dari penelitian ini adalah
mengetahui faktor fisik yang terdiri dari waktu dan pH
inkubasi ekstrak enzim kasar dari isolat Bacillus SLII-I
untuk mendapatkan aktivitas enzim keratinase yang
optimum. Kultur isolat untuk pembuatan ekstrak enzim
kasar diambil pada jam ke-25. Ekstrak enzim kasar
didapatkan dengan sentrifugasi dengan kecepatan 10.000
rpm pada suhu 40C. Aktivitas enzim diinkubasi pada suhu
400C dan diukur dengan spektrofotometer pada panjang
gelombang 280 nm dan dihitung menggunakan rumus Ali .
Kombinasi faktor fisik yang terbaik adalah waktu
inkubasi 30 menit dan pH 9 dengan aktivitas enzim
keratinase sebesar 3,151 unit/ml.
Kata Kunci—Bacillus SLII-I, keratinase, waktu
inkubasi, pH, dan suhu.
I. PENDAHULUAN
M ASALAH utama dalam peningkatan produksi ternak
unggas adalah penyediaan pakan sumber protein hewani
yang harganya relatif mahal. Untuk memenuhi kebutuhan
pakan Indonesia masih mengimpor dari luar negeri karena
produk dalam negeri belum mampu memenuhi kebutuhan
yang ada, sehingga harganya sangat mahal dibanding bahan
pakan lain. Untuk menekan biaya pakan dan mengefisiensikan
pakan diusahakan memanfaatkan limbah pertanian ataupun
peternakan [34].
Salah satu produk pengolahan hasil peternakan yang belum
dimanfaatkan secara optimal sebagai bahan pakan ternak
adalah limbah bulu ayam. Bulu ayam merupakan salah satu
limbah dari usaha pemotongan ayam. Konsumsi daging ayam
di Jawa Timur pada tahun 1999 sebesar 25.924.000 kg [7]
meningkat menjadi 65.429.000 kg pada tahun 2011 [8].
Pemotongan ayam menghasilkan rata-rata bulu sebanyak 4-
9% dari total berat ayam [1], [21]. Beban limbah padat yang
dihasilkan industri peternakan ayam di Jawa Timur sebesar
121.793 ton pada tahun 1998 [36]. Limbah bulu ayam yang
dihasilkan akan terus meningkat seiring peningkatan
kebutuhan masyarakat akan konsumsi daging ayam. Limbah
bulu ayam biasanya dibuang, dipendam, digunakan sebagai
land filling atau dibakar. Hal ini dapat menyebabkan masalah
pengontrolan emisi dan pembuangan abu. Jika limbah yang
terus bertambah tidak dikelola dengan baik maka akan
menimbulkan dampak pencemaran terhadap lingkungan [19].
Bulu ayam merupakan limbah peternakan yang dapat
dijadikan sebagai bahan pakan alternatif pengganti sumber
protein hewani dalam formulasi ransum ayam (unggas). Hal
ini disebabkan karena bulu ayam memiliki kandungan protein
cukup tinggi. Menurut [27], protein kasar tepung bulu ayam
mencapai 86,5% dan energi metabolis 3.047 kcal/kg.
Demikian juga menurut [32], bulu ayam mengandung protein
kasar cukup tinggi, yakni 82 – 91 % , kadar protein jauh lebih
tinggi dibanding tepung ikan.
Salah satu jenis protein yang terdapat pada limbah bulu
ayam adalah keratin. Keratin adalah protein yang terdapat
pada kulit, wool, rambut, tanduk, lapisan stratum korneum.
Protein ini sangat sulit untuk dirombak dan resisten terhadap
perlakuan fisik, kimia, dan biologis, karena ikatan disulfida
dan ikatan hidrogen yang kuat [20].
Protease merupakan enzim yang paling penting, karena 60%
dari hasil produksi industri enzim di seluruh dunia adalah
protease [31]. Keratinase termasuk kelompok enzim protease
yang dapat menghidrolisis keratin, sehingga memainkan
peranan penting dalam industri penyamakan kulit [37]. Di
seluruh dunia diperkirakan bahwa 315 juta kulit diproduksi
setiap tahunnya dengan biaya pengolahan limbahnya sebesar
USD 1 juta per hari [26]. Penghilangan bulu secara enzimatik
dalam penyamakan kulit telah dipertimbangkan sebagai suatu
alternatif untuk menghindari penggunaan sulfit yang bersifat
racun dan menimbulkan polusi [30].
Permasalahan utama yang sering timbul pada bidang
industri adalah sifat enzim yang mudah rusak pada suhu
kamar, sehingga harus disimpan pada suhu rendah. Di sisi lain
aplikasi enzim dalam bioteknologi memerlukan suhu tinggi.
Bakteri Bacillus mendapat perhatian utama dalam
bioteknologi karena mampu tumbuh pada kisaran suhu dan pH
yang luas dan relatif mudah untuk isolasi dari berbagai macam
lingkungan serta mampu tumbuh dalam media sintetik [18].
Genus Bacillus merupakan salah satu bakteri yang mempunyai
berbagai macam kemampuan yang dapat dikemangkan dalam
dunia industri. Menurut [6], Bacillus sangat potensial untuk
dikembangkan dalam industri bioteknologi karena mempunyai
sifat sifat yang unggul seperti kisaran pertumbuhan yang luas,
pembentukan spora, memiliki range habitat yang luas, tahan
terhadap senyawa antiseptik, bersifat aerob atau fakultatif
aerob, memiliki kemampuan enzimatik yang beragam, dan

beberapa diantaranya mampu melakukan biodegradasi
terhadap banyak senyawa xenobiotik.
Isolat Bacillus SLII-I adalah isolat bakteri koleksi
Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Jurusan Biologi
FMIPA ITS yang diisolasi dari kawah Dieng, Jawa Tengah.
Isolat Bacillus SLII-I mampu hidup pada media minimal
feather meal sehingga diduga mampu mendapatkan sumber C
(karbon) dari keratin bulu ayam yang terdapat pada media
minimal tersebut. Dari penelitian terdahulu isolat ini memiliki
potensi menghasilkan enzim keratinase pada suhu 400C. [3]
melaporkan Bacillus termofilik paling potensial menghasilkan
keratinase dan bersifat termostabil. Menurut [35], kemampuan
bakteri dalam menghasilkan enzim keratinase dapat
ditingkatkan dengan menambahkan pepton 1% ke dalam
media pertumbuhannya.
II. METODE PENELITIAN
Penelitian dilakukan pada bulan Mei sampai Juni 2013 di
Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Jurusan Biologi
FMIPA ITS dan Institute of Tropical Disease Universitas
Airlangga.
A. Pembuatan Tepung Bulu Ayam
Tepung bulu ayam yang digunakan sebagai sumber keratin
dibuat mengikuti metode [2] yang telah dimodikasi. Bulu
ayam dicuci hingga bersih dan direbus selama 2-3 jam,
kemudian dioven selama 8 jam pada suhu 50oC. Bulu ayam
yang telah kering, digiling, digerus dengan mortar dan
disaring sehingga menjadi sebagai tepung bulu ayam.
B. Pembuatan Starter
Pembuatan starter isolat Bacillus SLII-I dilakukan sesuai
modifikasi metode [22] yang dilakukan secara bertahap. Isolat
Bacillus SLII-I dari media padat Nutrient Agar diambil
sebanyak 1 ose dan dimasukkan dalam 10 mL media FM
modifikasi. Selanjutnya biakan diinkubasi selama 24 jam
dengan rotary shaker pada kecepatan 120 rpm dan pada suhu
ruangan. Setelah itu 5 ml biakan dipindahkan ke media FM
modifikasi baru sebanyak 45 ml dan diinkubasi kembali pada
kondisi yang sama seperti kondisi diatas. Sebanyak 10 ml
biakan kemudian dipindahkan lagi ke dalam 90 ml media FM
modifikasi baru dan diinkubasi dengan kondisi yang sama.
Biakan tersebut diambil sebanyak 20 ml dipindahkan lagi ke
dalam media FM modifikasi baru sejumlah 180 ml serta
diinkubasi dengan kondisi yang sama. Hasil terakhir biakan
digunakan sebagai kultur starter.
C. Pembuatan Kurva Pertumbuhan 24 Jam
Sebanyak 25 ml kultur starter dimasukkan kedalam 225 ml
media FM modifikasi dan diinkubasi selama 24 jam. Setiap
jam diukur pertumbuhannya secara spektrofotometri, yaitu
dengan mengukur nilai absorbansi optical density
mengunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 600
nm. Pengukuran dilakukan dengan cara biakan diambil
sebanyak 0,2 ml lalu diencerkan dengan menambahkan
akuades steril sebanyak 1,8 ml lalu dihomogenkan. Langkah
selanjutnya biakan dimasukkan ke kuvet untuk diukur nilai
optical density dengan spektrofotometer. Untuk blanko
2
digunakan media kosong dengan pengenceran 10 kali
menggunakan akuades steril (0,2 ml media minimal FM
modifikasi tanpa isolat ditambah 1,8 ml akuades steril).
Pengambilan sampel dilakukan tiap jam mulai dari jam ke-0
sampai jam ke-24 [5].
D. Kultur isolat Bacillus SLII-I
Starter isolat Bacillus SLII-I sebanyak 25 ml diinokulasikan
ke dalam 225 ml media FM modifikasi baru di Erlenmeyer
500 ml dengan pH 7 dan diinkubasi dengan shaker inkubator
dengan kecepatan 120 rpm selama 24 jam dan dilakukan
pengulangan sebanyak tiga kali [22]. Pengkondisian pH 7
pada media dilakukan dengan cara menambahkan larutan HCl
atau NaOH 1 N ke media FM modifikasi. Setelah penambahan
HCl atau NaOH 1N, media kemudian disterilisasi dengan
autoklaf pada suhu 1210C, tekanan 1 atm selama 15 menit [9].
E. Persiapan Ekstrak Enzim Kasar
Pembuatan ekstrak enzim kasar diambil dari hasil biakan
yang dihomogenasikan lalu dimasukkan ke dalam tabung
sentrifugasi sebanyak 30 ml biakan dari ketiga pengulangan
kultur. Biakan tersebut disentrifugasi dengan kecepatan
10.000 rpm selama 10 menit pada suhu 4oC. Supernatan yang
didapatkan merupakan ekstrak enzim kasar untuk pengukuran
aktivitas keratinase dan disimpan dalam ice box [5].
F. Uji Aktivitas Enzim
Ekstrak enzim kasar yang didapatkan dari sentrifugasi
biakan ditambahkan tepung bulu ayam sebanyak 20 mg yang
dilarutkan dalam larutan buffer dengan perbandingan ekstrak
enzim dengan larutan buffer sebesar 1:4 (200 ul ekstrak enzim
: 800 ul larutan buffer). Untuk mendapatkan pH 5 digunakan
0.2 M sodium acetate buffer, pH 7 digunakan 0.2 M phosphate
buffer, pH 8 dan 9 digunakan 0.2 M Tris-HCl buffer [5].
Larutan diinkubasi sesuai kelompok perlakuan waktu inkubasi
(30, 60, 90, dan 120 menit). Sedangkan untuk mendapatkan
suhu 40oC dilakukan dengan pengaturan suhu pada waterbath.
Setelah diinkubasi, larutan didinginkan dalam air es selama 10
menit, lalu disaring dengan kertas Whatman nomor 42.
Absorbansi larutan diukur menggunakan spektrofotometer
pada panjang gelombang 280 nm [11]. Satu unit aktivitas
enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menyebabkan
peningkatan 0,01 unit absorbansi per waktu pengukuran [5].
Aktivitas keratinase ditentukan berdasar rumus [4] :
Aktivitas (Unit/ml) = (4 x n x A 280)
(0.01 x T)
G. Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode rancangan acak lengkap
faktorial dengan tiga faktor yang saling dikombinasikan.
Faktor tersebut adalah waktu inkubasi (30, 60, 90, dan 120
menit) dan pH (5, 7, 8, dan 9) saat pengukuran aktivitas enzim
keratinase. Ulangan terdiri dari 3 biakan kultur isolat Bacillus
SLII-I, tiap ulangan kultur dibuat 2 kali pengukuran ekstrak
enzim. Kombinasi yang menghasilkan aktivitas enzim
tertinggi dipilih sebagai kondisi paling optimum.
F. Analisa Data

Data dianalisa dengan Analysis of Varian (ANOVA) dan
dilanjutkan dengan Uji Duncan dengan selang kepercayaan
95%.
III. HASIL DAN DISKUSI
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui faktor fisik yang
terdiri dari waktu, pH, dan suhu inkubasi ekstrak enzim kasar
(crude enzyme) dari isolat Bacillus SLII-I untuk mendapatkan
aktivitas enzim keratinase yang optimum. Medium yang
digunakan dalam penelitian ini adalah Medium Minimal
Feather Meal dengan Pepton 1% (FM Modifikasi). Menurut
[14], isolat Bacillus merupakan salah satu bakteri penghasil
enzim keratinase. Enzim tersebut akan memutuskan ikatan
disulfida pada protein keratin. Keratin merupakan protein
yang terdapat pada bulu, rambut, kulit, kuku, tanduk, sisik,
dan berbagai bagian tubuh makhluk hidup lainnya yang
bersifat tidak larut dalam air (insoluble).
A. Kurva Pertumbuhan Isolat Bacillus SLII-I
Kurva pertumbuhan diperlukan untuk mengetahui waktu
yang tepat untuk panen kultur Bacillus SLII-I yang akan
dipakai sebagai sumber ekstrak enzim kasar. Hasil pengukuran
kurva pertumbuhan isolat Bacillus SLII-I dapat dilihat pada
Gambar 1.
Gambar 1. Kurva pertumbuhan isolat Bacillus SLII-I 24 jam pada media
minimal FM modifikasi.
Fase pertama adalah fase lag yang terjadi dari jam ke-0
setelah inokulasi hingga jam ke-4. Fase ini, ditandai dengan
penambahan jumlah sel yang sebanding dengan jumlah sel
yang mati sehingga kurva berbentuk linier. Fase lag
merupakan suatu periode penyesuaian yang sangat penting
untuk menyesuaikan sistem enzimatis terhadap lingkungan
baru bagi sel isolat agar dapat memanfaatkan nutrisi dengan
optimal untuk pertumbuhannya.
Pada jam ke-5 hingga jam ke-12 merupakan fase
eksponensial, dimana terlihat sel tumbuh secara pesat. Pada
fase ini sel isolat Bacillus SLII-I telah beradaptasi terhadap
lingkungannya sehingga dapat memanfaatkan nutrisi yang
terkandung dalam media secara optimal untuk
pertumbuhannya.
Fase stasioner terjadi pada jam ke-12 hingga jam ke-16.
Fase stasioner adalah fase dimana jumlah sel yang membelah
dan mati relatif sama. Pada media minimal FM modifikasi,
fase stasioner isolat Bacillus SLII-I terlihat pendek, hal ini
mungkin karena media yang digunakan adalah media minimal
yang berisi mineral mineral mikromolekul kebutuhan dasar
bakteri dengan sumber C hanya dari penambahan pepton 1%.
Setelah jam ke-16 hingga jam ke-19 merupakan fase
kematian. Pada fase ini kurva terlihat menurun, menunjukkan
3
bahwa jumlah sel yang mati lebih banyak daripada sel yang
hidup. Hal ini mungkin berhubungan dengan sumber C pepton
pada media mulai habis sehingga populasi bakteri menurun.
Menuju ke jam 20 hingga jam ke-24 kurva pertumbuhan sel
bakteri terlihat kembali naik. Hal ini diasumsikan bahwa pada
jam ke-24 enzim keratinase mulai diproduksi untuk memecah
keratin pada bulu ayam sebagai sumber C bagi pertumbuhan
isolat Bacillus SLII-I setelah sumber dari pepton habis. Selain
pepton, pengkayaan media dapat dilakukan dengan
penambahan glukosa, fosfat, dan glutatioinin [12]. Berdasar
kecenderungan grafik nilai OD yang terukur pada jam ke-24
menuju fase stasioner, maka panen sel untuk pembuatan
ekstrak enzim kasar dilakukan pada jam ke-25. Menurut [41]
produksi enzim keratinase maksimal bergantung pada faktor
lingkungan seperti suhu, suplemen media, dan konsentrasi
substrat keratin. Namun biosintesis enzim proteolitik dan
keratinolitik oleh bakteri umumnya berada pada akhir fase
eksponensial atau awal fase stasioner.
B. Pengaruh wakt dan pH inkubasi terhadap aktivitas enzim
keratinase.
Keratin merupakan protein yang tidak larut dalam air karena
terdapat ikatan disulfida pada asam amino sisteinnya [25].
Keratinase merupakan enzim yang dapat melarutkan keratin
dengan memutus ikatan disulfidanya. Proses keratinolitik
memberikan efek langsung berupa dihasilkannya protein,
lipid, asam amino terlarut serta residu gugus thiol dari sistein
[41]. Enzim merupakan protein fungsional yang kinerjanya
dipengaruhi oleh faktor lingkungannya seperti pH, dan waktu
enzim bereaksi dengan substrat target. Kandungan yang
terdapat pada media juga memberikan pengaruh terhadap
aktivitas enzim. Penambahan pepton menstimulasi aktivitas
proteolitik [10].
Tabel 2. Nilai rata rata aktivitas keratinase pada suhu 400C dengan variasi
kombinasi pH 5; 7; 8; 9 dan waktu inkubasi 30; 60; 90; 120 menit.
Tabel 2 menunjukkan rata rata nilai aktivitas enzim
keratinase (unit/ml) di setiap kombinasi perlakuan yang
dikelompokkan berdasar perlakuan suhu. Lampiran 2
menunjukkan nilai aktivitas enzim yang diukur dengan
spektrofotometer pada panjang gelombang 280 nm. Panjang
gelombang 280 nm merupakan panjang gelombang yang

memiliki afinitas kuat dengan asam amino yang memiliki
cincin aromatik seperti sistin, tryptophan, dan tirosin [24].
Asam amino tersebut merupakan asam amino yang dihasilkan
dari pemecahan protein keratin [39].
C. Pengaruh waktu inkubasi
Dari data Tabel 2 diketahui bahwa dengan pH yang sama,
misal pada pH 5, nilai aktivitas enzim berbanding terbalik
dengan kenaikan waktu inkubasi. Semakin lama waktu
inkubasi, maka semakin turun nilai aktivitas enzimnya. Nilai
aktivitas enzim tertinggi terdeteksi setelah diinkubasi 30 menit
yaitu 2,236 U/ml dan terendah setelah masa inkubasi 90 menit
yaitu 0,654 U/ml, ketika diaplikasikan pada pH 5. Hal ini juga
terjadi pada semua kelompok perlakuan pH yang lainnya.
Berdasar uji Duncan diketahui bahwa waktu inkubasi 30, 60,
90, dan 120 menit memiliki pengaruh yang signifikan satu
sama lain terhadap aktivitas enzim. Namun waktu inkubasi 30
menit memiliki pengaruh yang paling signifikan. Dengan
demikian disimpulkan bahwa waktu inkubasi terbaik adalah
30 menit.
Waktu inkubasi merupakan waktu yang dibutuhkan enzim
keratinase untuk memecah protein keratin menjadi protein
yang larut (soluble protein). Enzim merupakan protein yang
sensitif terhadap kerusakan akibat paparan lingkungannya.
Paparan tersebut antara lain suhu, cahaya, dan bahan kimia
yang berinteraksi dengan enzim. Faktor tersebut akan
memberikan efek kerusakan yang berbanding lurus dengan
lamanya interaksi dengan enzim. Semakin lama terkena
paparan tersebut maka struktur enzim yang terdapat pada
lingkungan tersebut akan semakin banyak yang rusak sehingga
nilai aktivitasnya menurun [41].
D. Pengaruh pH
Data yang ditunjukkan oleh Tabel 2 dengan waktu inkubasi,
misal pada perlakuan waktu inkubasi 30 menit nilai aktivitas
enzim keratinase pH 5 adalah sebesar 2,236 unit/ml; pH 7
sebesar 2,423 unit/ml; pH 8 sebesar 2,754 unit/ml; dan pH 9
sebesar 3,151 unit/ml. Data tersebut menunjukkan bahwa
kenaikan nilai aktivitas enzim keratinase berbanding lurus
dengan kenaikan pH: semakin tinggi pH (semakin basa), maka
nilai aktivitas enzim akan semakin tinggi pula. Nilai aktivitas
enzim terendah pada pH 5 dan tertinggi pada pH 9. Hal ini
terjadi pada semua kombinasi perlakuan waktu dan suhu
lainnya. Dengan demikian disimpulkan bahwa faktor pH yang
memberikan pengaruh nilai aktivitas enzim keratinase
tertinggi adalah pH 9.
Rujukan [17] melaporkan 70% aktivitas enzim keratinase
optimum pada pH 9. Enzim keratinase merupakan enzim yang
dapat bekerja dengan kisaran pH yang luas yaitu 4 – 13 [33].
Enzim yang dapat bertahan pada kisaran pH yang luas
memiliki banyak kandungan asam amino hidrofobik seperti
alanine, valin, leusin, isoleusin, metionin, fenilalanin,
tryptophan, dan prolin [23].
Seperti protein lainnya enzim merupakan polimer dari asam
amino yang memiliki muatan positif, netral, maupun negatif.
Hal ini menyebabkan kinerja enzim dipengaruhi oleh
keberadaan ion H+ (asam) atau OH- (basa) [28]. Keratin
merupakan protein yang memiliki banyak monomer asam
amino dengan muatan positip seperti lisin, arginin, dan
4
histidin sehingga lebih mudah membentuk ikatan dengan ion
OH- yang terdapat pada suasana basa [39].
Semua reaksi enzim dipengaruhi oleh pH media tempat
reaksi terjadi sehingga diperlukan buffer untuk mengontrol pH
reaksi. Perubahan pH pada skala deviasi kecil menyebabkan
turunnya aktivitas enzim karena terjadi perubahan ionisasi
gugus gugus fungsionilnya. Hal ini karena enzim adalah
protein yang tersusun atas asam amino yang dapat
mengadakan ionisasi (mengikat) dan melepaskan proton atau
ion hidrogen pada gugus amino, karboksil dan gugus
fungsionil lainnya. Sebaliknya, pada skala deviasi pH yang
besar, perubahan pH akan mengakibatkan enzim mengalami
denaturasi karena adanya gangguan terhadap berbagai
interaksi non kovalen yang menjaga kestabilan struktur 3
dimensi enzim. Gugus ionik berperan penting dalam menjaga
konformasi sisi aktif enzim untuk mengikat dan mengubah
substrat menjadi produk [13].
IV. KESIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah faktor waktu dan pH
inkubasi memiliki pengaruh terhadap aktivitas enzim
keratinase. Kombinasi optimum faktor fisik tersebut adalah
waktu inkubasi 30 menit dan pH 9 dengan nilai aktivitas
enzim 3,151 unit/ml.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis Adam mengucapkan terima kasih kepada
Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Biologi FMIPA
ITS yang telah mengizinkan penggunaan fasilitas selama
penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
[1] Adiati, U., W. Puastuti, dan Mathius. 2002. Eksplorasi Potensi Produk
Samping Rumah Potong Bulu dan Darah sebagai Bahan Pakan Pangan
Imbuhan Pascarumen. Laporan penelitian Balai Peternakan Ternak
Ciawi, Bogor.
[2] Agrahari, A. K., Panda, S. K., Meher, A., Padhan, A. R., and
Khaliquzzam, M. 2010. Phytochemical Screening of Curculigo
Orchioides Gaertn Root Tubers. J. Chem. Pharm. Res. 2. 107-111.
[3] Agustien, A., Nurhayati, Y., Udin, L. Z., dan P. Aditiawati. 2006.
Produksi Enzim Keratinase dari Bacillus spp. Asal Sumber Air Panas
Ambayan Sumatera Barat. Makalah pada Pertemuan Ilmiah Tahunan,
PERMI, Solo.
[4] Ali
[5] Anitha, A. dan R. Eswari. 2012. Impact of Newly Isolated Bacillus
megaterium (A1) on Degradation of Feather Waste. International
Journal of Pharma and Bio Sciences. 3 (1) : 212-221.
[6] Atlas, R.M. dan Bartha, R. 1987. Microbial Ecology, Fundamental and
Application, 2nd edition. The Benjamin Cumming Publishing Company,
Inc. Menlo Par: California : 560 pp.
[7] Badan Pusat Statistik. 2005. Jawa Timur dalam Angka. Badan Pusat
Statistik: Jawa Timur.
[8] Badan Pusat Statistik. 2012. Jawa Timur dalam Angka. Badan Pusat
Statistik: Jawa Timur.
[9] Deivasigamani, B. dan Alagappan, K.M. 2007. Industrial Application Of
Keratinase and Soluble Proteins From Feather Keratins. J. Environ.
Biol.29(6), 933-936.
[10] El-Refai H.A., Abdel Naby M.A., Gaballa A.,El-Araby M.H., Abdel
Fattah A.F. 2005. Improvement of The Newly Isolated Bacillus pumilus
FH9 Keratinolytic Activty, Process Biochem. 40, 2325.
[11] Govarthanan, M., T.Selvankumar. and S.Arunprakash. 2011. Production
of Keratinolytic Enzyme by A Newly Isolated Feather Degrading
Bacillus sp. from Chick Feather Waste. International Journal of Pharma
and Bio Sciences. 2 (3) : 259-265.
 5

[12] Gupta, R. and P. Ramnani. 2006. Microbial Keratinase and Their [42] Mazotto, A.M., R.R.R. Coelho, S.M.L. Cedrola, M.F. de Lima, S. Couri,
Prospective Applications: An Overview. Appl. Microbiol. Biotechnol. E.P. de Souza dan A. B. Vermelho. 2011. Keratinase Production by
70:21-33. Three Bacillus spp. Using Feather Meal and Whole Feather as Substrate
[13] Hames in a Submerged Fermentation. Enzyme Research. 1-7.
[14] Harde, I. B. Bajaj, R. S. Singha. 2011. Optimization of Fermentative
Production of Keratinase from Bacillus subtilis NCIM 2724. Agriculture
and Food Bcteriology.
[15] Holt
[16] Harper, H., V.M. Rodwell, & P.A. Mayes. 1979. Biokimia. Terjemahan
dari: Harper’s Biochemistry. Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
[17] Jeong-Dong, Kim,. 2007. Purification and Characterization of a
Keratinase from a Feather-Degrading Fungus, Aspergillus flavus
Strain K-03. Mycobiology 35(4): 219-225.
[18] Johnvesly, B. dan Naik, G.R. 2001. Studies on Production of
Thermostable Alkaline Protease from Thermophilic and
Alkaliphilic Bacillus sp. JB-99 in a Chemically Defined medium. Process
Biochemistry, Vol. 37, no. 2, p. 139-144.
[19] Johsi A.K. Ortiz G. Crossa J. Singh G. Sharma R.C. Chand R. Parsad R.
2007. Combining Superior Agronomic Performance and Terminal Heat
Tolerance With Resistance to Spotblotch (Bipolarissorokiniana) of
Wheat in the Warm Humid Gangetic Plains of South Asia. Field Crops
Research 103.. 53-61.
[20] Kaluzewska, M., K. Wawrzkiewicz and J. Lobarzewski. 1991.
Microscopic Examination of Keratin Substrates Subjected to the Action
of the Enzymes of Streptomyces fradiae. Int. Biodeterioration, 27, 11-26.
[21] Ketaren, S. 2008. Pengantar Teknologi Minyak dan Lemak Pangan. UI
Press,Jakarta.
[22] Kosim, Mukhammad. 2010. Pengaruh Suhu pada Protease dari Bacillus
subtilis. ITS. Surabaya.
[23] Kumar, Vijay E., Srijana, M., Chaitanya K. 2011. Biodegradation of
Poultry Feather by A Novel Bacterial Isolate Bacillus altitudunis
GVC11. Indian Journal of Biotechnology. 10, 502-507.
[24] Layne, E. 1957. Spectrophotometric and Turbidimetric Methods for
Measuring Proteins. Methods in Enzymology 3: 447-455.
[25] Lehninger, A.L. 1995. Dasar-Dasar Biokimia Jilid 1. Terjemahan :
Maggy Thenawijaya. Erlangga, Jakarta.
[26] Macedo, A.J., W.O.B. da Silva, R. Gava, D. Driemeier, J.A.P. Henriques
and C. Termignoni. 2005. Novel Keratinase from Bacillus subtilis S14
Exhibiting Remarkable Dehairing Capabilities. Applied and
Environmental Microbiology, 71,1, 594-596.
[27] Murtidjo, B.A. 1995. Beternak Ayam. Kanisius, Yogyakarta.
[28] Ngili, Yohanis. 2010. Biokimia Dasar. Rekayasa Sains. Bandung.
[29] Page, David S. Prinsip-Prinsip Biokimia. 1997. Erlangga, Jakarta.
[30] Raju, A.A.; N.K. Chandrababu; N. Samivelu; C. Rose dan N.M. Rao.
1996. Eco-Friendly Enzymatic Dehairing Using Extracellular Proteases
from a Bacillus species isolate. Journal of the American Leather
Chemical Association, 91, 115-119.
[31] Rao, M.B.; Tanksale, A.M.; Ghatge, M.S. dan Deshpande, V.V. 1998.
Molecular and Biotechnological Aspects of Microbial
Proteases. Microbiology and Molecular Biology Reviews.62 (3), p. 597-
635.
[32] Rasyaf, M. 1996. Beternak Ayam Petelur. Penebar Swadaya. Anggota
IKAPI. Jakarta.
[33] Sherly.
[34] Sitompul S. 2004. Analisis Asam Amino dalam Tepung Ikan dan Bungkil
Kedelai. Buletin Teknik Pertanian 9 (1):33-37.
[35] Sivakumar T., Shankar T., Vijayabaskar P. dan Ramasubramanian V.
2012. Optimization for Keratinase Enzyme Production Using Bacillus
thuringiensis TS2. Academic Journal of Plant Sciences 5 (3): 102-109.
[36] Statistik Lingkungan Hidup dan Wilayah. 2000. Statistik Lingkungan
Hidup dan Wilayah 1999. Badan Pusat Statistik: Jakarta.
[37] Sun, H.J., H.K. Lee. 2001. Characterization of a Keratinolytic Serine
Protease from Bacillus subtilis KS-1. Journal Protein Chemistry, 20,165-
169.
[38] Suntornsuk W, Tongjun J, Onnim P, Oyama H, Ratanakanokchai K,.
2005. Purification and Characterization of Keratinase from A
Thermotolerant Feather Degrading Bacterium. World J Microbiol
Biotechnol 21:1111-1117.
[39] Tiwary, E., Gupta, R. 2012. Rapid Conversion of Chicken Feather to
Feather Meal Using Dimeric Keratinase from Bacillus licheniformis
ER-15. Journal of Bioprocessing and Biotechniques. 2 (4) : 1-5.
[40] Winarno, F.G. 1983. Enzim Pangan. PT. Gramedia, Jakarta.
[41] Wojciech Łaba, Anna Rodziewicz. 2010. Keratinolytic Potential of
Feather-Degrading Bacillus polymyxa and Bacillus cereus. Polish J. of
Environ. Stud. 19 (2): 371-378.