UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL

DAUN BUNI (Antidesma bunius L. Spreng) DENGAN METODE DPPH

Antioxidant Activity Test of Buni Leaf Ethanol Extract (Antidesma bunius L. Spreng)
with the DPPH Method
1 1 1
Lisnawaty B , Nur Ida , Tahirah Hasan
1
Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Islam Makassar, Jl. Perintis Kemerdekaan Km. 9, Makassar, Sulawesi
Selatan 90245, Indonesia
Email: lisna131296@gmail.com

ABSTRAK

Penelitian tentang uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun buni

(Antidesma bunius L. Spreng) telah dilakukan. Tujuan penelitian adalah untuk
menentukan nilai IC50 ekstrak etanol daun buni (Antidesma bunius L. Spreng)
dengan metode DPPH. Metode penelitian meliputi ekstraksi daun buni
(Antidesma bunius L. Spreng) secara maserasi menggunakan etanol 96%. Pengukuran
aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun buni (Antidesma bunius L. Spreng) dengan
peredaman radikal bebas DPPH menggunakan spektrofotometer visibel pada panjang
gelombang 515 nm. Hasil analisis diperoleh bahwa aktivitas antioksidan ekstrak etanol
daun buni (Antidesma bunius L. Spreng) memiliki nilai IC50 sebesar 63,3842 ± 0,09 ppm
dan termasuk dalam kategori kuat.

Kata Kunci: Antioksidan; Daun Buni; DPPH

ABSTRACT

Research on the antioxidant activity of the ethanol extract of of buni leaves

(Antidesma bunius L. Spreng) has been carried out. The aim of this research was to
determine the IC50 value of ethanol extract of buni leaves (Antidesma bunius L. Spreng)
using the DPPH method. The research method includes of the extraction of buni leaves
(Antidesma bunius L. Spreng) by maceration using ethanol 96%. Measurement of the
antioxidant activity of ethanol extract of buni leaves (Antidesma bunius L. Spreng)
with DPPH free radical reduction using a visible spectrophotometer against the 515 nm
wave. The results of the analysis showed that the antioxidant activity of the
ethanol extract of buni leaves (Antidesma bunius L. Spreng) had an IC50 value of 63.3842
± 0.09 ppm and was included in the strong category.

Keywords: Antioxidants; Buni Leaves; DPPH

PENDAHULUAN gagal ginjal, penuaan dini dan penyakit

kronik lainnya (Angela, 2012).
Radikal bebas merupakan Antioksidan alami terdapat
sekelompok bahan kimia baik berupa atom di dalam tubuh manusia yang merupakan
maupun molekul yang memiliki elektron senyawa yang dapat menangkal radikal
tidak berpasangan pada lapisan bebas. Antioksidan adalah senyawa kimia
terluarnya. Radikal bebas tidak dapat yang dapat memberikan satu atau lebih
mempertahankan bentuk asli dalam waktu elektron kepada radikal bebas, sehingga
yang lama dan segera berikatan dengan radikal bebas dapat diredam. Antioksidan
bahan yang disekitarnya untuk juga didefinisikan sebagai zat yang mampu
mendapatkan stabilitas kimia. Keberadaan memperlambat atau mencegah proses
radikal bebas di dalam tubuh dapat oksidasi yang dapat menetralisir atau
menimbulkan berbagai penyakit seperti menghancurkan suatu radikal bebas. Pola
serangan jantung, kanker, stroke, hidup dan pola makan yang tidak benar

Lisnawaty B. 2020, Universitas Islam Makassar 1

serta bertambahnya usia dapat
menyebabkan produksi antioksidan oleh
tubuh berkurang, sehingga tubuh
memerlukan antioksidan dari luar tubuh
(Kumalaningsih, 2007).
Antioksidan dapat diperoleh
secara alami dari tumbuh-tumbuhan, baik
buah, daun, batang atau bagian lainnya.
Salah satu tumbuhan yang memiliki
potensi sebagai antioksidan adalah daun
buni (Antidesma bunius L. Spreng) yang
secara tradisional tumbuhan ini dipercaya
berkhasiat untuk mengobati anemia,
hipertensi, batuk, gangguan pencernaan,
sifilis, gonore, diabetes, disentri, konstipasi
dan lainnya (Kassem, dkk., 2013).
Beberapa penelitian yang telah
dilakukan yaitu penelitian Rahman, dkk.
(2016) menyatakan bahwa buah buni
mempunyai nilai aktivitas antioksidan yang
sangat kuat terhadap Nitrit Oksida dengan
nilai IC50 2,28 μg/mL. Indrawati dan Andita
(2017) menyatakan bahwa ekstrak buah
buni memiliki potensi antibakteri terhadap
bakteri Gram positif Bacillus cereus dan
bakteri Gram negatif Salmonella
thypimurium dengan daya hambat kuat.
Almaidah (2018) menyatakan bahwa
ekstrak etanol daun buni memiliki aktivitas
antiinflamasi terhadap tikus jantan
(Rattus norvegicus) yang diinduksi
karagenan. Penelitian lain terhadap
keluarga Euphorbiaceae yang dilakukan
oleh Karim (2015) menyatakan bahwa
ekstrak daun patikan kebo (Euphorbia hirta
L.) memiliki aktivitas antioksidan yang
sangat kuat dengan nilai IC50 sebesar
11,50 ppm. Oleh karena itu, sangat
memungkinkan daun buni juga
mengandung senyawa antioksidan.
Berdasarkan uraian di atas maka
permasalahan dalam penelitian ini adalah
apakah ekstrak etanol daun buni
(Antidesma bunius L. Spreng) memiliki
aktivitas sebagai antioksidan.
Tujuan penelitian ini adalah
untuk menentukan nilai IC50 ekstrak etanol
daun buni (Antidesma bunius L. Spreng)
dengan metode DPPH.
Manfaat penelitian ini adalah
menambah data ilmiah tumbuhan buni
sebagai acuan atau pedoman bagi
mahasiswa yang akan melakukan
penelitian selanjutnya serta untuk
menambah wawasan dan pengetahuan
bagi peneliti.
Lisnawaty B. 2020, Universitas Islam Makassar
METODE PENELITIAN
A. Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam
penelitian ini yaitu bejana maserasi, rotary
evaporator (IKA® HB 10 digital),
spektrofotometer UV-Vis (Agilent),
timbangan analitik dan peralatan gelas
yang umum dipakai di laboratorium kimia.
Bahan-bahan yang digunakan
dalam penelitian ini yaitu asam askorbat,
daun buni (Antidesma bunius L. Spreng),
aluminium foil, aquadest, Diphenyl
Picrylhidrazyl (DPPH), etanol 96%, dan
metanol p.a.
B. Prosedur Kerja
1. Pengambilan Sampel
Sampel berupa daun buni
(Antidesma bunius L. Spreng) diambil
dari daerah Lingkungan Bontopuasa,
Kelurahan Adatongeng Kecamatan
Turikale, Kabupaten Maros, Sulawesi
o
Selatan, Indonesia (S 5 1’32.6532’’,
o
E 119 34’2.334’’).
2. Pengolahan Sampel
Bagian yang digunakan adalah
daun buni (Antidesma bunius L. Spreng).
Daun buni dicuci dengan air mengalir
sampai bersih lalu dipotong kecil kemudian
dikeringkan pada suhu kamar yang
terhindar dari sinar matahari langsung.
3. Ekstraksi Sampel
Simplisia daun Buni (Antidesma
bunius L. Spreng) sebanyak 300 gram
dimasukkan ke dalam bejana maserasi,
lalu ditambahkan etanol 96% sebanyak 6
L. Disimpan di tempat yang tidak terkena
sinar matahari langsung dan dibiarkan
selama 3 hari sambil sesekali diaduk,
kemudian disaring dan dipisahkan ampas
dan filtrat. Kemudian dipekatkan dengan
rotary evaporator lalu diuapkan hingga
diperoleh ekstrak etanol kental.
C. Uji Aktivitas Antioksidan
1. Pembuatan Larutan DPPH 0,4 mM
Larutan DPPH 0,4 mM dibuat
dengan cara menimbang 7,9 mg kristal
DPPH dan dilarutkan dengan metanol p.a
dimasukkan dalam labu tentukur 50 mL,
dicukupkan volumenya dengan metanol
p.a hingga tanda batas.
2
2. Pengukuran Panjang Gelombang
Maksimum untuk Aktivitas
Antioksidan
Larutan DPPH 0,4 mM dipipet
sebanyak 1 mL dan dimasukkan
ke dalam labu tentukur 5 mL kemudian
dicukupkan volumenya dengan metanol
p.a hingga tanda batas, dikocok sampai
homogen. Labu tentukur dibungkus
dengan aluminium foil dan didiamkan
selama 30 menit, selanjutnya
diukur absorbansinya menggunakan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 500–600 nm, sehingga
diperoleh panjang gelombang 515 nm.
Panjang gelombang 515 nm adalah
panjang gelombang terjadinya serapan
maksimum.
3. Pengukuran Aktivitas Radikal Bebas
DPPH
Larutan DPPH dengan
konsentrasi 0,4 mM dipipet sebanyak 1 mL
dan dimasukkan ke dalam labu tentukur 5
mL kemudian dicukupkan volumenya
dengan metanol p.a hingga tanda batas,
dikocok sampai homogen. Labu tentukur
dibungkus dengan aluminium foil dan
didiamkan selama 30 menit, selanjutnya
diukur absorbansinya menggunakan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 515 nm sehingga diperoleh
absorbansi blanko.
4. Pengukuran Larutan Induk Daun
Buni (Antidesma bunius L. Spreng)
1000 ppm
Larutan induk daun buni 1000
ppm dibuat dengan cara ekstrak etanol
daun buni ditimbang seberat 10 mg dan
dilarutkan dengan metanol p.a dalam labu
tentukur sambil dihomogenkan lalu
dicukupkan volumenya dengan metanol
p.a hingga tanda batas 10 mL.
5. Pengukuran Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Etanol Daun Buni
(Antidesma bunius L. Spreng)
Dibuat larutan uji ekstrak etanol
daun buni dengan konsentrasi 20 ppm,
Lisnawaty B. 2020, Universitas Islam Makassar
40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, dan 100 ppm
dengan memipet larutan induk 1000 ppm
masing-masing sebanyak 0,1 mL, 0,2 mL,
0,3 mL, 0,4 mL dan 0,5 mL lalu
dimasukkan dalam labu tentukur 5 mL,
kemudian ditambahkan larutan DPPH 0,4
mM sebanyak 1 mL dan dicukupkan
volumenya dengan metanol p.a hingga
tanda batas. Ditutup dan dibiarkan selama
30 menit pada suhu ruang yang terlindung
dari cahaya matahari. Selanjutnya
absorbannya diukur dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 515 nm.
6. Pembuatan Larutan Induk Asam
Askorbat
Larutan asam askorbat 1000
ppm dibuat dengan cara ditimbang 10
mg asam askorbat dan dilarutkan dengan
metanol p.a dalam labu tentukur sambil
dihomogenkan, lalu dicukupkan volumenya
dengan metanol p.a 10 mL. Kosentrasi 100
ppm dibuat pengenceran dengan cara
memipet 1 mL asam askorbat dari larutan
induk lalu dicukupkan volumenya dengan
metanol p.a hingga 10 mL.
7. Pengukuran Aktivitas Antioksidan
Larutan Pembanding Asam Askorbat
Metode DPPH
Larutan pembanding asam
askorbat dengan konsentrasi 0,4 ppm, 0,8
ppm, 1,2 ppm, 1,6 ppm dan 2 ppm dengan
memipet larutan induk 100 ppm masing-
masing 0,02 mL, 0,04 mL, 0,06 mL, 0,08
mL, dan 0,1 mL lalu dimasukkan dalam
labu tentukur, kemudian ditambahkan
larutan DPPH 0,4 mM sebanyak 1 mL dan
dicukupkan volumenya hingga 5 mL
dengan metanol p.a hingga tanda batas.
Ditutup dan dibiarkan selama 30 menit
pada suhu ruang yang terlindung dari
cahaya matahari. Selanjutnya
absorbansinya diukur dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 515 nm.
3
HASIL PENELITIAN

Tabel 1. Hasil Pengukuran Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Buni

(Antidesma bunius L. Spreng) Replikasi I
Konsentrasi Absorbansi (A) λ = Aktivitas Nilai IC50
No
(ppm) 515 nm DPPH Antioksidan (%) (ppm)
1 20 0,612 30,61
2 40 0,538 39,00
3 60 0,472 46,49 63,4502
4 80 0,436 50,57
5 100 0,223 74,72
6 Blanko 0,882

80.00 y = 0.4989x + 18.3447

Aktivitas antioksidan

R² = 0.9004
60.00
40.00
(%)

20.00
0.00
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

Gambar 1. Kurva Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Buni

(Antidesma bunius L. Spreng) Replikasi I

Tabel 2. Hasil Pengukuran Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Buni

(Antidesma bunius L. Spreng) Replikasi II
Konsentrasi Absorbansi (A) λ = Aktivitas Nilai IC50
No
(ppm) 515 nm DPPH Antioksidan (%) (ppm)
1 20 0,612 30,45
2 40 0,537 38,98
3 60 0,467 46,93 63,3182
4 80 0,433 50,80
5 100 0,224 74,55
6 Blanko 0,880

80.00 y = 0.5000x + 18.3409

Aktivitas antioksidan

60.00 R² = 0.9072
40.00
(%)

20.00
0.00
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

Gambar 2. Kurva Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Buni

(Antidesma bunius L. Spreng) Replikasi II

Tabel 3. Rata-rata Nilai IC50 Ekstrak Etanol Daun Buni (Antidesma bunius L. Spreng)
Replikasi I Replikasi II Nilai Rata-rata ± SD
63,4502 63,3182 63,3842 ± 0,09

Lisnawaty B. 2020, Universitas Islam Makassar 4

Tabel 4. Hasil Pengukuran Aktivitas Antioksidan Pembanding Asam Askorbat Replikasi I
Konsentrasi Absorbansi (A) λ = Aktivitas Nilai IC50
No
(ppm) 515 nm DPPH Antioksidan (%) (ppm)

1 0,4 0,579 34,35

2 0,8 0,511 42,06
3 1,2 0,438 50,34 1,1191
4 1,6 0,371 57,94
5 2 0,219 75,17
6 Blanko 0,882

80.00 y = 24.376x + 22.721

Aktivitas antioksidan

R² = 0.9652
60.00
40.00
(%)

20.00
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
Konsentrasi (ppm)

Gambar 3. Kurva Aktivitas Antioksidan Pembanding Asam Askorbat Replikasi I

Tabel 5. Hasil Pengukuran Aktivitas Antioksidan Pembanding Asam Askorbat Replikasi II

Konsentrasi Absorbansi (A) λ = Aktivitas Nilai IC50
No
(ppm) 515 nm DPPH Antioksidan (%) (ppm)

1 0,4 0,577 34,43

2 0,8 0,511 41,93
3 1,2 0,438 50,23 1,1227
4 1,6 0,376 57,27
5 2 0,215 75,57
6 Blanko 0,880

80.00 y = 24.403x + 22.602

Aktivitas antioksidan

R² = 0.9563
60.00
40.00
(%)

20.00
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
Konsentrasi (ppm)

Gambar 4. Kurva Aktivitas Antioksidan Pembanding Asam Askorbat Replikasi II

Tabel 6. Rata-rata Nilai IC50 Pembanding Asam Askorbat

Replikasi I Replikasi II Nilai Rata-rata ± SD
1,1191 1,1227 1,1209 ± 0,02

Lisnawaty B. 2020, Universitas Islam Makassar 5

PEMBAHASAN
Sampel yang digunakan pada
penelitian ini adalah daun buni
(Antidesma bunius L. Spreng) yang
diperoleh dari Kecamatan Turikale,
Kabupaten Maros, Sulawesi Selatan.
Tujuan penelitian ini adalah untuk
menentukan nilai IC50 ekstrak etanol daun
buni (Antidesma bunius L. Spreng).
Uji aktivitas antioksidan ekstrak
etanol daun buni (Antidesma bunius L.
Spreng) menggunakan metode DPPH.
Metode DPPH merupakan salah satu
metode yang paling banyak digunakan
untuk memperkirakan efisiensi kinerja dari
substansi yang berperan sebagai
antioksidan (Molyneux, 2004). Metode
DPPH dipilih karena memiliki beberapa
kelebihan antara lain dapat direaksikan
dengan sampel apapun dan berbagai
pelarut seperti metanol dan etanol
serta dapat mendeteksi kadar
antioksidan walaupun aktivitasnya lemah
(Kedare, 2011).
Parameter yang digunakan untuk
mengetahui hasil dari uji aktivitas
antioksidan dengan radikal bebas DPPH
adalah IC50 yaitu konsentrasi yang
menyebabkan hilangnya 50% aktivitas
DPPH. Penambahan larutan DPPH pada
ekstrak etanol daun buni (Antidesma
bunius L. Spreng) akan terjadi perubahan
warna pada larutan DPPH dalam metanol
yang semula berwarna ungu pekat menjadi
kuning pucat (Winarsi, 2007).
Perubahan warna mengindikasi-
kan adanya reaksi radikal bebas DPPH
dengan senyawa antioksidan pada larutan
sampel. Prinsip kerja pada metode DPPH
ini adalah adanya senyawa antioksidan
yang mendonorkan atom hidrogen pada
DPPH sehingga radikal bebas DPPH yang
berwarna ungu menjadi senyawa
non-radikal yang berwarna kuning pucat
atau warnanya hilang (Hanani, dkk., 2005).
Hasil pengujian aktivitas
antioksidan ekstrak etanol daun buni
(Antidesma bunius L. Spreng) dinilai efektif
sebagai antioksidan dengan nilai IC50
sebesar 63,3842 ± 0,09 ppm dan tergolong
dalam kategori kuat. Menurut Molyneux
(2004) suatu senyawa dikatakan sebagai
antioksidan sangat kuat apabila nilai IC50
kurang dari 50 ppm, kuat apabila nilai IC50
antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai
IC50 berkisar antara 100-150 ppm, lemah
apabila nilai IC50 berkisar antara
Lisnawaty B. 2020, Universitas Islam Makassar
150-200 ppm dan sangat lemah apabila
nilai IC50 lebih dari 200 ppm. Pengujian
aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun
buni (Antidesma bunius L. Spreng)
menggunakan pembanding asam askorbat
(Vitamin C). Aktivitas antioksidan ekstrak
etanol daun buni masih di bawah aktivitas
asam askorbat dengan nilai IC50 1,1209 ±
0,02 ppm yang tergolong dalam kategori
sangat kuat.
Penelitian tentang aktivitas
antioksidan sebelumnya telah ditemukan
pada jaringan buah. Buah buni memiliki
aktivitas antioksidan yang besar, menurut
Rahman, dkk (2016) menyatakan bahwa
buah buni mempunyai nilai aktivitas
antioksidan yang sangat kuat dengan nilai
IC50 2,28 ppm. Namun, buah buni dalam
proses pembuahannya memiliki jangka
waktu yang cukup lama. Sehingga daun
dapat menjadi alternatif karena daun ada
sepanjang tahun sejak tumbuhan itu
tumbuh.
Senyawa yang terdapat dalam
daun buni (Antidesma bunius L. Spreng)
yaitu flavonoid, terpenoid, tanin dan
saponin (Elya, dkk., 2012). Flavonoid
dalam daun buni memiliki kemampuan
sebagai antioksidan karena pada
strukturnya mengandung gugus hidroksil
yang mampu mendonorkan atom
hidrogen kepada senyawa radikal bebas.
Reaksi peredaman radikal bebas
oleh senyawa flavonoid seperti:
(Yuhernita & Juniarti, 2011).
Gambar 5. Peredaman Radikal Bebas oleh
Flavonoid
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian
dan pembahasan dapat disimpulkan
bahwa ekstrak etanol daun buni
(Antidesma bunius L. Spreng) memiliki
aktivitas antioksidan dengan nilai IC50
sebesar 63,3842 ± 0,09 ppm yang
dikategorikan sebagai antioksidan kuat.
6
DAFTAR PUSTAKA
Almaidah, M. F., 2018. Uji Aktivitas
Antiinflamasi Ekstrak Etanol
Daun Buni (Antidesma bunius L.
Spreng) terhadap Tikus Putih
(Rattus novergicus). Skripsi.
Fakultas Farmasi UIN Alauddin
Makassar. Makassar
Angela, F. T. I., 2012. Aktivitas Antioksidan
dan Stabilitas Fisik Gel Anti-
Aging yang Mengandung Ekstrak
Air Kentang Kuning (Solanum
tuberosum L.). Skripsi.
Universitas Indonesia. Jakarta
Elya, B., Malik A., Septimaharani P. I., &
Loranza B., 2012. Antidiabetic
Activity Test by Inhibition of α-
Glucosidase and Phytochemical
Screening from the Most Active
Fraction of Buni (Antidesma
bunius L. Spreng) Stem Barks
and Leaves. International Journal
of Pharm Tech Research. Vol. 4.
No.2
Hanani, E., Mun’im A dan Sekarini R.,
2005. Identifikasi Senyawa
Antioksidan Dalam Spons
Callyspongia sp. Dari Kepulauan
Seribu. Majalah Ilmu
Kefarmasian. 3(2).127-133
Indrawati, I., dan Andita F. M. R., 2017.
Potensi Ekstrak Buah Buni
(Antidesma bunius L. Spreng)
sebagai Antibakteri dengan
Bakteri Uji Salmonella
thypimurium dan Bacillus cereus.
Jurnal Biodjati Vol.2, No.2
Karim, K., Minarni R. J. & Sri M. S., 2015.
Uji Aktivitas Ekstrak Daun
Patikan Kebo (Euphorbia hirta
L.). Jurnal Akademika Kim. Vol.4,
No.2
Lisnawaty B. 2020, Universitas Islam Makassar
Kassem, M. E. S., Hashim A. N.,
Hassanein H. M., 2013.
Bioactivity of Antidesma bunius
Leaves (Euphorbiaceae) and
Their Major Phenolic
Constituents. European Scientific
Journal. Vol. 9, No. 18
Kedare, S. B., Singh R. P., 2011. Genesis
and development of DPPH
method of antioxidant assay. J
Food Sci Technol: 412-419
Kumalaningsih, S., 2007. Antioksidan
Alami. Trubus Angrisarana.
Surabaya
Molyneux, P., 2004. The Use of the Stable
Free Radical Diphenylpicryl-
hidrazil (DPPH) for Estimating
Antioxidant Activity. Journal of
Science and Technology. Vol. 26
Rahman, A., Abdul-Malik, Aktsar R. A.,
2016. Skrining Fitokimia dan Uji
Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Buah Buni (Antidesma bunius L.
Spreng). Jurnal Farmasi.
Universitas Muslim Indonesia.
Makassar
Winarsi, H., 2007. Antioksidan Alami dan
Radikal Bebas. Kanisius.
Yogyakarta
Yuhernita dan Juniarti, 2011. Analisis
Senyawa Metabolit Sekunder
dari Ekstrak Metanol Daun
Surian yang Berpotensi sebagai
Antioksidan. Jurnal Makara
Sains. Vol. 15. No. 1: 48-52
7